LABORATORIO DE HEMOSTASIA.pdf

UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA FACULTAD DE MEDICINA DEPARTAMENTO DE FISIOLOGÍA Y BIOQUÍMICA MANUAL DE LABORATOR L ABORATORIO IO HEMOSTASIA NORMAS PARA EL INGRESO AL LABORATORIO: Leer la guía de laboratorio, siempre habrá quiz antes de empezar. Elementos de protección personal (bata limpia y planchada, guantes). Cabello recogido tanto para hombres como mujeres. Calzado cubierto y ropa cubierta (no usar faldas ni pantalón corto). No es permitido, comer, tomar agua, ni fumar en del laboratorio. Las maletas deben colocarse en la parte trasera del laboratorio. No realice procedimientos que no le hayan sido autorizados por el profesor a cargo. Recuerde que el material contaminado debe ser depositado en las canecas rojas. El material cortopunzante debe ser depositado en el guardián dispuesto en la parte de atrás. LABORATORIO DE HEMATOLOGÍA II (HEMOSTASIA) El mecanismo hemostático está diseñado para detener la hemorragia en vasos que presentan daño en su integridad. El proceso es rápido y localizado y no afecta la fluidez de la sangre en circulación. La hemostasia comprende una interacción integrada compleja de: 1) vasos sanguíneos, 2) plaquetas y 3) factores de la coagulación y 4) la fibrinólisis. Para las pruebas de coagulación, el anticoagulante utilizado es el Citrato de sodio al 3.25%, el cual tiene como principio la precipitación del calcio.

TIEMPO DE SANGRÍA OBJETIVO Evaluar la hemostasia primaria, involucrando el recuento de plaquetas y su función. Esta prueba es utilizada como: Prueba prequirúrgica para evaluar los trastornos hemorrágicos relacionados con las plaquetas y su valor predictivo positivo es bueno.  Prueba de tamizaje de las diferentes trombopatías: Enfermedad de von Willebrand, Trombastenia de Glanzmann y Síndrome de Bernard Soulier.  Control de los medicamentos antiagregantes. 

FUNDAMENTO  Al lesionar pequeños vasos la hemorragia provocada es determinada por la liberación sustancias vasoconstrictoras y por la agregación plaquetaria que tapona la lesión.

MATERIALES      

Lanceta desechable Papel filtro Cronómetro  Algodón  Alcohol Portaobjetos

METODOLOGÍA 

Selección del sitio de punción: Se selecciona la parte anterior,

aproximadamente 5 cm por debajo del pliegue antecubital. del brazo, este no debe estar paralizado ni con edema. Debe evitarse lesionar grandes vasos, así como las áreas callosas y cicatrizadas. Si es necesario, se debe afeitar el lugar  de incisión seleccionado.  Colocar el tensiómetro sobre la porción superior del brazo del paciente.  Desinfectar el lugar de la incisión  Subir el tensiómetro a 40 mmHg durante 30 segundos antes de hacer la incisión  Colocar la lanceta en la zona elegida, asegurándose de que esté en contacto con la piel.  Si la prueba se realiza con lanceta, se deben hacer tres punciones y los extremos de la lanceta deben quedar marcados en la piel, para garantizar que penetró completamente.  Cada 30 segundos absorba la sangre que fluye, con papel de filtro #1 (rasgado), sin tocar el tapón que se está formando.  En caso de que la sangre que fluya sea muy abundante, puede absorber con mayor frecuencia.  Detenga el cronómetro una vez que el sangrado de haya detenido completamente. Si después de 15 minutos continúa la hemorragia se hace un vendaje con gasa estéril y seca, el resultado se reporta mayor de 15 minutos.  Retire el tensiómetro y limpie el área de incisión.

VALOR DE REFERENCIA: El valor normal es de 3 a 6 minutos. 

Interpretación: La prueba se encuentra alterada en:

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Trombocitopenia: Hay una correlación inversa entre el número de

plaquetas y la prolongación del tiempo. El tiempo de sangría se encuentra alterado cuando el número de plaquetas está por debajo de 100.000/ mm3 

Trombopatías: Por lo general, el tiempo es de más de 15 minutos en:

Enfermedad de Von Willebrand, Trombastenia de Glanzmann, Síndrome de Bernard Soulier etc. Está alterado en desórdenes vasculares primarios: vasculitis, Sindrome de Cushing, Amiloidosis, desórdenes del tejido conectivo y Ehlers Danlos. 

En algunas ocasiones con el uso de medicamentos antiagregantes (aspirina) se puede alterar. 

PRUEBA DE TORNIQUETE: METODO DE RUMPEL  – LEEDE OBJETIVO Determinar la fragilidad capilar del paciente.

FUNDAMENTO Determina la fragilidad capilar, al aumentar la presión sanguínea. La obstrucción del flujo venoso por el aumento de la presión puede producir la ruptura de pequeños vasos y la aparición de petequias.

MATERIALES  

Tensiómetro. Cronómetro.

METODOLOGIA Antes de iniciar la prueba se debe observar cuidadosamente el antebrazo, para comprobar si hay petequias, de haberlas, se deber encerrar en un círculo, y determinar si aparecieron nuevas o aumentaron de tamaño.  Se coloca el Tensiómetro en el brazo del paciente y se lleva a 80mmHg manteniéndolo así por 5 minutos.  Transcurrido este tiempo se retira, se esperan otros 5 minutos y se observa la aparición de petequias en el antebrazo y en la mano.  El resultado se da por cruces de 1  – 4 dependiendo del número de petequias: 

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+ Mas de 10 petequias en el antebrazo. ++ Mas de 20 petequias en el antebrazo. +++ Mas de 40 petequias en el antebrazo y el dorso de la mano. ++++ Incontables petequias.

No se deben contar las que aparecieron en el sitio donde se colocó el Tensiómetro, ni en el pliegue del brazo, ya que estas se presentan por  continuidad. VALOR DE REFERENCIA: Hasta 10 petequias en el antebrazo. FRAGILIDAD CAPILAR AUMENTADA: Se asocia a deficiencia de vitamina C, trombocitopenia, púrpura de Schelein Henoc, púrpura senil, diabetes, sepsis, hiperesplenismo.

TIEMPO DE COAGULACIÓN SANGRE TOTAL UTILIDAD Evaluar el sistema intrínseco de coagulación

FUNDAMENTO El contacto de la sangre venosa con una superficie extraña (vidrio) produce la activación del factor XII que a su vez activa el factor XI así sucesivamente hasta la formación del coágulo de fibrina.

MATERIALES        

Jeringa Tubo de sangría sin anticoaugulante Baño maría a 37ºC Cronómetro Sangre  Algodón  Alcohol Torniquete

PROCEDIMIENTO Inmediatamente después del sangrado se activa el cronometro, se mantendrá en la mano para mantener la temperatura corporal, posterior a ello se gira el tubo a 90 grados suavemente cada 30 segundos y se debe observar  detenidamente hasta que se forme completamente el coágulo. El valor normal es de 6 a 15 minutos. Un resultado menor indica, una técnica defectuosa. Un valor mayor de 15 minutos indica un defecto severo en alguno de los factores, exceptuando el factor VII o XII. Puede indicar también presencia de un anticoagulante circulante.

RETRACCIÓN DEL COÁGULO UTILIDAD Evaluar la función plaquetaria y la estructura de l a fibrina en la inducción de la retracción del coágulo. .

FUNDAMENTO El coágulo formado en un tubo de vidrio se retrae por acción de las plaquetas y la fibrina.

PROCEDIMIENTO La sangre utilizada en el procedimiento anterior la dejamos en el baño maría y observamos el tubo cada 15 minutos sin agitarla. Transcurrida una hora, se observa la separación del coágulo de las paredes del tubo, con la presencia de suero alrededor del coágulo. La retracción o separación debe ser total en

12 horas, el coágulo formado debe persistir por 72 horas. El resultado se reporta. Normal: Si hay retracción. Negativa: Si no se observa retracción. La retracción depende del número de plaquetas y su función. Es negativo en las trombocitopenias y trombopatía.

DESFIBRINACIÓN DE LA SANGRE OBJETIVO Promover la coagulación de la sangre total, dando como resultado la formación de fibrina

FUNDAMENTO La sangre total es un conjunto de células y plasma. En el plasma encontramos los factores de la coagulación, los cuales al ser activados dan como resultado la formación de fibrina que será atrapada en los palillos.

MATERIALES      

Jeringa  Agujas  Alcohol  Algodón Cápsula de porcelana. Palillos.

PROCEDIMIENTO Tomar 2 cm de sangre venosa en una cápsula de porcelana   Agitar con los palillos juntos impidiendo que se coagule la sangre, se obtendrá un coágulo adherido a los palillos el cual debe lavarse y observar  cuidadosamente su forma y contextura. Examinar la sangre que queda en el recipiente. 

TIEMPO DE PROTROMBINA (TP) OBJETIVO Medir el tiempo requerido para la formación del coágulo de fibrina, después de agregar tromboplastina tisular y cloruro de calcio a un plasma citratado pobre en plaquetas. Los factores que evalúa el TP son:  El FVII (que es el que se activa con la tromboplastina tisular)  Los factores comunes (FX, FV, FII y Fibrinógeno)

Es la prueba ideal para el control de la anticoagulación con anticoagulantes orales, en este caso se debe reportar con el INR. 

FUNDAMENTO Un exceso del extracto tisular y calcio, agregados al plasma reaccionan con los otros factores (V, VII, X y fibrinogeno) para formar un compuesto activo, que convierte la protrombina en trombina y el fibrinógeno en fibrina.

MATERIALES         

 Alcohol  Algodón  Agujas Tubos tapa azul (citrato al 3.25%) Tubos de ensayo Pipetas pasteur de 0.2 y 0.1 ml Baño de maría a 37°C Cronómetro Tromboplastina tisular que contiene calcio

PROCEDIMIENTO Extraer 4.7 ml de sangre en un tubo de tapa azul o hasta que se agote completamente el vacio. Esto permite mantener la relación 9:1 (Sangre: anticoagulante).  Centrifugar 10 minutos a 3.000 r.p.m. para obtener plasma pobre en plaquetas y separar el plasma.  En un tubo se colocar 0.2 ml de tromboplastina tisular e incubar a 37 °C durante 60 segundos   Adicionar 0.1 ml de plasma y poner en marcha el cronómetro.  Se inclina el tubo hasta la mitad para poder observar los hilos de fibrina y la formación del coágulo, cuando se inicia formación de los hilos, se detiene el cronómetro y se lee el tiempo. 

INTERPRETACIÓN La tromboplastina tisular que se utiliza para las pruebas de laboratorio es un extracto de pulmón o cerebro más calcio. La prueba se debe realizar por  duplicado, el valor normal es de 10 a 15 segundos aproximadamente, pero cada laboratorio tendrá sus propios valores de referencia. El tiempo de protrombina mide principalmente la actividad del complejo protrombinico. La vía extrínseca recibe éste nombre porque requiere la presencia del factor tisular presente en los tejidos extravasculares. El factor tisular en presencia del calcio activa al factor VII, pero también puede ser estimulada, por células endoteliales y los leucocitos.

TIEMPO TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADA (TTPa) OBJETIVO

Medir el tiempo requerido para la formación del coágulo de fibrina, después de agregar un activador de contacto (sílica coloidal) a un plasma citratado pobre en plaquetas. Los factores que evalúa el TTP son: Factores XII, XI, IX y VIII Los factores comunes (FX, FV, FII y Fibrinógeno) Es la prueba para la monitorización de pacientes bajo terapia anticoagulante con heparina

FUNDAMENTO Medir el tiempo de coagulación del plasma en presencia de una tromboplastina parcial activada, la cual sustituye la acción del factor 3 plaquetario, necesario para la formación del coagulo de fibrina. .

MATERIALES          

Alcohol Algodón Agujas Tubos tapa azul (citrato al 3.25%) Tubos de ensayo Pipetas pasteur de 0.2 y 0.1 ml Baño de maría a 37°C Cronómetro Reactivo para medir tiempo parcial de tromboplastina (cefalina) Calcio 0.025 M

PROCEDIMIENTO Extraer 4.7 ml de sangre en un tubo de tapa azul o hasta que se agote completamente el vacio. Esto permite mantener la relación 9:1 (Sangre: anticoagulante).  Centrifugar 10 minutos a 3.000 r.p.m. para obtener plasma pobre en plaquetas y separar el plasma. Tomar 0.1 ml de plasma y adicionar 0.1 ml de tromboplastina parcial e  incubar por 5 minutos exactos a 37°C  Agregar 0.1 ml de cloruro de calcio 0.025 M previamente incubado y poner   en marcha el cronómetro. Inclinar el tubo hasta que aparezcan los hilos de fibrina y se forme el  coágulo. Se detiene el cronómetro en el momento que aparezcan los hilos de fibrina y se anota el tiempo. 

INTERPRETACIÓN La prueba se debe realizar por duplicado, el valor normal es de 28-32 segundos aproximadamente, pero cada laboratorio tendrá sus propios valores de referencia. El TTPa evalúa la vía intrínseca, esta vía es más lenta que la extrínseca, se inicia con la activación del factor XII en el momento en que la sangre entra en

contacto con el endotelio lesionado y esta activación participan la precalicreína, e cininógeno de alto peso molecular, el colágeno y el F3P.

TIEMPO DE TROMBINA (TT) OBJETIVO Medir el tiempo requerido para la formación del coágulo de fibrina, después de agregar trombina a un plasma citratado pobre en plaquetas. El tiempo de trombina mide la calidad y cantidad del fibrinógeno

FUNDAMENTO El fibrinógeno, se convierte en fibrina, gracias a a la trombina mediante dos pasos, en el primer paso la trombina fija el fibrinógeno para formar monómeros de fibrina, luego estos se agregan para formar polímeros insolubles de fibrina.

MATERIALES          

Alcohol Algodón Agujas Tubos tapa azul (citrato al 3.25%) Tubos de ensayo Pipetas pasteur de 0.2 y 0.1 ml Baño de maría a 37°C Cronómetro Trombina Solución Salina

PROCEDIMIENTO Extraer 4.7 ml de sangre en un tubo de tapa azul o hasta que se agote completamente el vacio. Esto permite mantener la relación 9:1 (Sangre: anticoagulante). Centrifugar 10 minutos a 3.000 r.p.m. para obtener plasma pobre en  plaquetas y separar el plasma. Tomar 0.2 ml de plasma control y adicionar 0.2 ml de trombina con solución  salina hasta que el tiempo se encuentre en el intervalo de referencia (16-22 segundos). Tomar 0.2 ml de plasma problema y adicionar 0.2 ml de trombina ajustada.   Inclinar y agitar el tubo hasta que aparezcan los hilos de fibrina y se forme el coágulo. Se detiene el cronómetro en el momento que aparezcan los hilos de fibrina y se anota el tiempo. 

INTERPRETACIÓN

La prueba se debe realizar por duplicado, el valor normal es de 16-22 segundos aproximadamente, pero cada laboratorio tendrá sus propios valores de referencia. El valor del TT pueden ser alterados por:      

Afibrinogenemia Hipofibrinogenemia Disfibrinogenemia Anticoagulación con heparina En presencia de productos de degradación de fibrinógeno y/o fibrina Hipergammaglobulinemias