Laboratorio de Mohos y Levaduras

UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS LABORATORIOS DOCENTE: YUMAR E. RUIDIAZ MENDEZ. MENDEZ. RECUENTO DE MOHOS Y LEVADURAS. 1 OBJETIVO:

Determinar la presencia de

hongos y levaduras en diferentes muestras de

alimentos.

2 ALCANCE:

Abarca la determinación

de hongos y levaduras en diferentes muestras de

alimentos.

3 RESPONSABILIDAD: El encargado de hacer hacer cumplir el procedimiento procedimiento de análisis es el docente docente del área de microbiología de alimentos, el cual debe tener tener una formación formación de microbiólogo o bacteriólogo con una experiencia de 2 años como mínimo.

4 DOCUMENTOS DE REFERENCIA : 4.1. HOLGUIN, M. et, al Manual de técnicas de de análisis para el control de calidad calidad microbiológico microbiológico para consumo humano. División de laboratorios laboratorios de alimentos y bebidas alcohólicas INVIMA INVIMA 2001. 4.2. LUNA, G. Manual Operativo de análisis análisis microbiológico para para alimentos universidad de Pamplona 1998.

5. CONTENIDO: 5.1. FUNDAMENTO: Este método consiste en determinar y hacer el recuento de hongos y levaduras los cuales se ponen en evidencia en condiciones desfavorables para el crecimiento bacteriano como ph bajo, alto contenido de sales y azucares, bajo contenido de humedad y baja temperatura de almacenamiento.

5.2. DEFINICIONES: 5.2.1  Agar OGY(Agar oxitetraciclina glucosa extracto de levadura) medio que permite el crecimiento de mohos y levaduras y no de bacterias por la presencia de un antibiótico como la oxitetraciclina. 5.2.2. Agar extracto de levadura glucosa cloranfenicol: medio que esta constituido de un un azúcar, levaduras y un antibiótico el cual inhibe el crecimiento de bacterias y permite el crecimiento de hongos y levaduras. 5.2.3. UFC: Unidades formadoras de de colonias.

5.3. CONDICIONES GENERALES:

Los hongos son organismos eucarióticos los cuales pueden ser unicelulares o pluricelulares. pluricelulares. Las levaduras son unicelulares unicelulares y crecen de forma sencilla sencilla en la naturaleza con algunas excepciones, los mohos son pluricelulares que forman hifas y que se pueden observar macroscópicamente de aspecto algodonoso y velloso sobre la superficie que contaminan. Los mohos y las levaduras tienen características características similares a las bacterias bacterias cuando contaminan los alimentos, tales como la capacidad de alteración y la producción de metabolitos tóxicos.

5.4. 5.4.1. 5.4.2. 5.4.3. 5.4.4.

MATERIALES Y REACTIVOS: Cajas de petri estériles Beaker estéril Erlenmeyer estéril Agar OGY

5.4.5. 5.4.6 5.4.7 5.4.8. 

Agar extracto de levadura glucosa cloranfenicol. Solución de oxitetraciclina al 0.1% Solución de gentamícina al 0.05% Pipetas

5.5. EQUIPOS: 5.5.1. Incubadoras 5.5.2. Contador de colonias 5.5.3. Incubadora a 35ºC +/- 2ºC. 5.5.4. Estufa 5.6. 5.6.1. 5.6.1.1. 5.6.1.2. 5.6.1.3. 5.6.1.4. 5.6.1.5.

PROCEDIMIENTO: RECUENTO DE MOHOS Y LEVADURAS

Mezclar muy bien la muestra ( liquida) para asegurar su homogenización. Desinfectar con alcohol al 75% el sitio por donde se vaya a extraer la muestra.  Abrir asépticamente ( con el mechero en medio) y adecuadamente la muestra. Si es sólida tomar porciones de diferentes sitios de la muestra. Pesar 11 gramos de la muestra en balanza analítica si es sólida, sobre un papel graff estéril o medir 11 mililitros si es liquida en recipiente estéril. 5.6.1.6. Macerar, picar o triturar. 5.6.1.7.  Añadir al recipiente de dilución que contiene 99 ml de agua peptonada para obtener la dilución de 10 . 5.6.1.8. Mezclar al agitar vigorosamente el recipiente para homogenizar. 5.6.1.9. Preparar la dilución 10 trasfiriendo 1 ml de la dilución 10  a un tubo de ensayo que contiene 9 ml de agua peptonada, agitar cuidadosamente. 5.6.1.10. Preparar la dilución 10 trasfiriendo 1 ml de la dilución 10  a un tubo de ensayo que contiene 9 ml de agua peptonada, agitar cuidadosamente. 5.6.1.11. Transferir por duplicado alícuotas de 1 ml de cada una de las diluciones consecutivas en cajas de petri estériles. 5.6.1.12. Verter en las cajas de petri, 15 ml de agar OGY fundido y mantenido a 45ºC 5.6.1.13. Mezclar el inoculo con el medio de cultivo fundido . No debe transcurrir mas de 20 minutos entre la realización de las diluciones y el vertido del medio. La manera mas indicada de mezclar el inoculo con el medio es la siguiente: Mover la caja de arriba hacia abajo 5 veces Rotar la caja cinco veces en el sentido de las agujas del reloj Mover la caja 5 veces haciendo Angulo recto sobre el movimiento Rotar la caja cinco veces en el sentido contrario de las agujas del reloj. -1

-2

-1

-3

-2

5.6.1.14. Hacer control de esterilidad del medio de cultivo incubando una caja que contenga Agar OGY.

5.6.1.15. Hacer control de esterilidad del agua peptonada 0.1 % incubando una caja que contenga 1 ml de agua peptonada y agar OGY . 5.6.1.16. Una vez solidificado el medio de cultivo, invertir las placas e incubarlas a 22ºC +/- 2ºC ( temperatura ambiente) durante 5 -7 horas.

5.7. CALCULO E INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS: Seleccionar las dos cajas correspondientes a la misma dilución que presenten entre 20 y 100 colonias. Contar todas las colonias de cada caja. Hallar la media aritmética de los dos valores y multiplicarlos por el factor de dilución.

Si las cajas de las diluciones consecutivas presentan recuentos menores de 20 y mayores de 100 colonias, contar las cuatro cajas, calcular el recuento para cada una de las diluciones y sacar el promedio entre las dos. Se reporta como” unidades formadoras de colonias ( ufc) /g o ml.

5.8 ANEXOS:

N.A

5.9. REGISTRO: Registro de verificación y aprobación.