La química de BLUESTAR

A. DESDE LUMINOL HISTORIA

A

BLUESTAR

®

FORENSE:

UNA

BREVE

Los primeros experimentos realizados con vistas a la utilización de luminol como una herramienta en las ciencias forenses se llevaron a cabo en 1937 por Specht, quien lo probado en una variedad de bases como el césped, ladrillos o piedras manchadas de sangre. En 1939, Proesher y Moody probado composición Specht en animales y sangre humana. En 1951, Grodsky propuso una mezcla de polvos compuestos de luminol, carbonato de sodio, y perborato de sodio mezclado con agua destilada. Esto posteriormente se convirtió en la fórmula que se usa más comúnmente por los investigadores de hoy en día para detectar rastros de sangre en la escena de un crimen. Sin embargo, el uso de carbonato de sodio produce una reacción lenta en el proceso de oxidación de la hemoglobina. Por lo tanto, no es muy luminoso y de breve duración solamente. Por otra parte, una vez que los agentes reactivos se disuelven en el agua, la vida de la solución obtenida es muy corto. Esta fórmula es muy inestable y es tóxica, debido a la presencia de perborato de sodio. En 1966, Weber propuso una composición formada por luminol, hidróxido de sodio o hidróxido de potasio, el peróxido de hidrógeno diluido en agua destilada. La solución así obtenida debe mantenerse en un lugar fresco y protegido de la luz directa. Su vida es breve. La reacción luminosa obtenida por esta composición se pueden fotografiar en la oscuridad total, o filmado con una cámara de visión nocturna. En 2000, Jean-Marc Lefebvre-Despeaux, presidente de BLUESTAR, acusado de Loic Blum, Ph.D., profesor de bioquímica en la Universidad Claude Bernard-Lyon y director del laboratorio de ingeniería enzimática y biomolecular (EMB2-UMR 5013 CNRS -UCBL) para encontrar una nueva fórmula que se luminol basado y eliminar a todos los numerosos inconvenientes. Como resultado, Blum descubrió esta nueva fórmula que se llamó posteriormente BLUESTAR ® FORENSE. B. LA QUÍMICA DE BLUESTAR ® FORENSE

Una nueva fórmula basada en luminol, BLUESTAR ® FORENSE es un agente de la visualización de la sangre, sobre la base de luminol, una molécula que es bien conocida entre los criminalistas forenses. La constitución de BLUESTAR ® FORENSE ha hecho posible eliminar elementos inconvenientes asociados con otros agentes reactivo luminol basado. 1. ¿Cómo reacciona el luminol? Luminol (3-Aminophthalhydrazide) fue sintetizado por primera vez en 1853. Su propiedad de producir una reacción quimioluminiscente en la solución de base en la presencia de un agente oxidante en contacto con la sangre se observó por primera vez por Albrecht en 1928. Los componentes principales capaces de catalizar esta reacción para emitir la luz son los hemo metales de transición y peroxidasa. Hemo es una estructura bioquímica que forma parte integrante de la peroxidasa. Esta estructura está igualmente presente en la hemoglobina. De esta manera, la presencia de la hemoglobina - por lo tanto de sangre - pueden ser revelados mediante el aprovechamiento de la capacidad del grupo hemo de catalizar la propiedad quimio-luminiscente de luminol. En otras palabras, una mezcla de luminol + agente oxidante + agente alcalino, cuando se pone en contacto con la sangre, que emiten luz.

C. EXCELENTE RENDIMIENTO

1. La sensibilidad extrema de BLUESTAR ® FORENSE permite que el ojo humano para detectar manchas de sangre hasta 1:10.000 diluciones, como restos diminutos o gotas que se han lavado, con o sin detergente. 2. BLUESTAR ® FORENSE tiene una luminiscencia fuerte y duradera que no requiere la oscuridad total para ser visible. Imágenes de buena calidad se puede obtener con una cámara normal y el cine. 3. Con un poco de práctica, BLUESTAR ® FORENSE hace imposible confundirse entre la sangre y los falsos positivos ya que la luminosidad cambia de color, intensidad y duración. 4. BLUESTAR ® FORENSE no altera el ADN y permite tanto la tipificación de ADN y posterior tipificación ABO. 5. BLUESTAR ® FORENSIC trabaja tan bien en sangre fresca como en manchas de sangre muy viejo o alterado, puro o diluido. D. SENSIBILIDAD EXTREMA BLUESTAR ® FORENSE es más sensible que otras pruebas de campo de presunción de sangre. Manchas de sangre tratadas con BLUESTAR ® FORENSE pueden ser visibles hasta 1:10.000 diluciones. Manchas invisibles reaccionar inmediatamente ante el reactivo BLUESTAR ® FORENSE la sangre, provocando una luminiscencia intensa de color azul (430 nm de longitud de onda) visibles a simple vista en la oscuridad. Su sensibilidad es tal que la sangre se evidencia en la cantidad más pequeña que el mínimo requerido para realizar ADN escribiendo.

Sangre en diluciones de 1 a 1:1.000 (a la luz del día) y después de rociar Bluestar (fotos tomadas en la oscuridad)

BLUESTAR ® FORENSE permite la detección de huellas invisibles o microscópicas de gotas de sangre, sobre todo contra un fondo oscuro. La visualización de las manchas no depende del tamaño de las manchas de sangre, sólo de la presencia real de la sangre. Gotas de sangre

BLUESTAR ® FORENSE produce una luminosidad más intensa y duradera que no necesita de la oscuridad total para ser visible. BLUESTAR ® FORENSE se puede rociar varias veces en la misma zona, por lo que la observación y la foto o la película más fácil de tomar. Fotografías probatorio se puede tomar con una cámara normal y el cine, por lo tanto la supresión de la necesidad de equipo sofisticado. Cómo tomar fotografías de reacciones de BLUESTAR ® FORENSE Lo que los franceses de la Gendarmería Nacional del Instituto de Investigación Penal (IRCGN) dice al respecto: «Esta nueva solución de BLUESTAR ® ofrece numerosas ventajas sobre una solución clásica de luminol. La intensidad de la luminiscencia es más alta, que dura más tiempo, y no requiere la oscuridad total para ser visible. Además, este producto químico es más estable en el tiempo, y todavía se pueden utilizar varios días después »de preparación. Probatorio fotografía La luminiscencia que se produce al aplicar BLUESTAR ® FORENSE reactivo sangre dura varios minutos y BLUESTAR ® FORENSE se puede

rociar varias veces en la misma zona, por lo que la observación y toma de fotografías más fácil. Fotografías probatorio se puede tomar con una cámara normal y el cine, por lo tanto la supresión de la necesidad de equipo sofisticado. Configuración de la cámara Indicativo 24 mm de la lente Película de 400 ISO Cámara en un trípode Apertura de diafragma 2.8 La exposición de 30 años Procedimiento Todo lo que se necesita es un cuarto oscuro con luz difusa. La luz natural difusa se prefiere a la luz artificial que da imágenes de color amarillento o verdoso. Un flash detrás del fotógrafo debe evitarse ya que la oscuridad total es difícil de obtener y es peligroso para el técnico para moverse. El técnico debe ajustar la cámara en un trípode de preferencia antes de tratar el área afectada a fin de evitar rociar.

Un nuevo reactivo DE ALTO RENDIMIENTO Y PROCEDIMIENTO PARA LA DETECCIÓN LATENTE mancha de sangre BASADOS EN QUIMIOLUMINISCENCIA luminol. BlueStar ® es una mancha de sangre el reactivo quimioluminiscente como resultado de nuestra investigación. Combina la facilidad de uso con riesgos mínimos de salud y no tiene efectos nocivos para la determinación del perfil de ADN. INTRODUCCIÓN Manchas de sangre se pueden encontrar en cualquier lugar de un crimen violento se ha producido. los patrones de manchas de sangre en el piso (de una herida que gotea, por ejemplo) o salpicada en las paredes se pueden interpretar de opinión para la reconstrucción de la escena del crimen. análisis de la prueba de ADN puede establecer el perfil genético (s) del participante (s) en un crimen violento. En consecuencia, manchas de sangre se encuentran entre la evidencia más de uso útil para el tribunal. Este hecho se está convirtiendo en conocida, como criminales ya menudo intento de limpiar la escena del crimen. Una amplia variedad de productos químicos pueden ser utilizados como pruebas presuntivas para detectar evidencia de estas limpiezas. métodos de detección de sangre están basados en la detección de hemoglobina y sus derivados (prueba de catalizador) o en la detección de proteínas y aminoácidos (no covalente a las proteínas). Sin embargo, el uso de algunas sustancias químicas pueden tener efectos adversos en la posterior tipificación de ADN Short Tandem Repeat (STR) y también se ha demostrado que los riesgos potenciales para la salud. Por ejemplo, la bencidina y orto tolidina-tienen un potencial cancerígeno (1-2) y verde leucomalaquita no permite la tipificación de ADN (3). Luminol (5-amino-2 ,3-dihydrophthalazine-1 ,4-diona) se ha convertido en la prueba más popular de pre-presuntivo de sangre en la investigación de la escena del crimen (4-6). La quimioluminiscencia propie-dades del luminol se informó por primera vez en 1928 por Alberto (7). En medio acuoso, un sistema de oxidación-ción y un catalizador de oxidación se requiere, además de las condiciones alcalinas. cationes de metales de transición, ya sea libre o complejos con ligandos orgánicos o inorgánicos, catalizan la oxidación de luminol quimioluminiscencia. Esta es la razón por las proteínas que contienen hemo y hemoglobina son

capaces de catalizar la quimioluminiscencia del luminol en presencia de un oxidante. Para establecer un ensayo de trabajo, la elección de los reactivos (oxidantes y alcalinos um medicina) y las condiciones de reacción (pH y las concentraciones de reactivo) debe ser cuidadosamente considerado. Existen dos formulaciones, Luminol he descrito por Grodsky (8) y Luminol II descrito por Weber (9). Estudios previos han demostrado que esta prueba no molestar a análisis de ADN (10-12), pero su uso se mantuvo difícil debido a la corta duración de la quimioluminiscencia (1314). El objetivo del presente estudio fue desarrollar una nueva formulación de Luminol, BlueStar ®, que sería fácil de usar en la escena del crimen o en un laboratorio y permitiría a una emisión de quimioluminiscencia más brillante y más duradera, sin efectos perjudiciales para Análisis de ADN, ni ningún peligro para el investigador de la escena del crimen. La primera parte del estudio tiene como objetivo optimizar las concentraciones de los distintos componentes. La segunda parte del estudio se centró en el rendimiento del reactivo de sangre nueva formulación. MATERIAL Y MÉTODOS: Los reactivos Luminol y el peróxido de hidrógeno fueron suministrados por SigmaAldrich (Lyon, Francia). El carbonato de potasio, carbonato de sodio, hidróxido de potasio, hidróxido sódico y perborato de sodio fueron adquiridos de Prolabo (Fontenay-sous-Bois, Francia). Las soluciones acuosas se prepararon con agua destilada desmineralizada. Instrumentación y procedimiento para la medición de quimioluminiscencia • Luz de las medidas para la optimización de las condiciones de reacción Los ensayos se llevaron a cabo mediante la adición de 90 L de reactivos adecuados (oxidante, base y luminol) en las concentraciones adecuadas para 10μL de sangre en los pocillos de placas de 96 pocillos de Nunc (comprado de Fisher Bioblock Científico, Illkirch, Francia). La luz de inten-sidad, expresada en unidades arbitrarias, se midió utilizando un luminómetro lector de placas (Luminoscope de Labsystems). • Luz mediciones utilizando kits comerciales mancha de sangre de detección quimioluminiscente

Micro-gotas (0,3 mL) de sangre sin diluir o diluido se depositaron en blanco la pared de azulejos y se seca a temperatura ambiente. Para cada juego, las soluciones de quimioluminiscencia fueron preparados según lo recomendado por el proveedor. Las soluciones se rocía desde una distancia de 50 cm en la pared de azulejos, que fueron inmediatamente introducidos en un cargo de refrigeración de alta sensibilidad (CCD) sistema de medición de la luz (Intelligent oscuro Caja II, Fuji Film). En las imágenes obtenidas, intensidad de la luz se cuantificó en unidades arbitrarias con un programa de película Fuji de análisis de imagen (Image calibre 3.12). • Rendimiento de la Bluestar ® kit de detección de manchas de sangre y la comparación con la solución de luminol comer-cial Para estimar la sensibilidad de la Bluestar quimioluminiscente ® mancha de sangre detec-ción del kit, diluciones diferentes, que van 01:05-un y diez 000, de la sangre en solución isotónica Se prepararon. Posteriormente, un 0,3 l de sangre diluida se depositaron en blanco la pared de azulejos y se seca a temperatura ambiente. Después de rociar la solución Bluestar ® y la solución comercial luminol en las manchas de sangre, la intensidad de la luz se midió. Estos azulejos se han introducido en el dispositivo de carga acoplada (CCD), sistema de medición de la luz y la emisión de luz se controló durante 10 minutos. Instrumentación y procedimiento para la prueba de ADN • Extracción de ADN y cuantificación Todas las extracciones de ADN se realizaron con el método de extracción orgánica (proteinasa K con un disolvente orgánico). Todas las muestras de ADN extraídas fueron quantitfied por slot blot análisis-sis (15) utilizando el kit de Quantiblot (Applied Biosystems, una división de Perkin Elmer, Branchburg, NJ). • STR amplificación y tipificación de ADN cadena de la polimerasa (PCR), amplificación del DNA de la plantilla ha realizado mediante el Perkin Elmer GeneAmp 9700 del sistema (Applied Biosystems, una división de Perkin Elmer, Branchburg, NJ). Aproximadamente 0,5 ng de DNA fue amplificado utilizando AmpFlSTR SGM ® Plus ® de amplificación de PCR kit (Applied Biosystems). Esta

cooperación kit-amplifica repite diez cortos dem tostado (STR): D16S539 D3S1358, vWA, D2S1338, D8S1179, D21S11, D18S51, D19S433, THO1, FGA, además de amelogenina. Análisis de ADN se realizó por capilaridad elec-trophoresis en el ABI PrismTM Genetic Analyzer (Applied Biosystems) de acuerdo con las recomendaciones del fabricante. El sistema fue prerun de aproximadamente 180 segundos (15 000V, 0,1 mA, 4,5 W, 60 ° C) antes de la inyección de la muestra. El sistema se permite la ejecución de unos 1500 segundos (15 000 V, 0,1 mA, 4,5 W, 60 ° C). tamaños de alelos se analizarse en tiempo real utilizando el método locales del Sur por GeneScan ® Versión Software de Análisis de 3.7 (Applied Biosystems). Química • Elección del agente oxidante Para la detección de manchas de sangre, perborato y el peróxido de hidrógeno son los oxidantes más utilizados. Sin embargo, debido a la inestabilidad de las soluciones de perborato, las mediciones con este oxidante no son reproducibles. En consecuencia, todos los experimentos se realizaron con peróxido de hidrógeno como agente oxidante. • Elección de la solución alcalina y el pH La máxima intensidad de luz se puede obtener en un rango de valores de pH entre 10,5 a 13, en función tanto en el catalizador y el reactivo oxidante utilizado (16). Tales condiciones alcalinas fuertes se pueden obtener con carbonato, en forma de sodio o sal de potasio, o una base fuerte como el hidróxido de sodio o hidróxido de potasio. Sin embargo, para permitir la prueba de ADN sobre manchas de sangre detectados con un método de quimioluminiscencia, el pH de la solución de rociado debe estar alrededor de 11.5. Con el fin de evitar problemas que podrían ocurrir con un pH excesivamente alto, un valor de 11 fue elegido y diferentes soluciones alcalinas fueron preparados con un pH cercano a este valor especificado. El valor de pH exacto se midió en las soluciones finales reaccionar con peróxido de hidrógeno y luminol, además del compuesto alcalino-line. Las diferentes soluciones que se rocía en idénticas manchas de sangre seca y los resultados se compararon mediante la medición de la intensidad de luz máxima. • Optimización del luminol y las concentraciones de peróxido de hidrógeno

Para determinar las concentraciones óptimas del luminol y el peróxido de hidrógeno en solución que contiene 25 mM de NaOH y diferentes concentraciones de luminol (1-10 mM) y el peróxido de hidro-generación (5-100 mM) se preparó. Procedimientos de la prueba de ADN BlueStar • ® Preparación BlueStar ® comprimidos (todos los kit comprimido) se diluyeron en mL de agua desionizada 125. La mezcla se rocía con un atomizador a una distancia de unos 50 cm. Se incluyeron dos controles para comprobar la preparación de cada uno: un control positivo (una pieza de material con tres depósitos de sangre en las relaciones de dilución de 1:10, 1:100, 1:1000) y un control negativo (una pieza de material sin sangre u otros productos biológicos). • Micro volúmenes genotipificación

de

muestreo,

detección

con

BlueStar

®

y

Minuto volúmenes de sangre fueron tomadas con una punta de la pipeta por la acción capilar. Esta técnica se utilizó en los casos A, B, C: A y B: dos ensayos idénticos, que constaba de tres depósitos de sangre, realizada con el fin de asegurar la repetibilidad del proceso. C: Seis depósitos de sangre. Cinco otros volúmenes de sangre fueron probados (0,1 l, 0,5 l, 1 l, 2,5 ly 5 l) con el fin de estimar la influencia de la cantidad de sangre en la prueba de ADN (Tabla 2 y las Figuras 3 y 4) • Falso positivo en la prueba Seis diferentes pruebas de sangre y diferentes relaciones de cloro (Tabla 3) se repitieron tres veces. Estos 18 puntos fueron extraídos y analizados por análisis de ADN. • Pruebas en diferentes tipos de materiales de apoyo diversos materiales de apoyo fueron probados: los absorbentes (papel tapiz, diversos tipos de papel, lana, paño para el revestimiento, hoja, varias maderas, moqueta, cartones diferentes), no absorbentes (corcho, tubo, diferentes tipos de plástico, botellas de vidrio, varios plantas, hojas

(muertos), papel de esmeril, un pedazo de metal con pintura acrílica, cinceles de metal oxidado, tierra batida), y loza porosa (terracota cerámica, concha de azúcar,). Cada material de apoyo se divide en tres áreas. En dos de las áreas, una mancha de sangre (20 mL) fue depositado, mientras que la tercera área permaneció vacía. Dos pruebas idénticas, que constaba de tres depósitos de sangre se utiliza para permitir la recreación de los procedimientos de prueba. BlueStar ® se difundió luego sobre las tres áreas, el tercero que actúa como un control negativo. RESULTADOS Química • Elección de la solución alcalina y el pH Como se muestra en la Tabla 1, la intensidad de la luz se mide en la presencia de 25 mM de NaOH fue mayor que en la presencia de otros compuestos alcalinos. Más precisamente, la intensidad de la luz emitida de acuerdo a la naturaleza del compuesto alcalino en el orden: NaOH KOH>> Na2CO3> K2CO3. Estos resultados coinciden con otras mediciones realizadas en diferentes valores de pH y para diferentes valores de las concentraciones de reactivos otros.

Como cuestión de hecho, a un valor pH dado y lo que las condiciones de reacción, a la luz intensidad medida en la presencia de sodio o hidróxido de potasio fue mayor que en la presencia de carbonato de sodio o de potasio. Por otra parte, los iones de sodio, ya sea con soluciones de hidróxido o de carbonato de soluciones, parece producir una mayor intensidad de la luz emi-sión de los iones de potasio en las soluciones correspondientes (Tabla 1). • Optimización del luminol y las concentraciones de peróxido de hidrógeno Los resultados seleccionados (Fig. 1-2) muestran que las condiciones óptimas de luz de medición se obtuvieron con una concentración de peróxido de hidrógeno de 50 mM y una concentración de luminol-ción de 10 milímetros. Sin embargo, para este último compuesto, un aumento al doble de la concentración de luminol, a partir de 5 milímetros a 10 milímetros producido un aumento de la intensidad de luz de sólo 8%. Por consiguiente, una concentración 5 mM luminol fue elegido. Por último las condiciones óptimas de reacción determinada para la detección de manchas de sangre eran un 25 mM de solución de NaOH contiene luminol 5 mM y 50 mM de peróxido de hidrógeno. Con las condiciones alcalinas elegido (pH = 11), la preferible concentraciones finales reactivo son: Luminol: 5 mM, NaOH: 25 mm, el H2O2: 50 milímetros (17). • microvolúmenes detección con BlueStar ® y genotipificación En todas estas pruebas, las manchas de sangre se visualiza claramente en la escena del crimen con BlueStar ® y las muestras pueden tomarse de las manchas de sangre detectadas. Además, parece también posible utilizar BlueStar ® en el laboratorio para detectar micro-manchas de sangre en diferentes tipos de objetos. Figuras 3 y 4 muestran la intensidad media de fluorescencia en función de las 10 repeticiones cortas en tándem (STR) y amelogenina en presencia de diferentes volúmenes de sangre. El éxito de la detección de STR se obtuvo manchas de sangre sobre la determinación del genotipo con diferentes cantidades de sangre (casos A, B y C y con diferentes volúmenes: l 0,1, 0,5 l, 1 l, 2,5 ly l 5). Esto permitió la

detección de la prueba de ADN, de 10 de STR y amelogenina con intensidades satisfacción historia (Fig. 5).

Antecedentes En 1928, un químico llamado Albrecht descubierto una sustancia química que, cuando se coloca en una solución alcalina con peróxido de hidrógeno y un catalizador, que emiten una luz azul intenso, sin calor expulsado. Este producto químico fue un precursor de la moderna luminol. En 1937, un científico llamado Specht Albrecht utilizar químicos para probar una variedad de artículos manchados de sangre. En 1951, Grodsky utilizan químicos Albrecht con carbonato de sodio, perborato de sodio y agua destilada para detectar trazas de sangre. fórmula Grodsky fue encontrado a ser inestables, con la adición de perborato de sodio. Una mejora en la fórmula Grodsky fue hecha por Weber (1966), quien reemplazó al perborato de sodio con peróxido de hidrógeno [1]. fórmula de Weber está en uso por los departamentos de policía en la actualidad. Luminol es el más comúnmente por el carbonato de sodio con el hidrógeno 1 Bluestar Forensic es un producto de la República de China de Importación del Grupo, 16 Avenue de la Costa, BP 246, Monte Carlo, Mónaco 98 005. Diario de identificación forense 708/56 (5), 2006 peróxido, 3 Aminophthalhydrazide, y agua destilada. En 2000, el Dr. Loic Blum (Universidad de Claude Bernard-Lyon) ideó una nueva fórmula basada en el luminol, que más tarde fue nombrado Bluestar forense [1]. Aunque Bluestar Forensic es luminol basado, es una fórmula patentada y no está disponible para su publicación [2]. la acción de Luminol (quimioluminiscencia) no debe confundirse con fluorescencia. Quimioluminiscencia requiere de un catalizador. En el caso del luminol, esto puede ser el hierro de la hemoglobina. Luminol para su uso en el trabajo policial se compran generalmente prefabricados y se mezcla con carbonato de sodio y peróxido de hidrógeno. Una desventaja de luminol es que puede producir falsos positivos cuando se utiliza en oxidantes fuertes, algunos iones metálicos, y peroxidasas. Esto significa que la luminiscencia, aunque menos pronunciado, se puede ver al luminol se rocía sobre el cobre (o cualquier otra aleación), blanqueadores y rábano [3]. Para superar esta limitación y para ayudar a reducir la interferencia de cloro en el luminol, lo mejor es permitir que las manchas de sangre se seque completamente (dando tiempo cloro para descomponer) [3]. Bluestar Forense fue producida originalmente para los cazadores. El agente de la sangre que revela se utiliza para ayudar a localizar a los animales heridos. El forense Bluestar utilizados para los cazadores tiene un pH de 12,6 y por lo tanto no es apto para el procesamiento de ADN

de la sangre. República de China de Importación Grupo hizo Bluestar Forense de trabajo de la policía para tener un pH de 11,5. Debido a que el pH ajustado, Bluestar Forensic es propicio para el ADN de STR [2]. Desde hace tiempo se sabe que el luminol no afecta al proceso de PCR o STR [4, 5, 6]. Bluestar Forense no muestra la degradación del ADN, y análisis de ADN con éxito se ha logrado hasta treinta días después de la aplicación de Bluestar forense [1]. Sin embargo, para este experimento se hizo hincapié en la facilidad de uso del producto químico y no su capacidad de ADN tipo, por lo tanto, una mezcla de sangre humana y equina se usó y no fue escrito. A los efectos de este experimento, la vida útil, el uso después de la preparación, y el ADN no se estudiaron. Métodos y Materiales Pruebas de Materiales Seis pares de ensayo de materiales se realizaron tres meses antes de los exámenes reales. Los cuatro primeros conjuntos de superficies de prueba (de madera de arce, la alfombra olefina, baldosas de vinilo y cerámica) fueron de configuración de la misma manera. Diario de identificación forense 56 (5), 2006 \ 709 Una pipeta de plástico se utiliza para poner las manchas de sangre impacto en cuatro muestras de cada superficie de ensayo. La sangre se dejó secar durante 12 días. La sangre se retiró luego de dos muestras de cada superficie de prueba con una esponja de celulosa que se había empapado en agua del grifo. La sangre de las superficies de prueba otros dos se eliminan con una esponja de celulosa que se había empapado en agua del grifo contiene cloro, en lo sucesivo como el cloro. Las muestras se agruparon para proporcionar dos muestras de cada superficie (un lavado con agua y un lavado con lejía) para cada tratamiento a probar (luminol y Forense Bluestar). La superficie quinto fue un nuevo azul de algodón 100% camiseta. Un shoeprint en la sangre fue puesta en la frente y el dorso de la camiseta. Las manchas se deja secar durante 12 días. La camiseta fue lavada y luego usando detergente de lavandería Purex en un ambiente cálido / lavado en frío durante 30 minutos. La caída camiseta seca durante 60 minutos. Un lado de la camiseta iba a ser tratados con luminol y el otro iba a ser tratados con Bluestar Forense. La superficie final fue un nuevo azul oscuro CoolMax (poliéster) camisa. Un shoeprint en la sangre fue puesta en la frente y el dorso de la

camiseta. Las manchas se deja secar durante 8 minutos y luego la camisa se colocó bajo el agua fría del grifo. La camisa se dejó secar durante 12 días. La camiseta fue lavada y luego usando detergente de lavandería Purex en un ambiente cálido / lavado en frío durante 30 minutos. La camisa era secadora por 60 minutos. Un lado de la camiseta iba a ser tratados con luminol y el otro iba a ser tratados con Bluestar Forense. Como muestra de control, dos láminas de vinilo fueron manchadas con agua con lejía. Preparación química El luminol se preparó de acuerdo a la Delincuencia del Departamento de Policía de Scottsdale protocolo de laboratorio. Diez gramos de carbonato de sodio y 0,2 g de luminol premezclado se mezclaron con 180 mL de agua destilada en un vaso de 1000 ml, y luego de 3 ml de peróxido de hidrógeno 180% añadió. Después de la mano de mezcla, la solución se colocó en una botella de spray. El forense Bluestar se preparó de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Dos Bluestar tabletas Forense (uno beige y una tableta blanca) fueron sacados de sus bolsas selladas Diario de identificación forense 710/56 (5), 2006 y se han añadido a ml de agua destilada en una botella de spray 175. La botella del aerosol fue cerrada y la boquilla del rociador se abrió a la ventilación. La solución se agitó suavemente meciendo la botella durante unos 5 minutos hasta que la disolución se señaló. La aplicación del luminol y Forense Bluestar era el mismo. El contenido de las botellas de aerosol se pulveriza en un movimiento de barrido en cada muestra de ensayo a una distancia de 15 a 18 centímetros del objeto. Fotografía Los resultados fueron fotografiados usando las técnicas estándar de la fotografía fluorescentes [7, 8]. Todas las fotografías fueron tomadas con una cámara Fuji S3 Pro Digital, con un rango de sensibilidad ISO de 400. exposiciones de prueba fueron tomadas antes del experimento para establecer la configuración óptima de la exposición. El experimento se llevó a cabo en un entorno de laboratorio con luces tenues durante las pruebas Bluestar Forense y un tono más oscuro (aproximadamente una diferencia de parada) el medio ambiente para el luminol. La apertura se fijó en f/6.7 para todas las fotografías. Las fotografías tiempo de exposición varió ligeramente con el tratamiento inicial de las seis superficies de prueba (madera, alfombras, baldosas de vinilo, baldosas de cerámica, camiseta, hoja de plástico) (es

decir, 3 segundos para que el forense Bluestar y 4 segundos para el luminol) . El tiempo de exposición de las superficies durante el segundo tratamiento fue el mismo para el forense Bluestar y el luminol (es decir, 4 segundos). Las fotografías tiempo de exposición para el tratamiento inicial en la camisa CoolMax se extendió a 8 segundos para que el forense Bluestar y 30 segundos para que el luminol. Las exposiciones se realizaron durante el segundo tratamiento. Diario de identificación forense 56 (5), 2006 \ 711 Resultados y Discusión Los resultados de estos experimentos se muestran en la Tabla 2 y las Figuras 1 - 12. En todos los casos, Bluestar Forense superó luminol. La alfombra mostró los mejores resultados tanto para los reactivos, lo más probable debido a que la alfombra había manchas de sangre de la mejor visual antes de la tinción. Las baldosas de vinilo y el azulejo de cerámica también mostraron fuertes reacciones. La diferencia más obvia entre los reactivos en estas superficies es la fuerza de la quimioluminiscencia en el aerosol de la segunda Forense Bluestar. La mayoría de las reacciones se llevó a cabo en las zonas donde se había limpiado la sangre con agua solamente. Al parecer, la lejía elimina cualquier rastro de la sangre de la mayoría de las superficies. Fue sorprendente observar que, además de la alfombra, sin falsos positivos se observaron entre los reactivos y el cloro. Ambos reactivos se sabe que reaccionan con los materiales en lejía. La única reacción a las zonas limpiadas con lejía era la alfombra, sin embargo, no hay diferencia en el color o la intensidad se pudo determinar entre el agua y las zonas de lejía. Esto puede deberse a que el cloro no llegar a algunas de las manchas de sangre más integrados en los hilos de la alfombra. Por lo tanto, en este experimento no fue posible estudiar propuestas Bluestar Forensic luminiscencia ligera intensidad con falsos positivos. El lavado y secado de algodón 100% camiseta azul no parece interferir con la intensidad de la luminiscencia de luminol o Forense Bluestar. La camisa azul oscuro CoolMax no mostró ninguna reacción a cualquiera de los reactivos. Esto fue probablemente debido a que la sangre había sido lavado con agua del grifo antes y después de la aplicación lavar a continuación. ventaja Bluestar Forensic más de luminol fue más evidente en la capacidad de ver su reacción, sin necesidad de completa oscuridad. A pesar de la reactividad de luminol podría tener la misma intensidad que cuando está en completa oscuridad, en condiciones de poca luz, el luminol se mensurable menos intenso. Bluestar Forensic es mucho más

brillante que el luminol en condiciones de iluminación. En la escena del crimen donde se establece la oscuridad completa no es posible, Bluestar Forense tiene la ventaja.

• Falso positivo en la prueba Bleach da una reacción positiva con BlueStar ®. Sin embargo, esta reacción es visualmente diferentes de la reacción con una mancha de sangre. Un ojo experto puede ver inmediatamente la diferencia entre una mancha de cloro (aspecto difuso) y una mancha de sangre (manchas claramente definidas). Por otra parte, la lejía se diluye la sangre y hace que la detección de los eas de los últimos IER. En 18 casos (Tabla 3) el blanqueo de sangre producidos quimioluminiscencia con BlueStar ®. En todos los casos, 10 STRs y amelogenina dio un resultado positivo con una intensidad de amelogenina un promedio de 1,980 UA (Fig. 5). La concentración de cloro no afectó análisis de ADN, y este producto químico se evita que nei-no BlueStar ® detección ni análisis de ADN. • Pruebas en diferentes tipos de materiales de apoyo

Manchas de sangre se puede detectar con BlueStar ® en diferentes materiales. Sin embargo, debe prestarse especial atención a los materiales hidrofóbicos porque la fumigación de BlueStar ® conduce a la dispersión en la sangre. La competencia del técnico es un factor crucial para localizar con precisión la mancha de sangre. Comparación con otra solución luminol comerciales La intensidad de la luz en t0, es decir, inmediatamente después de la pulverización, fueron 344 600 au con la Bluestar ® solución y 143 500 UA con un nivel Grodsky fórmula basada comerciales kit. Los resultados (Fig. 6) muestran que después de 1 minuto, la intensidad de la luz se acerca a 0 con el sistema comercial normal, mientras que con la Bluestar ® solución, la intensidad de la luz fue del 83% del valor inicial medido en t0. Por otra parte, después de 7 minutos con la solución de BLUESTAR ®, la luz se midió todavía el 10% del valor inicial y después de 10 minutos, incluso si la lumi-señal de indígenas fue sólo el 1% de la inicial, todavía era cuantificable (3 100 UA).

Como era de esperar, cuanto menor sea el factor de dilución, menor será la intensidad de la luz (Fig. 7). Es notable observar que la sangre muy diluida (1:10 000), la emisión de luz era todavía cuantificables (1 730 UA). El funcionamiento del kit de detección de manchas de sangre Bluestar ® BlueStar ® permite la detección de manchas de sangre diluida hasta 1:1000 (sangre diluida en agua estéril). Sin embargo, el análisis de ADN es posible con diluciones de 1:250 a 1:500. En conclu-sión, la información facilitada por BlueStar ® es muy prometedor para la detección de manchas de sangre.

Un nuevo producto, Bluestar Forensic1, ya está disponible como un sustituto de luminol. Aunque Bluestar Forensic es luminol y basado en funciones de la misma manera como el luminol, sus propiedades hacen que sea más conveniente para las investigaciones de la escena del crimen: No requiere de completa oscuridad, se mantiene la quimioluminiscencia mismo después de cada pulverización, se puede utilizar hasta varios días después de la mezcla, y no requiere un conocimiento de la química [1] (Tabla 1). Lo más importante para los investigadores es que Bluestar Forensic es conveniente preparar. El propósito de este experimento fue determinar si Bluestar Forensic es una mejor opción que el luminol para su uso en la escena del crimen.

Luminol Bluestar Forense Las necesidades de casi completa oscuridad No necesita más completa oscuridad La disminución de la luminiscencia en la segunda aplicación Mantiene la misma luminosidad durante una segunda aplicación Laboratorio de preparación es necesario Fácil de mezclar en el campo No hay tiempo de conservación después de la mezcla Puede ser utilizado durante varios días después de la mezcla No destructivo para ADN No destructivo para ADN Use of Bluestar Forensic in Lieu of Luminol at Crime Scenes

Lisa Dilbeck Scottsdale Police Department Scottsdale, AZ CLASIFICACICÓN DE LA FUERZA DE REACCIÓN DE LUMINOL VS BLUE STAR EN DIFERENTES DILUCIONES EN PISO VINILICO 0 1 2 3

quimioluminiscencia quimioluminiscencia quimioluminiscencia quimioluminiscencia

no vista débil moderada fuerte

CONCLUSIÓN BlueStar esta nueva mezcla de luminol ® permite la detección de sangre oculta en las zonas lavadas. Si el sustrato es poroso y lo utiliza el agente de limpieza, BlueStar ® da una reacción positiva, la reacción se observa, bajo condiciones de poca luz, en la forma de quimioluminiscencia azul corto pero renovable que es más largo y más fuerte que el kit Grodsky comercial basado en fórmulas. Reacciones positivas falsas pueden ser eliminados después de un análisis de ADN se lleva a cabo. Quedan algunas limitaciones debido a la cantidad de sangre y de los umbrales de cada tecnología-nique. El umbral para la detección de ADN es mayor que el umbral de esta nueva formulación-la. Por lo tanto, una detección visual no garantiza un análisis de ADN exitosa. En conclusión, este reactivo luminol nuevo ha demostrado ser muy eficiente en los ámbitos forenses para localizar lavados / diluir manchas de sangre y ahora se utiliza habitualmente en Francia.