Lab 09 - Metodo Del Fenol Sulfurico

DETERMINACIÓN DE CARBOHIDRATOS COMO AZUCARES TOTALES POR EL METODO DE FENOL SULFURICO OBJETIVOS 

Aplicar uno de los procedimientos procedimientos estudiados estudiados en clase.



Conocer el porcentaje de azúcares totales en una muestra de miel.



Calcular la absorbancia de la muestra.

FUNDAMENTO Los carbo arbohi hidr drat atos os abarc barcan an uno uno de los los mayo ayores res grup grupos os de compuestos orgánicos encontrados en la naturaleza, y juntamente con co n las las prot proteí eína nass form forman an los los co cons nsti titu tuye yent ntes es prin princi cipa pale less del del organismo vivo, además de ser la mas abundante y económica fuente de energía para el hombre. La glucosa es el monosacárido mas impo mportan rtante te y const onstiituy tuye la unid unidad ad estru struct ctur ural al de los los polisacáridos de mayor importancia. El mé méto todo do de Dubo Dubois is y co cols ls.. (195 (1956) 6) fue fue el util utiliz izad ado o para para la cuantificación de los azúcares totales: A alícuotas de 0.4 ml de muestra se le añadieron 0.4 ml de fenol al 5% y posteriormente 2 ml de H 2SO4 concentrado, agitándose la mezcla. A los 30 minutos de acabado el proceso se midió la abso absorb rban anci cia a a 490 490 nm. nm. La rect recta a de ca cali libr brad ado o se real realiz izó ó co con n distintas concentraciones de glucosa. Los ácidos urónicos generan una respuesta menor que la glucosa al test del fenol-sulfúrico. Por ello las fracciones enriquecidas en ácidos urónicos daban resultados minusvalorados del contenido en azúcares totales. Para solucionar este problema, especialmente

importante en las fracciones pécticas, se realizó una curva patrón con ácido galacturónico para el test del fenol-sulfúrico y los resultados se rectificaron del siguiente modo: Con el contenido en ácidos urónicos de la muestra, obtenido por el método de Blumenkratz y Asboe-Hansen (1973), se calculó la absorbancia a 490 nm que darían de estar solos en ella. A la absorbancia a 490 nm de la muestra problema se le resta la que darían sus urónicos. De este modo obtuvimos la absorbancia de los azúcares neutros, y por lo tanto su contenido. Ahora solo quedó sumar las cantidades de ácidos urónicos y azúcares neutros para obtener el total de azúcares presentes.

MATERIALES 

Muestra de alimento(miel de abeja).



Balanza analítica.



Glucosa anhidra p.a



Agua destilada



Solución de fenol al 5%(bi destilada).



Ácido sulfúrico concentrado.



Espectrofotómetro.

PROCEDIMIENTO Se sigue de acuerdo al flujo de preparación de la muestra mostrado mas adelante.  También de acuerdo al modelo de la curva padrón que se muestra para la elaboración de la muestra.

CURVA PADRÓN: (MÉTODO DE FENOL SULFÚRICO- AZÚCARES TOTALES) 

A partir del padrón dc glucosa, cuya concentración es: 0,01 % (0,1 g/ 1000 ml) (glucosa) se prepara la curva padrón conforme los datos indicados a bajo.



En forma semejante se hace las lecturas de las absorbancias de la muestra problema. Para ello se toman alícuotas de 0,1; 0,2 ml de filtrado y se completa a volumen para 1,0 mL con agua destilada. Seguidamente se hacen las lecturas a 490 nm.

Númer o de tubo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Blanco

Padrón de glucos a 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 0.0

H2O Fenol (ml (5%) ) (ml)

H2SO 4

(ml)

Concentració Absorvanci n a (490nm) g/ml

0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0.0 1.0

5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0

100,2100 200,2850 300,4600 400,7500 500,85 ? ? ? ? ? ?

1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0

? ? ? ? ? ? ? 0.189 0.239 0.270 ?



Después de agregar el Fenol, debe adicionarse el H2SO4



Esperar 30 minutos y realizar las lecturas de absorbancia

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA Pesar 5,0 gr de

muestra Disolver 100 ml H2O

Baño María 5 min. Filtración Completar a 100 ml

Filtrado (líquido) 1/100 ml de Filtrado 12.5/50 ml Fenol sulfúrico (1 ml)

Residuo (descartar)

RESULTADOS Y CÁLCULOS Muestra de Miel Para ello: •

Se pesó 5.028g, se disuelve en 100ml con H2O.

•

Luego llevamos a baño maría por 5 minutos.

•

Se filtra.

•

Se extrae 1ml y enrasamos a 100; de esta mezcla extraemos 25ml y nuevamente enrasamos a 100ml

Determinamos la concentración Entonces: 1000ml



0.1g. glucosa

0.1ml X = 0.1 x 0.1 1000 X = 10ug/ml



X



# de Tub o 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14

Muestra Padrón (ml) 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 0.0 0.0 0.0 0.0

Muestra de Miel (ml) 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.1 0.2 0.5

Agua Destilada (ml) 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0.0 1.0 0.9 0.8 0.5

Fenol (ml) 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0

Ácido Sulfúrico (ml) 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0

El tubo # 1 presenta un color claro amarillo. En el resto del tubo naranja claro de mayor a menor hasta #11. Luego medimos la absorvancia: a 490nm

Númer o de tubo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Blanco

Padrón de glucos a 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 0.0

H2O Fenol (ml (5%) ) (ml)

H2SO

0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0.0 1.0

5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0

1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0

4

(ml)

Concentració Absorvanci n a (490nm) ug/ml 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

0.110 0.220 0.355 0.375 0.550 0.590 0.680 0.189 0.239 0.270

Obtenemos los valores de: A = 0.0409 B = 0.0094 R2 = 0.99 Absorvancia de la muestra: del tubo #10 = 0.55  Y = A +Bx 

0.55 = 0.0409 + 0.0094x x = 54.1606383

Para de determinar: 

54.16 

0.5ml

x

100ml



x = 10832.1ug = 10.8321mg 

10.8321



x

100ml



25ml

x = 43.3285mg 

43.3285



x

100



1ml

x = 4332.85mg = 4.33285g Entonces: 4.33285



x

100g



5.07g

Azúcares totales = 85.46% Otra manera: 5.07



100%

4.33285



x

x = 85.46% En 5 gramos de miel, hay 4.33285 gramos de azúcares totales, lo que representa el 85.46%.

DISCUSIÓN 

La reacción que se produjo en los tubos de la curva padrón con los de la muestra fueron exotérmicas, debido al calentamiento excesivo de estas, teniendo que esperar 10 minutos para su enfriamiento.



El fenol sulfúrico deshidrata el azúcar formando: Pentosas Hexosas

Metil furfural Hidroximetil furfural

CONCLUSIONES 

Hay que tener cuidado de la cantidad de muestra diluída ya que esta depende del resultado óptimo de la práctica.



El azúcar es deshidratado debido a la presencia del ácido fenol-sulfúrico.

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La temperatura de las soluciones influye positivamente o negativamente, según los otros compuestos.



En la miel se encuentra la fructuosa libre acompañada siempre de glucosa y sacarosa

BIBLIOGRAFÍA 

Norman Potter, “Tecnología de los alimentos “



R. Matissek, F.M. Schnepel, G. Steiner, 1992 “Análisis de los Alimentos”, 2da Edición, Editorial Acribia S.A. Zaragoza- España.



www.wikipedia.com