Manual Conocer La Agilent

 

Agilent ChemStation

Conocer la ChemStation

Agilent Technologies

 

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Número de referencia del man manual ual:: G2070-95121

Edición 05/05 Impreso en Alemania Agilent Technologies Hewlett-Packard-Strasse 8 76337 Waldbronn, Alemania

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Avisos de seguridad

PRECAUCIÓN Un aviso de PRECAUCIÓN indica un peligro. Llama la atención sobre un procedimiento de operación, una práctica o similar que, si no se realizan correctamente o no se ponen en práctica, pueden provocar daños en el producto o pérdida de datos importantes. No avance más allá de un aviso de PRECAUCIÓN hasta que se entiendan y se cumplan completamente las condiciones indicadas.

ADVERTENCIA Un aviso de ADVERTENCIA indica un peligro. Llama la atención sobre un procedimiento de operación, una práctica o similar que, si no se realiza realizann correc correctament tamentee o no se ponen en práct práctica, ica, pued pueden en provocar daños personales o la muerte. No No avanc avancee más allá de un avis avisoo de ADV ADVERTE ERTENCI NCIA A hasta que se entiendan y se cumplan completamente las condiciones indicadas. Conocer la Agilent ChemStation

 

En esta guía… Esta guía describe varios conceptos de la Agilent ChemStation. Su objetivo es la familiarización con el funcionamiento de la  Agilent ChemStation.

1

Cara Ca ract cter erís ísti tica cass de de la la Agi Agile lent nt Ch Chem emSt Stat atio ionn Este capítulo describe los componentes y características principales de la Agilent ChemStation.

2

Métodoss Método Este capítulo describe los conceptos de métodos y cómo trabajar con ellos.

3

Adquisición de de da datos Este capítulo describe los conceptos de la adquisición de datos, ficheros de datos, libro de registro y otros.

4

Integraciónn Integració Este capítulo describe los conceptos de integración de los algoritmos de integración ChemStation. Describe el algoritmo de integración, la integración y la integración manual.

5

Cuantificación Este capítulo describe cómo la ChemStation realiza la Ofrecedel detalles cálculos de %cálculo de área%  ycuantificación. % de altura, cálculo patrónsobre patrón externo (ESTD), norm, cálculo del patrón interno (ISTD) y cuantificación de picos sin identificar.

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3

 

6

Identi tifficación de de pi picos Este capítulo describe los conceptos de la identificación de picos.

7

Calibración Este capítulo describe la calibración en la ChemStation. ChemSt ation.

8

Automatización Este capítulo describe los conceptos de la automatización. Explica cómo trabajar con secuencias en la ChemStation, qué ocurre cuando se ejecuta una secuencia y cómo personalizar secuencias.

9

Revisión por lotes Este capítulo describe los conceptos de la revisión por lotes. Configuración por lotes, funciones de revisión e informes por lotes.

10

Utililiz Ut izac ació iónn de lo loss info inform rmes es de la la Chem ChemSt Stati ation on Este capítulo describe en qué consiste un informe. Aporta detalles sobre los resultados de los informes, resultados cuantitativos, estilos de informes, destino de informe e informes resumen de secuencia.

4

11

Eval Ev alua uaci ción ón de la id idon onei eida dadd del del si sist stem emaa

12

Ver erif ifiica caci ción ón de dell sis siste tem ma

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Contenido

1

Cara Ca ract cter erís ísti tica cass de de la la Agi Agile lent nt Ch Chem emSt Stati ation on

17

Descripción general 18 Módulos adicionales del instrumento 19 Módulos adicionales de evaluación de datos 19 Productos sólo para la evaluación de datos 20 Hardware de la Agilent ChemStation

21

Acerca del software de la Agilent ChemStation

22

Sistema operativo 22 Métodos y secuencias 22 Configuración del sistema 22 Modelo de datos 23 Convenciones de los nombres de ficheros 24 Interfase de usuario del software 26 Adquisición de datos 27 Análisis Análi sis de de datos datos — Visu Visualiza alización ción 28 Análisis Análi sis de datos — Integ Integració raciónn 29 Capacidades del integrador 29 Análisis Análi sis de datos — Cuanti Cuantificac ficación ión 30 Análisis Análi sis de datos — Infor Informes mes es estánda tándarr 31 Análisis Análi sis de Datos — Infor Informes mes espe especiali cializados zados 31 Utilidades y compatibilidades 35 Personalización 35 Automatización 36 Buenas prácticas de laboratorio 37

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5

 

Contenido

Control del instrumento 41 Conexión en red 41 Documentación

42

La estructura de directorios de la ChemStation

2

Métodos

44

47

¿En qué consiste un método?

48

Partes de un método 49 Method Information (Información del método) 49 Instrument Control (Control del instrumento) 49 Data Analysis (Análisis de datos) 50 Run-Time Checklist (Lista de control del análisis) 51 Estado de los métodos 52 Método grabado (Stored) 52 Método activo (Current) 52 Creación de métodos

53

Edición de métodos 54 Partes del método a editar

55

Estructura del directorio de métodos

56

¿Qué ocurre cuando se ejecuta un método? Operación del método 58 Comando o macro pre-análisis 58 Adquisición de datos 58 Análisis de datos 59 Análisis de datos personalizado 60 Salvar datos GLP 60 Comando o macro postanálisis 61 Salvar copia del método con datos 61 Resumen del funcionamiento del método

6

57

62

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Contenido

3

Adquisición de de da datos

63

¿En qué consiste la adquisición de datos? Ficheros de datos

65

Monitores en línea 66 Monitorización en línea de la señal 66 Monitorización en línea de los espectros Logbook

64

66

67

Información del estado 68 Estado de la ChemStation 68 Barra de estado 68 Diagrama del sistema 69

4

Integración

71

¿En qué consiste la integración? ¿Qué hace la integración?

73

73

Los algoritmos de integración de la ChemStation Capacidades de integración 74

74

Introducción 76 Definición de la línea base inicial 77 Seguimiento de la línea base 77 Asignación de la línea base 78 Identificación de los puntos cardinales de un pico Definición de términos 81 Puntos cardinales 81 Pico de disolvente 81 Hombro (frontal, trasero) Pendiente 82 Principio de operación

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80

82

83

7

 

Contenido

Reconocimiento de picos 84 Anchura de pico 84 Filtros de reconocimiento de picos 85 Agrupamiento 87 El algoritmo de reconocimiento de picos Cálculos no gaussianos 92

88

Asignación de la línea base 94 Construcción de la línea base por defecto 94 El inicio de la línea base 95 Marcas de señalización 95 El final de la línea base 95 Penetración de la línea base 96 Seguimiento avanzado de la línea base (Advanced Baseline Tra Tracking) cking) División tangencial (Tangent Skimming) 99 Picos no asignados (Unassigned Peaks) 105 Códigos de separación de picos Caracteres 1 y 2 106 Carácter 3 106 Carácter 4 107

97

106

Medida del área de pico 108 Determinación del área 109 Unidades y factores de conversión 110 Parámetros de integración 111 Parámetros iniciales 111 Anchura de pico (Peak Width) 112 Rechazo por altura y anchura de pico 113 Refinamiento de la integración 113 Parámetros programados 115

8

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Contenido

Integración automática (Autointegrate) 116 Introducción 116 Principios de funcionamiento 116 Parámetros de la integración automática 117 Integración manual 118 Introducción 118 Códigos de separación de picos para picos integrados manualmente Documentación de parámetros de integración manual 119

5

Cuantificación

119

121

¿En qué consiste la cuantificación? Cálculos de cuantificación

122

123

Factores de corrección 124 Factor de respuesta absoluto Multiplicador 124 Factor de dilución 124 Cantidad de muestra 125

124

Procedimientos de cálculo no calibrados Procedimientos % de Área y % de Altura 126 Procedimientoss de cálculo calibrados Procedimiento

126 127

Cálculo ESTD 128 Cálculo % Norm 130 Cálculo ISTD 131 Análisis 1: Calibración 132 Análisis 2: Muestra desconocida 133 Cálculo ISTD de picos calibrados 133 Cálculo ISTD de picos no calibrados 134

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9

 

Contenido

6

Identificación de de pi picos

135

¿En qué consiste la identificación de picos? Reglas de asignación de picos

136

137

Tipos de identificación de picos 138 Tiempo de retención/migración absoluto Tiempo de retención/migración corregido Cualificadores de picos 138 Límites de cantidad 139 Tiempo de retención/migración absoluto

138 138

140

Tiempos de retención/migración corregidos Picos de referencia simples 142 Picos de referencia múltiples 143 Cualificadores de picos 144 Correlación de la señal 145 Verificación del cualificador 145 Cálculo de la relación del cualificador

142

145

El proceso de identificación 147 Localización de los picos de referencia 147 Localización de picos ISTD (Patrón interno) 147 Localización del resto de los picos calibrados 148 Clasificación de picos no identificados

7

Calibración

149

Definición de términos

150

Tabla de calibración

151

Curva de calibración

152

Muestras desconocidas

10

148

154

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Contenido

Tipos de calibración 155 Calibración de un sólo nivel 155 Calibración multinivel 156 Rangos de calibración 158 Ajustes de la curva de calibración 158 Tratamiento del origen 158 Calibración de grupo Suma de picos

161

162

Recalibración 163 ¿Qué es la recalibración? 163 ¿Por qué recalibrar? 163 Recalibración manual 163 Recalibración con suma de picos 164 Opciones de recalibración 164 Maneras de recalibrar 165 Recalibración de picos no identificados

8

Automatización

167

¿En qué consiste la automatización? ¿Qué es una secuencia?

170

Parámetros de secuencia

171

Tabla de secuencia

166

169

172

Creación de secuencias 173 Utilización del editor de tablas de secuencias 173 Utilización del botón “Insert Vial Range” (Insertar Rango de Viales) Utilización del botón “Append Line” (Añadir Línea) 173 Trabajar con secuencias 174 Muestras prioritarias 174 Secuenciación con muestras de control Detener una secuencia (Stop) Conocer la Agilent ChemStation

173

174

174 11

 

Contenido

Abortar una secuencia (Abort) 175 Interrumpir una secuencia (Pause) 175 Ejecución de una secuencia parcial 175 Fichero del registro de secuencias 177 ¿Qué ocurre cuando se ejecuta una secuencia?

178

Asignación de nombre a los ficheros de datos en una secuencia 179 Nombrar automáticamente los ficheros en una secuencia 179 Introducir manualmente los nombres de los ficheros 180 Operación postsecuencia 181 Not Ready Timeout (sólo LC y CE) Wait Time (sólo LC Y CE) 181

181

Recalibración automática 182 Especificación de las recalibraciones 183 Parámetros de recalibración en la Tabla de Secuencia Tipos de secuencias

183

186

Secuencias de calibración explícita

187

Secuencias de calibración cíclica de un sólo nivel Secuencias de calibración cíclica multinivel Orden de análisis del método A 191

188

189

Orden de análisis del método B 192 Calibraciones explícita y cíclica juntas 193 Ejemplo 193 Orden del análisis SimpReg 194 Secuencias de calibración cíclica con agrupamiento Ejemplo 195 Operación con secuencia agrupada 196 Ejemplo 197

12

195

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Contenido

Secuencias de recalibración cíclicas con múltiples viales que contienen la misma dilución del patrón 199 Secuencia de recalibración cíclica con manejo de viales de calibración “Round-Robin” 199 Recalibraciones cíclicas donde cada calibración utiliza un vial diferente 201 Secuencia de agrupamiento que utiliza viales diferentes para el inicio y final del agrupamiento 201

9

Revisión por lotes

203

¿En qué consiste la revisión por lotes?

204

Configuración de lotes 205 Tabla de lotes 205 Tabla del compuesto 206 Informe por lotes 206 Interfase del usuario 207 Funciones de revisión 208 Calibración en la revisión por lotes

208

Informe de lotes 209 Historial de lotes 209

10

Utililiz Ut izac ació iónn de lo loss info inform rmes es de de la Ch Chem emSt Stat atio ionn ¿Qué es un informe?

212

Informe de resultados 213 Informes no calibrados 213 Informes calibrados 213 Informe del patrón externo 214 Informe del patrón interno 214 Informe de los Cuadros de Control Resultados cuantitativos

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211

214

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13

 

Contenido

Estilos de informes 216 Adición de un informe personalizado a los estilos de informes Otros parámetros de estilos de informes

219

Tabla de picos sumados 219 Informe a medida de los picos no calibrados Destino del informe 220 Formatos del fichero de informe

219

220

Informes resumen de secuencia 222 Introducción 222 Configuración de un Informe Resumen de Secuencia

11

Eval Ev alua uaci ción ón de la id idon onei eida dadd del del si sist stem emaa

222

227

Determinación del nivel de ruido 231 Cálculo del ruido utilizando seis veces la desviación estándar Cálculo del ruido mediante la fórmula pico-a-pico 232 Cálculo del ruido mediante el método ASTM 233 Cálculo de señal-a-ruido 235 Deriva y rango de variación 235 Cálculo de la simetría de pico

231

236

Fórmulas y cálculos de la idoneidad del sistema

238

Definiciones generales 239 Volumen muerto 239 Tiempo de retención del compuesto no retenido t (m) [min] Definiciones de las pruebas de rendimiento 240 Momentos estadísticos 240 Momentos estadísticos, desviación y exceso 241 Verdadera anchura de pico Wx [min] 242 Factor de capacidad (USP), Relación de capacidad (ASTM) k‘ Factor de cola USP (USP) t 242 Número de platos teóricos por columna (USP, ASTM) n 14

218

239

242

243

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Contenido

Número de platos teóricos por metro N [1/m] 244 Retención relativa (USP, ASTM), Selectividad alfa 244 Resolución (USP, ASTM) R 245 Definiciones de reproducibilidad 246 Media de la muestra M 246 Desviación Estándar de la muestra S 247 Desviación estándar relativa RSD[%] (USP) 247 Desviación estándar de la media SM 247 Intervalo de confianza CI 248 Análisis de regresión 249 Coeficiente de regresión 250 Desviación estándar (S) 250

12

Acceso a los números de doble precisión almacenados internamente Veri riffic icac ació iónn del del si sist stem emaa 255 Verificación del sistema 256 Pantallas de verificación y de diagnósticos El registro GLPsave

259

260

Función de prueba del detector DAD 262 Función de prueba para la verificación del detector DAD

Índice

Conocer la Agilent ChemStation

251

262

265

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Contenido

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Agilent ChemStation Conocer la ChemStation

1 Características de la Agilent ChemStation Descripción general 18 Módulos adicionales del instrumento 19 Módulos adicionales de evaluación de datos 19 Productos sólo para la evaluación de datos 20 Hardware de la Agilent ChemStation 21 Acerca del software de la Agilent ChemStation 22 Sistema operativo 22 Métodos y secuencias Configuración del sistema22 22 Modelo de datos 23 Convenciones de los nombres de ficheros 24 Interfase de usuario del software 26 Adquisición de datos 27 Análisis Análi sis de datos — Vis Visualiz ualización ación 28 Análisis Análi sis de da datos tos — Inte Integració graciónn 29 Capacidades del integrador 29 Análisis Análi sis de datos — Cuan Cuantifica tificación ción 30 Análisis Análi sis de da datos tos — Infor Informes mes estánda estándarr 31 Análisis Análi sis de Datos — Inform Informes es espec especializa ializados dos 31 Utilidades y compatibilidades 35 Personalización 35 Automatización 36 Buenas prácticas de laboratorio 37 Control del instrumento 41 Conexión en red 41 Documentación 42 La estructura de directorios de la ChemStation 44

Agilent Technologies

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1

Caract Cara cter erís ísti tica cass de de la la Agi Agile lent nt Ch Chem emSt Stat atio ionn Descripción general

Descripción general Las ChemStations para GC, LC, LC/MSD y A/D son sistemas para el control del instrumento, adquisición y evaluación de datos para  cromatógrafos de gases Agilent 6890N, 6890Plus y 6890A; • cromatógrafo de gases Agilent 6850 Serie II; • cromatógrafo de gases 5890 Serie II; • módulos y sistemas HPLC Agilent 1100; • LC/MS LC/MSD D Agilen Agilentt 1100, 1100, • cromatógrafos de líquidos 1090, • detectores FLD 1046 y ECD 1049, • • •

sistema electroforesis sistema de CE/MS Agilent e capilar (CE) Agilent, interfase analógico/digital de doble canal Agilent 35900E.

El software está diseñado para ordenadores personales compatibles con IBM, bajo el entorno operativo Microsoft ® 2000 y Microsoft ® Windows XP Professional.

El software se vende como una Agilent ChemStation básica, para un instrumento en cinco versiones. Todas las versiones incluyen las funciones de adquisición de datos, control instrumental, análisis de datos (integración, cuantificación y elaboración de informes), automatización auto matización y personalización, para un instrumento analítico. Un instrumento está diseñado para operar según un esquema de tiempo individual, pero puede recoger datos de varios detectores, simultáneamente. Las cuatro versiones son: • ChemStation para un sólo instrumento para sistemas de cromatografía de gases (GC), referencia re ferencia G2070BA, • ChemStation para un sólo instrumento para sistemas de cromatografía de líquidos (LC), referencia G2170BA, instrume nto para sistemas de electroforesis • ChemStation para un sólo instrumento capilar (CE), referencia G1601BA, • ChemStation de un sólo instrumento para sistemas de cromatografía de líquidos/detector selectivo de masas (LC/MSD), referencia G2710BA, y 

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Cara Ca ract cter erís ísti tica cass de de la la Agi Agile lent nt Ch Chem emSt Stat atio ionn Descripción general

1

 Agilent ChemStation de un instrumento analógico/digital (A/D) para la adquisición de datos analógicos con control de parámetros externos, exter nos, referencia G2072BA. Las posibilidades de control instrumental del software de la Agilent •

ChemStation pueden ampliarse mediante la adquisición de instrumentos instrument os adicionales de adquisición de datos y módulos de control que permiten configuraciones de técnicas mixtas de múltiples instrumentos.

Módulos adicionales del instrumento Los módulos adicionales del instrumento son: • módulo de control instrumental GC y adquisición de datos, referencia G2071BA, • módulo de control instrumental LC y adquisición de datos, referencia G2171BA, • módulo de control instrumental CE y adquisición de datos, referencia G2172BA, • módulo de control instrumental LC/MSD, adquisición y evaluación de datos, referencia G2715BA, y  re ferencia G2073BA. • módulo de adquisición de datos analógicos, referencia

Módulos adicionales de evaluación de datos La posibilidad de proceso de datos de de los las módulos ChemStations también puede ampliarse mediante la adquisición correspondientes para aplicaciones de especialistas: • módulo de evaluación espectral del detector de diodos (DAD), referencia G2180BA, • módulo adicional ChemStore de organización de muestras y bases de datos de resultados, referencia G2181BA, y  • módulo de evaluación de datos de deconvolución y bioanálisis LC/MSD, referencia G2720BA, para uso solamente con la ChemStation LC/MSD.

Conocer la Agilent ChemStation

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1

Caract Cara cter erís ísti tica cass de de la la Agi Agile lent nt Ch Chem emSt Stat atio ionn Descripción general

En cada ChemStation se pueden configurar hasta cuatro instrumentos de cromatografía. Si se configuran instrumentos con detectores detect ores espectroscópicos (detectores de diodos para cromatografía cromatog rafía de líquidos o electroforesis capilar), no se soportan más de dos detectores de diodos en una Agilent ChemStation  yutiliza el número de instrumentos estápara restringido tres. Cuando se la Agilent ChemStationsoportados para LC/MSD controlara el módulo LC/MSD  Agilent 1100 (opcionalmente con un HPLC Agilent 1100 o HPLC 1090 Serie II), el PC no soporta otros instrumentos.

Productos sólo para la evaluación de datos Existen tres productos para la evaluación de datos, que podrían no tener instrumentos configurados. Están diseñados para la evaluación de datos en un entorno de oficina: • la Agilent ChemStation de evaluación de datos, referencia G2090BA, tiene las mismas capacidades de evaluación de datos que las HP ChemStations básicas, • la Agilent ChemStation de evaluación de datos LC 3D, referencia G2190BA, incluye la evaluación de datos espectrales de diodos y las posibilidades de la Agilent ChemStation para evaluación de datos, y  • la Agilent ChemStation de evaluación de datos LC/MSD, referencia G2730BA, incluye la evaluación de datos espectrales de diodos y de masas así como las posibilidades de la Agilent ChemStation básica para evaluación de datos.

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Cara Ca ract cter erís ísti tica cass de de la la Agi Agile lent nt Ch Chem emSt Stat atio ionn Hardware de la Agilent ChemStation

1

Hardware de la Agilent ChemStation Para más detalles sobre el hardware de la Agilent ChemStation, consultar el manual de Instalación de la Agilent Ch ChemStation emStation.

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1

Caract Cara cter erís ísti tica cass de de la la Agi Agile lent nt Ch Chem emSt Stat atio ionn Acerca del software de la Agilent ChemStation

Acerca del software de la Agilent ChemStation Sistema operativo La ChemStation requiere los sistemas operativos Microsoft Windows 2000 Professional, actualizado con Microsoft Service Pack 4, o Windows XP Professional SP2. Los cuadros de control de Agilent ChemStation requieren Microsoft Ex Excel. cel.

Métodos y secuencias El método analítico describe cómo debe realizarse una determinada separación. Contiene todos los parámetros para el control del instrumento, adquisición y evaluación de datos, incluyendo integración, cuantificación y elaboración de informes. El sistema puede configurarse conf igurarse para adquirir datos de cierto número de muestras por diferentes métodos. El fichero de control para esta clase de operación se denomina secuencia y contiene información de cada muestra, referencias a los métodos correspondientes y especificaciones de la recalibración automática. Para más información sobre los métodos mét odos y secuencias, consultar el Ca Capí pítu tulo lo 8, “Automatización” y “Automatización” y la ayuda en línea.

Configuración del sistema La configuración del sistema se realiza a través del programa editor de configuración. Permite definir los instrumentos, direcciones GPIB ó LAN, los directorios de los datos, secuencias y métodos y la definición de color para el software de la Agilent ChemStation. Para más inform información, ación, consultar los manuales suministrados con los módulos adicionales de la Agilent ChemStation.

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Conocer la Agilent ChemStation

 

Caract Cara cter erís ísti tica cass de de la la Agi Agile lent nt Ch Chem emSt Stat atio ionn Acerca del software de la Agilent ChemStation

1

Modelo de datos El software está diseñado según un modelo de datos basado en una estructura de memoria llamada registro. Los registros son estructuras de múltiple uso que pueden analíticos e información tanto(por de dos dimensiones (porsoportar ejemplo,datos tiempo/intensidad) como de tres ejemplo, tiempo/intensidad/longitud de onda). La Agilent ChemStation proporciona comandos y funciones f unciones para construir, ampliar,, extraer y, donde no se alteren los datos iniciales, editar registros. ampliar Para más información, consultar la Guía de Programación de Macros  disponible en la ayuda en línea.

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1

Caract Cara cter erís ísti tica cass de de la la Agi Agile lent nt Ch Chem emSt Stat atio ionn Acerca del software de la Agilent ChemStation

Convencioness de los nombres de ficheros Convencione Convenciones de los nombres Las reglas siguientes permiten que la ChemStation genere y procese nombres  válidos para ficheros y directorios: No está permitido que los caracteres siguientes formen parte de los nombres de ficheros y directorios: • < > : " / \ | @ % * ? etc Si se utilizan estos caracteres en la carpeta de instalación, la copia para reprocesamiento no arranca; si se utiliza el carácter % en la carpeta de instalación, algunos métodos abreviados de "Agilent ChemStation ChemSt ation B.01.0x" no funcionan correctamente. Son asimismo aplicables las siguientes reglas: Tabla 1

Caracteres restringidos

Parámetro de ChemStation

Carácter

Nombres de ficheros de método:

% y . (punto decimal) no permitidos

Nombres de ficheros de datos (prefijo/contador):

espacios en blanco no permitidos

Subdirectorios de datos y subdirectorios de secuencias:

[] + = ; , . (punto decimal) no permitidos

No se pueden utilizar como nombre de un fichero los siguientes nombres de dispositivo reservados: • CON, PRN, AUX, NUL • COMx (donde x es un número del 1 al 9) • LPT1x (donde x es un número del 1 al 9) Debe evitarse asimismo el uso de estos nombres seguidos de una extensión (p.ej. Nul.txt).  

NOTA

En las pruebas realizadas para validar las convenciones de los nombres de ficheros se utilizan equipos con sistema operativo en inglés. Agilent no puede garantizar el soporte de sistemas operativos que no sean en inglés y sus caracteres especiales.

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Conocer la Agilent ChemStation

 

Caract Cara cter erís ísti tica cass de de la la Agi Agile lent nt Ch Chem emSt Stat atio ionn Acerca del software de la Agilent ChemStation

1

Longitud máxima de los nombres de ficheros y subdirectorios de ChemStation Se enumeran a continuación las especificaciones de la Agilent ChemStation relativas a nombres de ficheros y subdirectorios: Tabla 2

NOTA

Longitud máxima de los nombres de ficheros y subdirectorios de ChemStation

Fic Ficher heroo de datos/ datos/Sub Subdir direct ectorio orio/Ru /Ruta ta

Longitu Longitudd máx. de la entrada

Adición Ejemplo automática

Nombre de fichero de datos

38

. .D

Demodad.d

Nombre de fichero de datos utilizando prefijo/contador

15

. .D

longname000001.d

Método Secuencia Hipersecuencia Librerías Plantillas de informe personalizadas

40

.M .S . HYP . UVL . FRP

def_lc.m def_lc.s def_lc.hyp demodad.uvl areapct.frp

Subdirectorio de ficheros de datos

40

demo (en información de la muestra)

Subdirectorio de secuencias de datos

40

demo (en parámetros de secuencia)

Ruta de datos Ruta de método Ruta de secuencia Ruta de hipersecuen hipersecuencia cia Ruta de librería Ruta de plantilla de informe personalizada

100

100

c:\chem32\1\data c:\chem32\1\methods c:\chem32\1\sequence c:\chem32\1\hyper c:\chem32\speclib c:\chem32\repstyle

Las barras de herramientas que muestran nombres de ficheros de datos/secuencias/métodos datos/secuencias/m étodos se han rredimensionad edimensionadoo para mostrar hasta 18 caracteres.

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Todos los mensajes del sistema de informes de los libros de registro de la ChemStation en formato ampliado y las cadenas de información se imprimen en varias líneas. En determinados informes, por ejemplo el informe de secuencia, los nombres de ficheros pueden aparecer truncados para que encaje toda la información en la plantilla de informe.

Interfase de usuario del software La interfase de usuario está organizada en ventanas que agrupan las funcionalidades del software de acuerdo con las típicas tareas analíticas. Las tres ventanas estándar siguientes están presentes en todas las configuraciones: • la pantalla “Method and Run Control” (Control del método mét odo y del análisis) para controlar y adquirir datos del instrumento, • •

la pantalla “Data Analysis” (Análisis de Datos) para revisar y reevaluar datos que han sido adquiridos, la pantalla “Report Designer” (Diseñador de Informes) para diseñar informes específicos, y 

Habrá pantallas adicionales si se han adquirido módulos de evaluación de datos o para ciertas configurac configuraciones iones instrumentales que soportan proced procedimientos imientos de  verificación  verific ación y dia diagnósticos gnósticos de dell instrumento. Pu Puede ede instalarse una pantalla de ChemStation Companion si se desea que los operadores analicen muestras a partir de una tabla preconfigurada fácil de utilizar. Cada ventana consta de una serie de elementos estándar que incluyen menús  y barras de herramientas. La barra de herramientas estándar están dar proporciona proporciona un acceso rápido a la información común del sistemaademás como métodos y secuencias. La ventana “Method and Run Control” incorpora una barra de estado del sistema, un área de información de la muestra, que puede configurarse para un sólo análisis o para análisis aná lisis automatizados y un diagrama esquemático de la interfase del instrumento para configuraciones GC, CE y LC. Esta estructura utiliza puntos que permiten el acceso rápido a los parámetros del instrumento y una revisión gráfica animada del estado de cada análisis en curso. El diagrama esquemático del instrumento puede desactivarse si no se necesita, para ahorrar memoria y otros recursos de Windows.

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La ventana “Data Analysis” amplía la barra de herramientas her ramientas estándar a modos específicos de análisis de datos que incluyen integración, calibración, elaboración de informes, anotaciones, comparación de señales y modos especializados adicionales si están instalados los módulos adecuados. Cada uno de los modos de análisis de datos está soportado por un grupo de herramientas específico. La ventana “Report Designer” (Diseñador de Informes) permite al usuario definir gráficamente el formato de un determinado estilo de informe de una manera orientada hacia objetos gráficos. También utiliza un grupo de herramientas específicas para esta tarea.

Adquisición de datos El estado del instrumento se monitoriza continuamente y se actualiza en pantalla junto con el tiempo de análisis transcurrido, tanto t anto si el software está  visible como si está iconizado. T Todo odo lo que ocurre durante el análisis, incluido cualquier error y las condiciones instrumentales al principio y al final del análisis, se registran en el sistema, y un extracto del registro se almacena con cada fichero de datos. Las condiciones instrumentales, como flujo, temperatura, presión y composición del disolvente para cromatógrafos de líquidos, pueden ser registradas y almacenadas con cada fichero de datos. Estos parámetros pueden visualizarse e imprimirse para atestiguar la calidad de cada análisis. La naturaleza exacta de los parámetros registrados depende tanto de la técnica como de las capacidades del instrumento configurado. Pueden utilizarse una o más ventanas para monitorizar los datos que están siendo adquiridos el instrumento, en tiempo Losodatos presentan en unidades realespor de medida como mUA, volti voltios, os,real. grados bares.seCada  ventana puede mostrar múltiples señales señales cromatográficas/electroferográficas o parámetros instrumentales, como presión, superpuestos. Los parámetros de  visualización por defecto defecto pueden ser ajustados y recordados por el sistema de manera que los usuarios pueden fijar sus propios valores como los de defecto. La ventana tiene capacidad de ampliarse y el cursor puede utilizarse para  visualizar la respuesta de una señal señal específica en cualquier punto de tiempo. Pueden utilizarse todas las funciones de la Agilent ChemStation durante el análisis, a través de la copia off-line.

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Existe un comando “snapshot” (instantáneo) disponible para los usuarios que deseen iniciar el procesado de datos antes de que termine el análisis. El formato de las ventanas de información de las señales y de estado, incluidos los componentes del diagrama esquemático de la interfase del instrumento, se salvan automáticamente. Para más información sobre la adquisición de datos, consultar consult ar el Capí Capítu tulo lo 3, “Adquisición de datos” y datos” y la ayuda en línea.

Análisi Aná lisiss de dato datoss — Vi Visua sualiz lizaci ación ón La ventana Data Analysis amplía la barra de herramientas herramient as estándar con funciones de análisis de datos agrupadas por tareas como integración, calibración, informes, anotaciones y comparación de señales. Son posibles las siguientes operaciones gráficas: •  visualización de una o múltiples señales seleccionable cuando se carga el cromatograma/electroferograma, • superposición de cromatograma/electroferograma de diferentes muestras, • resta de un cromatograma/electroferograma de otro, • alineamiento gráfico vertical y horizontal de las señales, como ayuda para la comparación visual, • inversión o reflexión ref lexión de señal, como ayuda para la comparación visual, • funciones de ampliación (zoom) y desplazamiento gráfico, • ajuste de los atributos de visualización que incluyen marcas de integración, líneas de base, ejes, tiempos de retención/migración y nombres de los compuestos (el usuario también puede seleccionar el tipo de letra para el RT y las etiquetas, ajustarsuperpuesta el tamaño y olaseparada orientación de la visualización, seleccionar visualización y seleccionar factores de escala), • la visualización del cromatograma/electroferograma puede incluir la superposición gráfica de los parámetros del instrumento, dependiendo de la capacidad del instrumento configurado, • pueden añadirse interactivamente anotaciones definidas por el usuario, seleccionado el tipo de letra, tamaño, rotación y color del texto (una  vez definidas, las anotaciones pueden moverse, moverse, editarse o borrarse, gráficamente),

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copiar las ventanas al portapapeles de Windo Windows ws tanto en formato metafile como bitmap, una función pick mode para visualizar los valores de datos individuales en unidades del detector, y  exportar puntos digitalizados de tiempo/intensidad al portapapeles de Microsoft Windows.

Análisi Aná lisiss de ddato atoss — Int Integ egrac ración ión El algoritmo de integración de la ChemStation es la segunda revisión de una nueva generación que pretende mejorar la resistencia, fiabilidad y facilidad de uso.

Capacidades del integrador NOTA

Casi todas las pantallas reflejan la posibilidad de usar nombres de fichero largos. Las barras de herramientas que muestran nombres de ficheros de datos/secuencias/métodos se han redimensionado para mostrar hasta 18 caracteres. Los algoritmos del integrador incluyen las siguientes capacidades clave: configur ar los parámetros • posibilidad de integración automática para configurar iniciales del integrador, integ rador, la capacidad de definir tablas individuales de parámetros para cada señal cromatográfica/electroferográfica, si se utilizan múltiples señales o más de un detector, • definición interactiva de los parámetros de integración que permite a los usuarios seleccionar gráficamente los tiempos de los parámetros, • integración gráfica manual o elástica de cromatogramas/electroferogramas que requieren la interpretación humana (estos parámetros pueden registrarse en el método y ser utilizados en la operación automatizada), •  visualización e impresión de resultados de integración, y  • capacidad de integrar al menos 1000 picos por cromatograma/electroferograma. •

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definiciones de parámetros del integrador para fijar o modificar los  valores básicos de rechazo por área, rechazo rechazo por altura, anchura de pico y sensibilidad de pendiente, • parámetros de control de la línea de base, como línea de base forzada, •

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sostener base, línea base en detrás todos los valles, líneadel base enactual, el siguientelínea valle,de fijar línea base hacia desde el final pico control de suma de área, reconocimiento de picos negativos, proceso de división tangencial que incluye comandos de definición del pico de disolvente, y  capacidad de definición de tablas de parámetros individuales para cálculos de división tangencial frontal/de cola para toda la señal cromatográfica/electroferográfica, parámetros de corrección de la línea base (independientes de la señal),

•

comandos de control para la operación del que integdefinen integrador, rador, rangos de tiempo de retención/migración • la asignación de hombros de picos mediante el uso de una segunda derivada o grado de cálculo de curvatura, • muestreo mejorado de puntos de datos no equidistantes para un mejor comportamiento con ficheros de datos LC-DAD reconstruidos a partir de espectros DAD. El algoritmo del integrador se describe con más detalle en el Ca Capí pítu tulo lo 4, “Integración”.. “Integración”

Análisi Aná lisiss de dato datoss — Cua Cuanti ntific ficaci ación ón La ventana de análisis de datos del modo de calibración de la Agilent Ag ilent ChemStation permite visualizar simultáneamente: • la señal o señales que se están calibrando con una indicación de la ventana actual de tiempo de retención/migración del compuesto, • la tabla de calibración cuya visualización puede configurarse conf igurarse desde una selección completa de parámetros de calibración, y  • la curva de calibración del compuesto que se está calibrando.

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Todas las ventanas del modo de calibración están vinculadas, de manera que los cambios en una de ellas se reflejan automáticamente en el resto. Este modo permite la selección gráfica y la modificación de los datos. La cuantificación se basa en cálculos de %, % normalizado, patrón externo, % de patrón externo, patrón interno y % de patrón interno, calculados sobre área o altura de pico. Las calibraciones pueden ser multinivel, e incluir múltiples patrones internos. Los historiales de calibración se salvan automáticamente y pueden utilizarse para ponderar los cálculos de recalibración. Para más información sobre la calibración y cuantificación, consultar el Ca Capí pítu tulo lo 7, “Calibración”. “Calibración”.

Análisis Análi sis de datos datos — Info Informes rmes estándar estándar Un grupo estándar de estilos de informes definibles por el usuario para informes de muestra pueden seleccionarse desde la pantalla de especificación de informe. Cada tipo de informe estándar contiene grupos de información estándar y opcionales. Para más información sobre los estilos de informes disponibles, consultar el Capítu Capítulo lo 10 10,, “Utilización de los informes de la ChemStation”. ChemStation”.

Análisis Análi sis de de Da Datos tos — Info Informes rmes especializ especializados ados También se incluyen en la Agilent ChemStation ChemSt ation funciones avanzadas para las aplicaciones que requieran informes más especializados. Estos incluyen estadísticas sobre la calidad de la separación, informes que incluyen análisis de tendencias entre muestras y formatos definidos por el usuario.

Informes de idoneidad del sistema Los informes de idoneidad del sistema permiten a los usuarios incluir los parámetros de rendimiento del sistema para cada análisis. Hay tres  variaciones o estilos de estos informes. informes.

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El Informe Estándar del rendimiento imprime los parámetros para métodos no calibrados, que incluyen: • tiempo de retención/migración, • k’, • área del pico, • altura del pico, • simetría, • anchura verdadera del pico a media altura, • eficacia en número de platos, • resolución y  • selectividad. Para métodos calibrados, el nombre y la cantidad de compuesto sustituyen al área de pico, altura y columnas de selectividad. La cabecera del informe incluye la cabeza de página estándar, información de la muestra, parámetros deylapie columna analítica y, opcionalmente, un gráfico del cromatograma/electroferograma. El estilo de rendimiento y ruido (Performance and Noise)  añade una evaluación del ruido de la señal, con un máximo de siete rangos de evaluación definidos por el usuario, a los datos del estilo de informe de rendimiento (Performance). Los parámetros de ruido aparecen como relaciones entre la señal y el ruido para cada pico o compuesto calibrado y como una tabla de ruido para cada señal. Cada una de estas tablas t ablas incluye el ruido calculado mediante la desviación estándar de seis medidas, pico a pico y métodos mét odos ASTM, así como la desviación  y la deriva. decada rendimiento mejorado (Extended El estilode  añade la representación gráfica pico, mostrando el tiempoPerformance) inicial y final, f inal, media anchura y línea de base. Este estilo incluye los siguientes siguiente s parámetros además de los que aparecen en los informes de rendimiento estándar: • área, altura y cantidad, • desviación, • exceso, • factor de cola usp, • intervalo de tiempo entre puntos y número de puntos sobre el pico, • momentos estadísticos (M0 a M4),

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anchura de pico a media altura calculada por los métodos verdadero, cinco sigma, de tangente y de cola, platos/columna y platos/metro calculadas por los métodos de anchura de pico a media altura, cinco sigma, de tangente y de estadística.

Los usuarios pueden definir sus propios rangos de evaluación de ruido y los límites aceptables para estos criterios. Los valores que caigan fuera de los límites aceptables definidos por el usuario, se indican en el informe. Para más información sobre los cálculos de idoneidad del sistema, consultar Capítu ítulo lo 11 11,, “Evaluación de la idoneidad del sistema”. sistema” . el Cap

Informes resumen de secuencia Los informes resumen de secuencia se generan al final f inal de una serie de análisis automatizados. Su rango de aplicación va desde un breve resumen de las muestras analizadas, a una representación gráfica gráf ica detallada de repetitividad o tendencia del análisis de los parámetros seleccionados por el usuario, entre diferentes muestras analizadas con el mismo método. Los informes constan de hasta nueve categorías de información: • una página de encabezamiento que puede ser definida por el usuario, • la configuración del instrumento, incluyendo números de revisión y especificaciones de la columna analítica o capilar para sistemas LC o CE, • la lista de muestras programadas para analizar; la secuencia, • una copia impresa del registro que indica lo analizado y documenta las etapas de adquisición y procesado de datos, así como cualquier parámetro inesperado, • una copia impresa de los métodos analíticos, informes individuales de muestra, estadísticas sobre las muestras de calibración, • estadísticas sobre las muestras desconocidas, • una página sumario que puede ser un resumen de la muestra, una línea de información por análisis, o un resumen de un compuesto con una pequeña tabla resumen del compuesto además del de la muestra. Para más información sobre los informes resumen de secuencia, consultar la página na 222 222.. ayuda en línea e “Informes resumen de secuencia” en la pági • •

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Informes personalizados En la Agilent ChemStation se incluye una ventana para el diseño de informes personalizados para los usuarios que deseen definir el contenido exacto de sus informes. El usuario define gráficamente un formato que puede incluir información general de la muestra, señal, de la integración y resultados analíticos cuantitativos. El usuario puede definir elementos element os individuales como texto, tablas y gráficos, organizarlos en secciones de información y ajustar gráficamente su posición relativa, tamaño y orientación de cada uno de ellos. Las secciones individuales pueden añadirse, borrarse, reordenarse y relacionarse. El usuario puede definir cabeceras y pies de página, sellos de hora para el informe y numeración de páginas en el formato página x de y. La información incluida en el informe puede ser cualquier parámetro de la Agilent ChemStation o definido por el usuario. Una vez diseñado el informe, puede ser asociado con un determinado método para ser el informe por defecto para ese tipo de análisis en particular. Los informes personalizados pueden enviarse a pantalla, pant alla, a impresora o a un fichero. Los informes en pantalla incluyen gráficos. Para más información sobre el formato de informes, consultar el sistema de ayuda en línea.

Informes de los Cuadros de Control Un cuadro de control viene incluido con el software de la Agilent ChemStation. Una vez instalado y seleccionado, el usuario podría seguir automáticamente un parámetro seleccionado de un compuesto cada vez que se ejecuta un método. Estos parámetros incluyen: Cantidad, Factor de Respuesta, Tiempo de retención/migración, y Área. Para más información sobre estos informes Personalizados y de Cuadros de Control, consultar la ayuda en línea.

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Utilidades y compatibilidades General La Agilent ChemStation puede importar y exportar ficheros de datos en el formato cromatográfico  ANDI (Analytical Data Interchange) de la Analytical Instrument Association (AIA), revisión 1.0, copyright 1992. Importar datos está soportado a nivel de cumplimiento uno (información de la muestra y datos de señal) y exportar datos, al nivel dos de cumplimiento (información de la muestra, datos de señal y resultados de integración). La Agilent ChemStation incluye comandos y funciones para soportar el intercambio dinámico de datos (DDE) estándar de la plataforma Microsoft Windows como cliente DDE y como servidor DDE. El grupo de comandos incluye aquellos para establecer y terminar conexiones, transferir información en ambas direcciones y ejecutar funciones remotas.

Personalización La Agilent ChemStation puede personalizarse utilizando el potente grupo de comandos. Estos comandos pueden agruparse para ejecutar automáticamente una función específica; tal grupo se denomina macro. Los usuarios, al escribir macros, pueden definir sus propias variables, incluidas en programaciones condicionales o ciclos, realizar I/O físicas que incluyen manejo de ficheros e interacción de usuario, ligar sus macros y organizar e intercambiar datos con otras aplicaciones MS-DOS o Microsoft Windows. Para más información sobre la personalización,  disponible en la ayudaconsultar en línea.la Guía de  progra  programación mación de ma macros cros

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Automatización La Agilent ChemStation puede ejecutar secuencias multimétodo. El grupo de parámetros de secuencia puede definirse para utilizar ficheros generados automáticamente o numerados secuencialmente, con un prefijo de hasta quince caracteres. El usuario puede pue de elegir realizar análisis completos o sólo secuencias de reproceso de datos y puede también seleccionar uno de una serie de comandos de desconexión específica de la técnica, o una macro de desconexión definida por el usuario que se ejecute cuando la secuencia termina por error o después de que todos los análisis estén completos. La tabla de secuencia, o lista de análisis a realizar, se crea en una interfase de usuario del tipo hoja de cálculo y permite permit e especificar los números de vial y los nombres de muestra, métodos de análisis, parámetros de cuantificación de muestras que incluyen la cantidad de muestra, un multiplicador y un factor de dilución, especificaciones de calibración, el parámetro de intercambio de datos LIMSID y módulos el númeroconfigurados, de inyecciones repetidas. Dependiendo de los instrumentos habrá más campos accesibles; por ejemplo, si un sistema LC Agilent 1100 incluye un colector de fracciones, en la tabla de secuencia aparecerá la columna "Fract. Start". El usuario puede configurar el aspecto de la tabla de secuencia. El usuario puede moverse por las celdas en la tabla y copiar, cortar o pegar cada una de ellas, o las filas completas o serie de filas, para crear las secuencias de forma eficaz y rápida. Las muestras pueden identificarse en la tabla de secuencia como muestras de tipo desconocido, de calibración o de control. El tipo de muestra determina cualquier tratamiento especial de evaluación de datos de la muestra: • las muestras desconocidas son evaluadas y reportadas report adas de acuerdo con las especificaciones del método, • las muestras de calibración se utilizan para recalibrar el componente de cuantificación del método, como se describe a continuación, y  • las muestras de control son evaluadas frente a los límites para cada componente definido en el método. Si los resultados caen fuera del rango especificado del parámetro, se interrumpirá la ejecución de la secuencia. Las muestras de calibración pueden definirse como simples, cíclicas o agrupadas. Simple significa que se realiza una recalibración cada vez que una muestra de calibración se define en la secuencia. Las cíclicas tienen lugar a intervalos definidos durante los análisis de una serie de muestras desconocidas. En las agrupadas, se analizan una serie de muestras

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desconocidas entre dos grupos de calibración. Los informes cuantitativos de las muestras desconocidas se calculan utilizando una tabla de calibración promediada entre los dos grupos de calibración. La funcionalidad de la secuencia parcial permite a los usuarios visualizar el orden de ejecución de la secuencia y seleccionar entradas individuales de muestras para reanalizar o reevaluar. Cuando se reevalúan datos ya adquiridos, los usuarios pueden especificar si el reproceso utiliza los datos originales de cuantificación de la muestra o los nuevos datos introducidos en la tabla de muestra de secuencia. Las secuencias pueden interrumpirse interr umpirse para analizar la inyección de muestras prioritarias por otro método, y reiniciarse a continuación sin afectar a la automatización. Las muestras pueden ser añadidas a la tabla t abla de secuencia mientras se está ejecutando la secuencia. Pueden imprimirse tanto las tablas de secuencia como las de secuencia parcial. Para más información sobre las secuencias, consultar el Capí Capítu tulo lo 8, “Automatización” y “Automatización”  y el sistema de ayuda en línea.

Buenas prácticas de laboratorio La Agilent ChemStation está desarrollada según patrones internacionalmente reconocidos y contiene un número de funciones que ayudan a los usuarios a trabajar en un entorno regulado. Estas funciones se refieren al área de especificación del método completo y verificación de que los métodos se ajustan al uso que se pretende de ellos, para controlar la operación del sistema y asegurar la trazabilidad, originalidad y calidad de los datos.

Proceso de desarrollo El Certificado de Vali Validación dación incluido con cada paquete de sof software tware documenta las etapas de desarrollo y las pruebas ejecutadas como parte del ciclo de desarrollo. El proceso de desarrollo está registrado con la norma de calidad ISO 9001. Está documentado junto con los protocolos de revalidación revalidación in ssitu, itu, en la Carpeta de validación de la Agilent ChemStation para HPLC .

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Especificación y uso del método •

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Métodos globales — todas las es Métodos especifica pecificaciones ciones del in instrumen strumento to y del análisi análisiss de datos se almacenan juntas. Los métodos méto dos incluyen información del rango de cada compuesto para controlar que los resultados r esultados de cuantificación no se aplican fuera del rango calibrado. El registro de la historia del cambio del método permite a los usuarios de un método validado, grabar automáticamente cómo y cuándo cambió un método. Los usuarios pueden, opcionalmente, añadir un comentario. El registro se almacena automáticamente como parte de método, en formato binario. Para evitar el acceso desautorizado a los registros, están protegidos por el esquema de acceso del usuario, descrito posteriormente. El registro de la historia del cambio, puede visualizarse e imprimirse. Pueden asignarse límites sobre una base compuesto-compuesto en cada método, para ciertos parámetros cromatográficos/electroferográficos y de rendimiento del sistema, como se describe en la sección de cuantificación

del de datos. Los resultados que exceden estos rangos paraanálisis controlar la ejecución de secuencias automatizadas como se se utilizan describe en la sección de automatización. Se indican en el informe del análisis correspondiente. • Los informes de rendimiento o idoneidad del sistema (ver la sección anterior de Informes), proporcionan un análisis detallado de la calidad de separación. La Agilent ChemStation puede configurarse para el acceso restringido a dos niveles, de operador y de administrador administrador.. Este nivel de administrador puede estar protegido por una clave y permite el acceso a todas las funciones de la  Agilent ChemStation. El nivel de operador restringe el uso a las funciones claveorientado y a la ejecución de métodos analíticos definidos. El modificación nivel de operario está al uso en laboratorios de rutina y evita la y creación de nuevos métodos por parte de los usuarios.

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Robustez del método “Análi álisis sis de Datos Datos — Inf Informe ormess Los Informes resumen de secuencia (ver “An especializados” en la pág página ina 31) 31) proporcionan un medio para probar la robustez de los métodos. Los informes con formato extendido para criterios seleccionados por el usuario, muestran gráficos de tendencia y pueden utilizarse para determinar los límites de operación reales. Estos límites pueden incorporarse al método para asegurar, a través del análisis de muestras de control, que el método funciona dentro de las especificaciones.

Operación del sistema El kit de verificación de la Agilent ChemStation, que es parte del software estándar,, comprueba automáticamente la inst estándar instalación alación y operación correct correctaa de la sección de evaluación de datos, comparando los resultados generados cuando el test se ejecuta frente a valores conocidos ya registrados. El kit de  verificación permite a los usuarios definir sus propios ficheros de datos datos y métodos, para ser la base del test.

Seguimiento, originalidad y calidad de los datos El registro del análisis proporciona un registro de la transacción del sistema completo. Registra también cualquier evento inusual (como errores o cambios de parámetros durante el análisis), así como las condiciones instrumentales antes y después de cada análisis. Con cada fichero de datos se salva una copia del extracto relevante del registro. Las condiciones instrumentales, como presión, flujo y temperatura, que se alcanzaron durante cada análisis, también se registran, si el instrumento instr umento configurado soporta esta posibilidad. Estos datos pueden visualizarse gráficamente con el cromatograma/electroferograma y mostrar las condiciones durante el análisis, así como ser incluidas en el informe. Los métodos salvados con el fichero de datos registran el método en el momento del análisis y permiten la reconstrucción completa de los datos reportados en una fecha posterior. El método se salva al completarse todas las etapas analíticas. Todos los informes tienen el sello de la hora y numeración de las páginas (con estilo página x de y). El usuario puede seleccionar el nivel de detalle en cada informe, desde informes resumen simples a detalles det alles completos del sistema (ver la sección anterior sobre informes).

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Si se especifican como parte del método GLP los Save register files, se salvarán todos los datos originales, incluyendo información de la muestra, método mét odo de análisis de datos, señales cromatográficas/electroferográficas, condiciones instrumentales, resultados de integración y cuantificación, datos de informe y el logbook del análisis, en un fichero binario protegido. Se trata de un formato binario que no se puede editar y que asegura la originalidad de los resultados. El fichero incluye un esquema de revisión que indica si se han reprocesado los datos. Los tipos de las muestras de control pueden ser definidos en la tabla de secuencia y utilizados para comprobar automáticamente el rendimiento del sistema frente a los resultados re sultados de muestras de control de calidad cuando el instrumento funciona de forma desatendida. Los resultados fuera del rango aceptable especificado por el usuario, detendrán la ejecución automática del instrumento.

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Cara Ca ract cter erís ísti tica cass de de la la Agi Agile lent nt Ch Chem emSt Stat atio ionn Control del instrumento

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Control del instrumento La capacidad de control de las Agilent ChemStations ChemSt ations puede ampliarse mediante la adquisición de módulos adicionales que permiten configurar múltiples instrumentos y técnicas mixtas. Para más información, consultar el (los) manual(es) suministrados con los módulos adicionales de la ChemStation.

Conexión en red Se ha probado con éxito la compatibilidad del software con los productos de red de Agilent Ag ilent LanManager LanManager,, Microsoft Windows 2000 y Microsof Microsoftt Windows XP Professional, basados en la especificación IEEE 802.3 CSMA/CD. Será compatible condecualquier de la red r ed compatible con las reglas de programación Microsoftsoftware Windows. Estos productos permiten a la Agilent ChemStation compartir dispositivos como plotters e impresoras con otros ordenadores del laboratorio, así como compartir información como ficheros de datos y métodos.

Cliente/Servidor El software de la Agilent ChemStation puede instalarse en un servidor de red adecuado y cargarse en los PCs del cliente cuando se requiera. Cada configuración específica de cliente asegura un entorno adecuado para diferentes técnicas y usuarios individuales mientras que la instalación de software centralizada mitiga la carga de manejar muchas copias de la misma instalación de la Agilent ChemStation en un entorno de trabajo.

Control del instrumento basado en la red de área local (LAN) El software de la Agilent ChemStation proporciona el control del instrumento basado en la red de área local (LAN) y la adquisición de datos para el GC  Agilent 6890, el modulo de control A/D Agilent 35900E y el LC Agilent 1100. Los instrumentos se pueden controlar y monitorizar fácilmente conectándolos a una red de área local (LAN) donde reside el PC de la Agilent ChemStation. Esta disposición permite al PC estar localizado lejos de los instrumentos que controla.

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Caract Cara cter erís ísti tica cass de de la la Agi Agile lent nt Ch Chem emSt Stat atio ionn Documentación

Documentación El grupo de documentación contiene secciones específicas sobre: • instalar y aprender el software Agilent ChemStation, • utilizar el software Agilent ChemStation, • conocer los principios de cómo funciona el software, y  • personalizar la Agilent ChemStation.

Instalación y aprendizaje Cada producto Agilent ChemStation se acompaña de un manual de instalación que incluye detalles de las etapas et apas clave respecto a los requisitos de hardware y software, instalación de la interfase del instrumento, instr umento, instalación y cualificación de la instalación de la Agilent adquirida ChemStation. El manual instalación registros es específico de la configuración y puede incluirde diagnósticos, del sistema y consejos sobre el mantenimiento. mant enimiento.

Utilización del software Dos categorías adicionales de información en línea están diseñadas para el usuario de rutina. La ChemStation incluye un sistema de ayuda en línea ordenado, con estilo Windows y dependiente del contexto. Este sistema ofrece explicaciones detalladas de cada pantalla y el significado de los parámetros en esa pantalla. Las explicaciones están acompañadas por gráficos, donde corresponde, y pueden copiarse en el portapapeles de Windows para incorporarlas en la documentación del usuario, o para imprimirlas. La sección “How To” de la ayuda en línea también incluye una lista de control de las tareas de cromatografía más complejas, específicas y comunes, para ayudar a los usuarios menos experimentados a configurar el sistema correctamente. Estas listas de control están vinculadas directamente con la información de ayuda en línea.

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Cara Ca ract cter erís ísti tica cass de de la la Agi Agile lent nt Ch Chem emSt Stat atio ionn Documentación

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Familiarización con los principios El manual Familia  Familiarización rización con la Agilent Chem ChemStation Station documenta los principios de la operación del software sof tware y los algoritmos utilizados en la manipulación de datos.

Personalización Los usuarios que deseen personalizar la operación de la Agilent ChemStation, o que quieran incorporar funciones f unciones adicionales, pueden hacerlo escribiendo macros. El manual de referencia, Guía de programación de macros , disponible en la ayuda en línea, incluye un conjunto de ejemplos e jemplos acompañados por una descripción completa de los tipos y estructuras de datos internos. El fichero de ayuda de comandos, al que se accede directamente desde el menú de ayuda de la Agilent ChemStation ChemSt ation o el cuadro de diálogo Show es la del referencia de función del programador. Incluye la sintaxis  yCommand, explicaciones parámetro con ejemplos de macros que ilustran el uso de muchos de los comandos. Por estar en e n línea, los usuarios pueden copiar los ejemplos y la sintaxis del comando directamente en sus propios ficheros de macro.

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Caract Cara cter erís ísti tica cass de de la la Agi Agile lent nt Ch Chem emSt Stat atio ionn La estructura de directorios de la ChemStation

La estructura de directorios de la ChemStation El siguiente ejemplo muestra la estructura de directorios de la ChemStation. Consta de directorios genéricos que son compartidos por todos los instrumentos configurados y directorios directorios específicos de los instrumentos. El programa de instalación del software crea un subdirectorio (por defecto CHEM32) para cada instrumento configurado, con el número correspondiente. Dentro de este subdirectorio, se almacenan, por defecto, los datos, métodos y secuencias para este instrumento. CHEM32

REPSTYLE CORE

PICTURES LANGUAGE HELPENU 1024 800

LANGUAGE SYS

HELPENU LANGUAGE

BACKUP LC GC CE DRIVERS

HELPENU LANGUAGE 800

1

TEMP DATA DEMO METHODS SEQUENCE VERIFY

SPECLIBS

Figura 1 44

Estructura de directorios de la ChemStation

Conocer la Agilent ChemStation

 

Caract Cara cter erís ísti tica cass de de la la Agi Agile lent nt Ch Chem emSt Stat atio ionn La estructura de directorios de la ChemStation

1

Los subdirectorios de la Agilent ChemStation son los siguientes: Tabla 3

Subdirectorios de la ChemStation

Directorio

Contenidos

CHEM32

Comprende programas para configurar e iniciar el software de la ChemStation. Debe formar parte de la PA PATH. TH. Este directorio es creado automáticamente por el programa de instalación, a menos que se dé otra alternativa.

REPSTYLE

Contiene las plantillas definidas para los informes.

CORE

Consta de los componentes principales del software compartidos por todas las configuraciones de instrumentos cromatográficos/electroferográficos. cromatográficos/electroferográficos. Es el directorio de trabajo de la Agilent ChemStation.

PICTURES

Contiene los gráficos necesarios para la Agilent ChemStation.

LANGUAGE

Utilizado por el código específico de lenguaje de esta parte del software.

1024 and 800

Comprende los ficheros de inicialización para la interfase gráfica de usuario.

SYS

No cambiar. Contiene los componentes genéricos compartidos por todas las configuraciones de los instrumentos cromatográficos/electroferogr cromatográficos/electroferográficos. áficos. \chem32\sys debe formar parte del PA PATH. TH. Los programas de instalación los crean, por defecto.

HELPENU

Utilizado por la versión inglesa-US de los ficheros de ayuda de la parte principal del software.

LANGUAGE

Utilizado por otras partes, específicas del lenguaje.

BACKUP

Para las copias de seguridad de los ficheros antiguos durante la instalación.

DRIVERS

Contiene los controladores de los instrumentos configurados.

1

Para el instrumento configurado (1 a 4). Consta de cinco subdirectorios: DAT DATA, A, METHODS, SEQUENCE, VERIFY y TEMP. TEMP.

DATA

Contiene todos los directorios con los resultados de los análisis. También puede contener más subdirectorios si se estructura el disco con subdirectorios subdirectorios,, definiéndolos utilizando los cuadros de diálogo Sample Information o Sequence Parameters. Los directorios de resultados se identifican por un nombre con la extensión.D. Para más información sobre la estructura de los ficheros de datos, consultar “Ficheros de datos” en la página página 65 65..

METHODS

Contiene todos los directorios de métodos con la extensión .M. Para más detalles sobre contenidos, consultar “Estructura del directorio de métodos” en la págin páginaa 56.

SEQUENCE

Comprende las tablas de secuencia. Los ficheros de estos directorios tienen la extensión .S.

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45

 

1

Caract Cara cter erís ísti tica cass de de la la Agi Agile lent nt Ch Chem emSt Stat atio ionn La estructura de directorios de la ChemStation Tabla 3

46

Subdirectorios de la ChemStation (continuación)

Directorio

Contenidos

VERIFY

Contiene ficheros de datos, métodos y los resultados del proceso de datos almacenados en ficheros registro (.REG). Estos ficheros ejecutan el procedimiento de verificación de la Agilent ChemStation descrito en la ayuda en línea (Online Help). Para cada test de verificación se utiliza un grupo de ficheros de datos, métodos y registro

TEMP

El subdirectorio TEMP contiene los ficheros de trabajo temporales y los ficheros del logbook. Por ejemplo, para el Instrumento 1 el logbook en línea se denomina INSTR1.LOG y el logbook no en línea se denomina INSTR1-2.LOG.

LC, GC, CE

Código específico de instrumento como los ficheros INI. Estos directorios sólo aparecen si está instalado un instrumento de este tipo.

SPECLIBS

Comprende las librerías espectrales. (Agilent ChemStations sólo para sistemas 3D LC, LC/MS).

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Agilent ChemStation Conocer la ChemStation

2 Métodos ¿En qué consiste un método? 48 Partes de un método 49 Method Information (Información del método) 49 Instrument Control (Control del instrumento) 49 Data Analysis (Análisis de datos) 50 Run-Time RunTime Checklist (Lista de control del análisis) 51 Estado de los métodos 52 Método grabado (Stored) 52 Método activo (Current) 52 Creación de métodos 53 Edición de métodos 54 Partes del método a editar 55 Estructura del directorio de métodos 56 ¿Qué ocurre cuando se ejecuta un método? 57 Comando o macro pre-análisis 58 Adquisición de datos 58 Operación del método 58 Análisis de datos 59 Análisis de datos personalizado 60 Salvar datos GLP 60 Comando o macro postanálisis 61 Salvar copia del método con datos 61 Resumen del funcionamiento del método 62

Agilent Technologies

47

 

2

Métodos ¿En qué consiste un método?

¿En qué consiste un método? Un método comprende todos los parámetros de adquisición y análisis de datos de una muestra determinada, junto con las tareas pre y post análisis, si fueran necesarias.

48

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Métodos Partes de un método

2

Partes de un método Los métodos se identifican mediante un nombre de hasta ocho caracteres alfanuméricos. El nombre del fichero siempre tiene la extensión .M, que lo identifica como método. Los métodos se almacenan como directorios MS-DOS que contienen ficheros individuales relativos a los componentes del método. mét odo. Cada método consta de cuatro componentes: • información del método, • control del instrumento, • análisis de datos, y  • lista de control del análisis

Method Information (Información del método) Esta sección se utiliza para incluir la información sobre el método.

Instrument Control (Control del instrumento) Define los parámetros que controlan el instrumento o sus componentes. Con un LC, parámetros como la composición de la fase móvil, velocidad de flujo,  volumen de in inyección, yección, longitud de onda de detección, etc., controlan la bomba, inyector y detector. En un GC, la temperatura, presión del inyector y el flujo f lujo en la columna empaquetada, etc. controlan el instrumento.

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49

 

2

Métodos Partes de un método

Data Analysis (Análisis de datos) Define los parámetros que controlan el procesado de datos.

Signal Details (Detalles de la señal) Define las señales y las propiedades utilizadas para la evaluación de datos. Parámetros de integración Define los parámetros programados que tendrán lugar en momentos de retención/migración específicos en un cromatograma/electroferograma. Estos parámetros pueden utilizarse para cambiar el modo de integración.

Identificación de picos Define los parámetros del procesamiento de datos asociados a la identificación de picos en el cromatograma/electroferograma.

Peak Quantification (Cuantificación de picos) Define los parámetros del procesado de datos que afectan a los cálculos de cuantificación, que determinan la cantidad o concentración del componente de la muestra correspondiente a cada pico.

Calibration and Recalibration (Calibración y Recalibración) Define los parámetros del procesado de datos que afectan a la calibración y a la frecuencia con que se realiza.

Report (Informe) Define el formato del informe que se imprime después de un análisis.

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Métodos Partes de un método

2

Run-Time Checklist (Lista de control del análisis) Define qué partes del método se ejecutan al realizar un análisis. Puede utilizarse la lista de control del análisis para: • adquirir adquirir,, almacenar y procesar datos para generar un informe, • ejecutar sólo una parte del método, • adquirir y almacenar datos sin analizarlos, • analizar de nuevo ficheros de datos existentes, • usar macros propias para el análisis de datos, procesado pre y postanálisis, GLP. • salvar los resultados de los análisis en un registro para propósitos GLP.

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51

 

2

Métodos Estado de los métodos

Estado de los métodos Un método puede tener dos estados.

Método grabado (Stored) Es un método grabado en el disco del ordenador. Estos métodos constan de un nombre de hasta ocho caracteres alfanuméricos seguidos de la extensión .M.

Método activo (Current) Cuando un método almacenado se recupera del disco, se convierte en activo. Siempre hay un método activo en memoria. Cuando la ChemStation se inicia, se carga el método por defecto que suministra Agilent Technologies como parte del proceso de inicialización. Por ejemplo, este método puede ser: • DEF_LC.M para un instrumento LC, o • DEF_GC.M para un instrumento GC. Se sitúa en memoria una copia del método por defecto convirtiéndose en el método activo. En este momento puede cargarse un método diferente, que será, entonces, el activo.

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Métodos Creación de métodos

2

Creación de métodos La creación de un nuevo método siempre consiste en modificar el método activo y salvar los cambios bajo un nuevo nombre. Es importante import ante tener en cuenta que cuando el método activo se cambia, la versión grabada en el disco permanece sin modificar hasta que se salva. Hay varias posibilidades para crear un método. Se puede crear un método para realizar una o todas las partes de un análisis. Por ejemplo, se puede crear un método para realizar únicamente la adquisición de datos. Cuando esté preparado para analizar los datos y generar un informe de búsqueda de librerías, puede modificarse de nuevo el método para realizar las tareas del procesado de datos.

PRECAUCIÓN

No borrar el método defecto como plantillas para por crear nuevos(DEF_LC.M, métodos. o DEF_GC.M). Estos ficheros se utilizan

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53

 

2

Métodos Edición de métodos

Edición de métodos Pueden editarse los métodos existentes utilizando la opción Edit Entire Method del menú Method. Pasará por todos to dos los cuadros de diálogo del método  y al final podrá salvarlo. salvarlo. Este proceso se muestra a continuación (Fi Figu gura ra 2): Método en el disco Cargar el método

El método se carga en memoria y se convierte en el método activo

Seleccionar Edit Entire Method en el menú Method

Editar el método

Salvar el método como

Salvar con un nuevo nombre

Salvar con el mismo nombre

Se crea el nuevo método en el disco

Sustituye al método activo

Figura 2

54

Edición de métodos

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Métodos Edición de métodos

2

Partes del método a editar Cada método consta de cuatro secciones que pueden editarse por separado.  Algunos de los apartados siguientes se refieren a cuadros de diálogo diálogo específicos, otros son descripciones generales. •  Method Information Information (Inf (Información ormación del mé método) todo) consiste: • en una descripción del método. •  Instrument Control (Control del instrume instrumento) nto) depende de la configuración  y puede consistir en, por ejemplo: • parámetros del horno, • parámetros del inyector y  • parámetros del detector. •  Data Analysis (Análisis de da datos), tos), consiste en: • • • • • •

detalles de la señal, parámetros de integración, parámetros de cuantificación, parámetros de calibración y  parámetros del informe.

 Run Time Checklist Checklist (Lista de ccontrol ontrol del aná análisis) lisis) consta de: •

las partes del método que se van a ejecutar.

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2

Métodos Estructura del directorio de métodos

Estructura del directorio de métodos Un método consta de un grupo de ficheros almacenados en un directorio. El subdirectorio methods comprende todos aquellos que tienen una extensión .M. Los ficheros de método con la extensión .MTH contienen grupos de parámetros en formato ASCII. El fichero INFO.MTH comprende los parámetros de control del método.

Los ficheros de métodos que contienen los parámetros del instrumento tienen el nombre del módulo analítico correspondiente. corr espondiente. Por ejemplo: Tabla 4

56

Ejemplos de ficheros de métodos

LC1090.MTH GC5890.MTH

Contiene el método de adquisición del 1090. Contiene el método de adquisición del 5890.

HPCE1.MTH

Contiene el método de adquisición para electroforesis capilar.

DAD1.MTH

Contiene el método de adquisición del HP 1090.

FLD1.MTH

Contiene el método de adquisición del detector de fluorescencia HP1046.

ECD1.MTH

Contiene el método de adquisición del detector electroquímico HP1049.

ADC1.MTH

Contiene el método de adquisición del Agilent 35900. Si están configurados dos instrumentos idénticos, los ficheros del método son ADC1.MTH, ADC2.MTH.

DAMETHOD.REG

Para evaluación de datos.

LALS1.REG

Contiene lospara parámetros para el inyector inyector automático Agilent 1100. Los ficheros de métodos los demás módulos Agilent 1100 siguen el mismo convenio lxxx1.reg donde xxx son las siglas del módulo.

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Métodos ¿Qué ocurre cuando se ejecuta un método?

2

¿Qué ocurre cuando se ejecuta un método? El cuadro de diálogo Run Time Checklist especifica las partes del método a ejecutar cuando se inicia un análisis. Hay ocho partes en la lista de control del análisis (Run Time Checklist): • comando o macro preanálisis, • adquisición de datos, • análisis de datos estándar estándar,, • análisis de datos para la segunda señal (sólo GC), • análisis de datos personalizado, • salvar datos GLP, •

comando o macro postanálisis, y  salvar copia del método con datos. Cuando se ejecuta un método, se ejecutan las partes del método definidas en el cuadro de diálogo Run Time Checklist. •

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2

Métodos ¿Qué ocurre cuando se ejecuta un método?

Operación del método Figu gura ra 3 muestra el estado de la ChemStation durante la operación del La Fi método, con todas las partes de la Run Time Checklist seleccionadas. Estado de ChemStation Inyección

Macro postanálisis Evaluación datos Inyección y análisis

Fichero de datos iniciales cerrado

Macro preanálisis Preanálisis

   o     d    a    t    s    e    s    e     l    e    v     i

    N

Ejecución del método a través de la ChemStation Tiempo

Figura 3

Operación del Método

Comando o macro pre-análisis Si se especifica un comando o macro pre-análisis, se ejecuta ejecut a antes de iniciarse el análisis. Esta paquetes parte se utiliza normalmente para personalizar el sistema,  junto con otros de software.

Adquisición de datos •

•

58

Todos los parámetros se fijan con las condiciones iniciales del método activo. Si se especificó, se ejecuta un programa de inyección y se inyecta muestra del vial definido actualmente.

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Métodos ¿Qué ocurre cuando se ejecuta un método? •

•

2

La pantalla muestra el progreso del análisis, incluyendo información cromatográfica/electroferográfica y datos espectrales, si los hubiera. Se adquieren los datos y se almacenan en un fichero.

Análisis de datos Cuando se alcanza el tiempo final, el análisis acaba y todos los datos primarios se almacenan en el disco duro. La parte Data Analysis del software se inicia, una vez almacenados todos los datos iniciales.

Integración •

•

• •

Los objetos del cromatograma/electroferograma de la señal se integran según se indica en el cuadro de diálogo Integration Events. Se determinan el inicio y el máximo del pico, el tiempo de retención/migración y el final del pico. Se define la línea de base bajo cada pico, para determinar la altura y el área. Se generan los resultados de integración en la lista Integration Results.

Identificación y cuantificación del pico •

•

Utilizando los tiempos de retención/migración y los cualificadores opcionales de picos, el software identifica los picos mediante referencias cruzadas con compuestos conocidos, definidos en la tabla de calibración. Con la altura o el área del pico, el software sof tware calcula la cantidad de cada componente detectado, usando los parámetros especificados en la Calibration Table.

Búsqueda de la librería de espectros (ChemStations sólo para sistemas LC 3D, CE, CE/MS y LC/MS) Para todos los picos que dispongan de espectros UV-visible, puede hacerse una búsqueda automática en una librería espectral predefinida, para identificar los componentes de la muestra. Consultar  Familiar  Familiarización ización con el m módulo ódulo de espectros para más detalles.

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2

Métodos ¿Qué ocurre cuando se ejecuta un método?

Control de pureza de pico (ChemStations sólo para sistemas LC 3D, CE, CE/MS y LC/MS) Para un pico del que se disponga del espectro UV-visible, puede calcularse un factor de pureza y almacenarlo en un registro. La pureza del pico puede determinarse automáticamente al final de cada análisis como parte del método, si se ha marcado la opción Check Purity al especificar una búsqueda en librería o se ha seleccionado un estilo de informe apropiado. Consultar  Familiarización  Familia rización con el módulo de es espectros pectros para más detalles.

Imprimir informe Se genera un informe con las identidades y cantidades de los compuestos detectados en el análisis.

Análisis Permite de datos personalizado ejecutar macros personalizadas para evaluar los datos analíticos. Salvar datos GLP Salva el registro binario GLPSave.Reg junto con el método de análisis de datos en el subdirectorio de ficheros de datos. Esta función está diseñada para ayudar a probar el origen de los datos y la calidad de cada análisis. El fichero binario GLPSave.Reg contiene la siguiente información en un fichero registro, no editable, protegido: • parámetros claves del instrumento (presión, temperatura, etc.), • señales cromatográficas o electroferográficas, • resultados de integración, • resultados de cuantificación, • método de análisis de datos, y  • logbook (libro de registro). Estos datos se salvan sólo cuando está activada la función Save GLP Data, por haberla seleccionado en la lista de control del análisis. Pueden revisarse, pero no editarse, los datos GLP en el menú Data Analysis de la ChemStation.

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Métodos ¿Qué ocurre cuando se ejecuta un método?

2

Comando o macro postanálisis Si se especifica un comando o macro postanálisis, se ejecuta después de la evaluación de datos. Por ejemplo, copiar datos en un disco como copia de seguridad.

Salvar copia del método con datos Se realiza después de la adquisición de datos y sólo si está activada Data  Acquisition en la Run Time Checklist. De esta fforma orma se copia el método  en el directorio de datos. actual  en

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2

Métodos Resumen del funcionamiento del método

Resumen del funcionamiento del método La lista siguiente muestra el proceso de la operación del método, cuando están seleccionadas todas las partes de la Run Time Checklist. 1  Prerun Command Command Macro (Macro de comandos pr pre-análisis) e-análisis)

Ejecuta una tarea antes de iniciarse el análisis. 2  Adquisi  Adquisición ción de datos

Ejecuta el programa del inyector inyector.. Inyecta la muestra.  Adquiere datos iniciales. iniciales.  Almacena los datos.

3  Save Copy of of Method with Data (Salva una copia de dell método con datos) 4  Data Analysis (Process Da Data) ta) (Análisis de datos (pro (proceso ceso de dato datos)) s))

Carga el fichero de datos. Integra el fichero de datos. Identifica y cuantifica el pico. Busca en la librería espectral, si hubiera. Controla la pureza de pico, si hubiera. Imprime el informe.

5 Customized Data Analysis (Análisis de datos personalizado)

Ejecuta las macros. 6  Save GLP Data Data (Salva los d datos atos GLP)

Salva el registro binario GLPSave.Reg 7  Postrun Command Command Macro (Macro d dee comandos p post-análisis) ost-análisis)

Ejecuta una tarea una vez finaliza el análisis. Por ejemplo, genera un informe personalizado.

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Agilent ChemStation Conocer la ChemStation

3 Adquisición de datos ¿En qué consiste la adquisición de datos? 64 Ficheros de datos 65 Monitores en línea 66 Monitorización en línea de la señal 66 Monitorización en línea de los espectros 66 Logbook 67 Información del estado 68 Estado de la ChemStation 68 Barra de estado 68 Diagrama del sistema 69

Agilent Technologies

63

 

3

Adquisición de datos ¿En qué consiste la adquisición de datos?

¿En qué consiste la adquisición de datos? Durante la adquisición de datos, todas las señales adquiridas por el instrumento analítico pasan de señales analógicas a digitales, en el detector. La señal digital se transmite a la ChemStation electrónicamente y se graba en el fichero de datos de señales.

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Adquisición de datos Ficheros de datos

3

Ficheros de datos Un fichero de datos comprende un grupo de ficheros guardados en el directorio DATA DATA como un subdirectorio, con un nombre de fichero de datos  y una extensión .D. Los nombres de ficheros de datos datos se pueden definir manualmente utilizando 40 caracteres incluida la extensión. Cada uno de los ficheros del directorio sigue unas convenciones con respecto a sus nombres. Tabla 5

Ficheros de datos

Nombre

Descripción

*.CH

Ficheros de datos de señales cromatográficas/electroferográficas. El nombre comprende el tipo de módulo o detector detector,, el número del módulo y la identificación de la señal o del canal. Por ejemplo, ADC1A.CH, donde ADC es el tipo de módulo, 1 es el número del módulo, A es el identificador identificador de la señal y .CH es la extensión cromatográfica.

*.UV

Ficheros de datos espectrales UV. El nombre comprende el tipo de detector y el número de dispositivo (sólo con detector de diodos y de fluorescencia).

REPORT.TXT

Informes para los ficheros de datos de señal equivalente. El nombre comprende el tipo de detector, el número de dispositivo y la identificación de señal o canal, por ejemplo, ADC1A.TXT.

SAMPLE.MAC

Macro de información de la muestra.

RUN.LOG

Entradas del logbook generadas durante un análisis. El logbook guarda un registro del análisis. Todos Todos los mensajes de error y los cambios de estado importantes de la ChemStation se introducen en el logbook.

LCDIAG.REG

Sólo para LC. Contiene curvas del instrumento (gradientes, temperaturas, presiones, etc.), el volumen de inyección y descripciones de los disolventes.

ACQRES.REG

Contiene información de la columna. Para GC también contiene el volumen de inyección.

GLPSAVE.REG

Parte del fichero de datos si se indica “Save GLP Data”.

El método puede grabarse junto con los resultados. En estos casos, el directorio del método se graba como un subdirectorio del directorio de los ficheros de datos.

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65

 

3

Adquisición de datos Monitores en línea

Monitores en línea Hay dos tipos de monitores en línea, el de la señal y el de espectros.

Monitorización en línea de la señal El monitor de la señal en línea permite visualizar varias señales y, si está soportado por el instrumento asociado, el rendimiento del instrumento se representa gráficamente en la misma ventana. Pueden seleccionarse las señales que se deseen visualizar y ajustar los ejes de tiempo y de absorbancia. Para los detectores que soporten esta función, se dispone de un botón de balance. Puede visualizarse la respuesta de la señal absoluta en la línea del mensaje, moviendo el cursor en la pantalla.

Monitorización en línea de los espectros La monitorización de los espectros en línea sólo puede utilizarse en ChemStations que soporten la evaluación de espectros. Muestra la absorbancia como una función de la longitud de onda. Puede ajustarse tanto el rango de longitud de onda como el de la escala de absorbancia.

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Adquisición de datos Logbook

3

Logbook El logbook muestra los mensajes generados por el sistema analítico. Estos mensajes pueden ser de error, er ror, del sistema o de eventos de un módulo. El logbook registra estos eventos independientemente de que se visualicen o no. Para obtener más información sobre algún parámetro en el registro, pinchar dos veces sobre la línea correspondiente cor respondiente para visualizar un texto descriptivo de ayuda.

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3

Adquisición de datos Información del estado

Información del estado Estado de la ChemStation La ventana ChemStation Status muestra un estado de resumen del software de la ChemStation. Cuando se está realizando un análisis sencillo: • La primera línea de la ventana “Status” (Estado) de la ChemStation muestra el análisis en curso • La segunda línea de la ventana de estado muestra el estado del método activo y  • El nombre del fichero de datos primarios se muestra en la tercera línea  junto con el tiempo delinyector análisisfrontal (para un instrumento GC, también se muestran ficherosactual para el y trasero). La ventana Instrument Status ofrece información del estado de los módulos  y los detectores del instrumento. Muestran el estado de cada componente componente  y las condiciones actuales, actuales, si corresponde, por ejemplo, datos de presión, de gradiente y de flujo.

Barra de estado La interfase gráfica de usuario del sistema de la ChemStation, consta de barras dede herramientas y de un estado en de la ventana Method ande Run Control. La barra estado contiene campo estado del sistema información sobre el método y la secuencia actualmente cargados. Si se modificaron después de ser cargados, estarán est arán marcados con un triángulo rojo. Para un módulo Agilent 1100 para HPLC, un símbolo EMF amaril amarillo lo recuerda al usuario que se han excedido los límites de uso fijados para los fungibles (por ejemplo, la lámpara).

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Adquisición de datos Información del estado

3

Diagrama del sistema Si está soportado por los instrumentos analíticos configurados (por ejemplo, para los módulos Agilent 1100 para HPLC o el GC Agilent 6890) puede  visualizarse un diagrama gráfico del sistema la ChemStation. permite comprobar rápidamente el estado delpara sistema. SeleccionarEste la opción System Diagram en el menú View de la ventana Method and Run Control para activar el diagrama. Es una representación gráfica del sistema de la ChemStation. Cada componente se representa por un icono. Utilizando el código de colores, descrito a continuación, se visualiza el estado actual. Tabla 6

Código de colores para el diagrama del sistema

Color

Estado

gris

inactivo o apagado

amarillo

no preparado

verde

preparado

azul

operando

rojo

error

 Además, pueden visualizarse visualizarse listas de los valores actuales actuales de los parámetros.  Aparte de una revisión del estado, el diagrama permite el acceso rápido a los cuadros de diálogo para fijar los parámetros de cada componente del sistema. Consultar el sistema de ayuda en línea para obtener más información sobre el diagrama del sistema.

Conocer la Agilent ChemStation

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3

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Adquisición de datos Información del estado

Conocer la Agilent ChemStation

 

Agilent ChemStation Conocer la ChemStation

4 Integración ¿En qué consiste la integración? 73 ¿Qué hace la integración? 73 Los algoritmos de integración de la ChemStation 74 Capacidades de integración 74 Introducción 76 Definición de la línea base inicial 77 Seguimiento de la línea base 77 Asignación de la línea base 78 Identificación de los puntos cardinales de un pico 80 Definición de términos 81 Puntos cardinales 81 Pico de disolvente 81 Hombro (frontal, trasero) 82 Pendiente 82 Principio de operación 83 Reconocimiento de picos 84 Anchura de pico 84 Filtros de reconocimiento de picos 85 Agrupamiento 87 El algoritmo de reconocimiento de picos 88 Cálculos no gaussianos 92 Asignación de la línea base 78 Construcción de la línea base por defecto 94 El inicio de la línea base 95 Penetración de la línea base 96 Seguimiento avanzado de la línea base (Advanced Baseline Tracking) Tracking) 97 División tangencial (Tangent Skimming) 99 Picos no asignados (Unassigned Peaks) 105

Agilent Technologies

71

 

4

Integración

Códigos de separación de picos 106 Caracteres 1 y 2 106 Carácter 3 106 Carácter 4 107 Medida del área de pico 108 Determinación del área 109 Unidades y factores de conversión 110 Parámetros de integración 111 Parámetros iniciales 111 Anchura de pico (Peak Width) 112 Rechazo por altura y anchura de pico 113 Refinamiento de la integración 113 Parámetros programados 115 Integración automática (Autointegrate) 116 Introducción 116 Principios de funcionamiento 116 Parámetros de la integración automática 117 Integración manual 118 Introducción 118 Códigos de separación de picos para picos integrados manualmente 119 Documentación de parámetros de integración manual 119

72

Conocer la Agilent ChemStation

 

Integración ¿En qué consiste la integración?

4

¿En qué consiste la integración? La integración localiza los picos en una señal y calcula su tamaño. La integración es un paso necesario para: • la cuantificación, • los cálculos de pureza de pico (sólo en ChemStations de sistemas LC 3D, CE, CE/MS y LC/MS) y  • la búsqueda en librerías de espectros (sólo en ChemStations de sistemas LC 3D, CE, CE/MS y LC/MS).

¿Qué hace la integración? Cuando una señal se integra, el software: punto s • identifica un tiempo inicial y final para cada pico y señala estos puntos con marcas de integración verticales, • encuentra el máximo de cada pico; es decir, el tiempo de retención/migración, • construye una línea de base, y  • calcula el área, la altura y la anchura de cada pico. Este proceso está controlado por los parámetros llamados parámetros de integración.

Conocer la Agilent ChemStation

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4

Integración Los algoritmos de integración de la ChemStation

Los algoritmos de integración de la ChemStation El algoritmo de integración de ChemStation es la segunda revisión de una nueva generación que pretende mejorar la resistencia, fiabilidad y facilidad de uso.

Capacidades de integración Los algoritmos del integrador incluyen las siguientes capacidades clave: • una función de integración automática utilizada para configurar los parámetros iniciales de integración, • la capacidad de definir tablas individuales de parámetros para cada señal cromatográfica/electroferográfica, si se utilizan múltiples señales o más de un detector, • definición interactiva de los parámetros de integración que permite a los usuarios seleccionar gráficamente los tiempos de los parámetros, • integración gráfica manual o elástica de cromatogramas/electroferogramas que requieren la interpretación humana (estos parámetros pueden registrarse en el método y ser utilizados en la operación automatizada), •  visualización e impresión de resultados de integración, y  • capacidad de integrar al menos 1000 picos por cromatograma/electroferograma. definiciones de parámetros delárea, integrador fijar o anchura modificardelos  valores básicos de rechazo de rechazopara rechazo de altura, pico  y sensibilidad de pendiente, • parámetros de control de la línea de base, como línea de base forzada, sostener línea de base, línea base en todos los valles, línea base en el siguiente valle, fijar línea base hacia detrás desde el final del pico actual, • control de suma de área, • reconocimiento de picos negativos, •

74

Conocer la Agilent ChemStation

 

Integración Los algoritmos de integración de la ChemStation •

•

• •

•

•

4

proceso de división tangencial que incluye comandos de definición del pico de disolvente, capacidad de definición de tablas de parámetros individuales para cálculos de división tangencial frontal/de cola para toda la señal cromatográfica/electroferográfica, parámetros de corrección de la línea base (independientes de la señal), comandos de control que definen rangos de tiempo de retención/migración para la operación del integrador, integ rador, la asignación de hombros de pico mediante el uso de la segunda derivada o cálculo del grado de curvatura, muestreo mejorado de puntos de datos no equidistantes para un mejor comportamiento con ficheros de datos LC-DAD reconstruidos a partir de espectros DAD.

Conocer la Agilent ChemStation

75

 

4

Integración Introducción

Introducción Para integrar un cromatograma/electroferograma, el integrador: 1 define la línea base inicial, 2 realiza un seguimiento de la línea base y la actualiza continuamente, 3 identifica el momento de inicio de un pico y señala ese punto con una marca vertical, 4 localiza el punto máximo de cada pico e imprime el tiempo de retención/migración correspondiente, 5 identifica el momento de finalización del pico y señala ese punto con una marca vertical, 6 construye una línea base, y  7 calcula el área, la altura y la anchura de pico correspondientes a cada pico.

Este proceso se controla por medio de parámetro  parámetross de integra integración ción. Los parámetros más importantes son sensibilidad de pendiente inicial (initial slope sensitivity), anchura de pico (peak width), rechazo de área (area reject) y  rechazo  rechazo de altura (height reject). El software permite al usuario fijar

los valores iniciales de éstos y otros parámetros. Los valores iniciales tienen  vigencia al comienzo del cromatograma. cromatograma. De forma adicional, la función de integración automática proporciona un conjunto de parámetros iniciales que el usuario puede optimizar posteriormente. En la mayoría de los casos, los parámetros iniciales darán buenos resultados de integración en todo el cromatograma, si bien habrá ocasiones en las que el usuario prefiera tener un mayor control sobre el progreso de la integración. El software permite controlar el modo en que se lleva a cabo una integración mediante la programación de nuevos parámetros de integración integ ración en determinados momentos del cromatograma. Para más información, consulte la sección “Parámetros de integración” en la pá pági gina na 111 111.

76

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Integración Introducción

4

Definición de la línea base inicial Puesto que las condiciones de la línea base pueden variar en función de la aplicación y el detector, el integrador utiliza parámetros obtenidos de ficheros tanto de método como de datos para optimizar la línea base. Para poder integrar los picos, el integrador debe establecer e stablecer antes un punto de línea base. Al comienzo del análisis, el integrador establece un nivel de línea base inicial tomando el primer punto de datos como punto de línea base provisional. A continuación trata de redefinir ese punto de línea base inicial utilizando el promedio de la señal de entrada. Si no obtiene un punto de línea base inicial redefinido, mantiene el primer punto de datos como posible punto de línea base inicial.

Seguimiento de la línea base El integrador muestrea los datos digitales a una velocidad determinada deter minada por la anchura de pico inicial o por la anchura de pico calculada a medida que progresa el análisis. Considera cada uno de los puntos de datos como posible punto de línea base. El integrador determina una zona de línea base a partir de la pendiente de la línea base, utilizando un algoritmo de seguimiento de la línea base en el que la pendiente viene dada por la primera derivada y la curvatura por la segunda derivada. La zona de línea base se puede visualizar como un cono con la punta situada en el punto de datos actual. Los niveles superior e inferior de aceptación del cono se determinan como sigue: •

•

+ pendiente ascendente + curvatura + desviación de la línea base debe dar un resultado inferior al nivel umbral,  - pendiente ascendente - curvatura + desviación de la línea base debe dar un resultado más positivo (o menos negativo) que el nivel umbral.

 A medida que se van aceptando nuevos nuevos puntos de datos, el cono se desplaza hacia adelante hasta que dejen de cumplirse las condiciones.

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77

 

4

Integración Introducción

Para ser aceptado como punto de línea base, un punto de datos debe cumplir las condiciones siguientes: • debe encontrarse dentro de la zona definida como de línea base, • la curvatura de la línea base en el punto de datos (determinada por los filtros basados en derivadas) debe estar por debajo de un valor crítico determinado por el valor actual del parámetro de sensibilidad de la pendiente. El punto de línea base inicial establecido est ablecido al comienzo del análisis se restablece así de forma continua, a una velocidad determinada deter minada por la anchura de pico, como el promedio móvil  de  de los puntos de datos que se encuentran  dentro de la zona de línea base durante un período de tiempo determinado por la anchura de pico. El integrador realiza un seguimiento continuo de la línea base y la restablece periódicamente para compensar la deriva hasta que detecta la pendiente ascendiente de un pico.

Asignación de la línea base El integrador asigna durante el análisis la línea base cromatográfica/ electroferográfica con una frecuencia determinada por el valor de anchura de pico. Cuando ha muestreado un número determinado de puntos de datos, restablece la línea base desde el punto de línea base inicial al punto de línea base actual. El integrador reanuda entonces el seguimiento de la línea base en el siguiente conjunto de puntos de datos para restablecer nuevamente la línea base. El proceso continúa hasta que el integrador identifica el inicio de un pico.

tiempo inicial T

punto actual T

T

T

T

Punto de datos

Anchura de pico esperada

T

2T 2T T

Figura 4

78

T

restablecimiento de la línea base

Línea base

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Integración Introducción

4

 Al comienzo del análisis, análisis, el valor del parámetro de línea línea base se utiliza como línea base inicial. Si no hay un valor fijado, f ijado, se utiliza el primer punto de datos. El punto de línea base se restablece entonces periódicamente de acuerdo con la siguiente fórmula: Se suman las áreas durante un tiempo T (anchura de pico esperada). Ese tiempo no puede ser inferior a un punto de datos. El proceso continúa mientras exista una condición de línea base. Se adquieren asimismo medidas de pendiente y curvatura. Si tanto la pendiente como la curvatura son inferiores al umbral, se combinan entre sí dos sumas de áreas y se comparan con la línea base previa. Si el nuevo valor es inferior a la línea base previa, pasa a reemplazar inmediatamente al valor antiguo. Si es superior al valor previo, se graba como nuevo valor provisional de la línea base que se confirmará si un valor más cumple los criterios de llanura de la pendiente  y la curvatura. Esta última limitación limitación no tiene efecto cuando se permiten picos negativos. Durante la fase de línea base, es preciso realizar asimismo comprobaciones para examinar disolventes con rápida elevación de la señal; la elevación puede ser demasiado rápida para permitir la detección de una pendiente ascendente (para cuando se confirma la pendiente ascendente, el criterio de disolvente puede no ser ya válido). En el momento inicial, el primer punto de datos constituye la línea base. Ese valor se reemplaza por el promedio calculado sobre 2T si la señal está en base. La línea base se Figu gura ra 4 en la pág página ina 78 78). ). restablece entonces a cada intervalo T (véase la Fi

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79

 

4

Integración Introducción

Identificación de los puntos cardinales de un pico El integrador determina que puede estar comenzando a producirse un pico cuando los posibles puntos de línea base se encuentran fuera de la zona de línea y la curvatura de la línea base excede un valor determinado por elbase parámetro de sensibilidad de la pendiente delcierto integrador. Si esta condición continúa, el integrador reconoce estar en la pendiente ascendiente de un pico y éste se procesa.

Inicio 1 Pendiente y curvatura dentro del límite: prosigue el e l seguimiento de la

línea base. 2 Pendiente y curvatura por encima del límite: posibilidad de un pico. 3 La pendiente permanece por encima del límite: se reconoce un pico, se define el punto cardinal correspondiente. 4 La curvatura se hace negativa: punto de inflexión frontal.

Máximo 5 La pendiente pasa por cero y se hace negativa: máximo del pico, se define def ine el

punto cardinal correspondiente. 6 La curvatura se hace positiva: punto de inflexión trasero.

Final 7 Pendiente y curvatura dentro del límite: se aproxima el final del pico. 8 La pendiente y la curvatura se mantienen dentro del límite: final del pico, se define el punto cardinal correspondiente. 9 El integrador vuelve al modo de seguimiento de la línea base.

80

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Integración Definición de términos

4

Definición de términos Puntos cardinales máximo del pico punto de inflexión

punto de inflexión

punto de línea base

coordenada vertical de altura

Figura 5

punto de línea base

coordenada horizontal de tiempo transcurrido

Puntos cardinales

Los puntos cardinales son los puntos elegidos por el integrador para definir  y cuantificar un pico. Se designan como puntos cardinales cardinales y se graban los puntos de línea base, puntos de valle, máximos de pico y puntos de inflexión.  A cada punto cardinal cardinal le corresponde una coordenada horizontal de tiempo tiempo transcurrido y una coordenada vertical de altura desde la línea base, además de otros parámetros tales como tipo de pico, códigos de separación, valores de inicio/final de picos potenciales y las correspondientes lecturas de altura, área y pendiente que el integrador utiliza para calcular las áreas de pico.

Pico de disolvente El pico de disolvente, generalmente un pico de gran tamaño sin relevancia analítica, no suele integrarse. No obstante, cuando hay pequeños picos de interés analítico con elución cercana al pico de disolvente, por ejemplo en la cola del mismo, es posible establecer condiciones de integración especiales para calcular sus áreas corregidas teniendo en cuenta la contribución de la cola del pico de disolvente.

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81

 

4

Integración Definición de términos

Hombro (frontal, trasero) Se producen hombros cuando dos picos eluyen tan t an cerca el uno del otro que no llega a haber un valle entre ellos que permita resolverlos. Los hombros pueden aparecertrasero). en el avance del pico (hombro frontal) éstos o en elpueden rastro del mismo (hombro Cuando se detectan hombros, integrarse bien mediante división tangencial o mediante líneas de caída  verticales.

Pendiente La pendiente de un pico, que denota el cambio de concentración del componente en función del tiempo, se utiliza para determinar el inicio, el máximo y el final del pico.

82

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Integración Principio de operación

4

Principio de operación

Parámetros iniciales Definición de la línea base inicial Inicialización Seguimiento y restablecimiento de la línea base

Inicio del grupo de picos Seguimiento de la línea base

Parámetros programados

Identificación de las coordenadas de pico Detección de la línea base

Fin del grupo de picos Detección del grupo Construcción de líneas base de pico Detección de divisiones Almacenamiento de picos en la tabla de picos

Cálculo de estadísticas de pico Evaluación del grupo

Figura 6 Conocer la Agilent ChemStation

Diagrama de flujo del integrador

83

 

4

Integración Reconocimiento de picos

Reconocimiento de picos El integrador utiliza varias herramientas para reconocer y caracterizar un pico: • anchura de pico, • filtros de reconocimiento de picos, • agrupamiento, • algoritmo de reconocimiento de picos, • algoritmo de determinación del máximo de pico, y  • cálculos de efectos no gaussianos (por ejemplo colas, picos solapados).

Anchura de pico Durante la integración, se calcula la anchura de pico a partir del área y la altura del pico:

 Anchura = Área/Altura Área/Altura o, si los puntos de inflexión están disponibles, a partir de la anchura entre los puntos de inflexión.

H Fs

Rs Hf

a1 a2 t1 t2

Figura 7

84

Hr a3 a4 t3 t4

Cálculo de la anchura de pico

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Integración Reconocimiento de picos

4

En la Fi Figu gura ra 7, el área total, A, es la suma de las áreas a1, a2, a3 y a4. Fs es la pendiente frontal en el punto de inflexión, Rs es la pendiente trasera en el punto de inflexión. En caso de no localizarse alguno de los puntos de inflexión, la anchura de pico se define como sigue:  Anchura = Área ajustada / Altura ajustada

El parámetro de anchura de pico controla la capacidad del integrador integ rador para distinguir los picos del ruido de la línea base. Para obtener buenos resultados, la anchura de pico debe ser cercana a la anchura de los picos cromatográficos/electroferográficos reales. Hay tres modos de cambiar la anchura de pico: especif icar la anchura de pico inicial, • antes del análisis, el usuario puede especificar • durante el análisis, el integrador actualiza automáticamente la anchura de pico como corresponda para mantener una buena correspondencia con los filtros de reconocimiento de picos, •

durante el análisis, el usuario puede restablecer o modificar la anchura de pico utilizando un parámetro programado en el tiempo.

Para obtener información acerca de las definiciones de anchura de pico utilizadas en los cálculos de idoneidad del sistema, consulte el e l Ca Capí pítu tulo lo 4, “Integración” sección “Integración”  sección “Anchura de pico” en la pág página ina 84 84..

Filtros de reconocimiento de picos El integrador cuenta con tres filtros de reconocimiento de picos que puede utilizar de para reconocer picos mediante detección de cambios en los  valores pendiente y curvatura dentrolade un conjunto de puntos de datos contiguos. Los filtros contienen la primera derivada (para medir la pendiente)  y la segunda derivada (para medir medir la curvatura) de los puntos de datos examinados por el integrador. Los filtros de reconocimiento son los siguientes: Filtro 1

Pendiente (curvatura) de dos (tres) puntos de datos contiguos

Filtro 2

Pendiente de cuatro puntos de datos contiguos y curvatura de tres puntos de datos no contiguos

Filtro 3

Pendiente de ocho puntos de datos contiguos y curvatura de tres puntos de datos no contiguos

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85

 

4

Integración Reconocimiento de picos El filtro que se utiliza viene determinado deter minado por el valor del parámetro de anchura de pico. Por Por ejemplo: al comienzo d del el análisis puede utilizarse el Filtro 1. Si la anchura de pico aumenta durante el análisis, se pasará primero primero al Filtro 2 y en último término al Filtro Filtro 3. Para obtener buenos resultados resultados del uso de los filtros de areconocimiento, lospicos valores fijados para la anchuraerográficos de pico deben ser cercanos la anchura de los cromatográf cromatográficos/electrof icos/electroferográficos reales. Durante el análisis, el integrador actualiza la anchura de pico como sea necesario para optimizar la integración.

El integrador calcula la anchura de pico actualizada de distintos modos según la configuración instrumental:  Para configuracione configuracioness LC/CE , el cálculo de anchura de pico por defecto utiliza

un cálculo compuesto (0,3 x punto de inflexión derecho der echo - punto de inflexión izquierdo) + 0,7 x Área  / Altura

 Para configuraciones GC , elnocálculo de anchura de pico por defecto utiliza el área/la altura. Este cálculo sobreestima la anchura cuando los picos están

solapados por encima del punto de media altura. En determinados tipos de análisis, por ejemplo análisis GC isotérmicos  y LC isocráticos, los picos se ensanchan ensanchan de forma significativa a medida que progresa el análisis. Para compensar ese efecto, el integrador actualiza automáticamente la anchura de pico a medida que los picos se ensanchan durante el análisis. Lo hace de forma automática salvo que se haya deshabilitado la función de actualización o se haya fijado la anchura de pico en un valor específico por medio de un parámetro programado. La actualización de la anchura de pico se pondera del modo siguiente: 0,75 x (anchura de pico existente) + 0,25 x (anchura del pico actual)

Si un parámetro de integración programado deshabilita la anchura de pico o la fija en un valor específico, se deshabilita el ajuste automático de la anchura de pico.

86

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Integración Reconocimiento de picos

4

Agrupamiento El agrupamiento (bunching) es el medio que el integrador utiliza para ensanchar continuamente los picos dentro del rango de efecto de los filtros f iltros de reconocimiento de picos con el fin de mantener una buena selectividad. Cuando los picos se ensanchan, el integrador no puede continuar aumentando la anchura de pico de forma indefinida. Llegaría un momento en que los picos fueran tan anchos que no pudieran ser identificados por los filtros de reconocimiento. Para superar esa limitación, el integrador agrupa los puntos de datos entre sí, estrechando en términos prácticos el pico sin que el área se  vea alterada. Cuando se agrupan datos, los puntos de datos se agrupan en dos elevado a la potencia de agrupamiento, o sea, sin agrupar = x1, agrupamiento realizado una vez = x2, realizado dos veces = x4, etc. El agrupamiento se realiza en base a la velocidad de datos y la anchura de pico. El integrador utiliza esos parámetros para fijar el factor de agrupamiento de modo que se obtenga el número de puntos de datos apropiado (véase la Ta Tabl blaa 7).

El agrupamiento se realiza en potencias de dos en base a la anchura de pico esperada u obtenida. El algoritmo de agrupamiento se resume a continuación Tabl blaa 7: en la Ta Tabla 7

Criterios de agrupamiento

Anchura de pico esperada

Filtro(s) utilizado(s)

Agrupamiento realizado

0 - 10 puntos de datos 8 - 16 puntos de datos

Primero Segundo

Ninguno Ninguno

12 - 24 puntos de datos

Tercero

Ninguno

16 - 32 puntos de datos

Segundo

Una vez

24 - 48 puntos de datos

Tercero

Una vez

32 - 96 puntos de datos

Tercero, segundo

Dos veces

64 - 192 puntos de datos

Tercero, segundo

Tres veces

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87

 

4

Integración Reconocimiento de picos

El algoritmo de reconocimiento de picos El integrador identifica el inicio del pico con un punto de línea base determinado por el algoritmo de reconocimiento de picos. El algoritmo de reconocimiento de picos compara valores de de salida de los filtros de reconocimiento de picos en conprimer el valorlugar de lalos sensibilidad pendiente inicial para aumentar o disminuir el acumulador de pendiente ascendente. El integrador declara el punto en el que el valor del acumulador de pendiente ascendente es >= 15 como el punto que indica el ini inicio cio de un pico. El algoritmo de reconocimiento de picos se muestra en la Fi Figu gura ra 8. Arranque t2

t1

Línea base t5

t3 Pendiente ascendente

t11

t4

t10

Pendiente descendente t8

t7 Extracción del pico

t6

t9 Almacenamiento del pico

Figura 8

88

Reconocimiento de picos

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Integración Reconocimiento de picos

4

Los criterios utilizados son los siguientes: t1

El contador de pendiente ascendente es mayor o igual a 1

t2

El contador de pendiente ascendente es igual a 0

t3

El contador de pendiente ascendente es mayor o igual a 2

t4

  •

•

t5

  • •

t6

  •

Se ha encontrado la cumbre del pico y se ha encontrado la anchura a medio pico o Se ha encontrado la cumbre del pico y el contador de pendiente descendente es mayor o igual a 2 Se ha abortado el pico o Se ha restablecido la línea base Se ha encontrado el valle del pico y el contador de pendiente ascendente es mayor o igual a 2, o

El valor sigma de la pendiente descendente es más de dos veces el valor sigma del final del pico, o • Se ha restablecido la línea base, o • Se ha restablecido la línea base en el siguiente valle y se ha encontrado el  valle del pico •

t7

 Ya  Ya no se cumple el ccriterio riterio de pendiente descendente

t8

Se cumple nuevamente el criterio de pendiente descendente

t9

  •

Se ha encontrado el valle del pico y el contador de pendiente ascendente es mayor o igual a 2, o

•

El contador de pendiente descendente es igual a 0, o El valor sigma de la pendiente descendente es mayor que el valor sigma del final del pico, o Se ha restablecido la línea base, o Se ha restablecido la línea base en el siguiente valle

•

• •

t10

El contador de pendiente ascendente es mayor o igual a 2

t11

El contador de pendiente ascendente es menor o igual a 1

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4

Integración Reconocimiento de picos

Inicio del pico Tabl blaa 8, la anchura de pico esperada determina qué valores de pendiente y En la Ta curvatura de filtro se comparan con la sensibilidad de pendiente. Por ejemplo, cuando la anchura de pico esperada es reducida, se añaden los números del Filtro 1 al acumulador de pend pendiente iente ascendente. Si la anchura de pico esperada esperada aumenta, se utilizan entonces los números números correspond correspondientes ientes al Filtro 2 y, en último término, al Filtr Filtroo 3.

Cuando el valor del acumulador de de pendiente ascendente es >= 15, el algoritmo reconoce que se puede estar produciendo el inicio de un pico. Tabla 8

Valores Valo res de incremento del acumulador de pendiente ascendente

Filtros basados en derivadas 1 - 3 Valores de salida frente a la sensibilidad s ensibilidad de pendiente

Filtro 1

Filtro 2

Filtro 3

Pendiente > Sensibilidad de pendiente

+8

+5

+3

Curvatura > Sensibilidad de pendiente

+0

+2

+1

Pendiente < (-) Sensibilidad de pendiente

-8

-5

-3

Pendiente > |Sensibilidad de pendiente|

-4

-2

-1

Curvatura < (-) Sensibilidad de pendiente

-0

-2

-1

Fin del pico Tabl blaa 9, la anchura de pico esperada determina qué valores de pendiente y En la Ta curvatura de filtro se comparan con la sensibilidad de pendiente. Por ejemplo, cuando la anchura de pico esperada es reducida, se añaden los números del Filtro 1 al acumulador de pend pendiente iente descendente. Si la anchura de pico pico esperada aumenta, se utilizan entonces los número númeross correspondientes al Filtro Filt ro 2 y, en úl último timo té términ rmino, o, al Filtr Filtroo 3.

Cuando el valor del acumulador de pendiente descendente es >= 15, el algoritmo reconoce que se puede estar produciendo el final de un pico.

90

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Integración Reconocimiento de picos Tabla 9

4

Valores Valo res de incremento del acumulador de pendiente descendente

Filtros basados en derivadas 1 - 3 Valores de salida frente a la sensibilidad s ensibilidad de pendiente

Filtro 1

Filtro 2

Filtro 3

Pendiente > Sensibilidad de pendiente

+8

+5

+3

Curvatura > Sensibilidad de pendiente

+0

+2

+1

Pendiente < (-) Sensibilidad de pendiente

-11

-7

-4

Pendiente > |Sensibilidad de pendiente|

-28

-18

-11

Curvatura < (-) Sensibilidad de pendiente

-0

-2

-1

El algoritmo de determinación del máximo de pico  pico   El máximo del pico se reconoce como el punto más alto del cromatograma mediante la construcción de una curva de ajuste parabólica que pase por los puntos de datos más altos.

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91

 

4

Integración Reconocimiento de picos

Cálculos no gaussianos Picos solapados Se produce un solapamiento picos cuando unFi nuevo comienza anteselde Figu gura ra 9pico  muestra qué hace haberse alcanzado el final deldepico ante anterior. rior. La integrador con los picos solapados.

Punto de valle

Figura 9

Picos solapados

El integrador procesa los picos solapados como sigue: 1 suma el área del primer pico hasta el punto de valle; 2 en el punto de valle, termina la suma del área correspondiente al primer pico e inicia la correspondiente al segundo pico; 3 cuando el integrador localiza el final del segundo pico, se detiene la suma del área. Este proceso se puede visualizar como la separación de los picos solapados trazando una perpendicular desde el punto de valle entre ambos picos.

Hombros Los hombros son picos no resueltos ubicados en el avance o el rastro de un pico más grande. Cuando hay un hombro presente, no existe un verdadero  valle en el sentido de una pendiente negativa seguida por otra positiva. Un Un pico puede tener cualquier número de hombros frontales y/o traseros.

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Integración Reconocimiento de picos

4

15.550 a

b 15.410 15.690

Figura 10

Hombros de pico

Los hombros se detectan a partir de la curvatura del pico, que viene dada por la segunda derivada. Cuando la curvatura cae a cero, el integrador identifica a b

un Existe punto un de inflexión, como los puntos  y se  dedetecta la Fig Figura ura 10. . posible hombro frontal cuando un 10 segundo punto de inflexión antes del máximo del pico. Si se confirma la presencia de un hombro, el punto de inicio del mismo se fija en el punto de máxima curvatura positiva previo al punto de inflexión. • Existe un posible hombro trasero cuando se detecta un segundo punto de inflexión antes del final f inal o el valle del pico. Si se confirma la presencia pre sencia de un hombro, el punto de inicio del mismo se fija en el punto tangente desde el punto inicial a la curva. •

El tiempo de retención/migración se determina a partir del punto de máxima curvatura negativa del hombro. Con un parámetro de integración programado, prog ramado, el calcular también áreas de picosque normales conintegrador líneas de puede caída verticales en los puntos de hombro inf lexióncomo inflexión del pico presenta el hombro. El área del hombro se resta del pico principal. Los hombros de pico pueden tratarse como picos normales utilizando un parámetro de integración programado.

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4

Integración Asignación de la línea base

Asignación de la línea base Una vez completado un grupo de picos y encontrada la línea base, el integrador solicita al algoritmo de asignación de la línea base la asignación de ésta mediante una técnica de "jalonamiento". El algoritmo utiliza correcciones de área trapezoidal y altura proporcional para normalizar la línea base y mantenerla lo más baja posible. Entre los valores v alores de entrada al algoritmo de asignación de la línea base se incluyen también parámetros obtenidos obt enidos de los ficheros de método y datos que identifican el detector y la aplicación y que el integrador utiliza para optimizar los cálculos.

Construcción de la línea base por defecto En el caso más sencillo, el integrador construye la línea base como una serie de segmentos rectos entre: • el inicio de la línea base, • las marcas de señalización, • el final del pico.

Marcas de señalización

Línea base

Figura 11

94

Construcción de la línea base por defecto

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Integración Asignación de la línea base

4

El inicio de la línea base Si no se localiza una línea base al comienzo comie nzo del análisis, el inicio de la línea base se establece de uno de los modos siguientes: •

•

•

•

desde el inicio del análisis al primer punto de línea base, si el punto de inicio del análisis es inferior al primer punto de línea base, desde el inicio del análisis al primer punto de valle, si el punto de inicio del análisis es inferior al primer valle, desde el inicio del análisis al primer punto de valle, si el primer valle penetra una línea imaginaria trazada desde el inicio del análisis a la primera línea base, desde el inicio del análisis a una línea base horizontal extrapolada al primer punto de línea base.

Marcas de señalización Las marcas de señalización identifican el inicio y el final de un pico. Sus posiciones vienen determinadas por los tiempos de inicio y final de pico almacenados en la tabla de picos.

El final de la línea base El último punto de línea base válido se utiliza para designar el final de la línea base. los casos en el que un análisis enválido la línea base, el final de esta seEncalcula desde último punto no de termine línea base a la deriva de línea base establecida. Si un pico termina en lo que parece ser un valle pero el siguient siguientee pico está por debajo del valor establecido para el rechazo por área, la línea base se proyecta desde el comienzo del pico al siguiente punto de línea base verdadero. Cuando un pico comience de modo similar similar,, se aplicará la misma reg regla. la.

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95

 

4

Integración Asignación de la línea base

Penetración de la línea base Se produce una penetración cuando la señal cae por debajo de la línea base Figur uraa 12 12). ). En caso de penetración, por lo general construida (punto a  de  de la Fig se reconstruye la Fig Figur uraa 12 12..  esa parte de la línea base, tal como muestran los puntos b de

a

b

Figura 12

Penetración de la línea base

El usuario puede utilizar las siguientes opciones de seguimiento para eliminar todas las penetraciones de la línea base:

Seguimiento clásico de la línea base (Classical Baseline Tracking, Tracking, sin penetraciones) Cuando se selecciona esta opción, cada grupo de picos se examina en busca de posibles penetraciones de la línea base. Si se encuentran, se desplazan los puntos de inicio y/o final del pico hasta eliminarlas por completo (compárense Figur uraa 13 13 y  y la Figur Figuraa 12 12). ). las líneas base de la Fig

96

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Integración Asignación de la línea base

Seguimiento estándar de la línea base

Figura 13

NOTA

4

Seguimiento de la línea base (sin penetraciones)

Seguimiento estándar de la línea base y seguimiento de la línea base (sin penetraciones)

El seguimiento de lahombros línea base (sin penetraciones) disolvente con sus y picos secundarios. no está disponible para los picos de

Seguimiento avanzado de la línea base (Advanced Baseline Tracking) En el modo de seguimiento avanzado de la línea base, el integrador trata de optimizar la ubicación del inicio y el final f inal de los picos, restablece la línea base para un grupo de picos y elimina las penetraciones de la línea base (véase la sección “Penetración de la línea base” en la la pá págin ginaa 96 96). ). En muchos casos, con el modo de seguimiento avanzado se consigue una línea base más estable, menos dependiente de la sensibilidad de pendiente.

Relación pico/valle (Peak Valley Ratio) Este parámetro especificado por el usuario forma parte del modo de seguimiento avanzado de la línea base. Se utiliza para decidir si dos picos que no muestran separación a nivel de la línea base deben separarse utilizando una línea de caída vertical o una línea base de valle. El integrador integ rador calcula la relación entre la altura corregida por la línea base del menor de los picos y la altura corregida por la línea base del valle. Cuando la relación pico a valle es inferior al valor especificado por el e l usuario, se utiliza una línea de caída

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97

 

4

Integración Asignación de la línea base

 vertical; de lo contrario, se traza una una línea base desde la línea base del inicio del primer pico al valle y desde el valle a la línea base del final del segundo pico (compárese la Fig Figur uraa 13 13 con  con la Figura Figura 14 14). ).

H1

Figura 14

Hv

H2

Relación pico/valle

La relación pico a valle se calcula por medio de las ecuaciones siguientes:  H 1 ≥  H 2 , Relación pico/valle = H2/Hv

 y  H 1