LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA Tincion y Hongos
April 8, 2023 | Author: Anonymous | Category: N/A
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UNIVERSIDAD MARIANA FACULTAD DE INGENIERÍA INGENIERÍA DE PROCESOS MICROBIOLOGIA
LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA
TECNICAS DE COLORACION Fajardo Jojoa Kelly Stefania Zambrano Vallejo Juan Ernesto Andrade Barco Daniel Esteban Eraso Solarte Jhovan Andrés Andrés RESUMEN Las técnicas de coloración o fijación nos permiten observar de manera correcta las bacterias y sus diferentes estructuras celulares, la observación se hará a través del microscopio con la suspensión de microrganismos extendidas en portaobjetos (frotis), secadas y fijadas; la fijación de la muestra se puede hacer a temperatura tempe ratura ambiente o utilizando el calor para poder teñirla.
Palabras Clave: Coloración, Técnicas, Observación, Bacterias, Coloración de Gram. 1. INTRODUCCION
microorganismos, pero no las estructuras internas. La fijación química con agentes
La tinción es una técnica que permite incrementar el contraste entre la célula y su entorno, contribuyendo a mejorar la imagen
observada.
En
como etanol, formaldehido y ácido acético entre otros, se utiliza para preservar las estructuras celulares.
Microbiología
todas las tinciones se realizan a partir de la
La fijación por calor es la más
suspensión de microrganismos extendidas
utilizada para la observación de bacterias,
en portaobjetos (frotis), secadas y fijadas.
consiste en pasar el portaobjetos, con la suspensión bacteriana extendida y seca, a
La fijación por calor preserva la morfología
externa
de
los
través de la llama del mechero.
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TIPOS DE COLORACIONES
Colorantes de Gram.
Azul de metileno.
. Simple: se utiliza un solo
Nigrosina o tinta china.
colorante, y permute determinar la forma, tamaño y tipo.
Agua destilada.
Microscopio.
Mechero.
Diferencial: aplicación de dos
colorantes, las más utilizadas la de Gram y
la de ácido alcohol resistencia.
.
Pinzas.
Pipeta Pasteur.
Botella lavadora.
. De estructuras: para colorear
Recipiente
.
con
estructuras como flagelos, capsulas.
desinfectante
solución
(hipoclorito
de
sodio)
Micro químicas: para detectar
Lugol.
compuestos químicos.
Etanol-cetona 95%
. Negativa: lamina con fondo oscuro
Fucsina - Safrina
(tinta china y agua), las bacterias brillan. En esta práctica se aplicarán dos
. De ácido resistencia: separa las
técnicas de coloración:
la coloración
bacterias que se decoloran de las que no se
simple y la coloración diferencial (Tinción
dejan decolorar con el ácido.
de Gram).
MATERIALES Y MÉTODOS
Coloración simple
Coloración simple y diferencial
Ponemos una gota de agua destilada
Cultivo
sobre un portaobjetos, calentamos un asa de
Staphylococcus
aureus.
Cultivo de Escherichia Coli.
Portaobjetos y cubreobjetos.
Asas microbiológicas
microbiológica hasta el rojo vivo para esterilizar, y la enfriamos en el medio de cultivo.
Tomamos
una
muestra
del
microorganismo y la extendemos sobre el portaobjetos,
la
homogenizamos;
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utilizando
unas
pinzas
se
coge
el
portaobjetos y utilizando la llama del mechero secamos el agua para fijar el microorganismo, tenemos cuidado de no quemar la muestra. Dejamos enfriar el portaobjetos y añadimos una gota de azul
Figura 1 ASA AL ROJO VIVVO
de metileno por 5 minutos. Transcurrido los 5 minutos, lavamos el
portaobjetos
con
agua
destilada,
secamos la lámina y ponemos encima de la muestra un cubreobjetos. Observamos la muestra.
Figura 2 TOMA DE MUESTRA
Figura 3 SECADO DE MUESTRA
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Tinción de Gram Tomamos muestra del cultivo a observar, luego de haber calentando al rojo vivo las asas microbiológicas, posteriormente se enfrían en un costado interno de la caja Petri y tomamos la muestra, depositamos 2 gotas de agua destilada en un portaobjetos y ponemos la muestra obtenida y procedemos a secado de la muestra.
Figura 5 LAVADO CON AGUA DESTILADA Agregamos dos gotas de lugol, esperamos 1 minuto y lavamos con agua
Figura 4 SECADO
destilada.
Luego del secado y reposo de la muestra adicionamos dos gotas de violeta de genciana y la dejamos un minuto, después del minuto lavamos con agua destilada.
Figura 6 ADICION DE LUGOL Lavamos la muestra con etanol por 30 segundos (s), lavamos nuevamente con agua destilada.
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RESULTADOS: Observe todas las bacterias con las diferentes coloraciones, determine su morfología y determine si son bacterias Gram positivas o bacterias Gram negativas. Dibuje lo observado.
Figura 7 LAVADO CON ETANOL
El
Añadimos safranina dejamos actuar por un minuto, lavamos con agua destilada
dibujo
representa
al
Staphylococcus en un lente 4X. Sin forma definida, bacteria Gram +.
y secamos el exceso de líquido con una toalla
absorbente,
cubreobjetos
y
ponemos
observamos
en
el el
microscopio.
Figura 9 STAPHYLOCOCCUS EN UN LENTE 4X. Figura 8 ADICION DE FUCSINA O SAFRINA
Escherichia coli, lente de 4X sin forma definida. Bacteria Gram observar en microscopio.
Figura 10 E. COLI - 40X
al
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Microorganismos
vistos
2. ¿Cuál es el fundamento de la
en
coloración de Gram?
microscopio.
Tinción de Gram Esta tinción diferencial fue propuesta por el medico danés Christian Gram, que examinando tejido pulmonar de enfermos e nfermos fallecidos por neumonía
observó
que
la
bacteria
Streptococcus pneumoniae, presente en
FIGURA 11 . ESCHERICHIA COLI 40X
los
pulmones,
conocido
retenía
como
el
colorante
marrón
Bismark
(sustituido posteriormente por el cristal violeta), mientras que el tejido pulmonar no era capaz de retener el colorante. Es utilizada
la
tinción
de
diferencial
forma
rutinaria
más y
prácticamente la primera prueba a la que
FIGURA 12 STAPHYLOCOCCUS AUREUS 40X
se someten las muestras de cualquier origen antes de su estudio. Proporciona una información esencial, sobre la forma, tamaño y agrupación celular, como del tipo y composición de la pared que presentan
las
bacterias.
La
tinción
de Gram divide a las bacterias con pared del Dominio Bacteria en dos grandes grupos: bacterias con pared de tipo Gram
FIGURA 13 STAPHYLOCOCCUS AUREUS 100X
positiva y bacterias con pared de tipo Gram negativa.
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La
y
de los microorganismos a esta tinción,
organización de la pared celular en estos
parece que q ue la diferencia se debe tanto a la
dos tipos de organismos hace que ambos
estructura física como a la composición c omposición de
grupos respondan de manera distinta, así
la pared celular, en bacterias Gram
mientras las bacterias Gram positivas
positivas la la gruesa capa de péptidoglucano
mantienen y conservan el complejo cristal
con abundantes entrecruzamientos parece
violeta-iodo, las bacterias Gram negativas
contribuirá la retención del colorante
se decoloran rápidamente con la aplicación
fundamental, cristal violeta, mientras que
del alcohol, admitiendo el colorante de
en bacterias Gram negativas la delgada
contraste que proporciona un color entre
capa de peptidoglucano junto con la
rosa y rojo que contrasta con el intenso
abundancia de lípidos en la membrana
color violeta.
externa de la pared celular incrementan la porosidad y por ello, contribuyen a la
Se
diferente
han
estructura
propuesto
diferentes
explicaciones para justificar la respuesta
pérdida del colorante fundamental fundamental después de la decoloración con alcohol.
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LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA
LOS HONGOS RESUMEN La observación macroscópica y microscópica de los hongos nos permiten establecer características de este tipo de microorganismos a simple vista y con imágenes aumentadas para distinguir las estructuras que los componentes como hifas, conidias, esporas y esporangios.
Palabras Clave: Microorganismos, Hongos, Características, Observación, Mohos.
Son capaces de crecer en condiciones extremas y llegar a formar micro toxinas.
INTRODUCCIÓN Los hongos son microorganismos eucarióticos (tienen el núcleo rodeado por una membrana) unicelulares o pluricelulares que no n o forman tejidos y sus células se agrupan formando un cuerpo filamentoso muy ramificado. El conjunto de filamentos de un hongo se llama micelio. Los
hongos
tienen
alimentación
heterótrofa, puesto queno notienen puedenclorofila. realizar la fotosíntesis porque Su forma de reproducción puede ser asexual, por esporas, y sexual. Pueden tener forma redonda, ovalada o en forma de fibras. Las fibras pueden formar un entramado o red, visible a simple vista, como por ejemplo los mohos en los alimentos. Los hongos viven en lugares húmedos, con abundante materia orgánica en descomposición y en ausencia de luz sola
Los hongos tienen una gran importancia económica: las levaduras son las levaduras las responsables de la fermentación de la fermentación la la cerveza cerveza y el el pan, pan, y el cultivo de setas de setas como las trufas. las trufas. Desde 1940 se han empleado para producir industrialmente antibióticos, industrialmente antibióticos, así como enzimas como enzimas (especialmente proteasas) (especialmente proteasas).. Los hongos se dividen en mohos y levaduras.
Mohos Los mohos son microorganismos eucariotas no fotosintéticos, que se caracterizan por formar un entramado filamentoso conocido como micelio.
Morfología. A partir de las esporas o células reproductoras, se desarrolla una agrupación celular en forma de filamentos llamados hifas, que se agrupan formando el micelio o cuerpo vegetativo.
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El micelio se desarrolla de forma radial, colonizando el sustrato de forma superficial o por el interior, tomando distintos aspectos: algodonoso, seco, húmedo.
Los mohos invaden con rapidez cualquier sustrato, gracias a su eficacia en la diseminación, a un crecimiento rápido y a que poseen una rica carga enzimática.
La mayoría de los mohos se desarrollan entre 15 y 30 °C con un óptimo de crecimiento alrededor de 20-25 °C,
Clasificación de los Hongos: existen varias clasificaciones de los Hongos, las más actualizadas las simplifican y les da a los hongos cinco divisiones
Basidiomicetos Ascomicetos Glomeromicetos
Zigomicetos Quitridiomicetos Por las características de las esporas sexuales:
Los filamentos de los cuales están compuestos los mohos se llaman Hifas y presentan 3 formas: 1. Septadas o cenocíticas 2. Sepatadas con mononucleadas 3. Septadas con plurinucleadas.
Aspergillus
es un hongo filamentoso hialino ubicuo, productor de enfermedades.
células células
Fusarium: Extenso género de micro hongos filamentosos ampliamente distribuido en el suelo y en asociación con plantas.
Las levaduras son unicelulares, esféricas y ovales, no forman hifas, ni micelio.
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Fruta con hongos. ➔ Cinta pegante transparente ➔
Penicillium
tijeras.
Es un hongo filamentoso hialino, saprófito perteneciente al filo Ascomycota.
y
PROCEDIMIENTO: La práctica de hongos se limitó a realizar en nuestro caso con los hongos presentes en la papaya.
Mucor Hongo filamentoso, hifas largas, no septadas y curvas.
MATERIALES Y MÉTODOS Cajas con hongos filamentosos
➔
➔ ➔
➔ ➔ ➔ ➔ ➔
➔
(Penicillium, Aspergillus, Fusarium) Azul de lactofenol. Portaobjetos y cubreobjetos. Estiletes. Porta y cubreobjetos. Mechero. Microsocopio. Beaker con solución desinfectante (hipoclorito de sodio 1%). Pan con hongos.
A simple vista el hongo tenía una forma ovalada con zonas negras y blancas y en la periferia gris oscuros, con textura aterciopelada y suave. En un portaobjetos extendimos la muestra que obtuvimos de la papaya, luego de que el estilete estuvo al rojo vivo y fue enfriado e nfriado y previamente se adiciono una gota de azul de lactofenol en el portaobjetos, cubrimos la muestra con un cubreobjetos y procedemos a observar la muestra en el microscopio. Observamos la muestra.
RESULTADOS: Dibuje lo que observa en los diferentes objetivos y señale principales estructuras observadas. 1.
Las estructuras que se observan son filamentosas, alargadas y otras curvas. Unas colonias con estructuras circulares.
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Identifique el tipo de hifa y órganos de reproducción del hongo. 2.
En la muestra pudimos observar: Hifas septadas con células poli nucleadas, esporangios y esporangiosporas.
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