Lab. Vegetal Rosas y Piñas

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DIEGO ARMANDO VIVIESCAS LOPEZ

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CULTIVO DE YEMAS Y MERISTEMOS, VIA ORGANOGENESIS DIRECTA. ESTABLECIMIENTO ESTABLECIMIENTO DE ROSAS Y PIÑAS PIÑ AS

OBJETIVOS

Dominar la etapa (I) o fase de establecimiento de rosas y piñas, vía organogénesis directa, mediante el cultivo de yemas y meristemos. Continuar adquiriendo abilidades en el traba!o de cultivo de te!idos, especialmente en siembra de material vegetal. RESUMEN

"n esta pr#ctica se establecieron cultivos de organogénesis directa, en el cual se escogieron las yemas y meristemos no desarrollados de los tallos de la rosa y el meristemo de la piña, y primordios foliares de piña luego de eso se sometieron a un proceso de desinfecci$n con tres soluciones, ipoclorito de sodio, alcool al %&' y soluci$n !abonosa, este ciclo de desinfecci$n se llevo a cabo en diferentes #reas de laboratorio desde #rea no estéril asta c#mara de flu!o laminar, ya desinfectados los eplantes, se realio la siembra en c#mara de flu!o laminar.

INTRODUCCION

*a organogénesis es un evento morfogenético que se caracteria por su desarrollo unipolar, en otras palabras, es la formaci$n de un primordio unipolar a partir de una yema con el subsecuente desarrollo de este en un brote vegetativo, la organogénesis directa es la formaci$n directa de $rganos sobre la superficie del eplante cultivados intactos. "ste no requiere de la formaci$n de callos. "l establecimiento de los te!idos vegetales en las condiciones + in vitro vitro+ es una etapa decisiva, para obtener cultivos eitosos, es necesario seleccionar adecuadamente el eplante, el método de desinfecci$n, el medio de cultivo y mantener una asepsia total durante todo el proceso de etracci$n y siembra del eplante seleccionado así mismo

28 DE M MARZO DEL 2014

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deber#n seleccionarse adecuadamente las condiciones ambientales para el crecimiento de los mismos. "l traba!o en el cuarto de siembra deber# realiarse de forma r#pida y precisa. "n el momento de la siembra en los medios de cultivo se debe tener etremo cuidado y mantener las m#imas normas de asepsia que minimicen el riesgo de contaminaci$n por  manipulaci$n.

MARCO TEORICO

*a organogénesis directa es la formaci$n de $rganos directamente del eplante si la necesidad de pasar por una fase de formaci$n de callos. *a organogénesis a sido la base fundamental de la multiplicaci$n vegetativa y dentro de ella pueden diferenciarse dos vías- la formaci$n de las yemas ailares y la formaci$n de yemas adventicias. •

ormaci$n de yemas ailares

"sta técnica se basa en la formaci$n de brotes a partir de las yemas que se encuentran en las ailas de las o!as o primordios de o!as, los cuales son divididos y subcultivados repetidamente. (/u y 0ang 1234). "ste método, a pesar de no ser el m#s r#pido, a sido el m#s utiliado para la propagaci$n comercial debido en primer lugar a la facilidad con que se a establecido en la mayoría de las especies y en el segundo lugar a la estabilidad genética de las plantes regeneradas siendo el sistema de regeneraci$n en el cual se reportan los menores índices de variaci$n genética. 5us desventa!as es que sus coeficientes de multiplicaci$n en comparaci$n con otros sistemas de regeneraci$n es muy ba!o, y escasa automatiaci$n del procesos productivo. •

ormaci$n de yemas adventicias

"s la formaci$n de 6ovo de yemas a partir de meristemos preeistentes o te!ido no meristematico, las cuales se originan de una o de un pequeño grupo de células, cuando se cultivan los eplantes en medios con concentraciones elevadas de citoquininas. Con esta técnica es posible producir un mayor n7mero de platas por unidad de tiempo en comparaci$n con el método de yemas ailares y a la ve presenta mayores

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posibilidades de mecaniaci$n8automatiaci$n, eistiendo ya varios e!emplos de bioreactores para su producci$n.

MATERIALES "sta pr#ctica fue realiada en el laboratorio de 9iotecnología vegetal de la :niversidad rancisco de ;aula 5antander sede Campos "líseos en donde se tuvo como ob!etivo, lograr el establecimiento de rosa y piña a partir del cultivo in vitro de yemas y meristemos, respectivamente. Materiales      

gua destilada estéril rascos de vidrio

Reacti!s  

 >lcool %&' /ipoclorito de sodio 4'

E"#i$!s 

C#mara de flu!o laminar oriontal

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METODOLOGIA

%ASE PREPARATIVA

1. 5e escoger#n las yemas de rosa y se separan los segmentos con yemas ailares, con la ayuda de ti!eras o escalpelo. 5umergir en soluci$n antioidante. 1a. 5e limpian y reba!an los cogollos de piña con la ayuda de escalpelo y cucillo de cocina. ?. a. b. c.

5e preparan las soluciones desinfectantes- (c@u en un frasco de vidrio) 5oluci$n !abonosa >lcool al %&' /ipoclorito de sodio al 4'

4. 5e realio el proceso de desinfecci$n;ara las yemas de rosas•

5e sometieron a A min en una soluci$n !abonosa, seguido de 4 en!uagues con agua destilada estéril luego de ello, las yemas se llevaron al #rea estéril donde se sumergi$ durante A min en la soluci$n de alcool al %&', seguido de en!uague 4 veces con agua destilada estéril, y por 7ltimo se sumergi$ en ipoclorito de sodio al 4' durante 3 min. "sto se llevo a la cabina de flu!o laminar donde se en!uago 4 veces nuevamente las yemas para su debida desinfecci$n. •

;ara las yemas de piña-

5e sometieron a A min en soluci$n !abonosa, y se en!uagaron 4 veces con agua destilada estéril. 5e llevaron al #rea estéril y se sumergi$ en soluci$n de alcool al %&' durante A min, se en!uago con agua destilada estéril 4 veces. 5eguidamente se sumergi$ en soluci$n de ipoclorito de sodio al %& ' durante B min, por 7ltimo se pasaron a la cabina de flu!o laminar y se en!uago 4 veces con agua destilada estéril.

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%ASE DE ESTABLECIMIENTO

:na ve terminado la fase de desinfecci$n de los eplantes se procedi$ a entrar al #rea donde se encuentra la cabina de flu!o laminar, antes de entrar allí fue necesario lavar de nuevo las manos y los antebraos y utiliar una bata que previamente fue esteriliada. 5 DI >*"E>6DF> ;6G> D" 65 menudo se denomina =edio 9asal y puede ser suplementado con alg7n regulador de crecimiento y ocasionalmente con otras sustancias varias. *os nutrientes son esenciales para el crecimiento y desarrollo de la planta- sin agua y nutrientes minerales una planta no puede vivir ni in vitro ni in vivo. *a temperatura a la que est# epuesto el eplante cultivado in vitro afecta a la mayoría de procesos fisiol$gicos y por consiguiente es un factor fundamental a controlar. "n general, cada especie tiene un intervalo de temperaturas en el que se produce el crecimiento $ptimo. "ste intervalo puede variar en funci$n del genotipo, del $rgano del que se a obtenido el eplante, de la época del año, de la edad de la planta madre, del fotoperíodo, etc. :na complicaci$n adicional se produce por el eco de que puede eistir interacci$n entre la temperatura $ptima de crecimiento y otros factores como la lu, la composici$n del medio. Determinar la temperatura $ptima de crecimiento para cada cultivo in vitro puede ser un proceso muy laborioso que, adem#s, eige gran cantidad de c#maras de cultivo reguladas de forma diferente. >fortunadamente, y para la mayoría de situaciones, se pueden obtener resultados satisfactorios con temperaturas de incubaci$n que oscilan entre los ?& y ?3&C. *> *:K *a lu, definida como una forma de energía radiante que se nos manifiesta mediante la visi$n es, en realidad, parte de un fen$meno físico m#s amplio- la energía radiante (radiaci$n), que puede ser descrito seg7n dos modelos diferentes- el modelo ondulatorio (radiaci$n electromagnética) y el modelo corpuscular. Como quiera que s$lo una parte de la energía radiante (la lu y algunas de las radiaciones infrarro!as y ultravioletas pr$imas) tiene influencia conocida sobre el desarrollo de las plantas, a veces, se usa el término lu para referirse a ese con!unto de radiaciones cuando en realidad se refiere al con!unto de radiaciones electromagnéticas con efectos fisiol$gicos. *a lu es uno de los factores principales que determinan el desarrollo de los organismos aut$trofos, en ello radica la importancia de controlar el factor lu en los cultivos in vitro. Del proceso de desinfecci$n depende el éito de la producci$n de callos. 5ueles suceder que con las altas técnicas de asepsia, se logra retirar de los cortes la capa de contaminaci$n que presenta el material vegetal luego el interior que queda esta libre de pat$genos, que brind#ndoles las condiciones adecuadas dan origen a una pl#ntula.

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"s importante eliminar cualquier pat$geno presente en el eplante porque el crecimiento de bacterias y ongos, disminuye el crecimiento de te!idos vegetales o pueden producir toinas que afecten el desarrollo normal. Debemos tener en cuenta los tiempos en los que los eplantes deben permanecer en cada soluci$n desinfectante pues si los eplantes permanecen m#s tiempo del establecido en las soluciones desinfectantes, podría causar a los eplantes la muerte de los meristemos. '. LMué tipo de crecimiento debe esperarse de acuerdo al eplante usado y a la composici$n del medio de cultivoH (señale la composici$n del medio utiliado).que factores podrían afectar ese crecimientoH "plique su respuesta.

De acuerdo al eplante se debe esperar la formaci$n de tallos. *os factores que afectan el crecimiento sonJ Contaminaci$n del medio J Contaminaci$n end$gena Contaminaci$n e$gena J "l tamaño del eplante J "l origen del eplante. J =al mane!o del protocolo de desinfecci$n. =al mane!o de la cabina de flu!o laminar a la ora de la siembra.

(. proponga y elabore un esquema o diagrama con todo el proceso de micropropagacion de rosas, a partir de yemas ailares. "specifique, por separado, medios de cultivo, métodos de desinfecci$n, condiciones ambientales de crecimiento y otros factores que considere de interés particular, en cada fase de la propagaci$n masiva

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1. >5" &- ;F";>F>CIN6 D" *> ;*>6 D6D" 5" F">*IK>F> *> =:"5 "s de gran importancia mantener a las plantas madre en un período de tiempo, en un invernadero, en condiciones $ptimas. 5e toman las partes m#s !$venes de la planta los cuales van acer utiliados como eplantes. 5e separan las yemas ailares y se sumergen en soluci$n antioidante.

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