La Biorremediacion en Colombia (4)

LA BIORREMEDICION EN COLOMBIA

Victoria C. MONTENEGRO, Maribel LOPEZ, Juan P. CORTES, Oscar H. GUTIERREZ, Leidy P. RIOS.

Resumen. El artículo pretende realizar un análisis acerca de la biorremediacion en Colombia teniendo en cuanta que esta se ha convertido en el aliado número uno para descontaminar el medio ambiente, gracias a su efectividad representada en tiempo, dinero y porcentaje de remoción. En Colombia las diferentes técnicas de biorremediacion son usadas principalmente por las industrias petroleras ya que los hidrocarburos derivados del petróleo son uno de los mayores contaminantes ambientales en nuestro país debido a que la presencia de grupos terroristas sumado a los errores humanos y accidentes ocurridos en campo generan grandes derrames de hidrocarburos que se han convertido en un problema ambiental a gran escala que preocupa en nuestra república Colombia. Palabras claves: Biorremediación, impacto ambiental, descontaminación, hidrocarburos y organismos vivos Introducción. El hombre en su evolución industrial y tratando de mejorar su calidad de vida ha estudiado e investigado creando un nuevo mundo, en donde el transporte es veloz y los alimentos variados se pueden obtener en todas partes; para alcanzar el desarrollo actual ha hecho uso de todo tipo de materias primas que se encuentran en la naturaleza como el carbón, oro, sal, bosques, agua, petróleo, etc. extrayendo y tirando sin medida los recursos, obteniendo como consecuencia sustancias contaminantes provenientes de aquellas actividades industriales, mineras, agropecuarias, artesanales, y domésticas. Esto es una lenta amenaza para los seres vivos, porque causa alteración en los ciclos biogeoquímicos, en la cadena alimenticia y afecta el ecosistema, también ocasiona daños irreparables para ciertos ambientes dejándolos inhabitables, esta problemática aumenta incontrolablemente y el hombre a su vez preocupado por desarrollar métodos que contrarresten los daños causados por el mismo, crea tecnología e investiga en el campo biológico. MARCO TEORICO Para tratar y restaurar el medio ambiente que ha sido contaminado ya sea suelo, agua, sedimento o

fango se hace uso de los seres vivos como las bacterias, algas, hongos y plantas por medio del proceso de la biorremediación, el cual se basa en una tecnología ambiental amigable en donde los microrganismos degradan los contaminantes en unos menos tóxicos. Los contaminantes orgánicos persistentes (hidrocarburos, plaguicidas organoclorados) presentes en el suelo y en el medio marino son químicos que por lo general pueden llegar directamente un ecosistema, como en la aplicación de un plaguicida, o accidentalmente, por los derrames en lagos y ambientes marinos, generando pérdidas económicas y un gigantesco desequilibrio ambiental (4) Las técnicas utilizadas para biorremediación son dos: In-situ que se realiza sin la necesidad de trasladar la zona afectada y que intenta acelerar el proceso en el mismo ambiente modificando las condiciones ambientales o por inoculaciones microbianas. Se está convirtiendo en una alternativa popular porque es más barata que otros métodos de limpieza. Se trata de acelerar los procesos degradadores naturales de biodegradación mediante el suministro de oxígeno y nutrientes a la

pluma contaminante prolongado. (5)

durante

un

periodo

Las técnicas in- situ más utilizadas son: Bioaireación o Bioventeo que es una forma de estimulación realizada con gases, como por ejemplo oxígeno y metano, estos son adicionados de forma pasiva mediante un sistema de extracción e inyección en el suelo para estimular la actividad microbiana y biodegradar los hidrocarburos. (12) Inyección de aire a presión o biosparging: consiste en inyectar aire a presión en la parte inferior para deslazar el agua de los espacios intersticiales de la matriz del suelo. (7) Atenuación natural: Su característica principal es la utilización de los procesos físico-químicos de interacción contaminante-suelo y los procesos de biodegradación que tienen lugar de forma natural en el medio. Estos procesos se conocen como procesos de biotransformación natural que reducen la concentración de los contaminantes y se usa en casos donde existe contaminación producida por hidrocarburos halogenados o no halogenados. Bioestimulación que consiste en estimular los microorganismos nativos del suelo adicionando nutrientes como nitrógeno o fósforo. Bioaumentación que es la inoculación de una alta concentración de microorganismos en el suelo contaminado para facilitar la biodegradación. Como se van a inocular, estos microorganismos deben ser seleccionados del suelo que se desea tratar. (Mulas, R.) Ex-situ en donde se traslada la zona contaminada para tratarla en una planta externa. Las técnicas pueden aplicarse utilizando diferentes procesos pueden ser aerobios o anaerobios como : fitorremediación la cual comprende un conjunto de tecnologías que reducen la concentración de diversos compuestos a partir de procesos bioquímicos realizados por las plantas que tienen la capacidad de absorber, acumular, metabolizar, o estabilizar aquellos contaminantes. (10) Landfarming es la técnica más usada para la biorremediación de los lodos contaminados con

hidrocarburos y de otros desechos de la industria petrolera, se realiza trasladando los contaminantes a un suelo no contaminado, el cual ha sido preparado con anterioridad. Gran parte de los microorganismos del suelo no pueden ser recuperados en medios para el cultivo de microorganismos. Además de una búsqueda general, se realiza una específica a través de medios selectivos y diferenciales, en la cual se pretende aislar ciertos morfo tipos como las Pseudomonas y bacterias lactosa positivas, debido a su actividad degradadora de hidrocarburo. Tratamiento de bio suspensión en donde se excava el suelo contaminado y se introduce dentro de un reactor añadiendo nutrientes, agua, y cultivos microbianos para llevar a cabo la degradación. Diversidad microbiana en ambientes contaminados: Los suelos contaminados contienen gran cantidad de microorganismos que pueden incluir un número de bacterias y hongos capaces de utilizar hidrocarburos que representan un uno por ciento (1%) de la población total de aproximadamente 104 a 106 células por gramo de suelo. También, se han encontrado cianobacterias y algas capaces de degradar hidrocarburos. Los suelos contaminados con hidrocarburos contienen más microorganismos que los suelos no contaminados, pero su diversidad microbiana es más reducida. (14) De las ventajas de la biorremediación se pueden decir que es poca la contaminación que se transfiere entre un medio y otro, es poco intrusiva y no requiere componentes estructurales, además que es un proceso economico. Para la aplicación de este proceso se tienen en cuenta varios factores que son: 1. Las propiedades del contaminante, es decir la capacidad del contaminante en biodegradarse, por ejemplo los hidrocarburos alifáticos se degradan rápidamente. 2. La presencia de comunidades microbianas adecuadas que tengan la capacidad de metabolizar la sustancia.

3. Para que la degradación pueda ocurrir se necesita que el contaminante interaccione con la célula en el medio acuoso. 4. Las condiciones del medio contaminado que permiten o no el crecimiento de los microrganismos y el metabolismo del compuesto, a veces hay que bio estimular las condiciones del medio añadiendo nutrientes o aireándolos. (17) Los contaminantes que puedan ser degradados por los seres vivos son: los compuestos orgánicos que tienden a ser degradados total o parcialmente y eliminados por completo del ecosistema como por ejemplo, compuestos contaminantes como el tolueno, el fenol o los polibifenilos clorados (PCBs) pueden ser utilizados como fuente de carbono por bacterias, tanto en condiciones aeróbicas como anaeróbicas. Bacterias de los géneros Pseudomonas, Ralstonia, Burkholderia o Mycobacterium pueden eliminar (15) hidrocarburos aromáticos como el tolueno o el naftaleno, pesticidas como las atrazinas, aditivos de la gasolina como el tricloruro de etilo o sustancias venenosas como el cianuro potásico, tanto de ambientes sólidos como líquidos. [3]. Dentro de este grupo de microorganismos se destacan: Las bacterias: son el grupo de organismos más abundante en los suelos. Dichos organismos son un grupo diverso con variaciones extensivas en las propiedades morfológicas, ecológicas y fisiológicas y son los principales degradadores de compuestos orgánicos naturales y xenobióticos encontrados en el suelo. Las más comunes son Pseudomonas, Arthrobacter, Achromobacter, Micrococuss, Vibrio, Acinetobacter, Brevibacterium, Corynebacterium y Flavabacterium. . [2] De acuerdo a la tolerancia del oxígeno se clasifican en: Aerobios estrictos: que requieren de oxígeno para de desarrollo.

Aerobias facultativas: crecen en presencia o ausencia de oxigeno Eutrofas: crecen en presencia concentraciones de sustratos

de

altas

Oligotrofas: crecen con concentraciones trazas. (20) Los hongos son altamente protistas, no tienen movimiento y emplean materia orgánica como fuente de carbono y energía. Algunos de los hongos mejor conocidos son mohos, levaduras y setas. Estos son menos numerosos y crecen a velocidades considerablemente bajas; además, los procesos metabólicos de éstos son menos diversos, tienden a ser más tolerantes a los ácidos que las bacterias y son más sensibles a la variación en la humedad. Un hongo que tiene un considerable potencial en el tratamiento de compuestos orgánicos peligrosos es Phanerochaete chrysoporium, hongo de la podredumbre blanca. Este organismo produce una encima extracelular peroxidasa que degrada la lignina en presencia del peróxido; se ha encontrado que degrada una alta variedad de compuestos altamente clorados y recalcitrantes. . [2] Microorganismos concretos: Los microorganismos aislados en suelos poseen actividades de peroxidasas y oxigenasas, que permiten la oxidación de algunas fracciones del petróleo. Esta oxidación cambia las propiedades de los compuestos haciéndolos susceptibles a ataques secundarios y facilitando su conversión a bióxido de carbono y agua. . [2] Rhodococcus. Uno de los géneros bacterianos más explotados en bioprocesos no convencionales es Rhodococcus, un grupo único consistente en microorganismos que presentan una gran diversidad metabólica, capaz de transformar, biodegradar y utilizar como única fuente de carbono compuestos hidrófobos, posee una gran variedad de vías metabólicas para la degradación y modificación de compuestos aromáticos, incluyendo las actividades de di-oxigenasa y monooxigenasa sobre anillos, así como la actividad de ruptura de catecol. Algunas cepas presentan también la vía del 3-oxoadipato. Lo anterior sumado a su capacidad de crecimiento en medios con escasos nutrientes, la carencia de un sistema

de represión catabólica y su persistencia ambiental las hacen excelentes candidatas para los tratamientos de biorremediación. Dentro de las aplicaciones industriales y ambientales, se incluye la producción de ácido acrílico y acrilamida, conversión de esteroides, biorremediación de hidrocarburos clorados y fenoles, a lo que se añade su gran capacidad de degradar hidrocarburos alifáticos halogenados y numerosos compuestos aromáticos, como los HAP´s (hidrocarburos poli cíclicos aromáticos). Nuevas especies de Rhodococcus que presentan una nueva mutación tienen la capacidad de degradar compuestos alifáticos con enlaces dobles principalmente en el noveno carbono del grupo metilo terminal (alquenos). . [2] Pseudomonas. Las bacterias de este género poseen la habilidad para utilizar diversos substratos, incluyendo aquellos creados por el petróleo. Las Pseudomonas son bacterias Gram negativas, obicuas, que pertenecen a la subclase gamma del Proteo bacterias. La Pseudomonas aeruginosa, es otro de los microorganismos más usado y estudiado en biorremediación. Estudios con relación al desempeño metabólico de esta Pseudomona ha permitido identificarla como degradadora de gran cantidad de sustratos como el n-hexadecano, mineralización de compuestos alifáticos en condiciones anaerobias, y degradadora de hidrocarburos aromáticos y poli aromáticos. . [2]

Implementación de las biorremediación en Colombia

técnicas

de

En Colombia el impacto ambiental de los derrames de crudo presenta como resultado considerable cantidad de hectáreas afectadas, además de los kilómetros de ríos y quebradas. Estos daños a cuerpos de agua, suelos, aire, fauna y flora, causados por actos terroristas a la infraestructura petrolera o como resultado de la actividad de la extracción del petróleo, son prácticamente irremediables, ya que los procesos de descontaminación no alcanzan a cubrir todas las áreas afectadas y se realizan mucho tiempo después de que el crudo ha penetrado al ecosistema. . [3].

Origen y composición del petróleo En Colombia el potencial petrolífero se estima en más de 47 mil millones de barriles. El petróleo es el resultado de la degradación anaeróbica de materia orgánica, durante largos períodos de tiempo y bajo condiciones de alta temperatura y presión, que la convierte en gas natural, crudo y derivados del petróleo. El petróleo crudo es una mezcla extremadamente compleja y variable de compuestos orgánicos, donde la mayoría de los ellos son hidrocarburos, que varían en peso molecular desde el gas metano hasta los altos pesos moleculares de alquitranes y bitúmenes. Estos hidrocarburos pueden presentarse en un amplio rango de estructuras moleculares: cadenas lineales y ramificadas, anillos sencillos, condensados o aromáticos. Los dos grupos principales de hidrocarburos aromáticos son los monocíclicos, el benceno, tolueno y xileno (BTEX) y los hidrocarburos policíclicos (PAHs) tales como el naftaleno, antraceno y fenantreno. La biorremediación de suelos contaminados por hidrocarburos se lleva a cabo mediante técnicas de biorremediación In situ y ex situ. Biorremediación in situ: Biolabranza, Bioaireación, Bioestimulación, Bioaumentación. (17) Biorremediación Ex situ: Compostaje, Birreactores. En Colombia los procesos de biodegradación han sido enfocados principalmente al tratamiento de suelos. El Centro de Investigaciones Microbiológicas de la Universidad de los Andes ha desarrollado diferentes estudios encaminados al aislamiento y bioaumentación de bacterias nativas degradadoras de crudo en suelos impactados por derrames del oleoducto Caño Limón Coveñas. En otros estudios se han tratado suelos a través de biolabranza y adición de nutrientes, obteniendo porcentajes de degradación de hidrocarburos totales del petróleo entre el 35%-61% En el 2010, Roldan, F., et al, evaluó, la biodegradación y la lixiviación de hidrocarburos totales de petróleo (HTP) durante la atenuación natural (AN) en los procesos de los lodos aceitosos utilizados en el mantenimiento de caminos no pavimentados, este estudio fue realizado por un camino situado en Arauca

(Colombia) y al mismo tiempo en el laboratorio donde las condiciones de lluvia se han simulado mediante el uso de columnas. García, E., et al, en el año 2011, evaluó el proceso de Bioestimulación por nutrientes utilizando fertilizantes inorgánicos compuestos y sales inorgánicas simples en suelos contaminados con hidrocarburos utilizando respirometría. (18) Otra forma que se puede aplicar es con bacterias se utiliza este tipo de proceso en las zonas costeras para tratar los residuos de hidrocarburos. Independiente de la técnica o proceso que se realice debe hacerse minuciosamente con un seguimiento desde el inicio. Debemos mencionar por ejemplo que en el laboratorio de biotecnología de la empresa colombiana de petróleos ECOPETROL, se adelantan trabajos de investigación de biorremediación para diagnosticar y descontaminar suelos y aguas subterráneas con hidrocarburos, a la vez están desarrollando un producto llamado ECOBIOL-TPH constituido por una combinación de bacterias nativas, no modificadas genéticamente, con capacidad degradadora de compuestos hidrocarbonados para la biorremediación de suelos y residuos contaminados con hidrocarburos. (13) CASOS EXITOSOS DE IMPLEMENTACION BIORREMEDIACION EN COLOMBIA.

DE

1. LA APLICACIÓN DE BACTERIAS MARINAS NATIVAS DEGRADADORAS DE COMPUESTOS ORGÁNICOS PERSISTENTES EN COLOMBIA. En Colombia se ha venido incrementando la concentración de compuestos orgánicos persistentes especialmente en zonas costeras y marinas, por tal motivo el instituto de investigaciones marinas y costeras José Benito vives de Andrés INVEMAR, se ha encargado de aislar e identificar especies bacterianas marinas y estearinas nativas con capacidad degradadora de COP con el apoyo financiero de COLCIENCIAS y la cooperación de la universidad de los andes y los institutos de oceanologia y bioproductos marinos de cuba, y con la colaboración de las corporaciones autónomas regionales costeras CARSUCRE, CVS, CRC Y CORPONARIÑO con el objetivo de contribuir

a la implementación de bacterias marinas autóctonas que puedan ser empleadas en procesos de biorremediación de ecosistemas marinocosteros impactados por contaminantes orgánicos persistentes en el caribe y pacifico colombiano mediante procesos de aislamiento, selección, caracterización y aplicación a escala de laboratorio. La realización del proyecto ha permitido el Intercambio de información y tecnologías en el campo de la biorremediación (nacionales e internacionales). Así mismo, se ha dado inicio a la consolidación de la colección de bacterias marinas y estuarinas de Colombia, con cada una de las cepas aisladas por la técnica de subcultivo a 4°C (medio mínimo de sales + contaminante orgánico + aceite mineral) y en Crio conservación a 70°C (glicerol), en las instalaciones del INVEMAR. (18) 2. TRATAMIENTO DE ACEITES, LODOS DE PLANTAS DE TRATAMIENTO DE AGUAS RESIDUALES Y EMULSIONES PROVENIENTES DEL PROCESO DE DECAPADO, LAMINACION Y GALVANIZACION DEL ACERO A TRAVES DE LA BIORREMEDIACION DE SUELOS: LANDFARMING. La empresa Acerías de Colombia Acesco consiente del compromiso social derivado de la cercanía de sus plantas de producción al circuito de ciénagas de la franja oriental del departamento del atlántico diseña el tratamiento de Landfarming que ha sido exitoso en el tratamiento de los hidrocarburos de petróleo tales como combustible diesel, aceites combustibles, lodos en base a aceite, preservantes de madera, hidrocarburos policíclicos aromáticos (PAHs y creosote), desechos de coque, y algunos pesticidas. La eficacia del tratamiento es menor a medida que se incrementa el peso molecular de los contaminantes a ser degradados. También los compuestos clorados, o nitrogenados son por lo general difíciles para degrada con el fin de evitar la contaminación de los cuerpos de agua, en donde se degradan los contaminantes por aireación y la adición de nutrientes a la superficie contaminada para aumentar la velocidad de biodegradación natural de los lodos y los residuos aceitosos al

mezclarlos con arena, bacterias biodigestoras de hidrocarburos y otros nutrientes. Las bacterias utilizadas son del género Pseudomonas las cuales tienen la capacidad de utilizar los compuestos orgánicos de los grupos genéricos alifáticos, ciclo alifáticos, aromáticos y / o hidrocarburos aromáticos polinucleares a través de sus plásmidos metabólicos y acelerar el proceso de degradación. Poseen la habilidad para utilizar diversos substratos, incluyendo aquellos creados por el petróleo. Las Pseudomonas son bacterias Gram negativas, obicuas, que pertenecen a la subclase gamma de las Proteo bacterias. Las Pseudomonas son bacterias productoras de biosurfactantes como los ramnolipidos involucrados en procesos de remoción de aceites y productos relacionados. El objetivo del proyecto no es obtener un abono orgánico, sino obtener un relleno constructivo, con la concentración de los compuestos peligrosos para el suelo, dentro de los parámetros exigidos por la norma NTC. Evitando de esta manera la contaminación de suelos y cuerpos de agua cercanos. (6)

CONCLUSIONES A través del estudio de la biorremediación y sus deferentes técnicas se puede concluir que son métodos eficaces para la recuperación y estabilización del medio ambiente, y que no generan efectos adversos o negativos en su utilización.

Por otro lado se considera que la realización de este artículo fue de gran ayuda para adentrarnos en este curso tan importante para nuestra carrera ya que tiene gran impacto en los contaminantes logrando reducir su afectación en el medio ambiente.

BIBLIOGRAFIA. [1]. Eweis J, Ergas S, Chag D, Schoroeder E. (1999). Principios de Biorrecuperación. 1 ed. McGraw-Hill. Madrid, España. 327 pp. [2]. Torres, K., Zuluaga T. (2009). Biorremediación De Suelos Contaminados Por Hidrocarburos. Medellín – Colombia. Universidad Nacional de Colombia. [3]. Vargas, P., Cuellar R., Dussan, J. (2004). Biorremediacion de residuos de petróleo. Bogotá: Revista Hipótesis UNIANDES. (4) Gomes, M. (2005). bacterias marinas http://www.invemar.org.co/redcostera1/invemar/ docs/2653bacterias.pdf (5)Rincón Lizcano Martha 2004 Estudio de la biorremediacion como un alternativa en la mitigación de la contaminación ambiental http://repositorio.uis.edu.co/jspui/bitstream/1234 56789/7021/2/114220.pdf (6)Rio, P. (2009).II. Tratamiento de aceites lodos de plantas de tratamiento de aguas residuales y emulsiones provenientes del proceso de decapado, laminación y galvanización del acero a través de la biorremediación de suelos: Landfarming. Barranquilla: simposio iberoamericano de ingeniería de residuos. Rede de ingeniería de saneamiento ambiental. Recuperado en agosto del 2014 de: http://www.redisa.uji.es/artSim2009/TratamientoY Valorizacion/Tratamiento%20de%20aceites%20lod os%20de%20planta%20de%20tratamiento%20de% 20agua%20residuales%20y%20emulsiones%20prov enientes%20del%20proceso%20de%20decapado% 20laminaci%C3%B3n%20y%20galvanizaci%C3%B3n %20del%20acero.pdf (7)Biorremediacion técnicas más usadas http://es.slideshare.net/nataliaosinaga/biorremedi acion-de-suelos-agua-y-aire

(8)Ingeniería Recuperado

ambiental. Agosto

Biorremediación. del 2014 de:

http://www2.uah.es/tejedor_bio/bioquimica_ambi ental/biorremediacion.pdf

eliminar-contaminantes-respetuosa-con-elmedio-ambiente/

(9)Pardo Martínez, C.I. (2012). Selección de Tecnologías Limpias. Módulo didáctico. Bogotá: Universidad Nacional Abierta y a Distancia – UNAD.

(16)Sánchez, J. Luis, J. (2003).Fundamentos y aspectos microbiológicos. Biorremediación. Universidad de Oviedo. Recuperado en agosto del 2014 de: http://ingenierosdeminas.org/docu/documentos/f undamentos_%20biorremediacion.pdf

Posada, R.H. (2012). Procesos de Biorremediación. Módulo didáctico. Bogotá: Universidad Nacional Abierta y a Distancia – UNAD (10)Biorremediación. Recuperado Agosto del 2014 de: https://docs.google.com/document/edit?id=12Hrx Kvh2BhuG4RSy6rMw0sDGyxgwJSiMTOz0QvsIAmI& hl=es: (11)Tropical and Subtropical Agroecosystems. (2011).Fitorremediación: una Alternativa para eliminar la Contaminación. Recuperado Agosto del 2014 de: http://www.scielo.org.mx/scielo.php?pid=S187004622011000200002&script=sci_arttext Kelly, C, Gaither, K. K., Baca-Spry, A., Cruickshank, B. J. (2000). Incorporation of phytoremediation strategies introductory chemistry laboratory. Chem Educator. 5:140-143. Cherian, S., Olivera, M. (2005). Transgenic plants in phytoremediation recent advances and new possibilities. Environmental Science Technology. 39: 9377-9390. Cho, C., Yavuz-Corapcioglu, M, Park, S., Sung, oil Ann Air. Water, K. (2008). Effects of Grasses on the Fate of VOCs in Contaminated Soil and Air. Water, Air, Soil Pollution. 187:243-250. Eapen, S., Sing, S., D´Souza, S. F, (2007). Advancs in development of transgenic plants for remediation of xenobiotic polluntans. Biotechnology Advances. 25: 442-451. (15)Carmona, N. (2008). Biorremediación (I): una estrategia para eliminar contaminantes respetuosa con el medio ambiente. P Arieu theologies ewb. Recuperado en agosto del 2014 de:

http://oldearth.wordpress.com/microbios-enaccion/biorremediacion-i-una-estrategia-para-

(17)Ñustez, D. (2012).. Biorremediación para la degradación de hidrocarburos totales presentes en los sedimentos de una estación de servicio de combustible. Universidad tecnológica de Pereira. Recuperado en agosto del 2014 de: http://repositorio.utp.edu.co/dspace/bitstream/11 059/2779/1/6281683N975.pdf (18)Gomes, M. (2005). Biorremediación con bacterias marinas. Instituto de investigaciones marinas y costeras José Benito vives de Andrés. Recuperado en agosto del 2014 de: http://www.invemar.org.co/noticias.jsp?id=1783 &idcat=105 (19)Gomez, M. Vivas, L. Ruiz, R. Reyes, V. Hurtado, C. (2006). Bacterias marinas nativas degradadoras de los compuestos orgánicos persistentes en Colombia. Santa Marta: Instituto de investigaciones marinas y costeras José Benito Vives de Andréis. Retomado en agosto del 20014 de: http://www.invemar.org.co/redcostera1/invemar/ docs/2653bacterias.pdf (20)Fisiología y metabolismo bacteriano http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/Fisiologiay MetabolismoBacteriano.pdf (21)Rincón, M. (2004). Estudio de la biorremediación como una alternativa en la contaminación ambiental. Bucaramanga: Universidad industrial de Santander. Mulas, R. Fundamentos de la biorremediación. Recuperado en agosto del 2014 de: http://datateca.unad.edu.co/contenidos/358046/E NTORNO_DE_CONOCIMIENTO/UNIDAD_2/Fundam _Biorremediacion.pdf

(12) Samanez Elizabet 2008 Biodegradación bacteriana por bioestimulación en suelos contaminados con petróleo crudo http://cybertesis.unmsm.edu.pe/xmlui/bitstream/ handle/cybertesis/245/samanez_ge.pdf?sequence= 1 Bioestimulacion in situ http://www.miliarium.com/prontuario/Tratamient oSuelos/Bioestimulacion.asp (13)biorremediación de suelos contaminados por hidrocarburos http://www.bdigital.unal.edu.co/815/1/32242005_ 2009.pdf (14)Biorremediacion de los residuos del petróleo Vargas Gallego Paola http://hipotesis.uniandes.edu.co/hipotesis/images/ stories/ed04pdf/Biorremediacion.pdf