Laporan Praktikum Pewarnaan Bakteri

 

LAPORAN PRAKTIKUM PEWARNAAN BAKTERI ( Bakteri E. Coli Bakteri Termofilik )  )  BAB I  PENDAHULUAN  A.  Latar Belakang  Untuk mengamati bentuk atau ciri-ciri suatu mikroba menggunakan mikroskop dapat digunakan dua cara yaitu mengamati sel mikroba yang masih hidup tanpa diwarnai dan mengamati sel mikroba yang telah mati dengan diwarnai. Untuk lebih mudah dilihat sebaiknya bakteri diwarnai dengan zat warna, beberapa zat yang digunakan untuk mewarnai  bakteri juga dapat digunakan untuk mengamati struktur bagian dalam sel. Dengan adanya  pewarnaan terutama bakteri yang mempunyai sel dengan ukuran yang retif ret if kecil akan lebih mudah terlihat di bawah mikroskop denagn menggunakan lensa objektif minyak imersi yang mempunyai tingkat pembesaran yang relatif tinggi. 

Melihat dan mengamati bakteri dalam keadaan hidup sangat sulit, kerena selain  bakteri itu tidak berwarna juga transparan dan sangat kecil. Selain itu bakteri yang hidup akan kontras dengan air, dimana sel-sel bakteri tersebut disuspensikan. Sedangkan, untuk mengatasi hal tersebut maka dikembangkan suatu teknik pewarnaan sel bakteri, sehingga sel dapat terlihat jelas dan mudah diamati. Oleh karena itu teknik pewarnaan sel bakteri ini merupakan salah satu cara yang paling utama dalam penelitian-penelitian mikrobiologi. Prinsip dasar dari pewarnaan ini adalah adanya ikatan ion antara komponen selular dari  bakteri dengan senyawa aktif akti f dari pewarna yang disebut kromogen. Terjadi ikatan i katan ion karena adanya muatan listrik baik pada komponen seluler maupun pada pewarna. Berdasarkan adanya muatan ini maka dapat dibedakan pewarna asam dan pewarna basa.   Untuk mengidentifikasi suatu biakan murni bakteri hasil isolasi mula-mula diamati morfologi sel secara mikroskopik melalui pengecetan atau pewarnaa, salah satunya adalah dengan pewarnaan gram. Pewarnaan gram merupakan salah satu prosedur yang paling  banyak digunakan untuk mencirikan banyak bakteri. Dari pewarnaan gram dapat diketahui morfologi sel antara lain sifat gram, bentuk sel, dan penataan sel. Pewarnaan gram atau metode gram adalah suatu metode empiris untuk membedakan spesies bakteri menjadi dua kelompok besar, Gram positif dan gram negatif, berdasarka sifat kimia dan fisika dinding sel mereka, metode ini diberi nama berdasarkan penemunya, ilmuwan denmark hans Christian gram 1884. Pewarnaan Gram dibagi menjadi dua yaitu pewarnaan majemuk karena menggunakan lebih dari satu macam zat warna. Dan pewarnaan diferensial karena pewarnaan ini mampu mengdeferensiasi atau membedakan bakteri, sehingga bakteri dapat digolongkan menjadi dua yaitu Gram negatif dan Gram positif.   B.  Tujuan 

Adapun tujuan dari praktikum ini adalah sebagai berikut :   1.  Mengetahui dan memahami teknik pewarnaan mikroba 

 

2.  Mempelajari bentuk-bentuk dan struktur sel bakteri  3.  Membedakan golongan bakteri gram positif dan gram negatif. 

BAB II  TINJAUAN PUSTAKA 

Bakteri merupakan organisme organisme prokariot. Umumnya Umumnya ukuran bakteri bakteri sangat kecil, bentuk tubuh bakteri baru dapat dilihat dengan menggunakan mikroskop dengan pembesaran 1.000 X atau lebih (Waluyo, 2004). Sel bakteri memiliki memi liki panjang yang beragam, sel beberapa spesies dapat berukuran 100 kali lebih panjang daripada sel spesies yang lain. Bakteri merupakan makhluk hidup dengan ukuran antara 0,1 sampai 0,3 µm. Bentuk bakteri  bermacam  –  macam   macam yaitu elips, bulat, batang dan spiral. Bakteri lebih sering diamati dalam olesan terwarnai dengan suatu zat pewarna kimia agar mudah diamati atau dilihat dengan  jelas dalam hal ukuran, bentuk, susunan dan keadaan struktur internal dan butiran. Sel sel individu bakteri dapat berbentuk seperti bola/elips, batang (silindris), atau spiral (heliks) (Pelczar & Chan, 2007).  Pewarnaan bakteri bertujuan untuk memudahkan melihat bakteri dengan mikroskop, memperjelas ukuran dan bentuk bakteri, untuk melihat struktur luar dan struktur dalam  bakteri seperti dinding sel dan vakuola, menghasilkan menghasilkan sifat-sifat fisik dan kimia yang khas daripada bakteri dengan zat warna, serta meningkatkan kontras mikroorganisme dengan sekitarnya. Teknik pewarnaan warna pada bakteri dapat dibedakan menjadi tiga macam yaitu  pengecatan sederhana, pengecatan diferensial dan pengecatan struktural. Pemberian warna  pada bakteri atau jasad- jasad renik lain dengan menggunakan larutan tunggal tunggal suatu pewarna  pada lapisan tipis, atau olesan, yang sudah difiksasi, dinamakan pewarnaan sederhana. Prosedur pewarnaan yang menampilkan perbedaan di antara sel-sel mikroba atau bagian bagian sel mikroba disebut teknik pewarnaan diferensial (Pelczar & Chan, 2007).  Bakteri yang diwarnai dengan teknik pewarnaan Gram terbagi dua golongan, yaitu: Gram positif , bila warna zat pewarna pertama (karbol gentian violet) tetap bertahan, dengan demikian warna se bakteri tampak ungu tua; dan Gram negatif, bila warna zat pewarna  pertama tidak bertahan (luntur) kemudian tercat oleh zat pewarna tandingannya, misal: air fuchsin, safranin, dan oleh zat pewarna tandingan lainnya. (Razali, 1987)   Penyebab terjadinya dua golongan bakteri yaitu Gram positif dan Gram negatif ialah setelah diberi zat pewarna fenomenanya ini, berhubungan dengan struktur dan komposisi dinding sel. Perbedaan ketebalan antara kedua golongan itu dapat merupakan hal yang  penting; dinding sel bakteri Gram negatif pada umumnnya lebih tipis dari yang dimiliki  bakteri Gram positif. Presentasi kandungan lipid bakteri Gram negatif lebih tinggi daripada Gram positif. Kenyataannya dalam eksperimen pengecatan mennjukkan bahwa perlakuan dengan alkohol mengeskstrak lipid, yang menyebabkan poisitas atau permeabilitas didding sel meningkat. Denagn demikian, kompleks karbol gentian violet dan lugol dapat disari keluar dan bakteri Gram negatif terwarnakan. Keterangan lain yang hampir sama juga mendasarkan pada perbedaan permeabilitas antara kedua golongan bakteri itu, yaitu pada

 

 bakteri Gram negatif kandungan peptidoglikan jauh lebih sedikit sehingga kerapatan  jalinannya jauh lebih sedikit daripada baktri gram posiif. Pori-pori dalam peptidoglikan  bakteri Gram negatif tetap masih cukup besar untuk dapat disari keluar kompleks karbol gentian violet dan lugol. Selautnya, bila sel-sel Gram psitif diperlakukan dngan lisozim untuk menyingkirkan dinding selnya, sisa strukturnya yang disebut protoplas atau sel tanpa dinding akan tercatat juga oleh kompleks karbol gentian violet dan lugol. Tetapi, sel ini mudah dihapuskan oleh alkohol. Kenyataan ini menunjukkan bahwa struktur dinding sel bakteri Gram positif itu yag menjadi tempat tertahannya zat pewarna pertama yaitu karbol gentian violet. (Razali, 1987)  Zat warna adalah senyawa kimia berupa garam-garam yang salah satu ionnya berwarna. Garam terdiri dari ion bermuatan positif dan ion bermuatan negatif. Senyawa-senyawa kimia ini  berguna untuk membedakan membedakan bakteri-bakteri karena reaksinya reaksinya dengan sel bakeri akan memberikan warna berbeda. Perbedaan inilah yang digunakan sebagai dasar pewarnaan bakteri. Sel-sel warna dapat dibagi menjadi dua golongan yaitu asam dan basa. Jika warna terletak pada muatan positif dari zat warna, maka disebut zat warna basa. Jika warna terdapat pada ion negatif, maka disebut zat warna asam. Contoh zat warna basa adalah methylen blue, safranin, netral red, dan lain-lain. Sedangkan anionnya pada umumnya adalah Cl-, SO4-, CH3COO-, COOHCOO. Zat warna asam umumnya mempunyai sifat dapat bersenyawa lebih cepat dengan  bagian sitoplasma sel sedangkan sedangkan zat warna basa mudah bereaksi bereaksi dengan bagian-bagian inti sel. Pewarnaan bakteri dipengaruhi oleh faktor-faktor seperti : fiksasi, peluntur warna, substrat, intensifikasi pewarnaan dan penggunaan zat warna penutup (Sutedjo, 1991).

Prinsip dasar dari pewarnaan adalah adanya ikatan ion antara komponen selular dari  bakteri dengan senyawa aktif dari pewarna yang disebut dise but kromogen. Ikatan Ikata n ion dapat terjadi karena adanya muatan listrik baik pada komponen seluler maupun pada pewarna. Terdapat tiga mcam metode pewarnaan yaitu pewarnaan sederhana, pewarnaan diferensial dan  pewarnaan gram. Pewarnaan sederhana menggunakan pewarna tunggal, pewarnaan diferensial memakai serangkaian larutan pewarna atau reagen. Pewarnaan gram merupakan metode pewarnaan yang paling umum digunakan untuk mewarnai sel bakteri (Umsl, 2008).   Zat pewarna adalah garam yang terdiri atas ion positif dan ion negatif, salah satu di antaranya berwarna. Pada zat warna yang bersifat basa, warna terdapat pada ion positif (zat +

-

-

 pewarna  Cl ) dan pada pewarna asam, warna akan terdapat pada ion negatif (zat pewarna  Na+). Hubungan antara bakteri dengan zat pewarna basa yang menonjol disebabkan terutama oleh adanya asam nukleat dalam jumlah besar dalam protoplasma sel. Jadi, jika bakteri itu diwarnai, muatan negatif dalam asam nukleat bakteri akan bereaksi dengan ion positif zat  pewarna basa, Kristal violet, safranin dan metilin blue adalah beberapa zat pewarna basa yang biasa digunakan. Sebaliknya zat pewarna asam ditolak oleh muatan negatif bakteri menyeluruh. Jadi, mewarnai bakteri dengan zat pewarna asam akan menghasilkan hanya  pewarnaan pada daerah latar belakang saja. Karena sel bakteri tak berwarna di atas latar  belakang yang berwarna (Volk & Wheeler, 1993).  Pewarnaan gram ditemukan pada tahun 1884 oleh seorang dokter kebangsaan Denmark Christian Gram (membuat zat pewarna khusus) pewarna tersebut merupakan pewarna differensial karena dapat membagi bakteri menjadi dua kelompok fisiologi, yang akan memudahkan untuk identifikasi. Prosedur pertama dari pewarnaan gram ini adalah memberi  pewarna kristal violet, setelah se telah 1 menit dibilas dan kemudian akan diberikan pewarna yodium,

 

setelah satu menit dibilas dan kemudian akan diberi laputan alkohol 95% selama 30 detik, kemudian dibilas dan diberi pewarna safranin atau bismarck (untuk buta warna merah) selama 1 menit. Zat pewarna kristal violet dan yodium akan membentuk senyawa yang kompleks. Beberapa bakteri akan melepaskan zat pewarna dengan mudah apabila dicuci dan  beberapa bakteri yang lain zat pewarna akan bertahan walaupun dicuci dengan alkohol 95%. Bakteri gram positif akan terwarna ungu (kristal violet) dan bakteri gram negatif akan terwarna merah (safranin) (Umsl, 2008).   Pewarnaan terhadap bakteri yang paling sering dilakukan adalah pewarnaan Gram dan Ziehl‐ Nelsen.  Nelsen. Pewarnaan tersebut untuk mengetahui morfologi, struktur, dan karakteristik  bakteri. Pewarnaan Gram dapat mengidentifikasi penyakit infeksi. Prosedur pewarnaan Gram dimulai dengan pemberian kristal violet, setelah itu ditambahkan larutan iodium maka semua  bakteri akan berwarna biru. Setelah itu ditambah alkohol. Bakteri Gram positif membentuk kompleks Kristal iodine yang berwarna biru. Setelah di tambahkan safranin, bakteri Gram  positif akan berwarna ungu. Contoh bakteri Gram positif adalah Streptococcus, Bacillus, Stapilococcus, Clostridia, Corynebacterium dhypteriae, Peptococcus, Peptostreptococcus, dll. Sedangkan bakteri Gram negatif akan terdekolorisasi oleh alcohol dan pemberian safranin akan memberikan warna merah pada bakteri Gram negatif. Contoh bakteri Gram negative adalah Neisseria, Klebesiella, Vellonella, Shigella, Salmonella, Hemophillus, dll (Cappuccino & Sherman, 1983).  Proses pewarnaan gram ini memerlukan 4 jenis reagen. Bakteri terbagi atas dua kelompok berdasarkan pewarnaan ini, yaitu bakteri gram positif dan bakteri gram negatif. Perbedaan ini berdasarkan warna yang dapat dipertahankan bakteri. Reagen pertama disebut warna dasar, berupa pewarna basa, jadi pewarna ini akan mewarnai dengan jelas. Reagen kedua disebut bahan pencuci warna (decolorizing ( decolorizing agent ). ). Tercuci tidaknya warna dasar tergantung pada komposisi dinding sel, bila komponen dinding sel kuat mengikat warna, maka warna tidak akan tercuci sedangkan bila komponen dinding sel tidak kuat mengikat warna dasar, maka warna akan tercuci. Reagen terakhir adalah warna pembanding, bila warna tidak tercuci maka warna pembanding akan terlihat, yang terlihat pada hasil akhir tetap warna dasar. Larutan yang biasa dipakai adalah ungu kristal, lartan iodium, alkohol dan safranin (Tracy, 2005).  Teori Salton menjelaskan bahwa ada konsentrasi lipid yang tinggi pada dinding sel  bakteri Gram negatif. Sehingga jika lipid dilarutkan dalam pemberian alcohol, maka pori‐ pori akan membesar dan tidak mengikat pewarna. Hal ini menyebabkan bakteri menjadi tidak  berwarna. Sedangkan bakteri Gram positif akan mengalami denaturasi selama pemberian alcohol. Hal ini akan mengecilkan pori ‐ pori sehingga menghasilkan kompleks kristal iodium. Bakteri Gram positif memiliki dinding sel yang kuat dan lapisan peptidoglikan sebanyak 30 lapisan sehingga permeabilitas dinding selnya menjadi berkurang. Sedangkan bakteri Gram negatif hanya memiliki 1‐2 lapisan peptidoglikan sehingga memiliki permeabilitas dinding sel yang lebih besar. Pewarnaan Gram terdiri atas Gram A (violet) (Kristal violet, Aalkohol, Ammonium oksalat, Aquades), Gram B (cokelat) (Iodium, Kalium iodide, Aquades), Gram C (Aseton, Alcohol), Gram D (merah) (Safranin, Alcohol, Aquades) (Madigan, 2003).  Secara garis besar teknik pewarnaan bakteri dapat dikategorikan sebagai berikut:  pewarnaan sederhana, sede rhana, pewarnaan differensial (pewarnaan gram dan pewarnaan tahan asam), as am),  pewarnaan khusus untuk melihat struktur tertentu : pewarnaan flagel, pewarnaan spora,

 

l ain dan bakteri (pewarnaan  pewarnaan kapsul, pewarnaan khusus untuk melihat komponen lain  Neisser (granula volutin), pewarnaan yodium (granula glikogen) dan pewarnaan negatif (Gozali, 2009) 

BAB III  METODOLOGI  A.  Waktu dan Tempat  Adapun waktu dan tempat pelaksanaan praktikum ini adalah sebagai berikut :   Hari/Tanggal : Rabu, 11 April 2012 

B.  Alat dan Bahan  1.  Alat  Adapun alat-alat yang digunakan dalam praktikum ini adalah sebagai berikut :   1.  Bunsen 7. Tabung reaksi  2.  Cawan petri 8. Mikroskop      3. 9. semprot   4.  Jarum Objek Ose gelas 10. Botol Bak pewarnaan 5.  Pipet tetes 11. Erlenmeyer   6.  Stopwacth  2.  Bahan  Adapun bahan-bahan yang digunakan dalam praktikum ini adalah sebagai berikut :   1.  Alkohol 70 %  2.  Aquades  3.  Larutan gram A (Metilen Blue)  4.  Larutan gram B (Mordan)   5.  Larutan gram C (Alkohol 95%) 

6.  7.  8.  C.  1.  -  - 

Larutan gram D (Safranin)   Sampel bakteri  Tissue  Prosedur Kerja  Pembuatan Apusan  Mencuci tangan dengan alcohol 70% (syarat kerja aseptis).   Membilas kaca objek yang akan digunakan dengan aquades, lalu melidah-apikan kaca objek tersebut dengan api Bunsen guna meminimalisir kontaminasi. Kemudian meneteskan satu tetes aquades pada kaca objek.   -  Melidah-apikan jarum ose pada api Bunsen. Melidah-apikan bagian ujung tabung reaksi  berisi sampel mikroba. Mengambil sampel mikroba pada medium. medium.  -  Melidah-apikan kembali bagian ujung tabung reaksi untuk meminimalisir kontaminasi. Kemudian menutup kembali tabung reaksi.  

 

- 

Dengan menggunakan jarum ose, meletakkan sampel bakteri dari medium pada kaca objek yang telah berisi aquades.  -  Melidah-apikan kembali kaca objek berisi sampel bakteri.   2.  Teknik Pewarnaan Gram  -  Memberi 1-2 tetes larutan gram A (methylen blue) pada kaca objek yang telah diberi aquades. Membilas kaca objek menggunakan aquades setelah 1 menit.   -  Memberi 1-2 tetes larutan gram B (mordan) pada kaca objek. Membilas kaca objek menggunakan aquades setelah 1 menit.  -  Memberi 1-2 tetes larutan gram C (akohol 95%) pada kaca objek. Kemudian langsung membilasnya dengan aquades.  -  Memberi 1-2 tetes larutan gram D (safranin) pada kaca objek kemudian langsung membilasnya dengan aquades setelah 30 detik.  -  Melakukan pengeringan kaca objek dengan cara diangin-anginkan dan mengeringkan menggunakan tissue bagian bawahnya.  -  Mengamati objek di bawah mikroskop dengan perbesaran 160x.  -  Mengulangi langkah di atas untuk sampel bakteri kedua.  BAB IV  HASIL DAN PEMBAHASAN  A.  Hasil Pengamatan Pengamatan  No.  Gambar 

1. 

Gram negatif  

2. 

Gram positif  

Nama Bakteri   E.coli 

Bakteri Termofilik  

Bentuk  

Warna 

 Basil (batang) (batang) 

Merah 

Coccus(bulat) Coccus (bulat) 

Kebiru biruan atau ungu 

 

  Data berdasarkan berdasarkan literatur adalah sebagai berikut berikut :  Nama No.  Gambar  Bakteri   1.  Gram positif   - 

2. 

Gram negatif   E.coli 

Bentuk  

Warna 

Coccus(bulat) Coccus (bulat) 

Ungu 

 Basil (batang) (batang) 

Merah atau merah muda 

B.  Pembahasan  Pengecatan Gram merupakan salah satu teknik pengecatan yang dikerjakan di laboratorium mikrobiologi untuk kepentingan identifikasi mikroorganisme. Morfologi mikroskopik mikroorganisme yang diperiksa dan sifatnya yang khas terhadap pengecatan tertentu (pengecatan Gram) dapat digunakan untuk identifikasi awal. Pewarnaan gram dibagi menjadi dua hasil yaitu gram positif dan gram negative, tergantung dari reaksi dinding sel terhadap tinta safranin atau Kristal violet. Contoh dari  bakteri gram positif ialah Clostridium perfringens,  perfringens, Staphylococcus aureas, aureas, sedangkan bakteri gram negative misalnya adalah Eschericia adalah Eschericia Coli. Coli.  Proses sterilisasi sangat penting dibutuhkan sebelum memulai maupun mengakhiri sebuah pekerjaan di laboratorium dengan menggunakan teknik aseptik. Alkohol 70% yang

disemprotkan pada tangan, kaca preparat dan meja, bahkan tangan pun sebelumnya harus dicuci dengan sabun terlebih dahulu. Hal tersebut berfungsi untuk membunuh mikroorganisme yang tak diinginkan agar mendapatkan pengukuran yang akurat.   Pada proses pewarnaan gram, harus gelas obyek yang bersih. Pembersihan ini dilakukan supaya gelas obyek obyek bebas lemak dan debu. debu. Pembersihan biasanya menggunakan alkohol. Setelah di cuci kemudian di beri satu tetes aquades pada permukaan gelas obyek. Kultur bakteri murni diambil dan diratakan diatas kaca obyek. Pengambilan kultur bakteri tidak diambil terlalu banyak, karena jika terlalu banyak akan sulit diratakan dan apabila kultur bakteri tidak dapat diratakan tipis-tipis maka bakteri akan tertimbun hal ini akan mengakibatkan pemeriksaan bentuknya satu per satu menjadi tidak jelas.   Apabila sudah kering, dilakukan fiksasi dengan cara melewatkan diatas nyala api. Proses fiksasi dilakukan supaya bakteri benar-benar melekat pada kaca obyek sehingga olesan bakteri tidak akan terhapus apabila dilakukan pencucian. Yang perlu diperhatikan

 

dalam proses fiksasi adalah bidang yang mengandung bakteri dijaga agar tidak terkena nyala api.  Setelah dilakukan fiksasi kemudian ditetesi dengan larutan gram A (methylene blue) sebanyak 1-2 tetes dan dibiarkan selama 1 menit. Kemudian dicuci dengan air mengalir dan dibiarkan sampai kering dengan cara dianginkan dan menggunakan tissue untuk mengeringkan bagian bawah ojek gelas. Pencucian dengan air bertujuan untuk mengurangi kelebihan zat warna dari methylen blue.   Kemudian ditambahkan larutan gram B yang merupakan cat mordan, larutan ini mengandung yodium dan kalium yodida, Gram B merupakan larutan yang berfungsi untuk meningkatkan afinitas pengikatan zat warna oleh bakteri sehingga pengikatan zat warna oleh  bakteri lebih kuat, memperjelas warna dari zat warna tersebut, mempersulit pelarutan zat warna. Pada pewarnaan gram, penambahan larutan mordan menyebabkan terbentuknya  persenyawaan kompleks. Tanpa penambahan larutan mordan, zat warna methylene blueakan larut saat penambahan larutan alkohol. Lalu dibiarkan selama 1 menit untuk dibilas kembali dengan aquades. Akibat pemberian cat Gram B, maka pengikatan warna oleh bakteri akan lebih baik (lebih kuat).  Alkohol 95% ditambahkan atau diteteskan pada biakan bakteri untuk melakukan  penetrasi ke dalam dinding sel s el dan melunturkan pewarnaan biru dari komplek methylen blue dan KI pada gram negatif, mengandung lipid sedangkan pada gramLarutan positif akan mempertahankan warna karena biru karena mengandung peptidoglikan. ini tetap juga  berfungsiuntuk melarutkan lipida pada membrane bakteri gram negatif yang akan menyebabkan pori-pori sel membesar sehingga meningkatkan daya larut  persenyawaan methylene blue.Perlakuan ini dilakukan dil akukan tidak membutuhkan waktu yang lama atau secepat mungkin untuk melakukan pembilasan dengan aquades. Kemudian dilakukan  pengeringan.  Pewarnaan selanjutnya dengan menggunakan safranin (gram D) sebanyak 2 tetes dan diamkan selama 30 detik. Gram D merupakan cat yang terdiri dari campuran safranin 0, 25 gram , etil alkohol 95% 10 ml, dan akuades 90 ml. Safranin pada gram D tidak akan menyebabkan perubahan warna pada bakteri positif karena persenyawaan kompleksmethylene blue tetap terikat pada dinding sel. Pada bakteri gram negatif ne gatif  penambahan safranin akan menyebabkan warna bakteri berubah menjadi merah karena warna biru yang dihasilkan oleh methylene blue telah luntur dengan lisisnya membran sel sehingga safranin dapat terikat. Oleh sebab itu, gram D atau zat pewarna kedua berfungsi sebagai pembeda terhadap zat warna kristal violet (Lay, 1994). Kemudian cuci dengan air mengalir dan kering dianginkan, Cat ini berwarna merah. Cat ini merupakan cat sekunder atau kontras. Cat ini berfungsi untuk memberikan warna mikroorganisme non non target. Cat sekunder mempunyai spektrum warna yang berbeda ber beda dari cat primer. Kemudian preparat dikeringkan dengan cara diangin-anginkan lalu dilakukan pengamatan di bawah mikroskop.  Pemberian methylen blue pada bakteri gram positif akan meninggalkan warna biru. Perbedaan respon terhadap mekanis pewarnaan gram pada bakteri adalah didasarkan pada struktur dan komposisi dinding sel bakteri. Bakteri gram positif mengandung protein dan gram negative mengandung lemak dalam persentasi lebih tinggi dan dinding selnya tipis. Pemberian alkohol (etanol) pada praktikum pewarnaan bakteri, menyebabkan terekstraksi lipid sehingga memperbesar permeabilitas dinding sel. Pewarnaan safranin masuk ke dalam

 

sel dan menyebabkan sel menjadi berwarna merah pada bakteri gram negatif sedangkan pada  bakteri gram positif dinding selnya terdehidrasi dengan perlakuan alkohol, pori  –   pori mengkerut, daya rembes dinding sel dan membran menurun sehingga pewarna safranin tidak dapat masuk sehingga sel berwarna biru.  Perbedaan dasar antara bakteri gram positif dan negatif adalah pada komponen dinding selnya. Kompleks zat iodin terperangkap terperangkap antara dinding sel dan membran sitoplasma organisme gram positif, sedangkan penyingkiran zat lipida dari dinding sel organisme gram negatif dengan pencucian alkohol memungkinkan hilang dari sel. Bakteri gram positif memiliki membran tunggal yang dilapisi peptidohlikan yang tebal (25-50nm) sedangkan  bakteri negative lapisan peptidoglikogennya tipis (1-3 nm).  Berdasarkan hasil pengamatan di bawah mikroskop, diidentifikasi bakteri jenis termofilik yang mempunyai bentuk coccus (bulat) dan berwarna biru, bakteri ini digolongkan ke dalam bakteri gram positif karena ciri-cirinya menunjukkan ciri bakteri gram positif. Sedangkan untuk sampel bakteri kedua, diidentifikasi bakteri E.coli yang mempunyai bentuk  basil (batang) dan berwarna merah, bakteri ini digolongkan ke dalam bakteri gram negatif, karena menunjukkan ciri-ciri dari bakteri gram negatif.   Hasil pengamatan tersebut dapat dinyatakan berhasil dan benar, karena berdasarkan literatur yang ada bakteri E.coli merupakan golongan bakteri gram negatif.  

BAB V  PENUTUP  A.  Kesimpulan   Berdasarkan percobaan yang dilakukan, maka dapat ditarik kesimpulan sebagai  berikut :  1.  Pewarnaan gram merupakan pewarnaan difrensial karena dapat digunakan untuk membedakan antara bakteri gram negatif dan gram positif. Pewarnaan ini sering digunakan

untuk identifikasi dan klasifikasi bakteri. Komposisi dinding sel bakteri gram positif berbeda dengan bakteri gram negatif sehingga hasil pewarnaan gram akan berbeda.   2.  Bakteri gram positif adalah bakteri yang mempertahankan warna methylene blue sewaktu  proses pewarnaan gram. Bakteri ini mempunyai lapisan peptidoglikan peptidoglikan yang tebal.  3.  Bakteri gram negatif adalah bakteri yang tidak mempertahankan warna methylene blue sewaktu prose pewarnaan gram. Bakteri ini mempunyai lapisan peptidoglikan yang tipis.   4.  Berdasarkan hasil pengamatan dapat diidentifikasi bahwa bakteri E.coli merupakan golongan  bakteri gram negatif, sedangkan bakteri jenis termofilik merupakan golongan bakteri gram  positif.  B.  Saran 

Diharapkan kepada praktikan diharapkan lebih memahami prinsip percobaan dan  prosedur kerja pada percobaan.