Lab02 Microbiologia

 

“Año del Buen Servicio Al ciudAdAno” 

CONTROL MICROBIOLOGICO DE LOS MEDIC MENTOS

INFORME N°2

TEMA: Preparación de medios de cultivo y su forma de esterilización.

Técnicas de siembra y estudio del desarrollo bacteriano.  ALUMNOS: 

  Chepe Cueva, Freddy Jesús M.

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  Gallardo Delgado, Shirley J.

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  Huerto Machado, Mari Carmen.

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  León Osorio, Sherley B.   Santiago Valverde, Medalit.

DOCENTE: 

  Blga. Mónica Margarita Velarde Vílchez.

SECCIÓN: 

  FB6M1 / Práctica  – C

LIMA  – PERU

2017

 

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO Y SU FORMA DE ESTERILIZACIÓN.. TÉCNICAS DE SIEMBRA Y ESTUDIO DEL ESTERILIZACIÓN DESARROLLO BACTERIANO I. INTRODUCIÓN INTRODUCIÓN   Por su minúsculo tamaño, los microorganismos no pueden estudiarse como individuos, sino que es necesario manejarlos como poblaciones. Para ello es necesario cultivarlos, es decir, favorecer su multiplicación in Vitro, en ambientes especiales que proporcionen las condiciones semejantes a las de sus hábitats naturales. En estos ambientes se debe eliminar a todos aquello microorganismos que interfieren en el estudio del microorganismo de interés, al que además de proporcionar los nutrientes necesarios para su crecimiento multiplicación. En muchos aspectos, el pequeño tamaño de los microorganismos los hace sujetos ideales para la experimentación. Se pueden cultivar millones de organismos en un solo mililitro de medio para su estudio. La rápida multiplicación de estas diminutas criaturas constituye también una ventaja experimental, ya que se puede trabajar con muchas generaciones en un solo día, Es más, los conocimientos adquiridos en el estudio de los microorganismos pueden ser, a menudo, generalizados a los sistemas celulares, plantas y animales, incluida la especie humana. Para llevar a cabo experimentos con microorganismos es usualmente necesario necesario cultivarlos en el laboratorio. La esterilización La esterilización es un proceso a través del que se puede lograr la destrucción total de los microorganism microorganismos os viables presentes en un determinado material. Este procedimiento es de gran utilidad dentro del campo farmacéutico, ya que existen muchos procesos que requieren la utilización de materiales estériles. Entre éstos podemos destacar:   La esteriliza esterilización ción de equ equipos ipos quirúrgicos y otros materiales materiales de uso médico con el propósito de reducir el riesgo ri esgo de infecciones en pacientes.   El acond acondicionamiento icionamiento de dell material (pipetas, tub tubos, os, placas de Petri, pin pinzas, zas, etc.) que va a ser utilizado en los laboratorios de microbiología.   La prepara preparación ción de medio medioss de cultivo qu que e serán em empleados pleados con diferentes propósitos (cultivo de microorganismos, control de ambiente, equipos o personal, análisis microbiológico de medicamentos, cosméticos, alimentos, etc.) 

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Para efectuar el estudio de los microorganismos, se han diseñado diversos métodos que permiten cultivarlos bajo condiciones artificiales, en los que es posible cultivarlos bajo condiciones experimentales y maneja ma nejarr un s olo tipo tipo de microorg anis mo mo.. Una de las técnicas más usadas

en el laboratorio de microbiología consiste en transferir una muestra microbiológica de un ambiente determinado a un medio de cultivo, lo que permite obtener cultivos microbianos. A l efectuar este procedimiento, es necesario considerar que en es el necesario área de tomar trabajo, existen muchos otros microorganismos; debido a esto, precauciones para impedir i mpedir

 

que éstos penetren y contaminen los cultivos en estudio. Por otra parte, para considerar no sólo el aspecto nutricional, sino también las condiciones ambientales de su hábitat natural, por lo que en el medio de cultivo se debe ajustar el pH y concentración de sales y durante la incubación condiciones condiciones tales como la temperatura, aireación la luminosidad. La aplicación de estos procedimientos ha permitido propagar a los microorganismos en cultivos mixtos, así como su aislamiento y la obtención o btención de cultivos puros, facilitando de este modo, el estudio, caracterización, aplicación y control de los mismos. La forma de sembrarlos y cultivarlos depende del tipo de microorganismo y propósito específico del estudio.

II. OBJETIVOS   Aplicar la técnica ade adecuada cuada para preparar el área de trabajo y evitar contaminaciones.   Organizar el material para su fácil manej manejo o e identificación.   Manipular adecuadame adecuadamente nte los cultivos puros.   Seleccionar y ap aplicar licar las técnicas de siembra adecua adecuadas das para alcanza alcanzarr propósitos específicos. 

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  microscópica Identificar y s describir las características culturales y microscópicas de algunascorrectamente bacterias.

III. MATERIALES   Balanza.   Espátulas.   Algodón.   Papel kraft.   Probetas de 500 mL.   Frascos y/o Beacker de 500 mL.   Agua destilada.   Trípodes con rejilla metálica.   Baguetas.   Tubos estériles.   Placas PETRI estériles.    

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- Medios de cultivo deshidratados: 

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  Solido:    Agar: Tripticase de Soya (TSA), Agar MacConkey para placas P Petri, etri,    Agar SIM (Azufre  – Indol  – Motilidad) y TSA para tubos     Liquido: Caldo: Tripticase de Soya (TSB) y/o Caldo peptonado. 

 

IV. RESULTADOS Criterios y consideraciones importantes a tener en cuenta para la preparación de medios de cultivo.

1. Medios de cultivo: Son necesarios para el aislamiento, mantenimiento, la reproducción y la identificación de los microorganismos.   Contener sustancias nutritivas   pH adecuado   Deben estar estériles. 2. Incubación: Depende del metabolismo del microorganismo a cultivar.   La atmó atmósfera sfera emplead empleada a (aerobio (aerobio,, microaerofílico, a anaerobio) naerobio)   Tiempo.   Temperatura. Procedimiento para preparación preparación de medios de cultivo, di diluyentes luyentes y reactivos Los medios de cultivo, soluciones y reactivos deben prepararse, almacenarse y utilizarse de acuerdo con un procedimiento documentado.   En dicho pro procedimiento cedimiento debe ha haber ber una descripción descripción del equip equipamiento amiento necesario.   El laboratorio de debe be colocar una e etiqueta tiqueta indicando lla a identificación y otros datos en los medios de cultivo y reactivos.   Debe haber u un n registro de p preparación reparación de me medios dios de cultivo y reactivos. Registro control de esterilidad de medios de cultivo y reactivos Datos a registrar:   Fecha de realización del control   Medio de cultivo o d diluyente iluyente   Indicación del proceso de esterilización (Ejemplo N º correlativo de proceso en autoclave o filtración)   Tiempo de incub incubación ación (en hora horas) s)   Temperatura de incubación (º C)   Resultado   Conforme (SI o NO)   Firma del personal respo responsable nsable de la realización del control. Productividad: Pruebas semi-cuantitativas en medios de cultivos sólidos.

 

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Se inoc inocula ula en forma de estrías diluciones del cultivo con ansa calibrada de acuerdo a la figura o modelo.   Las placas inoculadas se incuban a temperatura y tiempo que depende del medio de cultivo evaluado y se observa el crecimiento.   Se evalúa la productividad del medio teniendo en cuenta el valor de cada estría con crecimiento.

SIEMBRA POR AGOTA AGOTAMIENTO MIENTO 

La

siembra

realizada

por

Para una buena siembra en

agotamiento de Mac Conkey, se

placa Petri, se debe de contar

llevará a incubar y de esa

con un mechero al costado,

manera se solidifique y realizar

de esta manera se evita

la siembra de microorganismos.

cualquier contaminación.

CULTIVO DE MAC KONKEY: En él, envase del MacConkey le agregamos 33 mL de agua destilada para disolver y así llevarlo a baño María.

 

Se calento para disolver completamente laas particulas del cultivo y luego lo llevamos a una olla a presion x 15 minutos.

Utilizamos en mechero encendido como lugar de d e esterilizacion para poder incorporar el cultivo en condiciones de esterilidad.

Se puedo observar que el cultivo presento una coloración rosado y de una consistencia consisten cia gelatinosa.

 

V.

CONCLUSIONES 

El trabajo realizado en la presente práctica de laboratorio, nos permitió aprender cómo aplicar la técnica adecuada para preparar el área de trabajo y evitar contaminaciones en un medio de cultivo, y a organizar el material para su fácil manejo e identificación. También aprendimos a manipular adecuadamente los cultivos puros y seleccionar y aplicar las técnicas de siembra adecuadas para alcanzar propósitos específicos. De igual manera nos permitió identificar y describir correctamente las características culturales y microscópicas de algunas bacterias.

VI.

CUESTIONARIO  1) ¿QUÉ IMPORTA IMPORTANCIA NCIA TIENE E EL L USO DE LOS MEDIOS SÓLIDOS? El uso de los medios sólidos es importante porque son utilizados para estudiar la multitud de las bacterias. Tienen un menor porcentaje de agar, por lo que no solidifican totalmente a la temperatura ambiente. Por ejemplo: Agar MIO, Agar SIM. 2) ¿COMÓ CONTROLARÍA SI EL MEDIO DE CULTIVO PREPARADO ESTA LISTO PARA REALIZAR UNA SIEMBRA? Si el medio de cultivo preparado ya está listo para realizar la siembra se procede a practicar la siembra en medios de cultivos previamente esterilizados y adecuados para la bacteria que se desea aislar. Luego necesariamente se debe emplear instrumentos estériles para no contaminar ni destruir los microorganismos. En seguida se deposita los microorganismos asépticamente asépticamen te en los medios de cultivo para luego esterilizar los instrumentos empleados, inmediatamente después después de cada operación. Los instrumentos empleados corrientemente corrientemente en la siembra son: a.  A s a de S iembra: iembr a: Se utiliza alambre de platino, o alambre de una aleación

níquel-cromo (nicrom) que tiene propiedades semejantes a la primera, con la ventaja de ser de menor costo. Este alambre tiene un diámetro de 0,3 a1 mm y está sujeto a un mango o porta asa metálico o de vidrio. El alambre puede ser totalmente recto (asa en punta o aguja), recto con un anillo de aproximadamente 3 mm de diámetro en la extremidad (asa) o aplastado en el extremo (espátula). Puesto a la llama del mechero alcanza rápidamente el rojo blanco (1.300°C) y también rápidamente se enfría. b. Pipeta Pasteur:   es un tubo de vidrio con una extremidad afilada u cerrada. La otra extremidad que se encuentra abierta está protegida por una mota de algodón cardé o hidrófobo. La técnica general de siembra dependerá de:    

Estado sembrar (sólido o líquid líquido). Estado físico físico del del material medio deacultivo (a (agar gar o cald caldo). o). o).

 

 

Ambiente en el cual crece el microorganismo ( aerobiosis, microaerofilia o anaerobiosis)

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Brooks G, Butel J, M Morse orse S. Microbiolog Microbiología ía Médica de Jawetz Jawetz,, Mlninck y Dalberg. 16ª Ed. El Manual Moderno. México. 1999. 2. Hernández S. Organización de Medios del Laboratorio Instrumentación. Universidad de Guadalajara. México. 1993. 3. Pazos, V. Métodos Básicos de Microbio Microbiología. logía. Cuba. 1990.

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