LABORATORIO N°5 DE MICROBILOGIA SANITARIA

April 22, 2019 | Author: Robert Lopez | Category: Bacteria, Microbiology, Ciencias de la vida y de la tierra, Biology, Life Sciences
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ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA...

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ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA 1. OBJETIVOS



Demost Demostrar rar el efecto efecto de difere diferente ntes s conce concentr ntraci acion ones es de crista cristall violet violeta a sobre bacterias Gram positivas y Gram negativas.



Demostrar como las concentraciones en que se diferencia cada crisol varia el crecimiento de microorganismos.



Hacer la tinción Gram para determinar si la bacteria es cocos o bacilos según los pasos que hicimos con anterioridad.



Saber a qué tipo de agrupación pertenece dicha bacteria.

2. FUNDA FUNDAME MENT NTO O TEO TEORIC RICO O Cristal violeta Los colorantes colorantes del grupo trifenilmetano trifenilmetano presentan presentan una marcada marcada acción acción bacteriosttica selectiva sobre las bacterias Gram positivas! en diluciones que aparentemente no afectan a las Gram negativas. "sta propiedad se aprove aprovech cha a median mediante te la incorp incorpora oració ción n de alguno alguno de esos esos colora colorante ntes s en medios de cultivo con el fin de facilitar el aislamiento de bacterias Gram negativas. "ntre los colorante colorantes s usados usados con estos propósitos propósitos estn# cristal violeta! fucsina bsica! verde brillante y verde malaquita. Las condi condicio ciones nes de salud salud en una nación nación estn estn determ determina inadas das!! en gran gran parte! por la capacidad de sus habitantes para controlar efica$mente los prob proble lema mas s micr microb obia iano nos. s. La cost costum umbr bre e diar diaria ia de puri purifi fica carr el agua agua!! pasteuri$ar la leche o la conservación de alimentos! son métodos para controlar las poblaciones microbianas. Los microorganismos son también capace capaces s de destru destruir ir materi materiale ales s valios valiosos os como como madera madera y fibras fibras te%tile te%tiles! s! causando pérdidas que necesitan evitarse con medidas eficaces. La tinción de Gram es una técnica diferencial comúnmente empleada en el diagnostico microbiano! fue descubierta por Hans &hristian Gram en '((). La mayor parte parte de de las muestras sometidas a e%amen e%amen cuando se sospecha infección infección bacterian bacteriana a deben ser e%tendida e%tendidas s en frotis sobre laminilla laminillas s de vidrio! te*idas e%aminadas en el microscopio.

Los reactivos empleados en la tinción de Gram son el cristal violeta +colorante bsico,! lugol+mordiente,! alcohol cetona+decolorante, y safranina+colorante de contraste. "l crista cristall violet violeta a sirve sirve como como colora colorante nte bsic bsico o unién uniéndos dose e a la pared pared celula celular  r  bacteriana! con ayuda del mordiente +lugol, que refuer$a la unión del colorante. Las bacterias Gram positivas! debido a la estructura y composición bioqu-mica de su pared celular retienen el compleo cristal violeta/lugol y aun después del tratamiento con el colorante bsico! por lo que se observa de color purpura o violeta al microscopio. Las bacterias Gram negativas pierden el colorante bsico cuando son tratados con el decolorant decolorante e debido debido a que el alcohol alcohol disuelve el contenido contenido lip-dico lip-dico de la pared celular +lo que aumenta la permeabilidad celular,! dando como resultado la pérdida del compleo cristal vileta/lugol. Las bacterias decoloradas captan ento entonc nces es el colo colora rant nte e de cont contra rast ste! e! ra$ó ra$ón n por por la cual cual esta estas s bact bacter eria ias s se observan de color roo al microscopio. "l cristal violeta es un colorante que penetra la pared celular de bacterias Gram positivas y negativa. 0osteriormente se agrega el lugol que es mordiente y se forma un compleo con el cristal violeta. Durante el proceso de decoloración con alcohol/acetona! la gruesa pared de los Gram positivos impide la salida del colorante manteniendo la coloración violeta. "n cambio! por el alto contenido lip-dico de la pared de los Gram negativos! el alcoho alcohol/a l/acet cetona ona genera genera poros! poros! por los cuales cuales!! escapa escapa el crista cristall violet violeta! a! la bacteria se decolora y ti*e de color roo con el colorante de contraste. ¿or !"# "$as %a&terias se ti'e$ (e violeta ) otras rosa(as* Las (i+ere$&i (i+ere$&ias as %,si&as %,si&as que nos permit permiten en ver las bacter bacterias ias de distin distintos tos colores residen en la -are( %a&teria$a! %a&teria$a! las paredes celulares de bacterias de tipo gramnegativo poseen una capa lip-dica e%terna la cual se ti*e con cristal violeta al igual que la pared de las células de tipo Gram positivo pero con la diferencia de que estas no tienen una esa capa lip-dica! que al ser tratada con alcoho alcoholl desap desapare arece ce +debid +debido o a que que el alcoho alcoholl es un disolv disolvent ente e orgni orgnico co y disuelve la pared lip-dica, y por tanto la célula queda de nuevo sin te*ir y para poder observarla basta con a*adir safranina +colorante, que se quedar en la capa de mureina que ha quedado ahora e%puesta.

 

1igura' "n la figura ' se observa que las Gram+2, por tener varias capas superpuestas en paralelo de peptidoglucano se ti*en violeta y las Gram+3, por tener una sola capa de peptidoglucano y por su capa e%terna se ti*e roi$o.

. METODOLO/IA

Materiales

E!"i-o

'. 0ipetas 4. 5ubos de prueba 6. 0icetas con agua destilada ). 7agueta 8. 9lgodón :. &anastilla ;. Gradilla (. 1rascos de vidrio echero bunsen Gradilla y tr-pode 9utoclave



echamos el agar en un vaso precipitado y agregamos 6??ml de agua! luego mover con una vagueta para disolver  el agar nutritivo.



0ara disolver meor el agar nutritivo calentarlo con el mechero.



Luego colocar el agar nutritivo en 4? tubos de prueba! conteniendo cada uno '8ml! tapar los tubos con algodón.



Después colocar los tubos en una canastilla y colocarlo en el autoclave. 0ara la esterili$ación de agar.



"sterili$ar los materiales a usar en el horno.

Distri%"&i$ (e los e(ios (e &"ltivo0 •

• • • • • •

) tubos con agar nutritivo estéril! conteniendo '8ml cada tuboB para cada grupo. 6 tubos con < ml de agua destilada. Solución cristal violeta de '#'??? 6 pipetas de 'ml para repartir el cristal violeta luego de la dilución. ) placas estéril para cada grupo ' inoculador para cada grupo &olonias 9 y = para la muestra de bacterias. ro&e(iie$to



>antener ) tubos con agar nutritivo fundido en el ba*o >ar-a a )8C&.



"n 6 tubos de prueba y echar icrobiolog-a. &uarta edición +segunda edición en espa*ol,

ANE5OS CUESTIONARIO 1. 6"# es "$ a7e$te %a&teriost,ti&o ) !"e !"iere (e&ir "$a a&&i$ %a&teriost,ti&a sele&tiva* .I$(i!"e al7"$as a-li&a&io$es -r,&ti&as (e este +e$e$o. Se observa cuando se inhibe la proliferación pero no tiene lugar la muerte celular. U$ a7e$te %a&teriost,ti&o#

Enhibe la s-ntesis de prote-nas.  9ctúa uniéndose a las ribosomas 0uede actuar el efecto dilución. "emplo# Streptomicina! 5etraciclina! &loramfenicol 5etraciclinas y estreptomicinas +6?S, &loramfenicol +8?S, La acción bacteriosttica se fundamenta en la inhibición del desarrollo microbiano mediante el bloqueo de diferentes factores de reproducción. o las mata directamente! pues una población de bacterias sin capacidad de reproducción o con capacidad disminuida para la misma es una población condenada a su desaparición. "n cambio un agente bactericida es aquel capa$ de matar a las bacterias. A&&i$ %a&teriost,ti&a sele&tiva0 "s aquel efecto que sólo inhibe el crecimiento o reproducción de cierto grupo de microorganismos! mientras que no afecta o afecta en menos proporción a otro grupo de microorganismos. "s por ello que se agregan a medios de cultivos agentes bacteriostticos para que éstos tengan carcter selectivo. A-li&a&io$es0 &ontrol con agentes qu-micos

Son sustancias qu-micas que tienen la capacidad de inhibir o matar a los microorganismos. Destr"&tores

I$8i%i(ores

=acterias

=actericidas

Ba&terioest,ti&os

Hongos

1ungicida

1ungistaticos

7irus

7irucida

7irustaticos

"l aOH se utili$a en la industria del vino para limpiar las cubas de madera. "l o$ono es utili$ado desde antes para tratamiento de agua! ahora se ha e%tendido su utili$ación y se aplica para tratar ambientes e incluso podemos tratar directamente sobre el organismo con fines terapéuticos +concentraciones de ?.?' ppm a menos,. Los antibióticos son usados para preservar los alimentos! as- tenemos las tetraciclinas.  9gentes bacteriostticos se utili$an en la industria te%til como protección de materiales. "n la industria del maquillae para las cremas! lociones para después de afeitar! en perfumes. Sustancia o 9gente capa$ de actuar sobre los microorganismos! ya sea inhibiendo su crecimiento o causando su muerte. N9MO"S 09N9 &O5NOL9N >E&NOONG9ES>OS =enéficos que generan el control d microrganismos por estos agentes#







0revenir la transmisión de las infecciones y las enfermedades. 0revenir la contaminación o la proliferación de microorganismos perudiciales. "vitar el deterioro o destrucción de materiales por los microorganismos.

ACCION OLI/ODINAMICA DE LOS METALES ESADOS

1. OBJETIVOS 

Demostrar la acción oleodinmica de algunos metales.



Denotar las diferencias de cada grupo para ver las diferencias y similitudes y as- poder saber en qué se equivocó cada grupo.

2. FUNDAMENTO TEORICO A&&i$ oli7o(i$ai&a (e los etales -esa(os.

Los iones de algunos metales pesados en altas diluciones son capaces de eercer una acción tó%ica sobre las bacterias y otros microorganismos. Si se coloca una moneda o un tro$o de cobre debao o sobre un medio de cultivo sólido recién inoculado con un microorganismo! luego de incubar se puede observar que no hay crecimiento en la $ona alrededor del metal. "sta es la $ona oligodinmicaB con frecuencia las colonias en el borde del halo de inhibición son de mayor tama*o que en el resto de la placa! debido a que tuvieron una mayor disponibilidad de nutrientes que no fueron utili$ados en la $ona sin crecimiento.  9cción oligodinmica! son activos en muy baas concentraciones +ppm,. Enactiva espec-ficamente en$imas claves al reaccionar con grupos SH. Son muy tó%icos y su actividad disminuye con la e%istencia de fluidos biológicos. METALES ESADOS 9 SUS COMUESTOS La mayor-a de metales pesados! ya sean solos o en ciertos compuestos! causan da*o a los microorganismos. Los ms efectivos son el mercurio! plata cobre.

Metales -esa(os :a&&i$ oli7o(i$,i&a;

La acción oligodinmica es la propiedad que tienen ciertos metales en cantidades sumamente peque*as! en particular la plata! de eercer efectos letales sobre las bacteriasB el término proviene de dos palabras palabras griegas oligos! que significa peque*o! poco y dynamis! que significa! fuer$a! poder. "ste fenómeno se demuestra fcilmente en el laboratorio poniendo un peda$o de metal limpio +plata o cobre, sobre una placa de cultivo. Después de la incubación! se ver una $ona de inhibición +sin desarrollo, rodeando al metal. La cantidad de metal involucrada en el efecto inhibidor se puede e%presar en partes por millón. Se cree que la eficacia de estas peque*as cantidades de metal se debe a la gran afinidad de que tienen ciertas prote-nas celulares por los ionesB se acumulan grandes cantidades en las células a partir de las soluciones diluidas. Los metales con actividad oligodinmica! particularmente la plata! se han usado en diferentes aplicaciones con el propósito de controlar las poblaciones microbianas como el tratamiento de los suministros de agua! preparación de art-culos antisépticos como vendaes y ungPentos! y la impregnación de diferentes teidos. La acción oligodinmica proporcionar un acercamiento notable para el control de los microorganismos y al parecer se han reali$ado muchos dise*os y art-culos tomando como base este fenómeno. Co-"estos (e etales -esa(os >uchos compuestos de metales pesados son útiles como germicidas o agentes antisépticos. Los compuestos de metales pesados que ms descuellan son los de mercurio! plata y cobre. Los metales pesados y sus compuestos actúan contra los microbios al combinarse con las prote-nas celulares y desnaturali$arlas. "n el caso del cloruro de mercurio la inhibición es directamente sobre las en$imas que contienen grupos sulfhidrilos. Las sales de los metales pesados también precipitan las prote-nas! y a grandes concentraciones estas sales causan la muerte de las células. Sin embargo! la dilución mayor a la cual algunos de estos compuestos muestran su acción bactericida o bacteriosttica sugiere interferencias ms sutiles con los mecanismos celulares normales. Me&a$iso (e (esi$+e&&i$ e(ia$te io$i. RECOMENDACIONES 

5ener cuidado cuando desinfectamos la moneda! ya que la placa esta al aire libre y se pude contaminar por agentes e%ternos.



desinfectar nuestras manos! en este caso no estaban desinfectadas y as- agarramos la moneda de die$ céntimos.

?. BIBLIO/RAFIA I$+ore >E&NO=EOLOGE9. 9utor# >ichael U 0elc$ar. 4da "dición 'e$cla =ordelesa,. Los compuestos de $inc también son fungicidas por lo que se utili$an para tratar el pie de atleta.

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