Laporan 3 Isolasi Dan Enumerasi

BAB I PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang Mikroba yang menguntungkan dan merugikan dapat ditemukan di semua tempat, baik pada udara, menempel di permukaan kulit tangan bahkan bisa juga ditemukan pada makanan. Buah-buahan dan sayur-sayuran segar pun bukan jaminan terbebas dari mikroba. Buah dan sayur baik segar maupun busuk yang memiliki kandungan nutrisi dapat menjadi media tumbuh mikroba misalnya pada sampel sayuran busuk (selada busuk). Mikroba dari sampel selanjutnya dibiakkan untuk diidentifikasi bentuk morfologi serta dihitung jumlah koloni yang tumbuh, oleh karena itu kami menerapkan teknik isolasi dan enumerasi.

1.2. Rumusan Masalah 1.2.1. Bagaimana morfologi koloni bakteri yang tumbuh pada media? 1.2.2. Faktor apa sajakah yang mempengaruhi perbedaan jumlah koloni bakteri dalam setiap sampel?

1.3. Tujuan 1.3.1. Mahasiswa dapat mengetahui morfologi koloni bakteri yang tumbuh pada media. 1.3.2. Mahasiswa dapat mengetahui faktor-faktor yang mempengaruhi perbedaan jumlah koloni bakteri dalam setiap sampel.

1.4. Manfaat Manfaat yang dapat diperoleh dari praktikum ini adalah para peneliti atau pekerja yang membutuhkan teknik isolasi dan enumerasi koloni mikroba dalam penelitian atau pekerjaannya, dapat lebih memahami konsep isolasi dan enumerasi koloni mikroba serta lebih terampil dalam mengaplikasikan teknik tersebut secara aseptis.

1

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

Isolasi adalah suatu cara untuk mendapatkan biakan murni dari suatu mikroba. Mikroba dapat diisolasi dari alam, misalnya sayuran busuk, buah busuk, lumpur danau atau sungai, limbah dan sebagainya. Isolasi mikroba dapat dilakukan dengan cawan gores atau cawan tuang. Sumber mikroba diberi perlakuan yang dapat merangsang pertumbuhan mikroba khususnya untuk mikroba yang diinginkan dan sekaligus menghambat pertumbuhan mikroba yang tidak diinginkan. Mikroba yang berhasil diisolasi harus dimurnikan berulang kali, sehingga koloni yang tumbuh dapat dipastikan berasal dari satu sel karena tidak semua mikroba mampu membentuk mikrokoloni yang terpisah secara sempurna. Biakan murni yang didapatkan selanjutnya dipindahkan secara steril pada biakan baru dan disebut sebagai isolat. (Yulneriwarni, 2008). Isolat yang telah dipindahkan kemudian diinkubasi selama 24-48 jam (temperatur 37oC) kemudian dilakukan enumerasi. Enumerasi adalah suatu teknik penghitungan jumlah mikroba dalam suatu media tanpa mengidentifikasikan jenis mikroba (bakteri, jamur, yeast) yang bertujuan untuk menentukan jumlah sel dari suatu kultur bakteri secara kuantitatif. Isolasi dilakukan dengan menggunakan taoge agar dan dilakukan pemurnian untuk mendapatkan koloni tunggal dengan metode gores (streak plate) yaitu quadrant streak (Method B) kemudian dilakukan pengamatan morfologi masing-masing koloni tunggal yang tumbuh pada media agar tersebut. Jumlah mikroba yang tumbuh pada media ditunjukkan oleh Colony Forming Units (CFU) atau satuan bentuk koloni. Jumlah normal koloni pada biakan adalah 30-300 koloni. (Herbert, 1978; Hastuti, 2007) Mikroba penyebab makanan busuk dapat ditemukan di tanah, air dan udara baik dalam kondisi hangat maupun lembab. Tumbuhnya mikroba di dalam bahan pangan dapat mengubah komposisi bahan pangan, dengan beberapa cara yakni: menghidrolisis pati dan selulosa menjadi fraksi yang lebih kecil, menyebabkan fermentasi gula, menghidrolisis lemak, mencerna protein, menghasilkan bau busuk dan amoniak. Beberapa mikroba dapat membentuk lendir, gas, busa, warna, asam, toksin, dan lainnya. (Susiwi, 2009) Sayuran merupakan salah satu mikronutrien yang penting bagi pertumbuhan. Sayuran yang segar pasti memiliki kandungan bakteri yang lebih sedikit daripada sayuran yang busuk karena sayuran yang busuk pasti terkontaminasi berbagai macam bakteri, apabila didasarkan pada SK Dirjen POM No. 03726/B/SKNII/89 maka kandungan bakteri aerob yang diizinkan maksimum adalah 106 koloni/g sehingga jika suatu makanan (sayuran) yang mengadung jumlah koloni bakteri melebihi batas ambang tersebut maka makanan tersebut dikatakan tidak layak konsumsi. (Harsojo, 2000; Sinaga, 2000; Andini, 2000)

2

BAB III METODE PENELITIAN

3.1. Waktu dan Tempat Penelitian Kegiatan praktikum isolasi dan enumerasi ini dilaksanakan pada: Hari, tanggal

: Selasa, 25 September 2012

Pukul

: 8.50 – 10.40 WIB

Tempat

: Laboratorium Mikrobiologi Gedung C9 FMIPA – UNESA

3.2. Alat dan Bahan Alat dan Bahan yang digunakan dalam praktikum isolasi, enumerasi dan pemurnian mikroorganisme diantaranya : a. Alat 

Spet/suntikan (7 buah)



Cawan Petri (6 buah)



Pembakar spirtus



Jarum inokulasi/Ose



Lemari pendingin



Pinset



Incubator



Colony counter



Neraca Ohaus



Vortex

b. Bahan 

Sayuran (selada) busuk (1 g)



Taoge agar (150 mL dan 100 mL)



Akuades (9 mL x 7=63 mL)

3.3. Metode Prosedur yang pertama untuk isolasi/penanaman mikroorganisme dilakukan dengan cara sayuran busuk (selada) ditimbang sebanyak 1 g dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang telah berisi 9 mL akuades steril (disebut juga suspensi pengenceran 10-1). Setiap langkah tersebut dilakukan secara aseptis. Suspensi pengenceran 10-1 dihomogenkan terlebih dahulu kemudian diambil 1 mL dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi berisi 9 mL akuades steril (disebut suspensi pengenceran 10-2). Langkah tersebut dilakukan berulang sampai mendapatkan sampel 3

dengan suspensi pengenceran 10-7. Sampel tersebut secara aseptis diambil sebanyak 1 mL dari pengenceran 10-5, 10-6 dan 10-7 untuk kemudian dimasukkan ke dalam cawan Petri steril secara terpisah dengan menggunakan cara duplo (satu sampel dari setiap pengenceran ditanam pada dua cawan Petri masing-masing sebnayak 1 mL). Media taoge agar yang terlebih dahulu dipanaskan kemudian didinginkan hingga suhunya turun menjadi kurang lebih 45oC. Media taoge agar selanjutnya dituangkan ke setiap cawan petri yang telah berisi sampel. Sampel dan media tersebut dihomogenkan dengan cara menggerakkan cawan petri membentuk angka 8 sehingga dihasilkan biakan. Biakan tersebut diinkubasi dengan posisi cawan petri terbalik pada suhu antara 28-30oC selama 24-48 jam. Koloni bakteri yang terbentuk diamati morfologinya. Prosedur yang kedua untuk enumerasi/penghitungan mikroorganisme yang terdapat pada sampel dilakukan dengan cara koloni yang terbentuk setelah diinkubasi pada setiap cawan petri diamati dan dihitung jumlahnya. Jumlah mikroorganisme yang terdapat pada sampel uji ditentukan berdasarkan Standart Plate Count.

4

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1. Hasil Hasil pengamatan morfologi dan enumerasi koloni yang tumbuh pada media kami sajikan dalam bentuk tabel berikut ini:

5

6

Tabel 4.2. Data Enumerasi Kelas Jumlah Koloni Per Pengenceran Sampel

Jumlah Koloni -5

-6

10

Busuk

-7

10

10

(CFU/gr)

1

2

1

2

1

2

Kangkung

165

138

45

54

TBUD

TBUD

1,5 x 107

Selada

TBUD

TBUD

106

93

72

52

1,0 x 108

Bayam

235

270

4

5

2

3

2,5 x 107

Daun Bawang

64

92

7

9

3

4

7,8 x 106

Manisa

65

63

19

7

2

1

6,4 x 106

Sawi Putih

55

73

63

55

34

17

6,4 x 106

Wortel

12

6

3

1

2

1