Laporan Pemeriksaan Salmonella

BAB I PENDAHULUAN

1.1 Latar Latar Be Belakan lakang g

Pangan Pangan (makan (makanan) an) adalah adalah bahanbahan-bah bahan an yang yang dimaka dimakan n setiap setiap hari hari untuk untuk memenu memenuhi hi kebutu kebutuhan han bagi bagi pemeli pemelihar haraan aan,, pertum pertumbuh buhan, an, kerja kerja dan  penggantian sel tubuh yang rusak. Oleh karena itu pangan atau makanan sangat dibutuhkan oleh manusia sebagai sumber zat gizi dan juga sumber energi.  Namun pangan juga dapat sebagai sarana penggangu kesehatan bagi manusia karen karenaa pang pangan an dapa dapatt terk terkon onta tami mina nasi si oleh oleh cema cemara ran n fisik fisik,, kimi kimiaa maup maupun un mikroba. Hampir semua bahan pangan tercemar oleh berbagai mikroorganisme dari lingkungan lingkungan sekitarnya. sekitarnya. Beberapa jenis mikroba mikroba yang terdapat pada bahan  pangan adalah Salmon Salmonell ella a sp, Staphy Staphyloc lococc occus us aureus aureus,, Escher Escherich ichia ia coli coli , kapang kapang,, khamir khamir serta serta mikrob mikrobaa patoge patogen n lainny lainnya. a. Pencem Pencemaran aran mikrob mikrobaa pada pada  bahan pangan merupakan hasil kontaminasi langsung atau tidak langsung dengan sumber–sumber pencemaran mikroba, seperti tanah, udara, air, debu, saluran pencernaan dan pernafasan manusia maupun hewan. Hanya sebagian saja dari berbagai sumber pencemar yang berperan sebagai sumber mikroba awal yang yang selanju selanjutny tnyaa akan akan berkem berkemban bang g biak biak pada pada bahan bahan pangan pangan sampai sampai  jumlah tertentu. Bahan pangan dapat bertindak bertindak sebagai sebagai perantara perantara atau substrat untuk  tumb tumbuh uhny nyaa mikr mikroo oorg rgan anism ismee yang yang bers bersifa ifatt pato patoge geni nik k terh terhad adap ap manu manusi sia. a. Penyakit Penyakit menular yang cukup cukup berbahaya berbahaya seperti tipes, kolera, disentri, disentri, TBC,  poliomilitis dengan mudah disebarkan melalui melalu i bahan pangan yang disebabkan oleh mikroorgan mikroorganisme isme patogenik patogenik seperti seperti Salmonella yang akan dibahas pada laporan ini. Salmonella meru merupa paka kan n bakt bakter erii Gram Gram nega negatif tif berb berben entu tuk k batan batang g fakultatif. fakultatif. Genus Salmonella dina dinama maii oleh oleh seora seorang ng ahli ahli pato patolo logi gi hewa hewan n Amerika yang bernama Daniel Elmer Salmon, Salmon, namun Theobald Smith adalah  penemu sebenarnya dari jenis bakteri jenis  bakteri ( Salmonella enterica var. choleraesuis) choleraesuis)

 pada 1885, yang menyebabkan penyakit enterik pada babi. Secara umum Salmonella dapat dibagi menjadi 2 yaitu : 1. Salmonella

tifoid yaitu Salmonella typhi, typhi , Salmonella Salmonella paratyphi paratyphi

A,B, A,B, dan dan C peny penyeb ebab ab dema demam m ente enterik rik (typh (typhoi oid) d) pada pada manu manusi sia. a. Kelompok ini telah beradaptasi pada manusia. 2. Salmonella non-tifoid yaitu Salmonella Salmonella Dublin Dublin (sapi),Salmonella (sapi),Salmonella cholera suis(babi), suis(babi),Salmonella Salmonella gallinarum dan Salmonella pullarum (unggas), Salmonella aborius equi (kuda) (kuda) dan Salmonella aborius ovis (domba). Salmonella sp yang beradaptasi pada jenis hewan tertentu jarang menimbulkan penyakit pada manusia. Salmonella merupakan penyebab utama dari penyakit yang disebarkan mela melalu luii

maka makana nan n ( foodborne  foodborne disease). disease). Pada Pada umumn mumnya ya sero seroty typ pe

dari ari

Salmonella menyeb menyebabk abkan an penyak penyakit it pada pada organ organ pencer pencernaa naan. n. Tiga Tiga serotyp serotypee utam utamaa dari dari Salm Salmon onel ella la ente enteric ric yaitu : Salm Salmon onel ella la thyp thypii, Salmonella thypimurium, thypimurium, dan Salmon Salmonell ella a enterit enteritidi idiss. Salm Salmon onel ella la thyp thypii menyebabkan  penyakit demam thypoid karena invasi kuman ke dalam pembuluh darah dan gastroe gastroente nteriti ritiss yang yang diseba disebabka bkan n oleh oleh keracu keracunan nan makana makanan. n. Gejala Gejala demam demam typhoid yaitu : demam, mual-mual dan muntah. Inang dari Salmonella Salmonella thypi hanya manusia.infeksi Salmonella dapat berakibat fatal kepada bayi, balita, ibu hamil dan kandungannya serta orang lanjut usia. Hal ini disebabkan karena kekeba kekebalan lan tubuh tubuh mereka mereka yang yang menuru menurun. n. Kontam Kontamina inasi si Salmonella dapat dicega dicegah h dengan dengan mencuc mencucii tangan tangan dan menjag menjagaa kebersi kebersihan han makana makanan n yang yang dikonsumsi. Salmonella adalah salah satu bakteri yang seringkali menyebabkan  penyakit yang cukup serius apabila mencemari makanan maupun minuman yang dikonsumsi manusia. Salmonella juga dapat hidup pada tubuh makhluk  hidup yang berdarah dingin maupun berdarah panas. Untuk dapat mewaspadai mikroorganisme ini diperlukan adanya identifikasi Salmonella pada makanan yang sering dikonsumsi dikonsumsi manusia yang pada praktikum praktikum ini menggunakan menggunakan telur  dan jamu sebagai sampel yang diuji.

1.2 Rumusan Rumusan Masalah Masalah

1.2.1 Bagaimana Bagaimana pemeriksaan pemeriksaan Salmonella dalam sampel kuning telur, putih telur,dan jamu? 1.2.2 Bagaimana Bagaimana hasil identifikasi identifikasi Salmonella pada kuning telur, putih telur, dan jamu?

1.3 Tuj Tujuan uan 1.3. 1.3.1 1 Tu Tuju juan an Umu Umum m

Mahasiswa dapat melakukan identifikasi Salmonella pada bahan makanan dan minuman secara mikrobiologi melalui identifikasi secara makroskopis, biokimia, dan mikroskopis.

1.3. 1.3.2 2 Tu Tuju juan an Kh Khus usus us

1.3.2.1 1.3.2.1 Untuk mengetahui mengetahui pemeriksaan pemeriksaan Salmonella pada Salmonella  pada sampel kuning telur, putih telur, dan jamu. jamu . 1.3.2. 1.3.2.2 2 Untuk Untuk menget mengetahu ahuii hasil hasil identi identifik fikasi asi Salmonella pada kuning kuning telur, putih telur, dan jamu.

1.4 Manfa Manfaat at 1.4. 1.4.1 1 Manf Manfaa aatt Prakt Praktis is

Dari praktikum dan dengan pembuatan laporan ini diharapkan dapat bermanfaat bagi mahasiswa sebagai tambahan referensi sehingga dapat dapat menamb menambah ah keteram keterampil pilan an di bidang bidang mikrob mikrobiol iologi ogi khusus khususnya nya mengenai mengenai teknik teknik identifikasi identifikasi Salmonella dalam bahan makanan dan minuman.

1.4.2 1.4.2 Manfa Manfaat at Teorit Teoritis is

1.4.2.1 1.4.2.1 Memperluas Memperluas pengetahua pengetahuan n mahasiswa mahasiswa dalam teknik identifikasi Salmonella pada Salmonella pada bahan makanan dan minuman. minuman. 1.4.2.2 Menjadi referensi di bidang ilmu mikrobiologi mikrobiologi mengenai teknik  identifikasi Salmonella pada Salmonella pada bahan makanan dan minuman.

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Morfologi Salmonella

Salmonella merupakan bakteri Gram negatif berbentuk batang fakultatif. Genus Salmonella dinamai oleh seorang ahli patologi hewan Amerika yang bernama Daniel Elmer Salmon, namun Theobald Smith adalah  penemu sebenarnya dari jenis bakteri ( Salmonella enterica var. choleraesuis)  pada 1885,yang menyebabkan penyakit enterik pada babi(Pratiwi, 2011).

Ciri-ciri dari bakteri Salmonella adalah sebagai berikut (Pratiwi, 2011): 1.

Berbentuk batang dengan ukuran tergantung jenis bakteri (pada umumnya memiliki panjang ± 2-3 µm, dan bergaris tengah antara ±0,3 – 0,6 µm ).

2.

Bersifat Gram negatif.

3.

Berkembang biak dengan cara membelah diri.

4.

Tidak berspora dan bersifat aerob.

5.

Motil (pergerakan ) dengan mengunakan flagel. Mempunyai flagel  perithrik (diseluruh permukaan sel), kecuali pada jenis Salmonella  gallinarum dan Salmonella pullorum.

6.

Salmonella mudah tumbuh pada medium sederhana, tetapi hampir tidak   pernah memfermentasikan laktosa atau sukrosa.

7.

Salmonella membentuk asam dan kadang-kadang gas dari glukosa dan manosa.

8.

Salmonella resisten terhadap bahan kimia tertentu (misal, hijau brilian, natrium tetrationat,natrium deoksikolat) yang menghambat bakteri enterik  lain, oleh karena itu senyawa – senyawa tersebut berguna untuk inklusi isolate salmonella dari feses pada medium.

9.

Struktur sel bakteri Salmonella terdiri dari inti (nukleus), sitoplasma, dan dinding sel. Karena dinding sel bakteri ini bersifat Gram negatif , maka memiliki struktur kimia yang berbeda dengan bakteri Gram positif. Menurut Jawetz et al (dalam Bonang,1982) mengemukakan bahwa

dinding

sel

bakteri

gram

negatif

mengandung

3

polimer

senyawa

mukokompleks yang terletak diluar lapisan peptidoglikan (murein). Ketiga  polimer ini terdiri dari : 1.

Lipoprotein

adalah

senyawa

protein

yang

mempunyai

fungsi

menghubungkan antara selaput luar dengan lapisan peptidoglikan. 2.

Selaput luar adalah selaput ganda yang mengandung senyawa fosfolipid dan sebagian besar dari senyawa fosfolipid ini terikat oleh molekulmolekul lipopolisakarida pada lapisan atasnya (Pratiwi, 2011).

2.2

Klasifikasi Salmonella

Berikut klasifikasi dari bakteri Salmonella (Pratiwi, 2011) : Kerajaan

: Bacteria

Filum

: Proteobakteria

Kelas

: Gamma proteobakteria

Ordo

: Enterobakteriales

Family

: Enterobakteriaceae

Genus

: Salmonella

Spesies

: Salmonella enterica Salmonella arizona Salmonella typhi Salmonella choleraesuis Salmonella enteritidis

Secara praktis salmonella dapat dibagi menjadi (Pratiwi, 2011) : 1.

Salmonella

tifoid yaitu Salmonella typhi, Salmonella paratyphi

A,B, dan C penyebab demam enterik (typhoid) pada manusia. Kelompok  ini telah beradaptasi pada manusia.

2. Salmonellanon-tifoid yaitu Salmonelladublin (sapi),Salmonella cholera suis (babi),Salmonellagallinarum

dan

Salmonella

pullarum

(unggas),

Salmonella aborius equi (kuda) dan Salmonella aborius ovis (domba). Salmonella sp yang beradaptasi pada jenis hewan tertentu jarang menimbulkan penyakit pada manusia.

2.3 Metode Analisa

Metode analisa merupakan proses pembuktian atau konfirmasi  pengujian secara obyektif di laboratorium yang telah memenuhi persyaratan yang telah ditentukan dan sesuai dengan tujuan

penggunaannya. Dalam

 pengujian mutu suatu bahan pangan diperlukan berbagai uji yang mencakup uji fisik, uji kimia, uji mikrobiologi, dan uji organoleptik. Uji mikrobiologi merupakan salah satu uji yang penting, karena selain dapat menduga daya tahan simpan suatu makanan, juga dapat digunakan sebagai indikator sanitasi makanan

atau

indikator

keamanan

makanan.

Pengujian

mikrobiologi

diantaranya meliputi uji kuantitatif untuk menentukan mutu dan daya tahan suatu makanan, dan uji kualitatif bakteri patogen untuk menentukan tingkat keamanannya, serta uji bakteri indikator untuk mengetahui tingkat sanitasi makanan tersebut (Fardiaz, 1993). Dalam

hal

ini,

metode

analisa

yang

digunakan

untuk 

mengidentifikasi adanya bakteri Salmonella adalah metode analisa secara kualitatifyakni bertujuan untuk mengetahui ada tidaknya suatu bakteri Salmonella dalam suatu makanan (Sugianto, 2012).

a. Metode Analisa Kualitatif 

Pada pengujian identifikasi bakteri Salmonella metode yang digunakan adalah metode analisa secara kualitatif. Pada metode analisa kualitatif ini memiliki tahapan – tahapan tertentu dengan tujuan untuk  mengetahui ada tidaknya suatu mikroorganisme dalam makanan(Sugianto, 2012). Tujuan dari pengidentifikasian dalam uji suatu bakteri (Salmonella)  pada metode ini adalah untuk mengetahui mutu ataupun kualitas dari suatu

 produk

berdasarkan

kemasan

atau

sifat

mikrobiologinya.

Pengujian

mikrobiologi pada sampel makanan akan selalu mengacu kepada persyaratan makanan yang sudah ditetapkan. Sebagai contoh sampel pada makanan yakni Parameter uji mikrobiologi pada mayonnaise yang dipersyaratkan sesuai Standar Nasional Indonesia dalam pengujian Salmonella(Sugianto, 2012). Prinsip pengujian deteksi Salmonella menurut Metode Analisis Mikrobiologi (MA PPOM 74/MIK/06) yaitu ada empat tahap untuk mendeteksi adanya Salmonella (Sugianto, 2012) : 1.

Pra. Pengkayaan dalam media cair non selektif yang diinkubasi pada 37±1°C selama 18+2jam.

2.

Pengkayaan dalam media cair selektif yang diinkubasi pada 41,5 + 1° C selama 24 ± 3 jam dalam RVS cair dan 37±1° C selama 24±3 jam MKTTn cair.

3.

Inokulasi & identifikasi dalam 2 media padat selektif, media selektif   pertama diinkubasi pada 37±1° C selama 24±3 jam dan dengan media yang digunakan.

4.

Konfirmasi terhadap identitas Salmonella dengan uji biokimia dan serologi. Pada pengujan deteksi Salmonella diguanakan Buffered Peptone

Water (BPW) sebagai media cair non selektif, Muller Kaufimann Tetrathionate  Novobiocin Broth (MKTTn) dan Rappaport Vassiliadis Medium + Soya (RVS) sebagai media cair selektif, Bismuth Green Agar (BGA) dan Xylose Lysine Deoxycholate (XLD) media padat selektif untuk mengisolasi Salmonella (Sugianto, 2012). b. Uji Salmonella

Uji Salmonella digunakan untuk menetapkan adanya Salmonella dalam makanan.Salmonella merupakan bakteri gram-negatif berbentuk tongkat yang menyebabkan tifus, paratifus, dan penyakit foodborne. Salmonella terdiri dari sekitar 2500 serotipe yang kesemuanya diketahui bersifat pathogen baik   pada manusia atau hewan. Bakteri ini bukan indikator sanitasi, melainkan  bakteri indikator keamanan pangan. Artinya, karena semua serotipe Salmonella yang diketahui di dunia ini bersifat patogen maka adanya bakteri ini dalam

makanan dianggap membahayakan kesehatan.Oleh karena itu berbagai standar  makanan siap santap mensyaratkan tidak ada Salmonella dalam 25 gram sampel makanan (Sugianto, 2012). Salah

satu

contoh

uji

Salmonella

yang

telah

dilakukan

 pengidentifikasian yakni pada sampel mayonnaise dengan pustaka syarat yang telah ditetapkan pada SNI 01-4473-1998 dengan syarat negatif koloni/ 25 gram. Karena mungkin keberadaan Salmonella  pada makanan sangat kecil karena itu tidak dibuat dalam 1 gram tetapi 25 gram. Salmonella adalah bakteri yang termasuk mikroorganisme yang amat kecil dan tidak terlihat mata.Selain itu bakteri ini tidak meninggalkan bau maupun rasa apapun pada makanan. Kecuali jika bahan makanan (daging ayam) mengandung Salmonella dalam  jumlah besar, barulah terjadi perubahan warna dan bau (merah muda pucat sampai kehijauan, berbau busuk). Biasanya bakteri dapat dideteksi melalui  pemeriksaan laboratorium (Sugianto, 2012). Salmonella  bisa terdapat di udara, air, tanah, sisa kotoran manusia maupun hewan atau makanan hewan. Yang sangat sering sekali terjadi adalah keracunan Salmonella dari makanan yang mengandung telur mentah (tidak  diolah), seperti mayonaise, es krim dan pudding. Mayonaise biasanya sudah  bersifat asam (pH dibawah 4, Salmonella hidup pada pH 4-9). Pada Mayonaise ditambahkan asam asetat sebagai cuka. Asam asetat pada mayonaise akan membunuh Salmonella (Sugianto, 2012). Makanan yang mudah rusak seperti daging mentah (terutama daging cincang), daging unggas, ikan, telur, makanan yang mengadung telur mentah (creme, salat, mayonaise, es krim, pudding, dll) harus segera mungkin didinginkan atau dibekukan dalam lemari es. Untuk mendeteksi keberadaan Salmonella dalam makanan dilakukan dalam 4 tahap yaitu pra-pengkayaan non selektif, pengkayaan selektif, inokulasi dan identifikasi, dan konfirmasi terhadap identitas Salmonella yang diuji. Berikut ini adalah hasil dari pengujian Salmonella pada 25 gram sampel mayonnaise (Sugianto, 2012). Pada pengujian Salmonella ini dibuat juga kontrol positif yaitu sampel yang telah diberi biakan kultur salmonella sebagai pembanding. Dari  pengkayaan selektif, biakan dari MKTTn dan RVS diinokulasikanpada media

BGA dan XLD untuk tahap inokulasi dan identifikasi. Pada tahap ini hanya  biakan dari BGA yang berasal dari MKTTn yang menunjukkan pertumbuhan koloni. Sedangkan pada media XLD tidak ada pertumbuhan koloni. Selanjutnya koloni dari biakan BGA dilakukan uji identifikasi yaitu uji  biokimia dan uji serologi. Uji biokimia yang dilakukan antar lain sebagai  berikut: 1.

Uji TSIA

Pada uji TSIA warna media slant berubah menjadi merah karena  bakteri bersifat basa ini menandakan bahwa bakteri ini tidak memfermentasi laktosa dan sukrosa. Pada media daerah butt media berubah berwarna kuning ini menandakan bakteri memfermentasi glukosa. Pembentukan gas positif ini hasil dari fermentasi H2 dan CO2 dapat dilihat dari pecahnya dan terangkatnya agar.Pembentukan H2S positif ditandai dengan adanya endapan berwarna hitam. TSIA agar mengadung laktosa dan sukrosa dalam konsentrasi 1%, glukosa 0,1% dan phenol red sebagai indikator yang menyebabkan perubahan warna dari merah orange menjadi kuning dalam suasana asam. TSIA juga mengandung natrium trisulfat, yaitu suatu substrat untuk penghasil H 2S, ferro sulfat menghasilkan FeS (precipitat), bewarna hitam untuk membedakan bakteri H2S dengan bakteri-bakteri lainnya (Sugianto, 2012).

2.

Uji Urease

Uji urease digunakan untuk mengetahui kemampuan mikroba menghidrolisis urea menjadi amonia. Enzim urease akan menguraikan urea menjadi amonia. Uji urease menunjukkan hasil positif jika terjadi perubahan warna dari kuning menjadi merah keunguan. Hasil uji urease negatif jika tidak  terjadi perubahan warna dari kuning menjadi merah keunguan (Sugianto, 2012). 3.

Uji Dekarboksilasi Lysin

Uji Dekarboksilasi Lysin menggunakan media Xylose-LysineDesoxycholate Agar medium digunakan untuk isolasi Salmonella danmemilah organisme lain dengan cara memfermentasi xylose, dekarboksilasi lysine dan

 produksi H2S. Fermentasi xylose sangat lazim bagi kebanyakan organisme enterik kecuali, Shigella, Providencia, Edwardsiella. Pada media ini, Salmonella akan membentuk koloni merah dengan inti hitam, sedang  Pseudomonas dapat tumbuh dengan warna merah dan  Eschericia  berwarna kuning. Mikroba lain yang dapat tumbuh pada media ini antara lain  Arizona,  Proteus, Aerobacter, Klebsiella,Citrobacter . Begitu banyak mikroba yang dapat tumbuh, sehingga media ini kurang dapat memilah Salmonella  pada tahap awal.Lebih baik digunakan untuk tahap konfirmasi kontaminan Salmonella (Sugianto, 2012). 4.

Uji β-galaktosidase

Uji β-galaktosidase digunakan utuk identifikasi beberapa jenis  bakteri seperti Salmonella.Enzim β-galaktosidase merupakan enzim yang dapat mengubah laktosa menjadi glukosa dan galaktosa. Beberapa mikroorganisme seperti E. coli, dapat menggunakan laktosa sebagai sumber karbon. Selain laktosa, substrat alamiah dari enzim, adalah bahan yang sangat penting, ONPG (o-nitro-phenyl-β-D-galactopyranoside), dapat digunakan pula.Β-galaktosidase dapat mengkatalisis ONPG menjadi galaktosa dan o-nitrofenol. ONPG tidak   berwarna tetapi setelah hidrolisis menjadi o-nitrofenol, akan timbul warna kuning pada larutan yang alkali. beberapa jenis bakteri yang mampu melakukan fermentasi terhadap karbohidrat Streptococcus, Lactobacillus,  Zygomonas,

Saccharomycetes,

Escherichia,

Enterobacter,

Salmonella

(Sugianto, 2012). 5.

Uji Indol

Uji Indol bertujuan untuk menentukan kemampuan bakteri dalam memecah asam amino triptofan. Media ini biasanya digunakan dalam indetifikasi yang cepat.Hasil uji indol yang diperoleh negatif karena tidak  terbentuk lapisan (cincin) berwarna merah muda pada permukaan biakan, artinya bakteri ini tidak membentuk indol dari tryptopan sebagai sumber  karbon, yang dapat diketahui dengan menambahkan larutan kovacs. Asam amino triptofan merupakan komponen asam amino yang lazim terdapat pada  protein, sehingga asam amino ini dengan mudah dapat digunakan oleh mikroorganisme akibat penguraian protein (Sugianto, 2012).

6.

Uji Voges Proskauer

Uji Voges Proskauer bertujuan untuk mengidentifikasi jenis bakteri. Untuk

membedakan

bakteri

 Escherichia

coli

dengan

 Enterobacteraerogenes.Hasilnya uji ini negatif, karena tidak terbentuk warna merah pada medium setelah ditambahkan á-napthol dan KOH, artinya hasil akhir fermentasi bakteri ini bukan asetil metil karbinol (asetolin).Salmonella  positif jika pada uji biokimia yang dilakukan hasilnya sebagai berikut (Sugianto, 2012) : 1.

TSIA : butt (+), slant (-), gas positif atau negatif dan H 2S positif atau negatif.

2.

Hidrolisis urea : negatif 

3.

Dekarbosilasi lysine : positif 

4.

Reaksi voges proskauer : negatif 

5.

Produksi indol : negatif 

6.

Uji serologi: terjadi aglutinasi pada penambahan antisera polivalen O, H, dan Vi. Pada biakan contoh setelah dilakukan uji biokimia dan serologi

didapatkan hasil sebagai berikut(Sugianto, 2012) : a)

TSIA : butt (-), slant (-), gas negatif dan H 2S negatif 

 b)

Hidrolisis urea : positif 

c)

Dekarbosilasi lysine : negatif 

d)

Reaksi voges proskauer : negatif 

e)

Produksi indol : negatif 

7.

Uji Serologi

Uji serologi tidak terjadi aglutinasi pada penambahan antisera  polivalen O, H, dan Vi. Karena hasil dari uji biokimia dan uji serologi contoh atau sampel berbeda dengan hasil kontrol positif, maka koloni yang tumbuh dari biakan BGA pada contoh bukanlah Salmonella, sehingga hasil dari  pengujian ini dapat dinyatakan sebagai negatif koloni/25 gr. Hasil ini telah memenuhi syarat seperti pada SNI 01-4473-1998 yang mensyaratkan cemaran Salmonella pada mayonnaise adalah negatif koloni/25 gr (Sugianto, 2012).

BAB III METODE PENELITIAN

3.1 Waktu dan Tempat

Praktikum “Pemeriksaan Salmonella” dilaksanakan secara bertahap. Adapun waktu dan tempat pelaksanaan praktikum dilakukan sebagai berikut :

3.1.1 Pembuatan Media SCB, SSA dan MCA Hari, tanggal

: Rabu, 20 Maret 2013

Waktu

: Pukul 09.00 – 12.20 WITA

Tempat

: Laboratorium Kimia dan Laboratorium Bakteriologi Jurusan Analis Kesehatan Poltekkes Denpasar 

3.1.2 Inokulasi Sampel Putih Telur, Kuning Telur dan Jamu pada Media SCB Hari, tanggal

: Rabu, 3 April 2013

Waktu

: Pukul 09.00 – 12.20 WITA

Tempat

: Laboratorium Bakteriologi dan Kimia Jurusan Analis Kesehatan Poltekkes Denpasar 

3.1.3 Pengamatan Hasil Inokulasi pada Media SCB serta Inokulasi pada  Media SSA dan MCA Hari, tanggal

:Kamis, 4 April 2013

Waktu

: Pukul 14.00 WITA s/d selesai

Tempat

: Laboratorium Bakteriologi Jurusan Kesehatan Lingkungan Poltekkes Denpasar 

3.1.4 Pengamatan Hasil Inokulasi pada Media SSA dan MCA Hari, tanggal

: Senin, 8 April 2013

Waktu

: Pukul 11.00 WITA s/d selesai

Tempat

: Laboratorium Bakteriologi Jurusan Kesehatan Lingkungan Poltekkes Denpasar 

3.2 Alat dan Bahan 3.2.1 Alat 

3.2.1.1 Gelas beaker 50 ml 3.2.1.2 Spatel 3.2.1.3 Gelas ukur 250 ml 3.2.1.4 Neraca analitik  3.2.1.5 Batang pengaduk  3.2.1.6 Botol semprot 3.2.1.7 Erlenmeyer 500 ml 3.2.1.8 Autoclave 3.2.1.9 Api bunsen 3.2.1.10Ose 3.2.1.11 Tabung reaksi

3.2.1.12 Rak tabung reaksi 3.2.1.13Plate 3.2.1.14 Pipet ukur 10 ml 3.2.1.15 Pipet ukur 5 ml 3.2.1.16Pipet tetes 3.2.1.17Bola hisap 3.2.1.18 Aluminium foil 3.2.1.19Kapas lemak  3.2.1.20Kertas koran 3.2.1.21 Benang pulung 3.2.1.22 Inkubator  3.2.1.23Label

3.2.2 Bahan

3.2.2.1 Salmonella Shigella Agar Powder  3.2.2.2 Mac Conkey Agar Powder  3.2.2.3 Simmons Citrat Agar Powder  3.2.2.4 Aquadest 3.2.2.5 Aquadest steril 3.2.2.6 Kuning Telur  3.2.2.7 Putih Telur  3.2.2.8 Jamu 3.3 Langkah Kerja 3.3.1 Bagan Langkah Kerja

SCB Pembuat an Media

MCA SSA

Kuning Telur

Sampel Pemeriksaa n

Inokulasi Sampel pada Media SCB

Putih Telur  Jamu

Inokulasi Sampel positif  pada Media MCA dan SSA Pengamatan koloni bakteri pada media MCA dan SSA Interpretasi Hasil 3.3.2 Langkah Kerja A. Pembuatan Media SCB

1. Ditimbang bubuk media SCB sebanyak 3,8 g dengan neraca analitik. 2. Dilarutkan dengan aquadest steril sebanyak 200 ml di dalam erlenmeyer sambil diaduk hingga homogen. 3. Ditutup dengan kapas berlemak lalu dipanaskan dengan kompor  listrik hingga media larut sempurna. 4. Dipipet media SCB sebayak

10 ml dengan pipet ukur, lalu

dimasukkan kedalam tabung reaksi steril, lalu ditutup dengan kapas lemak. 5. Media siap digunakan.

B. Pembuatan media MCA

1. Disiapkan alat dan bahan yang diperlukan, lalu diberi label pada erlenmeyer dan plate yang akan digunakan. 2. Ditimbang bubuk MCA sebanyak analitik.

15,3 gram dengan neraca

3. Dilarutkan dengan aquadest sebanyak 300 ml di dalam erlenmeyer  sambil diaduk. 4. Ditutup erlenmeyer dengan kapas berlemak lalu dipanaskan sampai media larut sempurna. 5. Media disterilisasi dengan autoclave pada suhu 1210C selama 15 menit. 6. Didinginkan media hingga suhu ± 40 o C. 7. Dituangkan media ke dalam plate. 8. Media siap digunakan.

C. Pembuatan media SSA

1. Disiapkan alat dan bahan yang diperlukan, lalu diberi label pada erlenmeyer dan plate yang akan digunakan. 2. Ditimbang bubuk SSA sebanyak

18,9 gram dengan neraca

analitik. 3. Dilarutkan dengan aquadest steril sebanyak 300 ml di dalam erlenmeyer sambil diaduk. 4. Ditutup erlenmeyer dengan kapas berlemak lalu dipanaskan sampai media larut sempurna. 5. Didinginkan media hingga suhu ± 40 o C. 6. Dituangkan media ke dalam petridisk steril. 7. Biarkan media hingga memadat, lalu media siap digunakan

D. Persiapan Sampel a. Sampel padat (telur) •

Semua alat dan bahan yang diperlukan dipersiapkan dan diberi label.

•

Sampel putih dan kuning telur dipisahkan dalam wadah terpisah yang steril.

•

Ditimbang 10 gram putih dan kuning telur secara terpisah menggunakan neraca analitik lalu dimasukkan ke dalam labu erlenmeyer.

Dilarutkan putih dan kuning telur dengan 90 ml aquadest

•

steril. Diaduk hingga homogen. Bahan dengan pengenceran tersebut siap dipergunakan

•

untuk pemeriksaan. b. Sampel cair (jamu)

Sampel jamu dituangkan ke dalam beaker steril. Sampel

•

 jamu dihomogenkan terlebih dahulu. Dipipet 10 ml jamu ke dalam labu erlenmeyer atau botol

•

steril. Dilarutkan sampel tersebut dengan 90 m aquadest steril.

•

Diaduk/dikocok hingga homogen. Bahan dengan pengenceran tersebut siap digunakan untuk 

•

 pemeriksaan

E. Inokulasi Sampel Putih Telur, Kuning Telur dan Jamu pada Media SCB (Pengayaan)

1. Disiapkan alat dan bahan yang diperlukan. 2. Sampel yang akan diinokulasi dihomogenkan. 3. Dipipet 10 ml sampel putih telur, kuning telur dan jamu lalu diinokulasikan ke dalam media SCB. Pengerjaan dilakukan di dekat api bunsen. 4. Dihomogenkan sampel dengan media SCB. 5. Diberi label berupa identitas sampel yang jelas pada tabung reaksi. 6. Diinkubasi media menggunakan incubator pada suhu 37 o C selama 24 jam. 7. Setelah waktu inkubasi, diamati apakah terbentuk kekeruhan pada sampel. Hasil positif ditunjukkan dengan terbentuknya kekeruhan dari sampel setelah diinkubasi. Hasil positif ini kemudian akan dilanjutkan pada proses selanjutnya.

F. Inokulasi Sampel Putih Telur, Kuning Telur dan Jamu positif pada Media MCA dan SSA (Penanaman pada media selektif)

1. Disiapkan semua alat dan bahan yang diperlukan. 2. Sampel putih telur, kuning telur dan jamu positif diinokulasikan 1 ose ke dalam media MCA dan SSA. Pengerjaan dilakukan di dekat api bunsen dengan metode cawan gores (streak plate). 3. Diberi label identitas sampel yang jelas pada media. 4. Diinkubasi

media

yang telah

diinokulasikan

menggunakan

incubator pada suhu 37 o C selama 24 jam. Setelah waktu inkubasi, diamati media apakah tumbuh koloni. Hasil positif  ditunjukkan dengan terbentuknya koloni bening pada media SSA dan koloni merah bata pada media MCA. Hasil koloni positif ini diamati secara makroskopis.

BAB IV PEMBAHASAN

4.1 Data Hasil Pengamatan No

Gambar

Tahap uji

Keterangan

1

Penginokulasian sampel telur

Setelah diinkubasi pada suhu 37

pada

media SCB

selama 24 jam pada media tersebut menunjukkan kekeruhan

warna karena

kuning adanya

 pertumbuhan bakteri

2

Penginokulasian

Setelah diinkubasi pada suhu 37

 pada media SSA selama 24 jam, terjadi pertumbuhan koloni pada media dengan ciri-ciri : Koloni 1 •

Bentuk : bulat

•

Ukuran : kecil

•

Warna : bening

•

Permukaan: cembung

•

Tepi : halus

Koloni 2 •

Bentuk : bulat

•

Ukuran : kecil

•

Warna : merah muda (pink)

•

Permukaan: cembung

•

Tepi : halus

3

Penginokulasian

Setelah diinkubasi pada suhu 37

 pada media MCA selama

24

jam,

tidak

terjadi

 pertumbuhan koloni bakteri pada media

4

Setelah diinkubasi pada suhu 37 selama 24 jam 

 pada media Simmons Citrate Agar tidak terjadi pertumbuhan koloni bakteri



 pada

media

 pertumbuhan

Uji biokimia pada

SIM

terjadi

bakteri

yaitu

dengan cirri-ciri:

media Simmons Citrate Agar,

a. Motilitas + (aktif)

SIM,dan TSI

 b. Indol tidak dilakukan c. H2S ( -) 

Pada media TSI menunjukkan hasil yang positif dengan cirriciri terjadi perubahan warna menjadi merah pada bagian atas (slant) dan bagiaan dasar tabung  berwarna kuning

5

Setelah diinkubasi pada suhu 37 selama 24 jam 

Pada

media

glukosa

menunjukkan hasil yang positif  yaitu terbentuknya gelembung gas pada tabung durham dan warna media menjadi kuning Uji gula-gula pada



media glukosa,

Pada

media

menunjukkan

laktosa, dan manitol

laktosa hasil

yang

negative yaitu tidak terbentuk  gas dalam tabung durham dan tidak terjadi perubahan warna 

Pada

media

menunjukkan

manitol hasil

yang

negative yaitu tidak terbentuk  gas dalam tabung durham dan tidak terjadi perubahan warna Pemeriksaan 6

mikroskopis

Dari hasil penanaman bakteri yang  postif pada media TSI dan SSA di lanjutkan

pada

pemeriksaan

mikroskopis dengan cat gram 

Koloni yang berwarna bening hasil pemeriksaan mikroskopis: Bentuk : batang Ukuran : pendek dan kurus Sifat : gram negative Penataan : sendiri-sendiri dan  bergerombol Pelaporan : basil (+) gram (-)



Koloni yang berwarna merah muda (pink) hasil pemeriksaan mikroskopis: Bentuk : batang Ukuran : panjang dan ramping Sifat : gram negatif  Penataan : sendiri-sendiri dan  bergerombol Pelaporan : basil (+) gram (-)

4.2 Pembahasan 4.2.1 Pemeriksaan  Salmonella pada Sampel Kuning Telur, Putih Telur, dan Jamu

Pemeriksaan dan identifikasi bakteri Salmonella dapat dilakukan dengan mengisolasi dari bahan makanan. Bahan makanan yang umum diisolasi adalah daging dan telur yang tidak diolah dengan baik. Pada praktikum ini sampel yang digunakan adalah telur mentah dan jamu . Telur meskipun masih utuh dapat mengalami kerusakan, baik  kerusakan fisik maupun kerusakan yang disebabkan oleh pertumbuhan mikroba. Mikroba dari air, udara maupun kotoran ayam dapat masuk ke dalam telur melalui pori-pori yang terdapat pada kulit telur. Telur yang telah dipecah akan mengalami kontak langsung dengan lingkungan, sehingga lebih mudah rusak dibandingkan dengan telur yang masih utuh. Tanda-tanda kerusakan yang sering terjadi pada telur adalah sebagai berikut : 1. Perubahan fisik, yaitu penurunan berat, pembesaran kantung udara di dalam telur, pengenceran putih dan kuning telur. 2. Tim buln ya bau b usu k karena pertumbuhan bakteri pembusuk. 3. Timbulnya bintik-bintik berwarna karena pertumbuhan bakteri  pembentuk wama, yaitu bintik-bintik hijau, hitam, dan merah. 4. Bulukan, disebabkan oleh pertumbuhan kapang perusak telur.

Isolasi Salmonella pada praktikum ini, dilakukan dengan pemisahan antara

kuning

dengan

putih

telur.

Bakteri

Salmonella

dapat

mengkontaminasi telur jauh sebelum cangkang terbentuk. Sebenarnya,  bakteri ini tidak biasa masuk ke dalam telur. Bakteri ini mengkontaminasi telur apabila cangkang dan membran telur yang melindungi kuning telur  rusak atau pecah, kuning telur ini merupakan satu-satunya tempat pada telur dimana bakteri ini bisa hidup. Salmonella biasa hidup dalam sel telur  ayam betina. Dalam isolasi ini, sampel kuning telur, putih telur, dan jamu diinokulasi pada media Selenite Cystine Broth. Media Selenite Cystine  Broth ini merupakan salah satu media yang berdasarkan fungsinya merupakan media encrichment yaitu media yang dapat menunjang  pertumbuhan bakteri yang tidak dapat tumbuh pada media biasa karena memerlukan

beberapa

nutrisi

pengaya

yang

dapat

menyokong

 pertumbuhannya. Media ini tergolong enrichment eksklusif media yaitu media penyubur eksklusif untuk bakteri gram negatif seperti Salmonella  sp. Hasil positif yang ditunjukkan oleh sampel kuning telur, putih telur, dan jamu pada media Selenite Cystine Broth yang ditandai dengan adanya kekeruhan pada media diinokulasi kembali pada media Salmonella Shigella Agar  (SSA) dan  Mac Conkey Agar  (MCA). Media  Mac Conkey  Agar  (MCA) merupakan media selektif deferensial bagi mikroba. Media ini menghambat pertumbuhan bakteri gram positif dengan adanya garam empedu yang akan membentuk kristal violet. Bakteri gram negatif yang tumbuh dapat

dibedakan

dalam kemampuannya memfermentasikan

laktosa. Pertumbuhan koloni bakteri Salmonella pada  Mac Conkey Agar  (MCA) adalah serupa dengan media yaitu berwarna merah bata. Sedangkan media Salmonella Shigella Agar  (SSA) adalah media yang digunakan untuk tumbuh kembang bakteri Salmonella dan Shigella. Media

ini

tergolong

media

selektif

untuk

pengisolasian

bakteri

Salmonella dan Shigella. Media ini mengandung bile salt, brilliant green, sitrat, dan thiosulfate yang bersifat selektif untuk mencegah pertumbuhan

 bakteri gram positif, beberapa gram negatif lainnya, dan bakteri coliform sehingga diharapkan bakteri yang tumbuh hanya Salmonella dan Shigella. Pertumbuhan bakteri Salmonella pada media ini muncul sebagai koloni tidak berwarna (bening) dan jika terjadi produksi H 2S oleh spesies Salmonella mengubah pusat koloni menjadi berwarna hitam.

4.2.2 Hasil Identifikasi  Salmonella pada Kuning Telur, Putih Telur, dan Jamu

Pengujian terhadap bakteri Salmonella dengan sampel kuning telur,  putih telur, dan jamu pada praktikum ini dilakukan dengan metode konvensional. Metode ini dilakukan melalui serangkaian tahapan. Tahapan  pertama pada prakikum ini yaitu penanaman sampel kuning telur, putih telur, dan jamu pada media Selenite Cystine Broth. Pada media Selenite Broth didapatkan hasil positif pada sampel kuning telur dan jamu yang ditandai dengan adanya kekeruhan pada media setelah diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37oC. Kekeruhan tersebut diakibatkan karena perkembangbiakan bakteri  pada inokulasi di media ini. Sedangkan sampel putih telur hanya muncul gelembung pada dinding tabung. Namun, hasil ini tetap dilanjutkan ke tahap  berikutnya. Dari hasil positif tersebut, kemudian diinokulasikan pada media Mac Conkey Agar dan media Salmonella Shigella Agar dengan metode cawan gores. Setelah inokulasi dilakukan, media diinkubasi pada inkubator selama 3 × 24 jam dengan suhu inkubasi sebesar 37 oC. Pada sampel kuning telur, media Mac Conkey Agar ditumbuhi koloni bakteri tua tertutup jamur dan  berwarna kuning serta tampak warna kehitaman akibat pertumbuhan strain kuman tertentu. Pada pengamatan media sangat sulit diidentifikasi karena waktu inkubasi sangat melebihi batas yaitu 3 × 24 jam. Sedangkan koloni yang tumbuh pada media Salmonella Shigella Agar adalah koloni bakteri tua tertutup jamur dan berwarna kuning keemasan. Sehingga sampel kuning telur  dikatakan positif terdapat bakteri Salmonella. Sampel kuning telur yang digunakan adalah kuning telur yang busuk sehingga sangat berpotensi untuk  ditemukannya bakteri Salmonella. Sedangkan sampel putih telur tidak tumbuh koloni pada media Mac Conkey Agar dan Salmonella Shigella Agar. Warna

kedua media tidak mengalami perubahan yaitu berwarna merah transparan. Dimana sampel putih telur ini memiliki peluang yang kecil untuk dapat ditumbuhi bakteri Salmonella. Inokulasi positif sampel jamu pada media Mac Conkey Agar membentuk koloni tua yang tertutupi oleh jamur dan berwarna orange. Jamur terbentuk dari adanya waktu inkubasi yang melebihi batas yaitu 3 × 24 jam. Bentuk koloni dan permukaannya sangat sulit diamati karena tertutupi jamur. Sedangkan pada media Salmonella Shigella Agar terbentuk  koloni kuning keemasan tertutupi jamur dan terdapat warna kehitaman di dasar koloninya. Warna hitam tersebut muncul akibat pertumbuhan strain kuman tertentu. Sehingga jamu tersebut positif terdapat bakteri Salmonella. Beberapa hal yang menyebabkan ditemukannya bakteri Salmonella pada  jamu olahan industri rumah tangga yaitu sebagian besar jamu yang diproduksi masyarakat masih dibuat secara tradisional menggunakan peralatan sederhana. Beberapa faktor yang menyebabkan cemaran mikrooganisme pada jamu adalah penggunaan bahan mentah yang mungkin tercemar atau tidak segar,  proses pengolahan yang tidak sempurna, pekerja yang tidak higienis atau menderita infeksi, umur simpan yang sudah melebihi batas dan sebagainya. Beberapa

mikroba

patogen

yang

perlu

diwaspadai

dapat

mengkontaminasi jamu adalah kapang penghasil mikotoksin (Claviceps,  Fusarium, Penicillium, Aspergillus flavus, dan A. parasiticus), kamir  (Shizosaccharomyces dan Kloeckera) yang merupakan kamir tanah sehingga sering mengkontaminasi bahan rempah-rempah. Berikutnya adalah kelompok   bakteri pembentuk spora, Staphylococcus aureus, E. coli, Salmonella, dan Shigella. Kontaminasi jamu juga dapat disebabkan oleh E. Coli, bakteri ini banyak  terdapat dalam feses dan air yang terkontaminasi oleh feses. Oleh karena itu,  jamu yang berbentuk cair dan menggunakan rempah-rempah segar, yang diolah secara tradisional seperti jamu gendong memiliki peluang yang lebih  besar terkontaminasi E. Coli, jika pengolahan tidak memperhatikan faktor  sanitasi. Bakteri patogen yang dapat mengkontaminasi jamu adalah Salmonella,  bakteri ini banyak terdapat di air, tanah, serangga, feses hewan, daging

mentah, dan seafood. Kemungkinan rempah-rempah dapat terkontaminasi Salmonella berasal dari air pencuci, tanah, dan serangga. Oleh karena itu, secara umum kontaminasi yang terjadi pada olahan jamu tradisional disebabkan karena buruknya sanitasi di lingkungan pengolahan sehingga dapat  berdampak buruk terhadap produk yang dihasilkan.

BAB V PENUTUP

5.1 Simpulan

5.1.1

Identifikasi Salmonella pada sampel kuning telur, putih telur, dan  jamu dalam praktikum ini dilakukan melalui

pemeriksaan

 bakteriologis yang meliputi pemeriksaan makroskopis dengan mengamati koloni bakteri yang terbentuk pada media selektif. 5.1.2

Dari kegiatan praktikum yang dilakukan didapatkan bakteri Salmonella pada sampel kuning telur dan jamu yang ditunjukkan dari hasil positif pada media Salmonella Shigella Agar dan Mac Conkey Agar. Sedangkan sampel putih telur diperoleh hasil negatif  tidak terdapat bakteri Salmonella yang ditunjukkan dengan tidak  adanya pertumbuhan koloni pada media Salmonella Shigella Agar  dan Mac Conkey Agar.

DAFTAR PUSTAKA

Association of Official Analytical Chemistry (AOAC), 2000.Official Methods of  Analysis.

Mc

Graw

Hill

Press.

Canada

Dad.2000.Bacterial Chemistry and Physiology. John Wiley & Sons, Inc., New York, p. 426. Association of Official Analytical Chemistry (AOAC), 2000.Official Methods of  Analysis. Mc Graw Hill Press. Canada. Black, J.G. 1999.  Microbiology Principles and Exploration 4th Edition. PrenticeHall Inc. New Jersey Buckle, K. A., dkk. 1987.  Ilmu Pangan.Diterjemahkan oleh Adiono dan Hari Purnomo. UI Press, Jakarta. Campbell, N. A., J.B. Reece, L.G. Mitchell. 2002.  Biologi Jilid 2 edisi Kelima. Jakarta : Erlangga Cappuccino, J. G. & Natalie S. 1983. Microbiology A Laboratory Manual . Addison-Wesley Publishing Company, New York. Dad.2000.Bacterial Chemistry and Physiology. John Wiley & Sons, Inc., New York, p. 426. Direktorat Jenderal PPM & PLP, Depkes.1996. Pedoman Teknis Sanitasi (Penyehatan) Pengelolaan Makanan Di Rumah Sakit, Jakarta. Direktorat Jenderal PPM & PLP, Depkes.1996. Pedoman Teknis Sanitasi (Penyehatan) Pengelolaan Makanan Di Rumah Sakit, Jakarta. Djide, M. Natsir. 2003.  Mikrobiologi Farmasi, Jurusan Farmasi UNHAS, Makassar. Dwidjoseputro, D. 2005.  Dasar-Dasar Mikrobiologi Cetakan ke-13.Jakarta : Percetakan Imagraph Dwijoseputro. 1987. Dasar-dasar Mikrobiologi. Jakarta : Djembatan. Fardiaz, S. 1993.  Analisis Mikrobiologi Pangan. PT. Raja Grafindo Persada., Jakarta. Fardiaz, S.  Mikrobiologi Pangan 1. Jakarta : Gramedia Pustaka Utama Lim, D. 1998. Microbiology 2nd Edition.McGraw Hill. United States of America. Fardiaz, S.,.1989. Analisis Mikrobiologi Pangan, Departemen Pendidikan dan Kebudayaan, IPB.

Fardiaz, S.,.1992. Analisis Mikrobiologi Pangan, Departemen Pendidikan dan Kebudayaan, IPB Food and Drug Administration.1998.Bacteriological Analytical Manual. 8th Edition,.FRIEDHEIM, E., AND MICHAELIS, L. 2001 J. Biol. Chem., 91,55-368. Cit. PORTER, J. R. GAUSE, G. F. 1946 Litmocidin, a new antibiotic substance produced by roactinomyces cyaneus. J. Bacteriol., 51, Hadioetomo, R. S. 1993.  Mikrobiologi Dasar Dalam Praktek: Teknik dan  Prosedur Dasar Laboratorium. PT Gramedia Pustaka Utama, Jakarta. Jurnalair.

2011. Kualitas

Air .

Diakses

di

:

(http://jurnalair.wordpress.com/2011/01/21/kualitas-air/. Diaksespada : 15April 2012) Official Chemical Method. 1979. Fish Inspection Branch Fisheries And Ocean. Science Press. Canada. Pelczar, M. J & E. C. S Chan. 1986. Dasar-dasar Mikrobiologi.UI-Press, Jakarta. Pelczar, M. J., Chan, E.C.S. 2007 dalam

Soni, Ahmad. 2010  Elements of 

 Microbiology. Mc Graw Hill Book Company. New York. Pelczar, M.J dan E.C.S. Chan. 2006.Dasar-dasar Mikrobiologi. UI Press. Jakarta. Pratiwi,

Erni.

2011.

 Pemeriksaan

Salmonella.

http://id.scribd.com/doc/54252133/tugas-bakteri2.

Diakses Diakses

di pada

:. :

Minggu, 18 November 2012 Ramona, Y., R. Kawuri, I.B.G. Darmayasa. 2007.  Penuntun Praktikum  Mikrobiologi

Umum

Untuk

Program

Studi

Farmasi

FMIPA

UNUD.Laboratorium Mikrobiologi Jurusan Biologi Fakultas MIPA Universitas Udayana. Bukit Jimbaran. Sugianto,

Tantri.

2012.

Uji

Salmonella.

Diakses

di

:http://tantri-

sugianto.blogspot.com/2012/07/uji-salmonella.html. Diakses pada : Minggu, 18 November 2012 Sutedjo, M. M. 1991. Mikrobiologi Tanah. Rineka Cipta, Jakarta. Tjay, T. H. 2003. Obat-Obat Penting. PT. Elex Media Komputindo, Jakarta.

Widiyanti, Ni Luh Putu Manik dan Ni Putu Ristianti.2004. Analisis Kualitatif   Bakteri Koliform pada Depo Air Minum Isi Ulang di Kota Singaraja  Bali.

LEMBAR PENGESAHAN

Denpasar, 15 April 2013

1. Luh Made Ari Mas Purnamasari

(.........................)

2. Ni Wayan Febi Suantari

(.........................)

3. Ni Luh Arnitasari

(.........................)

4. Ni Luh Komang Ita Purnama Sari

(.........................)

5. I Putu Mahendra

(.........................)

Penanggungjawab

Pembimbing

Mata Kuliah Bakteriologi

(Nyoman Mastra, SKM., S.Pd.,M.Si)

(

)