Laporan Praktikum Pollen Nur Fitria F1D015029

BAB I PENDAHULUAN 1.1 Latar Belakang Perkembangbiakan pada tumbuhan biji terletak pada bunga. Bunga merupakan alat perkembangbiakan generatif pada tumbuhan biji. Bunga mempunyai dua bagian utama, yaitu perhiasan bunga dan alat kelamin bunga. Perhiasan bunga terdiri atas kelopak dan mahkota. Alat kelamin bunga terdiri atas putik dan benang sari (Nugroho, 2006) Pollen atau serbuk sari mempunyai perbedaan bentuk butir sari, besar/volume, serta warna butir sarinya. Banyaknya serbuk sari sangat berkaitan dengan ukuran sel, dengan demikian jumlah serbuk sari pada setiap anthera adalah tidak terhingga jumlahnya. Serbuk sari pada umumnya memiliki ukuran yang sangat kecil sehingga tidak memungkinkan untuk dapat dilihat jika hanya dengan menggunakan mata telanjang dan tanpa dilakukan perlakuan-perlakuan yang khusus. Namun dalam perlakuan terhadap serbuk sari ini haruslah dengan menggunakan metode tertentu sehingga serbuk sari yang sangat kecil tidak ikut terbuang pada saat dilakukan pemfiksasian maupun pencucian dengan aquades. Untuk itu, maka perlu dipahami cara-cara dan teknik pembuatan dan penyiapan preparat pollen ini. Untuk mengetahui bagian-bagian serta macam-macam bentuk pollen maka dilakukanlah percobaan kali ini dengan menggunakan metode asetolisis. 1.2 Tujuan Tujuan dari percobaan ini yaitu untuk mengetahui cara pembutan preparat serbuk sari Berbagai macam bunga dengan menggunakan metode asetolisis.

BAB II DASAR TEORI Tanaman pepaya banyak ditemukan di berbagai daerah Indonesia. Sebagai salah satu negara tropika, hampir seluruh pelosok negeri Indonesia terdapat pepaya dengan ragam bentuk dan jenis yang berbeda-beda, mulai dari yang berbentuk lonjong, bulat, dan silindris. Berbagai pepaya berukuran kecil, sedang, dan besar dengan daging buah berwarna merah, kuning, hingga oranye serta kulit buah yang berwarna hijau muda, hijau tua, dan kuning. Keanekaragaman ini merupakan bahan genetik tanaman pepaya yang menjadi bahan dasar untuk merakit varietas pepaya unggul (Sujiprihati dan Suketi 2009). Selain sebagai tempat gametofit jantan dan alat penyerbukan pada tumbuhan berbunga, serbuk sari memiliki fungsi dan penting dalam beberapa bidang meliputi morfologi serbuk sari dan kaitannya dalam taksonomi, filogeni dan palinologi fosil. Beberapa karakter dari morfologi serbuk sari adalah: simetri, ukuran dan bentuk, struktur dinding serbuk sari (pollen wall), stratifikasi exine, ornamentasi exine, kerutan/alur dan lubang. (Agashe dan Caulton, 2009) Sel-sel polen berada pada dinding polen yang unik dimana susunan ini dimulai saat meiosis dengan lapisan permukaan yang mengembang dari waktu ke waktu. Saat matang, permukaan polen dapat dibedakan menjadi 3 strata utama: (1) dinding bagian terluar, terdiri dari banyak lapisan, mengandung bahan polimer kimia sporopollenin dan memiliki lubang yang disebut celah; (2) bagian lebih dalam, terkadang terdiri dari banyak lapisan dan terbuat dari selulosa; (3) mantel polen, mengandung lemak, protein, pigmen, dan senyawa aromatik (Edlund et al. 2004). Asetolisis adalah salah satu metode pembuatan preparat serbuk sari yang menggunkan prinsip melisiskan dinding sel serbuk sari dengan asam asetat glasial serta asam sulfat pekat sebagai bahan tambahan. Hal ini bertujuan untuk mendapatkan hasil amatan morfologi dinding serbuk sari ornamentasi dari serbuk sari tersebut. Serbuk sari yang digunakan dalam pembuatan preparat ini haruslah merupakan serbuk sari yang matang. Serbuk sari yang matang ini dapat ditandai

dengan sudah tidak ada air dalam serbuk sari tersebut, jika serbuk sari dipatahkan maka hanya akan seperti tepung saja (Suntoro, 1983). Palinologi adalah ilmu yang mempelajari polen (serbuk sari) tumbuhan tinggi dan spora tumbuhan rendah. Palinologi juga mempelajari mengenai struktur, bentuk maupun preservasinya dibawah kondisi tertentu. Palinologi berasal dari kata palynos yang artinya debu, karena ukuran polen menyerupai debu. Palinologi merupakan studi polen dan spora, studi ini berkisar pada morfologi butir polen dan spora tetapi tidak meliputi bagian dalamnya. Kajian palinologi mencakup tentang sifat atau cirinya, seperti bentuk, struktur dan sifat morfologis lainnya, maupun cara penyebarannya di bawah kondisi lingkungan tertentu.Berdasarkan teori diatas maka dilakukanlah percobaan tentang pembuatan preparat pollen dengan menggunakan metode asetolisis. Asetolisis adalah salah satu metode pembuatan preparat serbuk sari yang menggunkan prinsip melisiskan dinding sel serbuk sari dengan asam asetat glasial serta asam sulfat pekat sebagai bahan tambahan. Hal ini bertujuan untuk mendapatkan hasil amatan morfologi dinding serbuk sari ornamentasi dari serbuk sari tersebut (Hidayat, B 2005).

BAB III METODOLOGI PRAKTIKUM 3.1 Waktu dan Tempat Praktikum ini dilaksanakan pada hari Senin, 3 April sampai 6 April 2017 jam 13.00 sampai dengan selesai bertempat di Laboratorium Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Bengkulu. 3.2 Bahan dan Alat Bahan dan Alat yang digunakan dalam praktikum ini antara lain: Antera Carica papaya, GAA, H2SO4, akuades, Natrium Klorat, HCl, Safranin, Gliserin, paraffin, Fenol, Kaca Preparat, kaca penutup, botol vial, kuas, label, tisu, dan sentrifugasi 3.3 Cara Kerja 1 2

Disiapkan semua alat dan abhan laturan yang digunakan Butir polen yang akan digunakan diambil dari antera dan dikumpulkan dalam botol vial yang berisi asam asetat glasial, dibiarkanselama 24 jam

3

untuk pematian dan fiksasi Bahan dipindahkan ke dalam

tabung

sentrifuge

dan

selanjutnya

disentrifugasi pada kecepatan sedang. Diganti larutan dengan campuran 4

larutasn Asam Asetat glasial : Asam Sulfat pekat (9:1) Tabung dipanaskan dalam waterbath pada suhu 650 0C selama 3 menit,

5

kemudian didinginkan Jika larutan bewarna gelap dilakukan pemutihan (Bleaching) dengan

6

kombinasi formula:  Asam asetat glasial 2 ml  Natrium Klorat 2-3 tetes  HCl 2-3 tetes Dilakukan sentrifugasi dengan kecepatan 2000 rpm selama 3 menit, pellet dibuang dan supernatant dicuci dengan aquades. Dilakukan 2-3 kali

7 8 9 10

pencucian, setiap pencucian dilakukan sentrifugasi kembali Dilakukan pewarnaan menggunakan Safranin Bahan diteteskan diatas kaca benda 1-3 tetes Diletakkan paraffin pada sisi kanan dan kiri objek Dilakukan penutup/pembalut dalam jeli gliserin dengan formula:  Gelatin 5 gram

11

 Akuades  Gliserin  Fenol Ditutup dengan kaca

12

menggunakan hotplate 6000C Dilakukan labelling (pemberian nama) pada sebelah kiri kaca penutup

30 ml 35 ml 5 gram ( dilarutkan dalam 10 menit) penutup, kemudian dilakukan pemanasan dengan

diletakkan etiket dan diberi keterangan : nama jenis tanaman, waktu dan nama kelompok

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN N Hasil pengamatan o.

Referensi

1

1

2 3 Keterangan : Perbesaran 10X10 1. Exin 2. Indine 3. Nucleoli

2

1 2 Keterangan : Perbesaran 10X10 1. Butir Pollen 2. Sitoplasma

3 Pewarnaan yang berlebihan dikarenakan waktu yang kurang tepat

Dalam Pelaksaan Praktikum ini, metode yang digunakan adalah metode asetolisis. Metode asetolisis adalah salah satu metode pembuatan preparat serbuk sari yang menggunkan prinsip melisiskan dinding sel serbuk sari dengan asam asetat glasial serta asam sulfat pekat sebagai bahan tambahan. Hal ini bertujuan untuk mendapatkan hasil amatan morfologi dinding serbuk sari ornamentasi dari serbuk sari tersebut. Serbuk sari yang digunakan

dalam pembuatan preparat ini haruslah merupakan serbuk sari yang matang agar didapatkan bentuk polen yang baik. Fiksasi dilakukan dengan menggunakan asam asetat. Fiksasi adalah suatu usaha untuk mempertahankan elemen-elemen sel atau jaringan, dalam hal ini serbuk sari agar tetap pada tempatnya, dan tidak mengalami perubahan bentuk maupun ukuran dengan media kimia sebagai fiksatif. Asam Asetat dapat mengendapkan nukleoprotein, tetapi melarutkan histon dalam nukleus,

tidak

karbohidrat.

melarutkan Daya

lemak,

penetrasinya

juga cepat,

bukan

pengawet

tetapi

dapat

membengkakkan jaringan, ini disebabkan oleh bertambahnya diameter serabut-serabut dalam jaringan tersebut. Larutan polen disentrifuge bertujuan untuk memisahkan serbuk sari dan asam asetat glacial, karena serbuk sari berukuran kecil dan bercampur dengan asam asetat glacial sehingga serbuk sari susah untuk diambil, maka diperlukan centrifuge. Dari hasil centrifuge ini akan terbentuk supernatan asam asetat dan endapan serbuk sari. Lalu dilakukan pemanasan larutan di dalam waterbath bertujuan untuk mempercepat terjadinya reaksi yang terjadi pada serbuk sari. Sedangkan penambahan

H2SO4

dan

asam

asetat

glasial

dengan

perbandingan 1:9 ini berfungsi untuk untuk melisiskan selulosa pada dinding serbuk sari (asetolisis), sehingga setelah dibuat preparat, morfologi eksin serbuk sari akan terlihat lebih jelas dibandingkan dengan sebelum asetolisis. Pencucian dilakukan dengan penambahan aquadesh ke dalam tabung centrifuge yang berisi serbuk sari kemudian dilakukan centrifuge untuk mendapatkan serbuk sari yang sudah bersih. Lalu pewarnaan (staining) dengan menggunakan safranin 1%. bertujuan untuk meningkatkan kontras warna serbuk sari

dengan sekitarnya sehingga memudahkan dalam pengamatan serbuk sari dari bawah mikroskop. Pewarnaan dapat memperjelas bentuk ornamen dinding sel serbuk sati serta mempermudah mengetahui ukuran serbuk sari. Mounting

atau

penutupan

dilakukan

dengan

proses

pemanasan. Pemanasan ditujukan untuk mencairkan parafin dan gliserin jelli agar dapat menutup serbuk sari, sehingga dihasilkan preparat serbuk sari yang tahan dalam selang beberapa waktu. Dari hasil pengamatan di bawah mikroskop yang dilakukan oleh praktikan, nampak bahwa serbuk sari bunga Carica papaya ada dua bentuk, yang pertama berbentuk bulat dan yang kedua berbentuk bulat dengan dinding serbuk sari memiliki spina di sepanjang permukaannya. Dinding serbuk sari terdiri dari dua lapisan, yaitu eksin (lapisan luar) tersusun atas sporopolenin, dan intin (lapisan dalam) yang tersusun atas selulosa. Pollen terdiri atas; 1. Intin, dari intin inilah dilepas enzim serta prekursor enzim pada apertura butir pollen. 2. Eksin, merupakan bagian paling luar yang berdiferensiasi menjadi neksin dan seksin. 3. Apertura merupakan tempat pertumbuhan serbuk sari pada masa perkecambahan. 4. Fillus merupakan rambut-ramput halus.

BAB V SIMPULAN DAN SARAN

5.1

Simpulan Berdasarkan hasil percobaan dapat disimpulkan bahwa

metode asetolisis adalah salah satu metode pembuatan preparat serbuk sari yang menggunkan prinsip melisiskan dinding sel serbuk sari dengan asam asetat glasial serta asam sulfat pekat sebagai bahan tambahan. Proses pembuatan preparat polen dengan metode asetolisis terdiri dari proses fiksasi, asetolisis, pemanasan, pencucian, pewarnaan, penutupan dan labelling. Hasil pengamatan terlihat bentuk pollen dari bunga Pepaya (Carica papaya) terdapat dua bentuk yaitu bulat dan kedua bulat dengan bagian-bagiannya yaitu eksin (lapisan duri), intin (lapisan dalam) dan duri-duri. Dinding serbuk sari terdiri dari dua

lapisan,

yaitu

Eksin

(lapisan

luar)

tersusun

atas

sporopolenin, dan Intin (lapisan dalam) yang tersusun atas selulosa.

5.2

Saran Sebaiknya

praktikan

memahami

langkah

pembuatan

preparat metode asetolisis ini sebelum memulai praktikum serta lebih berhati-hati dalam proses pengambilan polen dan memperhatikan ketepatan waktu dari masing-masing tahap pembuatan preparat

DAFTAR PUSTAKA

Agashe, S. N. dan E. Caulton. 2009. Pollen And Spores: Applications With Special Emphasis On Aerobiology And Allergy. United States of America: Science Publishers. Edlund AF, Swanson R, Preuss D. 2004. Pollen and stigma structure and fuction: the role of diversity in pollination. The Plant Cell. 16(2): 84–97. Hidayat, B, Estiti, 2005. Anatomi dari Tumbuhan Berbiji. ITB. Bandung. Nugroho, Hartono, 2006. Struktur dan Perkembangan Tumbuhan. Penebar Swadaya. Depok. Sujiprihati S, Suketi K. 2009. Budidaya Pepaya Unggul. Penebar Swadaya. Depok. Suntoro, S.H. 1983. Metode Pewarnaan. Bharata Karya Aksara. Jakarta.