laporan praktikum flowcytometry

LAPORAN PRAKTIKUM INSTRUMEN DAN TEKNOLOGI ANALISIS FLOWCYTOMETRY PEMERIKSAAN SEL T CD4 dan CD8

Oleh :  Yulia  Yulia Di Se!ia NIM "#$%&%"%%"""%%'

KEMENTERIAN RISET( TEKNOLOGI DAN PENDIDIKAN TINGGI

FAKULTAS KEDOKTERAN UNI)ERSITAS *RAWI+AYA '%"#

PENDA,ULUAN

a- Da.a/ Te0/i Metode flow cytometry adalah teknik untuk mengukur sel yang memiliki berbagai karakteristik atau molekul di permukaan maupun di dalam sitoplasma pada suspensi sel. Metode ini dilakukan dengan cara mengamati bagaimana sel tersebut mengalir di dalam cairan. Molekul yang menjadi target tersebut biasanya diikat dengan antibodi monoklonal yang berlabel fluorokrom tertentu. Kemudian sel dilewatkan celah sempit, dan ditembak sinar. Pada suatu populasi sel yang sejenis, misal pada sel kanker yang diberi perlakuan suatu senyawa sitotoksik, dapat dilakukan analisis terhadap fase - fase daur sel, sel apoptosis, serta sel yang mengalami poliploidi.

1- Tu2uan 3eia!an 1. Memahami prinsip kerja teknik Flowcytometry . Mampu melakukan pemeriksaan sel !"# dan !"$ %. Mampu menentukan jumlah sel yang memiliki !"# dan !"$ pada sample.

5- Pela3.anaan Keia!an Praktikum dilaksanakan di &aboratorium 'iomedik FK(' pada tanggal $ )eptember  *1+ pukul *.#*  1.** d- Ala! dan *ahan : a /abung sentrifus 1,+ ml b )entrifuge dingin c Micropipet d Ku0et fcm e acutainer 2"/3 f )wing centrifugated g Ficoll 4ipa5ue h Phospat 'uffer )alin i )ample darah  j 3ntibodi sel surface marker  k &arutan sel staining buffer 

e- P/0.edu/ 3e/2a a

)emua bahan yang diperlukan dikeluarkan dari lemari pendingin dan dibiarkan sampai suhu ruang

b

Menyiapkan tabung sentrifuse 1+ ml dan diisi dengan Ficoll 4ipafi5ue d 6 1,*77 g8m& sebanyak ,+ m&

c

)ampel darah dalam 0acutainer 2"/3 yang akan diuji diambil dengan micropippete dan disalutkan secara perlahan pada dinding tabung sentrifus sehingga terbentuk  lapisan

d

Mensentrifuse dengan kecepatan 19** rpm selama %* menit dalam suhu ruang

e

)etelah disentrifuse akan terpisah menjadi + lapisan, yaitu plasma, sel P'M!, Ficoll, granulosit dan sel darah merah

Plasma Sel PBMC Ficoll Granulosit Sel darah merah

f

!incin Peripheral 'lood Mononuclear !ell :P'M! yang terbentuk diambil secara perlahan menggunakan micropippete dan diletakkan dalam botol sentrifuse 1+ m& yang baru

g

&arutan P'M! dicuci dengan P') hingga 1* m& dan disentrifuse suhu ruang dengan kecepatan 1** rpm selama 1* menit. Pencucian ini dilakukan sebanyak  kali

h

Pelet yang terbentuk dicuci dengan sel staining buffer :; Fetal 'o0ine )erum :F') dalamP') 1 kali

i

"i0orte& F?/! !"# ditambah ,+>& P2 !"$ diencerkan dengan #+>& sel staining buffer

k

Pelet sel dicampurkan dengan antibodi surface marker yang telah diencerkan

l

"iinkubasi * menit dalam gelap di suhu ruang

m

)etelah diinkubasi ditambahkan sel staining buffer kurang lebih %**>&

n

"ipindahkan ke ku0et baca dan siap untuk dibaca dengan flowcytometry

,ASIL

a-

G/a6i3 7en5a/ .5a!!e/9 7ada .a7le P*MC

Keterangan @ Aate :terdapat lingkaran pada scatter di atas menunjukkan sel limfosit b. Persentase gate limfosit

c. G/a6i3 7en5a/ .5a!!e/9 7ada 707ula.i .el li60.i! T

d. Persentase pada populasi sel limfosit /

Keterangan @ yang merupakan sel yang hanya memiliki !"# tanpa !"$ ditunjukkan pada persentase kuadran kanan bawah :&B, untuk sel yanghanya memiliki !"$ tanpa !"# ditunjukkan pada persentase kuadran kiri atas :(&. )edangkan sel yang memiliki marker !"# dan !"$ ditunjukkan pada kuadran kanan atas :(B. PEM*A,ASAN

Pada grafik pencar :scatter sample P'M!, sumbu < menunjukkan ukuran sel, sedangkan sumbu y menunjukkan kompleksitas dari sel. Pada sumbu