LES MÉTHODES ANALYTIQUES DES LIPIDES SIMPLES Author(s): C. PAQUOT, J. MERCIER, D. LEFORT, A. MATHIEU and R. PERRON Source: Annales de la nutrition et de l'alimentation , 1962, Vol. 16 (1962), pp. 1-63, 65213, 215-275, 277-281 Published by: S. Karger AG Stable URL: https://www.jstor.org/stable/45124662 JSTOR is a not-for-profit service that helps scholars, researchers, and students discover, use, and build upon a wide range of content in a trusted digital archive. We use information technology and tools to increase productivity and facilitate new forms of scholarship. For more information about JSTOR, please contact
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L E SM É T H O D E SA N A L Y T I DES LIP IPID IDES SIM IMPLES par
C. PAQUOT Directe eu ur du Laboratoi ir re de Lipochimie, C. N. R. S.
Mue j# MERCIER
A M ATHIEU
Ingénieur. C. N. R. S.
Ing ngénieur, C. N R. S.
D. LEFORT
R. PERRON
Chargé de Recherches, C. N. R. S. Sous-directeur du Laboratoire
de Lipochimie, C. N. R. S.
S 0 M M A i R fi
Pages
n p p I n t r o d u c t o n G n é r a l i t é s s u r l e s c o r p s g r a s e t s u r l a n l y e C h p t r e e r L e s m t è r e s p r e m è r e s
M t è r e s p r e m è r e s v é g é t a e s g d h u m d
D a g d h u l e
o s a g e d e l a z o t e e t d e s p r o t é n e s
E x r a c t o n p r é p r a t v
M t è r e s p r e m è r e s a n m e s C h a p t r e I I .D é t e r m n a t i o n d e c a r a c t é r i s t i q u e sp h y s i q u e s p c f q M u
n d c e d r é f r a c t o n
o u b t é o n s d f u o n e t d s o d f c a t o n
S p e c t r o p h t o m t r e , g é n é r a t é s S p e c t r o p h t o m t r e u t r a v o e t t e C o u e u r d e sh u l e s ,o u s p e c t r o p h o t o m t r i e v s i b e
y n X p e c t r o p h t o m t r e n f r a r o u g e
P 2 3 1 0 1 2 1
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C h a p t r e I I I .D é t e r m n a t i o n d e c a r a c t é r s t i q u e sc h m q u e s n d c e d a c d e t a c d t é I n c e d e s a p o n f c a t o n e t n c e d e s t e r
I n c e d i o d
n d c e d d è n
n d c e d h y d r o g n d e d p o y b r o m e
n d c e d p e r o x y d s
D é t e r m n a t i o n s c o l o r m t r q u e sd e l a t e n e u r e n p e r o x y d e s
S t a b t é à a u o x y d t o n n d c e d h y d r o x y e
C h p t r e V D t e r m n t o n d e c o n t t u a n t s d v e r s
o s a g e d e e a u d a n e s p d e s o a g e d s m u r e t é s
o a g e d s c e n d r e s
o s a g e d u s a v o n d a n e s h u e s s e e n é v d e n c e d e s s o v n t s d a n e s h u l e s
D o s a g e d u n e u t r e d a n s l e s m t i è r e s g r a s s e s àf o r t e a c i d t é D o a g e d u p h o p h o r e
A n a l y s e d e sa c i d e sg r a sc o n s t i t u t i f sd e sl i p d e s
o s a g e d e s a c d e s g r a s s a t u r é s n d c e s d e s a c d e s g r a s v o a t s D o s a g e s p e c t r o p h o t o m t r q u e d e sa c i d e sg r a s p o l y n s a t u r é s
D é t e r m n a t io nd elap o s it io nd e sd o u b l e sl ia is o n sp a rc o u p u r eo x y d a n t e I d e n t i f i c a t i o n d e s a c i d e s g r a sp a r l e s d é r v é s f o n c t i o n n e l s
C a r a c t é r i s a t i o n d e l a f o n c t i o n a c é t y é n q u e T n u r e n a c d e s o x y d é s T n u r e n n a p o n f a b e
H
C r t é n d s
l e s C h o r p h y
T c o p h r o
G
S é s a m , s é s a m n s é s a m n
y
A
o s a g e d e a f o n c t o n c a r b o n y e D o a g e d e a f o n t o n a é p o x y
D o s a g e d u g l y c é r o le t d e sc o m p o s é sa d h y d r o x y é s
C h p t r e V S é p r a t o n d e c o n t t u n s
P r é p r a t o n d e s a c d e s g r a s
P r é p a r a t i o n d e se s t e r sm t h y i q u e se té t h y i q u e s s t a t o n a n y q u t o g r p C h h e r m C h r o m t o g r a p h e s u r c o o n n
C h r o m t o g r a p h e s u r p p e r
h r o m t o g r a p h e e n p h s e g z e u e
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AVANT-P PROPOS
Dan ans s le règne ani animal com m e dan ans s le règne vég végétal, l les es li lipides une g gr ran and de place; il est n né écessaire d di in ns siste ster sur ce fait, puisq sque util li ise se an nn nuel ll lem en nt t 1300000 tonnes de corps gras s, , al li imen nt taires ou la m oitié en nv viron est produite sur son sol (en particulier 450 00 000 beurre et s sa ai in ndoux), ce q qu ui repré és sen nt te une v va al le eur com m ercial le e de m ill lliards de no nouveaux fran nc cs s, , et place par suite le les corps gras à fort hon no orable dan ns s l'économ ie de n no otre pays s.. Et pourtant l le es lipides sont des com posés dont l le es propriét été és s, q qu u fa f ait l l''objet de no nom breux trav va aux, s so on nt ts so ouvent nt m al connues, s, et étudiée ées, m êm e dan ns s les facultés és, où la la place qui l le eur est réserv gé général de très faible im portance. Ce son nt t parfois des com posés délicats à travai il ller, et leur an na al
de n no om breux problèm es à ceux qui, en ayan nt t bes so oin n, ,n ne es so on nt t pas des c sp spécialis st tes des corps gras. Le présent ouvrage est donc destin né é à tous
quils ls étudien nt t des problèm es de biol lo og gi ie et de biochimie an ni imal tale le, de m édecine ne ou de diété ét ti iq que, ou m êm e de chim ie organ ni ique Il leur don nn nera un certain nom bre de techniques expé ér rim ent ntal le e s se em en nt ts sé élection nn nées et étudiée ées s, ,q qu ui l le eur perm ettron nt t de résoud blèm es an na al ly ytiqu ques les plus couran nt ts s, , et il com plétera par le poi ana nal ly ytiqu que, le les g gr ran nd ds ouvrages cl la as ss siqu ques de biochimie, tels le T
biochimie g gé énérale le de Pol lo onows sk ki et le rem arquable třaité d The Lipids , t th heir ir Chem istry a an nd Biochem istry .
Com m e in nt troduction à notre trav va ai il l nous ne pouvon ns s que reco l la a le lecture de l l''ex xc cellen nt te étude fai it te récem m ent nt par E. André (*
Les m éthodes an na aly lytiq qu ues qui s se eront disc scuté ée es seront en pri
méthodes m odernes et d da application pratiq qu ue, l le e plus souven nt t en rant nt dan ns s le Laboratoire de Lipochim ie du C.N.R.S. La bas se e en se fo fois que cela s se era possibl le e, une m éthode officiel ll lem ent nt n no orm ali lis l' l'échel ll le in nt ternation na al le e par l'Union in nt ternation na al le e de chimie pur qu quée ((U U.I. I.C.P.A.), s so oit aux échelles national onales es par l'Association fr
no norm ali lisa sation (A.F.N.O.R.) en Fran nc ce, la la Deutschen Ges se el ll lschaft wiss ssenschaft ((D D.G. G.F F..)) en Allem ag agn ne, l le e Britis sh h Stan and dards In ns stitu
e n tG a n nd d -B Bretag gn ne, l' l'Am erican Oil Chem ist sts' s' Society ((A A.O. Éta s-r U n is is. .e (*) (*) E. André, Oléagine agineux , 1957 1957, , 12, 12, 507 et 615. 1.
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P o u rc h a q u ed o s a g eé t u d ié ,n o u sin d iq u e r o n s
e tc e r t a in e sr é f é r e n c e sp a r t ic u l iè r e m e n ts ig nf ic
c ip eà d e st r a v a u xr é c e n t sp a r u sd a n sd e sr e p r o c u r e r . Il n e s tp a sq u e s t io n ,e ne f f e t ,d e r e l a t iv eàc h a q u em é t h o d ed ed o s a g e . D a u t r ep a r t ,n o u sd o n n e r o n st o u sl e sd é t a i p o u rm e n e ràb ie nl e sa n a l y s e su s u e ll e s ;p o u s im p l e m e n tu nn o m b r er e s t r e in td er é f é r e n
p r é c is ,o ùla n a l y s t ein t é r e s s ép a rc e t t em é t h o d e
e tt r o u v e rt o u sl e sr e n s e ig n e m e n t sv o u l u s . N o u sd e v o n s ,e no u t r e ,s ig n a l e rq u ed iv e r s
d e sq u e s t io n sd a n a l y s ed e sc o r p sg r a s ,e n
c h im q u eq u eb io c h im q u e ,e t ,p a r mc e u x c i, o n té t ép r é c ie u xp o u rl ep r é s e n tt r a v a il ,l e s
E nf r a n ç a is: Ge tJ P W o l f f ,M é t h o d e sd D u n o d ,P a r is ,1 9 5 3 .
E na n g l a is: K W l l ia m ,O il s, f a t sa n df
examination , Churchill, London, 3e edit. 1950; V. Mehlenbacher, The analysis of fats and oils, Garrard Presses, Champaign. (111.), U.S.A., 1960.
En allemand : H. Kaufmann, Analyse der Fette und Fettprodukte, Springer Verlag, Berlin, 1958. Par principe, nous ne renverrons pas le lecteur à ces ouvrages : il le fera de lui-même lui-même en cas d dee nécess nécessité ité ((**) **)..
Le domaine de la microanalyse étant plus délicat, aussi bien pour les lipides pour les autres nous n'avons derenseitech niques àque cette échelle. Nousconstituants, signalerons simplement quepas deprésenté nombreux gnements utiles à ce sujet se trouvent dans les publications de G. Gorbach. Enfin, il convient de dire que le présent ouvrage a été réalisé en équipe au Laboratoire de Lipochimie du C.N.R.S., sous la direction de C. Paquot, directeur du Laboratoire, et avec le concours de : Mlle J. Mercier,
MM. D. Lefort; R. Perron; et A. Mathieu, secrétaire de rédaction.
(*) Pour rU.I.C.P.A., Analyse des matières grasses, 4e édition, 1954. Pour le B.S., Methods of analysis of oils and fats, n° 684, 1958.
(**) Au moment de la mise sous presse du présent ouvrage, viennent de paraître les comptes-rendus d'un d'un « Symposium Sy mposium sur les le s nouvelles nouvel les méthodes d'analyse d'analyse des Lipides Lipides », J, Amer . Oil. Chem. Soc., 1961, 38, 534, 625 et 708.
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IN INTRODUCTION
GÉNÉRALITÉS SUR LES CORPS GRAS ET SUR L'ANALYSE
Pour le chimiste organicien, les corps gras sont formés essentiellement par la classe des esters des acides aliphatiques à longue chaîne, et plus spécia lement des esters de glycerol. De tels composés peuvent évidemment être obtenus par synthèse avec toute la pureté désirable, mais toute leur impor tance réside dans le fait que, pondéralement, ceux-ci forment l'élément prépondérant de l'un des grands groupes de constituants des cellules vivantes,
celui des lipides.
Les lipides
Les lipides se trouvent aussi bien dans le règne végétal que dans le règne animal, et, tout en ayant dés traits communs, peuvent avoir de grandes différences de structure et de composition. Le caractère commun à tous les lipides réside dans le fait que, à l'état anhydre, ceux-ci sont solubles
dans les solvants organiques apolaires. C'est d'ailleurs en faisant appel à
cette propriété que l'on sépare les lipides des autres constituants cellulaires, protides prot ides et glucid glucides es notamment. Que la matière de départ soit animale ou végétale, le principe d'extraction de ce que l'on désigne en général sous le nom de fraction lipidique totale est toujours touj ours le mê même me : cette matière de dépa départ rt est amenée à un degré d'h d'hydra ydra--
tation faible ou nul, extraite par un solvant peu ou pas polaire, le plus sou vent éther de pétrole pour les produits végétaux, et mélange benzène/éthanol,
ou benzène/éther de pétrole/éthanol pour les produits animaux. Il faut d'ailleurs préciser que, pour ces derniers, les lipides de réserve sont extraits
beaucoup plus facilement que les lipides cons constitutif titutifss d des es cellules, pour lesquels l esquels
il faut rompre des c complex omplexes. es. La fraction lipidique totale ainsi obtenue subit une transformation pro-
fonde lorsqu'elle est; traitée par une solution alcoolique d'hydroxyde de potassium à 1' ebullition (en particulier toutes les fonctions esters sont sapo nifiées). Si cette solution alcoolique alca alcaline line est diluée par l'eau l' eau et extraite par l'oxyde diéthylique ou l'éther de pétrole, le solvant contient en solution certains constituants appelés fraction insaponifiable tandis que la phase hydro-alcoolique en contient d'autres.
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E ne f f e t ,l o r s q u ec e t t es o l u t io nh y d r o a l c o o l i e x t r a c t io np a rlo x y d ed ié t h y l iq u eo ulé t h e r
t io na c id e sg r a s, c o n s t it u é ee s s e n t ie l l e m e n td a c i
c h a î n e .
P a rc o n t r e ,d a n sl as o l u t io nh y d r o a l c o o l iq d e sc o r p sd ec o n s t it u t io na s s e zd iv e r s es e l o n g l y c e r o l , in o s it o l ,a c id e sp h o s p h o r iq u e s ,b a s e s An s i, d a n ss ag é n é r a lit é ,l af r a c t i o nl ip id i c o m p l e x e ,d en o m b r e u xc o n s t it u a n t sf o r td i f ê t r eo b t e n u s .C e s tp o u r q u o io naé t éa m e n é
IoL i p id e ss im p l e s, c o m p r e n a n t: a .L e sg l y c é r id e s ,o ue s t e r sd e sa c id e sg r a s bL e sc ir e s ,o ue s t e r sd e sa c id e sg r a se td a l c h a în e(c é r id e s )o ua l ic y c l iq u e s(s t é r id e s ).
2 °L ip id e sc o m p l e x e s, c o m p r e n a n t: a .L e sp h o s p h o l ip id e s ,c o m p o s é sd a n sl am o l r a d ic a ld el la a c id eo r t h o p h o s p h o r iq u e ;
bL e sg l u c o l ip id e s ,c a r a c t é r is é sp a rl ap r é
molécule.
Le présent ouvrage est consacré uniquement aux méthodes analytiques concernant les lipides simples, et plus spécialement les glycérides, en y adjoignant bien entendu les composés qui les accompagnent normalement. Les glycérides
Les triglycérides, ou triesters des « acides gras » et du glycerol, constituent,
à quelques rares exceptions près, plus de 99 p. 100 de ce que l'on désigne couramment sous le nom d'huiles et de graisses animales ou végétales, la petite fraction non glycéridique étant constituée par des « insaponifiables ».
Pendant de très nombreuses années, il a été admis que les acides gras naturels étaient uniquement des acides gras aliphatiques, linéaires saturés, éthyléniqües de structure cis, ou éventuellement acétyléniques, à nombre pair d'atomes de carbone. Actuellement, cette conception est dépassée. En effet, depuis une quin zaine d'années, de nombreux chercheurs ont démontré l'existence, dans les matières naturelles, soitgras à l'état de traces, soit d'atomes même à des tages nongrasses négligeables, d'acides à nombre impair de pourcencarbone, d'acides gras ramifiés (souvent en position iso ou anté-iso), d'acides gras trans, et même d'acides gras à structure plus complexe (céto-acides, époxydes,
acides à cycle cyclopropane...). Par suite, l'analyste l'analyste moderne devra tenir compte de ces indica indications tions et penser qu'une analyse complète de la fraction « acides gras » d'une huile ou graisse sera délicate et peut être compliquée. Ainsi, par exemple, une analyse fine des acides gras d'un beurre pourrait faire apparaître plus de 30 acides gras
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d if f é r e n t s ,d o n tc e r t a in ss e r o n tp r é s e n t sd a n s
(a c id eo l é iq u e )e td a u t r e sàl 'é t a td et r a
m é t h y l 1 0d o d é c a n o ï q u e ).
D a u t r ep a r t ,l eb io l o g is t es e r as o u v e n ta m e n é n o ng l y c é r id iq u e sd e sm t iè r e sg r a s s e s: c e u x c
d a n sl af r a c t io nin s a p o n if ia b l e .C es o n t ,p a r l e st o c o p h e r o l s ,l e sp ig m e n t sc o l o r é s (c h l o r o c e r t a in sc o m p o s é ss p é c if iq u e sd u n ee s p è c e d ec o t o n ,s é s a m o ld elh lh u il ed es é s a m e ,d ia c d a il l e u r sp r é c is e rq u u nc e r t a inn o m b r ed e p r o p r e m e n tp a r l e rd e sl ip id e s ,m isq u il ss
e x t r a c t io n Il f a u t ,e no u t r e ,s ig n a le rl ap r é s e n
d ep h o s p h o l ip id e sd a n sl e sh u il e sv é g é t a l e s s o ja ,d ela la r a c h id e ), l e sp h o s p h o l ip id e sd o r i g é n é r a la s s e zn e t t e m e n td e sp r é c é d e n t st a n
localisation.
Les altérations des lipides
Le biologiste qui veut connaître exactement la composition et la structure d'un lipide devra toujours avoir présent à la mémoire le fait que le lipide est un mélange chimique complexe en facile évolution. Il devra donc prendre toutes les précautions voulues pour s'assurer que le lipide étudié ne subit pas
de transformations transformations ch chimiques imiques pe pend ndant ant son extraction, entre celle-ci et l'analyse,
et même pendant l'analyse. En effet, les lipides sont souvent susceptibles de subir des altérations sen sibles au cours des traitements qu'on leur fait subir, et même au cours du simple stockage. Ces altérations peuvent être d'ordre purement chimique, ou d'ordre bio chimique ch imique (enzymatique en particulier) particulier).. Les plus importantes ssont ont ll'hyd 'hydrolyse rolyse et l'autoxydation.
L 9 hydrolyse des triglycérides se fait toujours par passage progressif par les
di, puis monoglycérides :
Triglycéride + eau ■ - ► diglycéride + acide gras;
Diglycéride + eau ■ - ► monoglycéride + acide gras ;
Monoglycéride + eau ■ - ► glycerol + acide gras.
Le résultat analytique simple de l'hydrolyse est l'apparition d'acides gras libres, et de fonctions hydroxyles libres (traduits par des indices d'acide et d'hydroxyle non nuls). Une telle hydrolyse est, dans certains cas, extrêmement rapide; ainsi, à titre d'exemple particulièrement significatif, une huile extraite de fruits de palme mûrs et intacts aura une acidité inférieure à 0,2 p. 100, alors que l'huile extraite de fruits identiques, mais blessés, aura une acidité de plusieurs unités
pour cent lorsque l'extraction est effectuée dix minutes seulement après la blessure.
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Ua u t o x y d a t io nd e sl ip id e se s tl lo o x y d a t io n
d el la a ir ,e tc es o n tl e sc h a în e sn o ns a t u r é e sq u i
t io ns et r a d u itda b o r dp a rl af o r m t io nd e p e r o x y d e sn o nn u l ), p u isp a rla p p a r it io nd e c e u x c i («a c id e so x y d é s» ,f o n c t io n sc a r b o n ic id ed é c r ir ec e sp h é n o m è n e s . Il f a u tt o u t e f o isa t t ir e rla t t e n t io nd ela la n
d u n e t i è r e g r a s s e d o i t s e f f e c t u e r d e p r é f x y d é ,m q u e c e l l e d u n p r o d u it a u t o x y d é e s t t r
p r a t iq u e m e n tim p o s s ib l ee tq u e ,d a u t r ep a la la n a l y s edu nt e lp r o d u ita u t o x y d ép e r m e t t e s t r u c t u r ed up r o d u ita v a n ta u t o x y d a t io n p r é v o i tlap r é s e n c ed ec h a în e sg r a s s e sin s a t d è s le x t r a c t io nd ul ip id e , il d e v r ap r e n d r e t e l l e slet r a v a il s o u sa z o t e ,l es t o c k a g eàb a s oxygènes.
But des analyses
Le chimiste ou le biochimiste peuvent être amenés à effectuer des analyses
dans le domaine des lipides pour des buts assez différents. On peut réunir les principaux d'entre eux en trois groupes :
1° Détermination de la composition exacte, totale ou partielle, d'un lipide d'origine connue. Ainsi, on peut désirer conna connaître ître la composition de l'huile extraite d'une plante déterminée, ou d'un tissu déterminé. On peut aussi avoir
besoin de connaître les modifications dans la composition, ou les altérations que subit un lipide lorsque les conditions de nourriture ou de vie de la plante ou de l'animal dont il provient varient; 2° Identification d'un lipide, ou d'un dérivé de corps gras, inconnu. Ainsi, par exemple, étant en présence d'une huile inconnue, il peut être utile de pouvoir déterminer de quelle espèce végétale elle a été extraite, ou bien,
étant en présence présence d'un composé composé quelconque, quel conque, un ester par exemple, d'en
indiquer la l a compos composition ition exac exacte; te;
3° Contrôle de la nature et de la qualité d'un lipide, ou d'un dérivé de corps
gras. Il est souvent bon de pouvoir reconnaître qu'une huile donnée corres pond à ce que le fournisseur annonce, de pouvoir déterminer la qualité, la puretéé d'un produit m puret marc arch hand afin de prévoir si les impuretés impuret és présentes sont
nuisibles ou non. A titre d'exemples, il faut pouvoir s'assurer qu'une huile dite huile huile d'oliv d'olivee vierge est effectivement une huile d'olive, et que, de plus, elle mérite le qualificatif qu'on lui donne; ou bien il faut pouvoir déterminer la composition d'un acide oléique commercial, connaître la nature des autres constituants et leur teneur, afin de voir si ceux-ci ne perturberont pas l'expé-
rience qu'on veut entreprendre. Ce groupe est donc en fait la synthèse des deux précédents.
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Q u e lq u es o itl eb u td el la a n a ly s eàe f f e c t u e r ,c e l u i d e v r af a ir ep r e u v ed ed is c e r n e m n td a n sl ec h o i xd p r e n d r ee td e sm t h o d e sàa p p l iq u e r il d e v r ae n s u i
les résultats obtenus. Généralités sur l'analyse
Il n'est donc pas dans le cadre de cet ouvrage de faire une étude générale sur l'analyse organique qualitative et quantitative, ni même sur la partie de celles-ci s'appliquant aux lipides. Toutefois, il a semblé utile d'attirer l'attention sur quelques points parti culiers qui échappent parfois à l'analyste non averti. Un premier point à signaler est celui de la précision que l'on peut attendre d'un dosage. Celle-ci est fonction d'un certain nombre de facteurs que l'on peut essayer de grouper comme suit : Io Facteurs matériels :
a. Une pesée est à l'origine de la prise d'essai dans la quasi-totalité des
dosages : l'erreur sur celle-ci est en général faible, et on peut aisément l'estimer;
b. Le dosage s'effectue quelquefois par gravimétrie, le plus souvent par volumetrie. Dans le premier cas, il y a à considérer une seconde erreur sur une pesée, dans le deuxième cas, l'erreur sur la lecture d'une burette : avec la burette usuelle de 50 ml graduée au 1/10, le volume sera mesuré à 2/10 de millilitre près (deux erreurs de lecture de 1/10 de millilitre chacune); aussi
pour avoir une erreur de 1 p. 100, on doit mesurer un volume d'au moins 20 millilitres. Le titre de la solution de dosage, ou l'importance de la prise d'essai doivent être ch choisis oisis en conséquence ;
c. Souvent la méthode de dosage impose l'utilisation d'un témoin, ou
essai à blanc. L essai L'erreur 'erreur sur cette opération s'ajoute à la précéd précédente, ente, et peut parfois devenir très importante si l'on n'y prend pas garde; en effet, il est
indispensable indispensa ble d'opérer dans d des es conditions conditions te telles lles qque ue la l a différence des volumes
de réactifs utilisés pour l'essai et pour le témoin soit assez grande pour être connue avec précision. Dans ce cas, c'est cette différence qui doit être d'au
moins 20 ml pour les dosages effectués avec la burette usuelle;. d . Dans le cas des dosages volumétriques, il est nécessaire de connaître
le titre exact de la solution titrée de dosage. Celui-ci devra être déterminé par
une méthode telle que l'erreur introduite soit négligeable. Dans le cas de dosages gravimétriques, il faudra opérer dans des conditions telles que le précipité pesé ne contienne pas d'impuretés (solvants en parti culier) et ait bien la composition chimique qu'on lui assigne.
2° Facteurs chimiques : a. Les dosages font le plus souvent appel à des réactions chimiques. Il faut donc se mettre dans des conditions où celles-ci sont totales, mais où des réactions parasites n'ont pas lieu; cette dernière condition pose parfois des problèmes ardus, ou même insolubles, et il faut alors tenir compte de telles J P 2 3 1 0 1 2 1
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r é a c t io n sp a r a s it e s .D a u t r ep a r t ,l e sr é a c t io n se n
p a se ng é n é r a l in s t a n t a n é e s ,i lf a u d r ar e s p e c t e rl e st e
s o itq u el lo o nd é s ir eo b t e nru n er é a c t io np r a t iq u e
d é s ir ea r r iv e ràu né q u i l ib r e ,s o itm m ,c eq u ie s tp l
a r r iv e ràu nm ms t a d ed el ar é a c t io n
bS i lo nu t il is eu nd o s a g eb a s és u ru n er é a c t io n s e r ain d is p e n s a b l ed ed é f inrd ef a ç o np a r t i c u l iè r e o p é r a t o i r e s ,d ef a ç o nàc eq u ec e l l e s c is o ie n te x a c c. D a n sl e sd o s a g e sv o l u m t r iq u e s ,o nf a its o u v
c o l o r é .I l yad o n cl ie ud ec h o is ira v e cs o inc e l u ic i ,d
g o u t t e» ,d elam mf a ç o np o u rle s s a ie tlet é m o T o u tc e c ic o n d u it ,d a n sl ap l u p a r td e sc a s , àu n e u nq u e , in f é r ie u r eà1p 1 0 0P a rs u it eo ne s to b l ig
l e sd o s a g e sa um o in se nd o u b l ee td ep r e n d r elam o y e
C e lap r é s e n t ee no u t r e , la v a n t a g ed em t t r ee né v i t e l l e ,t o u jo u r sp o s s ib l e . L e x p r e s s io nd ec e sr é s u l t a t sd e v r aê t r el o g iq u e , e s t im e(* ). A n s i, àt i t r ed e x e m p l e , il s e r a itr id i
d io d ed u n eh u il ee s td e7 5 , 8 3 ,m is ,s i lo naf a it e np r e n n el am o y e n n e ,o np o u r r ad ir eq u elin d ic e m md e7 5 , 8= t0 , 5 . D em mlac o m p o s it io ne na c id e sg r a sd u n eh u
f a ç o nr a is o n n a b l e: a in s i, d ir eq u u n eh u il ec o n p a l m t iq u ee s tu nn o n s e n s: o np e u t ,e ng é n é r a l , c o n t ie n t2 3= f c0 , 5p 1 0 0d ec e ta c id e .
U na u t r ep o i n tf o r ti m p o r t a n tàs ig n a l e ràla n a l y s t
n a g e . Il e s te ne f f e tin d is p e n s a b l eq u el e sa n a ly s e s p r is e sd e s s a iq u ir e p r é s e n t e n tb ie nlé c h a n t il l o n a n a ly s e r Lé t u d ed é t a il l é ed e sc o n d it io n sd ep r é l è v m o y e n»s o r td uc a d r ed ec e to u v r a g e ,c a rc e sc o n e ts o n ts o u v e n td e sc a sd e s p è c e . At it r ed e x e m p l e
p r o b l è md elé lé c h a n t il l o n n a g ed a n su nc a sd é t e r m n é ,
d a n su np r é c é d e n tc a he rc o n s a c r éa u x«M é t h o d e s f a r in e se ta u t r e sp r o d u it s »e tp u b l iép a rl eC N E d a u t r ep a r ts o m m ir e m n tl e sm t h o d e sp r é c o n s d e sg r a in e so l é a g in e u s e s ;n o u sr a p p e l l e r o n se n f in t e lu n eg r a is s e , au np o i n td ef u s io np e ué l e v é ,i le s t
d ep r é l e v e rl e sp r is e sd e s s a is u rc ep r o d u itàlé t
l'échantillon étant fondue.
Tout ceci nous conduit à préciser que l'étude des corps gras et lipides est, non une besogne imprécise et empiri empirique, que, mais un chapitre chapitre de l'immense l'immense
domaine de la chimie organique qui ne se singularise pas spécialement.
Toutes les lois de cette chimie organique y sont valables, toutes ses techniques
peuvent y être utilisées. La suite de cet ouvrage en sera la preuve. (*) Voir en particulier A.O.C. S., M 1-59.
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CHAPITRE I
LES MATIÈRES PREMIÈRES
Pour ledes chimiste ou corps le biochimiste, les matières premières pouvant lui fournir lipides ou gras proviennent, soit du règne végétal, soit règne animal. Les techniques analytiques varient légèrement en fonction ces matières premières, en particulier parce que certains constituants lipi diques présents dans le règne animal sont nettement plus complexes que ce
du règne végétal (cenapses lipoprotéiques, phosphoaminolipides...). C'e pourquoi il y a lieu d'examiner séparément ces deux groupes de matières premières.
A. MATIÈRES PREMIÈRES VÉGÉTALES
Danss'ils le règne végétal, les lipides se trouvent principalement lesarachide), graines, dites, y sont abondants, graines oléagineuses (lin, colza,dans ricin,
mais se trouvent aussi dans le péricarpe de divers fruits (olive, palme, avocat...).
L'extraction industrielle de ces huiles s'est pendant longtemps effectuée uniquement par pression; mais, à l'époque actuelle, les méthodes d'extraction par solvants sont de plus en plus utilisées pour les graines oléagineuses. Les principaux dosages à effectuer sur une graine oléagineuse sont les déter-
minations de l'humidité et de la teneur en huile. Dans certains cas, il est
intéressant d'effectuer, en outre, un dosage de l'azote pour connaître la teneur
en protéines de cette graine, et par suite, du tourteau qui en résultera après
extraction.
Lorsqu'on veut effectuer des analyses ayant un sens sur des graines oléagi neuses, la question de l'échantillonnage est primordiale, car il faut, en fin de être en présence un compte, « échantillonnage moyen de ». prises d'essai qui représentent effectivement 1a.
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C e s tp o u r q u o il e sd iv e r s e sm t h o d e sn o r m l is é e s p r é c is e sàc es u je t .L aN o r mf r a n ç a is e ,e np a r t i c u l
«P o u rp e r m t t r eu n ea n a l y s ec o r r e c t e , lé c h a n t il -2à5k gp o u rl e sg r a in e sd ed im n s io n sm o y e s o j a ...), e tp o u rl e sg r o s s e sg r a in e s(c o p r a h ,k a r it é -2 0 0ga um nm u m p o u rl e sp e t it e sg r a in e s(l in ,
Q u il ya ito un o ns é p a r a t io nd e sim p u r e t é s ,m la n g e
a f ind el lh h o m o g é n é is e re t ,p a rr é d u c t io n ss u c c e s s iv e réduit de :
- 1 kg environ pour coprah et olives; - 500 g environ pour toutes les autres graines, sauf les petites graines; - 100 g environ pour toutes les petites graines (lin, sésame, la plupart des crucifères, tomates...); - 50 g environ pour les très petites graines (œillette, cameline). » Lorsque cela sera possible, les prescriptions précédentes pour effectuer l'échantillonnage seront suivies. Dans le cas contraire, il faudra chercher à s'en rapprocher rapprocher le plus possible, et se souvenir que, plus les échantillons échantillons de départ sont petits, plus les variations botaniques dues au hasard auront de l'importance sur le résultat final.
DOSAGE DE L'HUMIDITÉ Le dosage de l'humidité dans une graine oléagineuse est assez délicat, car il peut être ê tre ass assez ez diffic difficile ile de différencier la véritable humid humidité ité (eau lib libre) re) de l'eau de constitution. constitution. C'est pourq pourquoi uoi il est indispensa indispensable ble de suivre un protocole expérimental bien précis afin d'avoir des résultats reproductibles, et par suite, vu l'importance de la détermination pour les transactions commer-
ciales, les méthodes à employer ont été normalisées dans tous les pays.
De nombreuses méthodes méthodes peuvent être utilisées pour doser l'humidité,
mais la méthode normalisée est celle consistant consistant à déterminer lla a perte de poids à l'étuve.
Méthode n no orm ali lis sé ée
Matériel.
- Étuve à vide, ou à défaut étuve à air réglée à 103 °C =h 2 °C ; - Cristallisoir d'un d'un dia diamètre mètre de 70 mm et e t d'une hauteur hauteur de 30 à 40 m
- Dessicateur.
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Mode opératoire.
Le dosa dosage ge est effectué sur les graines broyées (ou éventuellem éventue llement ent râpé dans le cas des amandes de coprah), sauf pour les petites graines renferm des huiles siccatives ou semi-siccatives (lin, œillette...), celles-ci étant séch entières. Il faut faire en sorte que le broyage soit effectué sans échauffemen pour éviter les pertes en huile ou en humidité.
Peser dans le cristallisoir 5 g =h 0,5 gài mg près.
Placer le cristallisoir dans l'étuve. Après trois heures de séjour dans l'étuve, laisser refroidir dans le dessicateur et peser.
Étuver à nouveau pendant une heure, et peser dans les mêmes conditio Si la différence entre les deux pesées n'est pas supérieure à 5 mg, arrê l'opération. Dans le cas contraire, continuer l'étuvage pendant une heur et ainsi de suite, jusqu'à ce que l'écart entre deux pesées successives soit inférieur ou égal égal à 5 mg. Il y a lieu de noter que la prise d'essai doit être pesée aussitôt après broyage car les graines broyées sèchent rapidement à l'air, et que la graine séch doit être pesée le plus rapidement possible après sa sortie du dessicateu car les graines anhydres anhydres s'h s'hydratent ydratent ttrès rès vite. vi te. Expressi sion des résultats.
Si p es st tl la am as ss se en gram m es de l la a pris se ed de es ss sai, et p celle des grai sè sèches, l l''humdité en p. 1 10 00 est :
Hu Hum idité p. 1 00 = 100 P Méthodes diverses
De nombreuses autres méthod mét hodes es de détermination de l' l'hum humidité idité dans les
graines oléagineuses ont été proposées, soit méthodes de laboratoire, soit
méthodes rapides de contrôle industriel. A titre indicatif, on peut citer parmi celles-ci :
Études d'ensemble du problème (1) : Méthodes chimiques : a. Mesure du dégagement d'acétylène obtenu par réaction sur le carbure de calcium (2) (3).
jS. Dosage de l'eau par le réactif de Karl Fischer (4).
M éth odes pphysiques hysiques : a. Séc ha ge iinfrarouge nfrarouge (5).
ß. M es esure ure de constante diélectri diélectriqu qu e (6). y . Entraînement Entraînement azéotrop azéotropique ique de l'eau (méth ode de
D ean et Sta rk), en particulier par le benzène, benzène, sur graines broyées.
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BIB IBLIOGRAPHIE IE Normes A.F.N .F.NO O.R. V 0 03 3-90 901 1
U.I.C.P.A. p. 12 A O CS .c o t o n: A a3 3 8 arachide : A6 2 - 49
so soja : Ac 2 - 41 tung : Ad 2-52 2-52
ricin : Ae 2 - 52
l lin in : A/ 2 - 5 54 4 D.G.F. B II 3 ((52) 52) Références
1. Fra Franç nçois ois M. T. et collabora collaborateurs, teurs, Bull. Inf Inform. orm. ITERG., 1949, 194 9, 3, 257 ; 19 1950, 50, 4, 40 456; 1952, 6, 117 et 427; 1953, 7, 11. - 2. Gorbach G et Jurinka A., Fette u. Seifen , 1 51,, 129. - 3. Da 51 Dangoumau ngoumau A., L Laville aville A. et De Debruyne bruyne H H., ., O Oléagineux léagineux , 1953 1953,, 8, 211. - 4.
J., Seifen , Ole FetteFette- Wac Wachs hse-, e-, 1959, 195 9, 85, 173 1 73 et 249. - 5. Fauve M., Bull. Inform. Inf orm. ITERG., 194 19 4
3, 323, - Fauve M. et Lacoste P., Bull. Inform. ITERG., 1952, 6, 70. - 6. Massoni Desnuelle P., Bull. Inform. ITERG., 1952, 6, 39.
DOSAGE DE LH LHUILE
Le dosage de l' l'h huil ile e dans les grain ine es oléagin agine euses a donné breux trav va aux, car c''e es st t au prem ier chef un problème d di im à la fois dan ans s toutes les trans ansactions commerciales ciales entr entre grain aines, es, i in ntermédiaires, et huil ilier iers, et dan ans s les usin ines es d dextr extr Ce C est st pourquoi div ve erses méthodes ont nt é ét té proposé sées et m
certaines ines rel elat ativem ivem en ent tl lo ongues, es, mais précises cises et dappli
dau d autres rapides, es, mais plus spécifiq cifiques et moin ins s précises cises.. Seu ont donné lieu à normalisation.
Celles-ci reposent sur l'extraction de l'huile par un solvant approprié : le problème pratique consiste à extraire la totalité des lipides, et à ne pas extraire d'autres constituants, soit lipides altérés et oxydés, soit non-lipidiques ; par suite, le l e solvant idéa idéall devrait avoi avoir r les carac caractéristiques téristiques suivantes :
- grand pouvo pouvoir ir diss dissolv olvant ant vis-à-vis vis-à-v is des des glycérides; glycérides; - pouvoir dissolvant nul, ou à la rigueur faible pour les produits tels que les protéines, les amino-acides, les sucres, les sterols, les phospholipides ;
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-e v a p o r a t io nf a c il ee ts a n sr é s id u -p o in td ë b u l l it i o np e ué l e v é ; -c o r p sp u ro ua z é ot r o p e ; -inn f l a m m b l e ;
- non toxique; - pénétration aisée dans les graines. En pratique, il n'est pas possible de réunir toutes ces conditions, et les solvants employés employés se réd réduisent uisent à l' l'éth éther er de pétrole léger (Eb. 40-60 °C) ou mieux à 1' hexane, et éventuellement à l'oxyde diéthylique (non utilisé dans les méthodes normalisées). Un second point c'est-à-dire particulièrement important est la préparation la graine avant extraction, le broyage de celle-ci. Ce broyagededoit en effet être tel que l'huile ne subisse aucune altération ni perte. Ind In dépendamment épendamment de ceci, diverses méthod méthodes es d'extraction peuvent peuvent être ê tre utilisées: macération, lixivation, extraction avec appareils continus. Ensuite on peut, soit peser l'huile extraite après avoir chassé le solvant, soit peser le résidu déshuilé (1). En pratique, les méthodes normalisées préconisent les extractions continues et pèsent l'huile extraite. Méthode n no orm ali lisé sée
Matériel.
Broyeur à graines d'un type approprié. Mortier en fer ou en bronze a avec vec pilon.
Appareil App areil d'extraction d'extraction type typ e Soxh Sox hlet, Kum K um agawa agawa ou analogue, analogue, mun mu n
deux ballons A et B.
Bain-marie.
Dessicateur.
Réactifs.
Hexane normal, ou à défaut éther de pétrole distillant entre 40 °C et 60 °
et ayant un indice de brome inférieur à 1. Sable fin.
M ode opér ératoir ire.
Broyer l'échan nt til ll lon réduit de faç ço on à obten ni ir une m outure fi in ne, évitan nt t tout é éc chauffem en nt t, perte d dh huile le ou perte s se en ns sibl le ed dh hum idit Aussitô ôt t après la fi in n du broyag ge e, peser une prise se d de es ss sai de 10 g 1 cg près et la placer dan ns s la cartouche de l l''appareil dextraction n.. Si le les grain ne es son nt t très hum ides, ef ff fectuer un séchag ge e partiel de c dan ns s la cartouche pré éc cé éd den nt te pour ram en ne er le le taux dhum idité au vo
d e 10 p. 100.
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S é c h e re tt a r e r ,a um l l ig r a m mp r è s ,l eb a l l o n t io nE f f e c t u e rc e l l e c ip e n d a n tq u a t r eh e u r e s .E la la p p a r e i l ,e tl ap l a c e rd a n su nc o u r a n td eg a zin p a r t ied us o l v a n tq u i im p r è g n elaf a r in e . Vd e rl ac a r t o u c h e ,e tt r i t u r e ra u s s if in e m n t
c e t t ef a r in ea v e ce n v ir o n1 0gd es a b l ef i nR e m t t
e te x t r a ir ed en o u v e a up e n d a n td e u xh e u r e se n D a n sd e sc o n d it io n sid e n t iq u e s ,t r i t u r e ràn o u v àu n et r o is iè me x t r a c t io np e n d a n td e u xh e u r e p r é a l a b l e m n ts é c h ée tt a r é .
C h a s s e r l a m je u r e p a r t ie d u s l v a n t s é p a r é b a ll o n s A e t B p a r d i s t il l a t io n a u b a io n m r ie b o u il l
t r a c e sd us o l v a n tp a rc h a u f f a g eà1 0 0° C ,s a n sd c e t t eo p é r a t io np a rin s u f f l a t io nd eg a zin e r t eo r é d u it e .C ec h a u f f a g en ed o i tp a se x c é d e rv in g d a n su nd e s s ic a t e u re tp e s e rR e n o u v e le rl ec h a u
t io n sju s q u àc eq u ed e u xp e s é e ss u c c e s s iv e sn ed if f è
S il ep o id sd elh lh u il ec o n t e n ud a n sl eb a l l o nBn
lo lo p é r a t io ne s tt e r m n é e ,s in o nr e c o m m n c e rl ec y c
e x t r a c t io nju s q u ào b t e n t io nd u np o id sd h u il ea L ep o id st o t a ld h u il ee x t r a it ee s tl as o m md e ballons A et B.
Expressi sion des résultats.
Si E est l le e poids in itial de farin ne et p le poids de l le extraite, l la at en huile le p a r rapponi rt aux grain ne e set elles quel ll les es st tl'':huile p' 100 ~P~ Précision.
D'après des séries d'essais effectués entre divers laboratoires, on peut chiffrer la précision de cette méthode à 0,2 p. 100 pour les graines usuelles Méthodes diverses
De très nombreux travaux travaux ont o nt été ex exécutés écutés dans le but de mettre au poi des méthodes méthodes rapides rapides,, donnant la teneur ten eur en e n huile des graines en vue v ue d contrôles industriels; à titre d'exemple, citons :
- extraction de l'huile par un solvant à indice de réfraction élevé,
mesure de l'indice de réfraction du mélange après extraction (sans chasse solvant). Des tables éta établies blies à l'avanc l'avancee perm permettent ettent d'en déduire la teneur huile. Les solvants préconisés sont principalement le chloro et le brom napht alène ;
- extrac extrac tion de l'h l'h uile par du dich loro lorobenzène, benzène, eett mesure de la constante ' diélectriqu diélectriqu e de la solut solut io ion, n, ou bien par du té trach lorure de ca rbone et déter mination de la densité de la solution.
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BIB IBLIOGRAPHIE IE
Normes
A.F.N.O.R. A.F.N.O .R. V 03 - 901
U.I.C.P.A. p. 12 A.O.C.S. Graine nes de coton : A a 4 4-38 - arachide : A6 3 - 49
- soja : Ac 3 - 44 - tung : Ad 33-52 52 Ad 5-52
Ad 6 - 52
-r ic i n: A e3-5 2
-l in A / 3 5 4
D D.G.F. .G.F. B I - 5 (52)
Références
1. André E. et Carbouères M., Oléagineux , 1953, 8, 441.
DOSAGE DE L'AZOTE ET DES PROTÉINES Dans les graines oléagineuses, il est parfois intéressant d'effectuer le dosage
de l'azote de façon à connaître la teneur en protéines de celles-ci. La méth utilisée est celle de Kjeldahl, les catalyseurs préconisés étant soit le mercu soit le sélénium.
Méthod Mét hodee
Matériel.
Appareil de Kjeld ahl avec matras de 800 ml. Burette 50 ml, graduée au 1/10. Réactifs.
Oxyde rouge de mercure (ou mercure).
Acide sulfurique d = 1,84.
Sulfate de potassium (ou de sodium) anhydre. Solution de sulfure de sodium à 4 p. 100. Solution Sol ution d'hydroxyde d'hydroxyde de sod sodium ium environ env iron 1 10 0 N. Solution Solut ion de rouge de méth méthyle yle à 0,1 p. 10 100 0 da dans ns l'éthanol. l'éthanol. Liqueur d'acide sulfurique titrée 0,5 N. Liqueur d'hydroxyde de sodium titrée 0,5 N.
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M ode opératoir ire.
Pes se er exactem en nt t 1, ,5 5 à 2 g de g gr rain ne es fin ne em en nt t broyé ée es dan ns s un m a Kj Kjel ld dahl. Aouter en nv viron 0,7 g doxyde de m ercure ((o ou 0,6 65 5 g de m e 15 15 g de s su ulfate de potas ss sium(ou de s so odium et 25 m dacide s su ulfuri Chauffer doucem en nt t, s sa an ns s faire bouill llir, pen nd dan nt t cin nq q à quin nz ze m i
ju jusquà ce quil ne se fo form e plus de m ousses, le m atras étant lé légèrem ent nt i
Chauffer en ns suite à ebulliti io on douce jusquà décoloration com plète
solu lution, n, et poursuivr vre le le chauffage ge trent nte m inu nutes après celle-c -ci.
Refroidir, ajjo outer 300 m deau, puis une quantité suff fi isa san nt te de l la as so o
de su sulfure de so sodiumpour préc écipiter tout le le m ercure (env nviron 25 m).
Ao Aouter ens nsuite avec précaution une q qu uan nt tité de l la as so olution dhydr
de s so odiumconcentrée tel ll le q qu ue l le em ili lieu devi ie en nn ne ne nettem ent nt al lc cal li in (e
60 ml). M ettre le matras en place sur l'appareil l'appareil de d is istillation; tillation; da ns le flacon récepteur, mettre 50 ml exactement mesurés de la liqu liqu eur d'acide sulfu rique titrée et fa ire ire en so sorte rte qu e l'e l'extrémité xtrémité d u tu be d e sortie sortie plonge plonge dans cett e solution.
Distiller environ 150 ml.
Titrer le liquide se trouvant dans le flacon récepteur par la liqueur d'hy droxyde de sodium en présence de trois à quatre gouttes de la solution de rouge de méthyle. Faire un essai à blanc dans les mêmes conditions. Express si ion des résultats.
Si :
p est le poids de la prise d'essai en g ; n est le nombre de ml de la liqueur titrée d'hydroxyde de sodium utili sée pour l'essai ; raole nombre no mbre de ml de la lliqueur iqueur titrée t itrée d'h d'hydroxyde ydroxyde d dee sodium utilisée
pour le témoin ; f le facteur de normalité de cette liqueur titrée;
la teneur en azote p. 100 est :
(no - n)f 0,14
o t e =
P
La t eneur en pr protéines otéines f ormule Proté est ines inesdonnée (p. 100) 100)par= 6la,25 Azot e :(p. 10 100) 0) BIB IBLIOGRAPHIE IE
Normes AO AO.C.S. Graine nes de coton : A a 5-3 -38 - arachide : A6 4 - 50
- soja : Ac 4 - 41 D.G.F. D.G.F. B II - 6 (52)
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EXTRACTION PRÉPARATIVE Dans bien des cas, au laboratoire, il est nécessaire d'extraire l'huile contenue
dans les graines en vue d'étudier celle-ci. Il est alors nécessaire d'opérer sur des quantités de matière première supérieures à celles utilisées dans la
détermination de la teneur en huile. Par contre, il est e st en général sans sans inconvé nient de ne pas extraire la totalité l'huile. Le plus souvent, l es tech les techniques niquesde util utilisées isées pour extraire ll'huile 'huile dérivent de
celle préconisée pour le dosage : extraction par un solvant, de préférence éther de pétrole léger ou hexane, d dans ans un extracteur continu de taille adéquate,
type Soxhlet ou Kumagawa. Une durée d'opération de quatre heures est en général suffisante. Il y a lieu de signaler en particulier l'appareil préconisé
par Gérard Gér ard (1), (1) , entièrement en ac acier ier inox inoxyda ydable, ble, et permettant de traiter en une seule opération 2 à 3 kg de graines, et de distiller dans le même appa-
reil le solvant utilisé.
Dans le cas de graines particulièrement sensibles à la chaleur, il peut être préférable d'utiliser des méthodes d'extraction à froid; en ce cas, il y a lieu d'opérer par macération des graines broyées pendant des temps relativement longs et en renouvelant le solvant. Des précautions devront alors être prises pour chasser ce solvant à la température la plus basse possible. Au laboratoire, les procédés d'extraction de l'huile par pression, analogues à ceux utilisés dans l'industrie pour obtenir des huiles vierges, ne sont en général pas utilisés, faute de matériel adéquat. BIB IBLIOGRAPHIE IE
Référence
1. Gérard G érard R., Ch Chim. im. Anal ., 1950 1950,, 32, 278.
B. MATIÈRES PREMIÈRES ANIMALES
L'extraction et le dosage des lipides provenant de matières premières
animales est beaucoup plus complexe que dans dans le cas des des matières premières premièr es végétales. En effet, dans le règne animal se trouvent des lipides de réserve, du type triglycérides, facilement extractibles, et des lipides complexes, plus
ou moins liés aux autres constituants des cellules, et souvent difficiles à extraire par suite de la nécessité de rompre diverses liaisons.
Les lipides de de réserve, tel telss le suif de bœuf ou de mout mouton, on, le sa saindoux indoux de porc sont simplement extraits des tiss tissus us ad adipeux ipeux par traitement de c ceux-ci eux-ci
à l'eau chaude et décantation ultérieure.
Pour extraire les lipides complexes, il est nécessaire de faire appel à des solvants organiques qui, évidemment, extraient en même temps les lipides simples. Mais ces lipides complexes étant en général associés à diverses subs-
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t a n c e sp r o t é iq u e s , il e s ta l o r sl ep l u ss o u v e n tn é c e d é s h y d r a t e rl am t iè r ep r e m è r e(t is s u, s o itd ir e c s o l v a n tp o l a ir e( m t h a n o l ,a c é t o n e ), q u id a il l e u r s c o m p l e x e s .E n s u it eo ne x t r a itc e u x c i, s o itp a rl lo o s o i tlep l u ss o u v e n tp a ru ns o l v a n to uu nm l a n g e
p a re x e m p l em t h a n o l / c h l o r o f o r mo ué t h a n o l /b e n z è d é s h y d r a t a t io ne te x t r a c t io n ,p e u v e n td a il l e u r sê t r ee
Ap a r t ird ec e sd o n n é e st r è sg é n é r a le s ,d iv e r s e s p o u re x t r a ir el e sl ip id e se tp o u rl e sd o s e rN o u sn d é c r ir eb r iè v e m n tq u eq u e lq u e s u n e s . U n em t h o d eu s u e l l ee s tc e l l ed eB l o o r(1 ):l et i p a ru nm la n g eé t h a n o l / o x y d ed ié t h y iq u e ,p u isd d uc h l o r o f o r mo ud elé t h e rd ep é t r o l e . L ap l u p a r td e sm t h o d e su t il i s e n te nf ind ec o m p m t h a n o l / c h l o r o f o r m / e a u ,e tlef a itq u ec e u xr ic h e s
p h a s iq u e s ,a l o r sq u ec e u xm o i n sr ic h e se nm t h a n s o n tb ip h a s iq u e s ,c o m ml em o n t r el af ig u r e1 E
METHANOL
EAU 10 20 30 AO 50 60 70 CHLOROFORME Fig. 1
Diagramme d'équilibre des mélanges ternaires chloroforme/ méthanoll eau
biphasiques, les lipides vont préférentiellement dans la couche chlorofor mique, tandis que les constituants non lipidiques vont préférentiellement dans la couche hydroalcoolique.
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M éthode de BLI IC CH ET DYER (2)
Le prin nc cipe est l le es su uiv va ant nt : le tis ss su est ex xt trait par un m élan ng ge m o si siq qu ue don nt tl la a com posi it tion es st t représent nté ée e par le poin nt t P de l la af fi ig gu ure
p ant rté ae dd in tio nsd hll o ro e, on a è,ne en l le ein m la ng edà e om p o si it io s se e n ée e Q ue rc la li ig gn nf eor dm ed ém ix xi im on n, nf f n, ,ép an rga diu tn io ncd de ea u ,s o n une dém ix xi ion fran nc che en am en na an nt tl le em élan ng ge à une com position rep par l le e poin nt t R. Pour eff ffectuer correctem en nt t ces opération ns s, i il l es st t in nd dis sp pen ns sable d com pte de l la a qu quan nt tité deau présen nt te dans ns l'échan nt til ll lon à extraire. pour un tis ss su conten na an nt t8 80 0 p. 100 deau, i il l es st t recom m an nd dé dopérer suit :
Chaque portion de 100 g de tissu frais óu congelé sera homogénéisée dans un « mixer » pendant deux minutes avec un mélange de 100 ml de chloro forme et 200 ml de methanol; ajouter alors 100 ml de chloroforme et homo généiser pendant pendant ttrente rente second secondes; es; ajouter ensuite 100 ml d'eau dis distill tillée ée et homogénéiser à nouveau pendant trente secondes. Le mélange est filtré filt ré sur Buchner; Buchner; normalement lla a filt filtration ration est rapid rapide. e. Le filtrat est transféré dans une éprouvette graduée de 500 ml; après quelques
minutes, la décantation est achevée; noter le volume de la couche chloro formique formiq ue (au moins 1 150 50 ml). La couc couch he alcoolique est éliminée par siph siphonon nage, tandis que la couche chloroformique contient les lipides purifiés. La méthodee peut fac méthod facilement ilement être rend rendue ue quantitative. La technique peut être appliquée à des tissus de diverses teneurs en eau, à condition de respecter scrupuleusement les proportions suivantes : l'extrac-
tion doit être effectuée avec un mélange chloroforme/méthanol/eau de compo-
sition 1/2/0, 1 /2/0,8 8 een n volume, vol ume, tand tandis is qu'après dilution lla a compos composition ition du mélange doit être 2/2/1,8.
Méthode de FOLCH (3) (4)
Réactifs.
Solvant d'extraction : mélange chloroforme/méthanol (2/1 en volume). Solvants de lavage : faire un mélange chloroforme/méthanol/eau dans le rapport 8/4/3 en volume. volum e. Lais Laisser ser déc décanter. anter. Recueillir séparément séparément les deux phases qui serviront de solvant de lavage, la couche supérieure (environ 3/48/47) aux solutions chloroformiques, la couche inférieure (environ 86/14/1)
aux solutions hydroalcooliques. On peut éventuellement additionner à la
couche supérieure de petites quantités de certains sels : 0,02 p. 100 de chlorure
de calcium, ou 0,017 p. 100 de chlorure de magnésium, ou 0,29 p. 100 de chlorure de sodium, ou 0,37 p. 100 de chlorure de potassium. Mode opératoire.
Le tissu tissu à extraire ext raire est homogénéisé homogén éisé dans dans un appareil adéquat pen
trois minutes minute s avec avec le mélange m élange chloro chloroform forme/métha e/méthanol nol à raison raison de 20 m jnélange jnél ange par gramme de tissu.
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F il t r e r ,e ta jo u t e ra uf il t r a t0 , 2f o iss o nv o l u m s a lin ea d é q u a t e ,a g it e ré n e r g iq u e m n te tla is s e rd é s u p é r ie u r ee tl a v e rl ap h a s ein f é r ie u r ep a rl ac o u
d e lavage.
La présence présence d es ssels els minérau minérau x da ns les ph ases supé supé rieures rieures diminue la
qu antité des lipi lipides des éliminés dans cellescelles-ci. ci. Par cette t echniqu e, 99 p. 10 1000 d es lilipides pides présents présents ssont ont extraits, et d ans l'extrait l'e xtrait , 95 p. 100 d es cons constitu titu ant s non lipid lipid iqu es sont sont élim inés. Méthode de CLÉMENT ET RAULIN (5)
Dans cette méthode, les échantillons sont extraits au Kumagawa par l'alcool pendantt six à huit heures. Après ev pendan evapora aporation tion de ll'alcool 'alcool eett séch séchage, age, extraire les lipides solubles dans le chloroforme : lipides simples, phosphatides, cho lestérol et ses esters.
Après concentration de la solution chloroformique, les phosphatides sont
séparés par une double précipitation à l'acétone en présence d'ions magné sium (quelque (q uelquess gouttes d'une solut solution ion saline de ch chlorure lorure de magnésium magnésium da dans ns l'éthanol absolu). Par evaporation de la solution acétono-chloroformique,
on obtient les lipides, qui sont repris par l'éther de pétrole et les divers dosages sont effectués à partir de cette solution. Méthode rapide de PINLOKAYA (6)
Une prise d'échantillon d'environ 5 g finement broyée est mélangée éner giquement giq uement avec 1 15 5 g de sulfate sulfate de sodium sodium anhydre. anhydre. Le tout est transféré
dans une fiole d'ERLENMEYER de 250 ml. Ajouter 25 ml de chloroforme, agiter une minute et filtrer fil trer immédiatement. immédiatement.
Sur des parties adéquates du filtrat (5 ml), déterminer l'indice d'iode, l l'indic 'indice d'ac d'acide, ide, l'indic l'indice e de perox peroxydes ydes. . Une U ne partie évaporée àntsec au baine d'air en boîte boî te de Petri, puis séch séchée ée àautre 100100-102 102 °C àest poids c consta onstant de façon à déterminer la teneur en lipides.
BI BIB BL LIOGRAPHIE
Références
1. Bloor B loor W W., ., J. Bio Biol. l. Chem ., 1928, 77, 53 53.. - 2. B Bligh ligh E. et D Dyer yer W W., ., Can. J. Biochem. Physiol Phys iol ., 1959, 195 9, 37, 911. 911 . - 3. 3 . Folch Folch J. et coll., /. Biol. Ch C hem ., 1951, 195 1, 191, 833. 83 3. - 4. Folch Folch J. Lees M. et Stanley G., J. Biol. Chem., 1957, 226, 497. - 5. Clément G., Clément J. et
Raulin J., Arch. Sci. Physiol 1957, 11, 101. - 6. Pinlokaya U., Myasnaya Ind. S.S.S.R., 1958, 29, 9.
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CHA HAPITRE II
DÉTERM INATION DE CARACTÉRISTI IQ QUES PH HY YSI IQ Q
Div ve erses proprié ét té és s physi siq qu ues des corps gras et dériv vé és peuven nt t êtr l li isé sées pour caracté ér ris se er ceux-ci. Nous pas ss seron ns s dabord en revue as ss se dem en nt tl le es constantes phys si iq qu ues usuel ll les s.. Ensuite n no ous exam in ne erons en détail les propriét étés és spectrographiqu ques des ; orps gras, s, su surtout inf nfra-r
car celles s-ci fourniss ssen nt tm ain nt tenan nt t de plus en plus de ren ns seig gn nem en cieux et devi ie en nn nen nt td du un usag ge e couran nt t avec l la am ultiplication des app m odernes s, ,d du un m an ni iem en nt t rel la ativ ve em en nt t ais sé é.
M ASSE SPÉCIFIQUE Définition.
La masse masse spécifique, o ou u densité absolue d'un corps, est la masse masse de ll'uni 'uni de volume de ce corps. Elle sera exprimée, pour les corps gras, en gram par centimètre cube, à la température tem pérature considérée. considérée. La densité est le rapport de la masse d'un certain volume du corps à la mass
du même volume d'eau, à 4 °C. On notera que la masse spécifique s'identi à 0,000027 près, avec avec la densité densité par rapport à l'eau l 'eau à 4 °C, c'est-à-dire c'est-à-dire a une approximation qui n'est pas atteinte dans les mesures précises ordinai La masse spécifique est donnée, sauf impossibilité, à la température
référence de 20 °C. Quand le composé n'est pas liquide à 20 °C, la m spécifique est donnée aux températures nominales de de 40 °C ou 60 °C, ° C, et éventuellement à une température nominale encore supérieure. Il faut s'astreindre à mesurer le volume du corps gras à une températ
aussi voisine que possible de la température de référence ou de la température
nominale choisie, la différence ne devant pas excéder 5 °C en plus ou e
moins.
Les résultats doivent être ramenés à la température de référence (20 °C)
ou à la température nominale choisie (40 °C ou 60 °C), en utilisant les formules
données plus loin.
La mesure est faite sur le corps gras préalablement séché et purifié.
Matér ériel. l.
Un picn no om ètre jja augé à la tem pérature de 20 20 °C (ou aux tem péra
no nomn mna ales 40 °C, 60 °C °C si n né écessaire). Un therm om ètre g gr radué au 1/ 1/10 de deg gr ré C. Un therm os st tat, ou étuve.
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Mode opératoire.
a. Cas des corps gras liquides à 20 °C.
Faire la tare du picnomètre vide (masse m). Remplir ensuite le picnom d'huile, et quand l'ensemble a atteint la température du milieu ambia la mesure sera effectuée effectuée (t (température empérature vo voisine isine d dee 20 °°C), C), affleurer l'h l' hui niveau nive au d du u bord supérieur du tube capillaire, ou à celui du repère, s'il y un. Noter alors la température t' à l'aide du thermomètre, et peser le pi
mètre plein (masse M). b. Cas des corps gras solides à 20 °C,
Faire la tare du picnomètre vide (masse m). Remplir le picnomètre ave graissee fond graiss fo ndue ue à une tem température pérature supérieure à sa température de fusio 10 °G environ. Mettre penda pendant nt une heu heure re à l'étuve, réglée à une tempér
voisine de la température nominale Affleurer choisie, afin de chasser toute trace au de ni l'a encore enfermé dans l'échantillon. ensuite la graisse fondue
du bord supérieur du tube capillaire, ou à celui du repère, s'il y en a Noter la l a température ii à ll'aid 'aidee du thermom thermomètre; ètre; laisser laisser ens ensuite uite ref refroi roi picnomètre, l'ess l 'essuyer uyer soigneusement, et peser (mas (m asse se M). Expressi sion des rés ésultats.
La m as ss se s sp pécif fi iq qu ue pt de l l''huile le ou de l la ag gr rais ss se à la tem pérature de
renc nce ou nom ina nale le t , est st donn nnée par la fo form ule su suiva van nt te : M - m
P*= y" V ét étan nt tl le e vol lu ume en m du picn no om ètre à t deg gr rés.
Si la la m es su ure a ét été faite à une tem pérature t' vois si in ne e de l la a te
(h (h - zh 5 °C), le le résultat doit ê êt tre ram ené ené à la températur de la formule : pt = pn + ( ti - t) 0,00068 si h > i pt = pn - (t - ii) 0,00068 si ii
