Kromatografi Lapis Tipis

 

BAB I  PENDAHULUAN  1.1 

Latar Belakang 

Ada banyak teknik pemisahan tetapi kromatografi merupakan teknik paling banyak digunakan. Kromatografi sangat diperlukan dalam kefarmasian dalam memisahkan suatu campuran senyawa. Kromatografi merupakan metode pemisahan yang sederhana. Dalam kromatografi, komponen-komponen terdistribusi dalam dua fase. Salah satu fase adalah fase diam. Kromatografi mencakup berbagai proses yang berdasarkan pada perbedaan distribusi dari  penyusunan cuplikan antara dua fasa. Satu fasa tetap tinggal pada system dan dinamakan fasa diam. Fasa lainnya dinamakan fasa gerak menyebabkan perbedaan migrasi dari penyusun cuplikan. Prosedur kromatografi masih dapat digunakan, jika metode klasik tidak dapat dilakukan karena jumlah cuplikan rendah, kompleksitas campuranyang hendak dipisahkan atau sifat berkerabat zat yang dipisah Kromatografi dibagi menjadi beberapa macam, tetapi pada praktikum Farmakognosi II yang digunakan hanya 2 jenis kromatografi yaitu kromatografi kertas dan kromatografi lapis tipis. Oleh karena itu, pada makalah ini hanya akan dijelaskan kedua kromatografi tersebut.

1.2 

Rumusan Masalah 

1.  Apakah pengertian dari kromatografi ? 2.  Prinsip KLT 3.  Cara kerja KLT

 

  1.3 

Tujuan 

1.  Untuk mengetahui pengertian dan cara kerja dari d ari kromatografi. 2.  Mengetahui prinsip KLT 3.  Mengetahui cara kerja KLT

 

  BAB II  PEMBAHASAN 

2.1 

Pengertian Kromatografi Lapis Tipis 

Kromatografi Lapis Tipis Yaitu kromatografi yang menggunakan lempeng gelas atau alumunium yang dilapisi dengan lapisan tipis alumina, silika gel, atau bahan serbuk lainnya. Kromatografi lapis tipis pada umumnya dijadikan metode pilihan pertama pada pemisahan dengan kromatografi. Kromatografi lapis tipis digunakan untuk pemisahan senyawa secara cepat, dengan menggunakan zat penjerap berupa serbuk halus yang dipaliskan serta rata pada lempeng kaca. Lempeng yang dilapis, dapat dianggap sebagai “kolom kromatografi terbuka” dan pemisahan dapat didasarkan pada penyerapan, pembagian atau gabungannya, tergantung dari jenis zat  penyerap dan cara pembuatan lapisan zat penyerap dan jenis pelarut. Kromatografi lapis tipis dengan penyerap penukar ion dapat digunakan untuk pemisahan senyawa polar. Harga Rf yang diperoleh pada kromatografi lapis tipis tidak tetap, jika dibandingkan dengan yang diperoleh  pada kromatografi kertas. Oleh karena itu pada lempeng yang sama di samping kromatogram zat yang di uji perlu dibuat kromatogram zat pembanding kimia, lebih baik dengan kadar yang  berbeda-beda (Dirjen POM, 1979, hal. 782).

2.2

Prinsip kerja Kromatografi Lapis Tipis 

 

Prinsip kerjanya memisahkan sampel  berdasarkan perbedaan kepolaran antara sampel dengan  pelarut   pelarut  yang digunakan. Teknik ini silika  dan fase geraknya disesuaikan dengan  biasanya menggunakan fase  fase  diam dari bentuk plat silika   jenis sampel yang ingin dipisahkan. Larutan atau campuran larutan yang digunakan dinamakan eluen eluen   Semakin dekat kepolaran antara sampel dengan eluen maka sampel akan semakin terbawa oleh fase gerak tersebut.

2.3 •

 

Cara Kerja Kromatografi Lapis Tipis 

Sebuah garis menggunakan pinsil digambar dekat bagian bawah lempengan dan setetes pelarut dari campuran pewarna ditempatkan pada garis itu.

•

 

Ketika bercak dari campuran itu mengering, lempengan ditempatkan dalam sebuah gelas kimia  bertutup berisi pelarut dalam jumlah yang tidak terlalu banyak. Perlu diperhatikan bahwa batas  pelarut berada di bawah garis dimana posisi bercak berada.

•

 

Menutup gelas kimia untuk meyakinkan bawah kondisi dalam gelas kimia terjenuhkan oleh uap dari pelarut. Untuk mendapatkan kondisi ini, dalam gelas kimia biasanya ditempatkan beberapa kertas saring yang terbasahi oleh pelarut. Kondisi jenuh dalam gelas kimia dengan uap mencegah  penguapan pelarut.

2.4 

Nilai RF 

Jarak antara jalannya pelarut bersifat relatif .  Oleh karena itu, diperlukan suatu  perhitungan tertentu untuk memastikan spot yang terbentuk memiliki jarak yang sama walaupun walaup un ukuran jarak plat nya berbeda. Nilai perhitungan tersebut adalah nilai Rf, nilai ini digunakan sebagai nilai nilai   perbandingan   perbandingan  relatif antar sampel. Nilai Rf juga menyatakan derajat retensi suatu

 

] komponen dalam fase diam sehingga nilai Rf sering juga disebut faktor retensi. retensi. Nilai Rf dapat

dihitung dengan rumus berikut : Rf = Jarak yang ditempuh substansi/Jarak yang ditempuh oleh pelarut Semakin besar nilai Rf dari sampel maka semakin besar pula jarak bergeraknya senyawa  plat   kromatografi lapis tipis. Saat membandingkan dua sampel yang berbeda di tersebut pada  plat  bawah kondisi kromatografi yang sama, nilai Rf akan besar bila senyawa tersebut kurang kuran g  polar   dan berinteraksi dengan adsorbent  polar  polar dari plat kromatografi lapis tipis.  Nilai Rf dapat dijadikan  dijadikan  bukti  bukti  dalam mengidentifikasikan  mengidentifikasikan  senyawa. senyawa. Bila identifikasi nilai Rf memiliki nilai yang sama maka senyawa tersebut dapat dikatakan memiliki  memiliki   karakteristik   yang sama atau mirip. Sedangkan, bila nilai Rfnya berbeda, senyawa tersebut dapat dikatakan merupakan senyawa yang berbeda. Kromatografi digunakan untuk memisahkan substansi campuran menjadi komponenkomponennya. Seluruh bentuk kromatografi berkerja berdasarkan prinsip ini.Kromatografi adalah teknik pemisahan campuran berdasarkan perbedaan kecepatanperambatan komponen dalam medium tertentu. Pada kromatografi, komponen-komponennya akan dipisahkan antara dua buah fase yaitu fase diam dan fase gerak.Fase diam akan menahan komponen campuran sedangkan fase gerak akanmelarutkan zat komponen campuran. Komponen yang mudah tertahan  pada fasediam akan tertinggal. Sedangkan komponen yang mudah larut dalam fase gerak akanbergerak lebih cepat. Semua kromatografi memiliki fase diam (dapat berupa padatan,atau kombinasi cairan-padatan) dan fase gerak (berupa cairan atau gas). Fase gerakmengalir melalui fase diam dan membawa komponen-komponen yang terdapat dalamcampuran. Komponenkomponen yang berbeda bergerak pada laju yang berbeda Proseskromatografi juga digunakan dalam metode pemisahan komponen gula dari komponennon gula dan abu dalam tetes menjadi fraksi-fraksi terpisah yang diakibatkanolehperbedaan adsorpsi, difusi dan eksklusi komponen gula dan non gula tersebut terhadap adsorbent dan eluent yang digunakan. Pelaksaanan kromatografi lapis tipis menggunakan sebuah lapis tipis silika atau aluminayang seragam pada sebuah lempeng gelas atau logam atau plastik yang keras. Jel silika(atau alumina) merupakan fase diam. Fase diam untuk kromatografi lapis tipisseringkali  juga mengandung m engandung substansi yang mana dapat berpendar flour dalam sinarultra violet.Fase gerak merupakan pelarut atau campuran pelarut yang sesuai. Fase diamlainnya yang biasa digunakan

 

adalah alumina-aluminium oksida. Atom aluminium padapermukaan juga memiliki gugus -OH. Apa yang kita sebutkan tentang jel silikakemudian digunakan serupa untuk alumina. Dalam kromatografi, eluent adalah fasa gerak yang berperan penting pada proses elusibagi larutan umpan (feed) untuk melewati fasa diam (adsorbent). Interaksi antaraadsorbent dengan eluent sangat menentukan terjadinya pemisahan komponen. Olehsebab itu pemisahan komponen gula dalam tetes secara kromatografi dipengaruhi oleh lajualir eluent dan jumlah umpan. Eluent dapat digolongkan menurut ukuran kekuatanteradsorpsinya  pelarut atau campuran pelarut tersebut pada adsorben dan dalam hal iniyang banyak digunakan adalah jenis adsorben alumina atau sebuah lapis tipis silika.Penggolongan ini dikenal sebagai deret eluotropik pelarut. Suatu pelarut yang bersifat larutan relatif polar, dapat mengusir  pelarut yang relatif tak polar dari ikatannyadengan alumina (jel silika).

BAB III  PENUTUP  3.1

Kesimpulan 

Kromatografi Lapis Tipis Yaitu kromatografi yang menggunakan lempeng gelas atau alumunium yang dilapisi dengan lapisan tipis alumina, silika gel, atau bahan serbuk lainnya. Kromatografi lapis tipis pada umumnya dijadikan metode pilihan pertama pada pemisahan dengan kromatografi. Saran 

Penulis menyadari bahwa makalah ini masih jauh dari sempurna, oleh karena itu penulis sangat mengharapkan saran dan kritik yang sifatnya membangun agar dalam pembuatan makalah selanjutnya bias lebih baik lagi, atas perhatiannya penulis ucapkan terimakasih.

DAFTAR PUSTAKA 

Dirjen POM, (1979), Farmakope Indonesia Edisi III, Departemen Kesehatan RI, Jakarta Rohman, (2009), Kromatografi untuk Analisis Obat, Graha Ilmu, Yogyakarta Yog yakarta Sastrohamidjojo Hardjono, (1985 ), Kromatografi, Edisi kedua, Liberty , Yogyakarta Stahl Egon, (1985), Analisis Obat secara Kromatografi dan Mikroskopi, ITB, Bandung. Bandun g.

 

Makalah Kimia Analitik Kromatografi Lapis Tipis

BAB I  PENDAHULUAN 

1.1 Latar Lelakang

Didalam sebuah produk seperti cairan vitamin atau obat sejenis serta produk pangan lainnya terkadang sulit untuk membedakan dengan benar tentang unsur / zat yang terkandung didalamnya. Dengan adanya kemajuan teknologi dibidang elektrokimia saat ini telah memiliki peranan penting dalam menentukan berbagai kandungan / unsur zat didalam cairan. Adapun teknologi yang masih digunakan saat ini seperti penerapan metode kromatografi. Kromatografi ( Chromatography )  )   sebenarnya secara harfiah berasal dari nama "warna menulis", namun tak ada hubungan secara langsung kecuali senyawa pertama yang mengalami pemisahan dengan cara ini adalah pigmen hijau tumbuhan, seperti klorofil. Kromatografi adalah suatu nama yang diberikan untuk teknik pemisahan tertentu. Pada dasarnya semua cara kromatografi menggunakan dua fasa yaitu yang pertama, fasa tetap ( Stationary Phase ) Phase ) dan kedua, fasa bergerak ( Mobile Phase  Phase  ). Dengan adanya penelitianpenelitian baru yang memungkinkan untuk menerapkan prinsip kromatografi pada senyawa-senyawa yang tak berwarna termasuk gas. Adapun perkembangan pesat dari beberapa jenis sistem kromatografi diantaranya adalah ; Kromatografi kertas, kromatografi lapisan tipis ( Thin Layer Chromatography ), ) , kromatografi gas ( Gas Chromatography ), ), dan kromatografi cair kinerja tinggi ( High Performance Liquid Chromatography ). Pada kromatografi lapisan tipis, terdapat lapisan  lapisan   tipis ( tebal 0.1-2 mm ) yang terdiri atas bahan padat yang  yang  dilapiskan kepada permukaan penyangga datar ( plat ), yang biasanya terbuat dari kaca, tetapi dapat pula terbuat dari plat polimer atau logam. Lapisan yang melekat pada  pada  permukaan dengan bantuan bahan pengikat, biasanya kalsium sulfat dan kromatografi lapisan tipis dapat digunakan untuk keperluan yang luas dalam pemisahanpemisahan.  pemisahanpemisahan.  Seperti halnya, kromatografi lapisan tipis yang banyak digunakan akhir-akhir ini oleh sebagian besar laboratorium di Indonesia menggunakan alat berupa TLC  TLC  Scanner 3 merk CAMAG ( Made in Switzerland ) dengan metode kromatografi lapisan tipis, yang mana proses pengambilan sample yang berada pada permukaan plat  plat  (tempat sample yang telah dilakukan pemisahan) menggunakan scanner didalam alat tersebut kemudian hasilnya ditransfer ke PC dan

 

dilakukan proses  proses  selanjutnya. Dan kelebihan dari TLC Scanner 3 CAMAG  CAMAG  sendiri adalah mampu menganalisa senyawa berwarna dan tak berwarna, membutuhkan waktu yang relatif cepat.

1.2 Rumusan Masalah

1.  Apa yang dimaksud dengan kromatografi ? 2.  Apa yang dimaksud dengan kromatografi lapis tipis ? 3.  Apa kelebihan dan kekurangan kromatografi lapis tipis ? 4.  Bagaimana prinsip kerja kromatografi lapis tipis ? 5.  Apa yang dimaksud dengan kromatogram ? 6.  Apa yang dimaksud dengan fase diam dan fase gerak dalam kromatografi lapis tipis? 7.  Bagaimana prosedur kerja dengan kromatografi lapis tipis ? 8.  Bagaimana cara mendeteksi bercak pada kromatografi k romatografi lapis tipis ? 9.  Apa saja yang mempengaruhi analisis kromatografi lapis tipis ? 10.  Bagaimana aplikasi kromatografi lapis tipis dalam bidang pangan ?

1.3 Tujuan Penelitian

1.  Untuk mengetahui apa yang dimaksud dengan kromatografi. 2.  Untuk mengetahui apa yang dimaksud dengan kromatografi lapis tipis. 3.  Mengetahui apa kelebihan dan kekurangan ke kurangan kromatografi lapis tipis. 4.  Mendeskripsikan bagaimana prinsip keja kromatografi lapis tipis. 5.  Untuk mengetahui apa yang dimaksud dengan kromatogram. 6.  Untuk mengetahui apa yang dimaksud dengan fase diam dan fase gerak ge rak dalam kromatografi lapis tipis.

 

7.  Mendeskripsikan bagaimana prosedur kerja dengan kromatografi lapis tipis. 8.  Mendeskripsikan bagaimana cara mendeteksi bercak pada kromatografi lapis tipis. 9.  Untuk mengetahui apa saja yang mempengaruhi analisis kromatografi lapis tipis.

10.  Untuk mengetahui bagaimana aplikasi kromatografi lapis tipis dalam bidang pangan.

1.4 Metode Penelitian 

Metode yang di gunakan dalam penyusunan makalah ini merupakan metode tinjauan kepustakaan yang bertujuan untuk mempelajari buku-buku yang relevan dengan masalah yang di teliti serta melakukan tinjauan langsung terhadap objek pengamatan yang dilakukan pada saat praktikum kimia analitik. Penelitian ini dilakukan untuk bagaimana aplikasi Kromatografi Lapis Tipis dalam bidang pangan.

1.5 Manfaat Penulisan 

1.  Bagi Pemerintah Bisa dijadikan sebagai sumbangsih dalam meningkatkan kualitas ketahanan pangan Indonesia serta agar terus mengembangkan teknologi te knologi yang menunjang pada penelitian dalam bidang pangan. 2.  Bagi Dosen Bisa dijadikan sebagai acuan dan sumbangsih dalam mengajar terutama pada materi ini agar para peserta didiknya dapat berprestasi lebih baik dimasa yang akan datang. 3.  Bagi Mahasiswa Bisa dijadikan sebagai bahan kajian belajar dalam rangka meningkatkan prestasi diri.

BAB II  PEMBAHASAN 

 

  2.1  Kromatografi Secara Umum  2.1.1 Pengertian Kromatografi 

Kromatografi di tahun 1903 Tswett menemukan teknik kromatografi. Teknik ini bermanfaat sebagai cara untuk menguraikan suatu campuran. Dalam kromatografi, komponen-komponen terdistribusi dalam dua fase. Salah satu fase adalah fase diam. Transfer massa antara fase bergerak dan fase diam terjadi apabila molekul-molekul campuran serap pada permukaan partikel-partikel atau terserap di dalam pori-pori partikel atau terbagi ke dalam sejumlah cairan yang terikat pada permukaan atau di dalam pori. Ini adalah sorpsi (penyerapan). Laju perpindahan suatu molekul zat terlarut tertentu di dalam kolom atau lapisan tipis zat penyerap secara langsung berhubungan dengan bagian molekulmolekul tersebut diantara fase bergerak dan fase diam. Jika ada perbedaan penahanan secara selektif, maka masing-masing komponen akan bergerak sepanjang kolom dengan laju yang tergantung pada karakteristik masing-masing penyerapan. Jika pemisahan terjadi, masing-masing komponen keluar dari kolom pada interval waktu yang berbeda, mengingat bahwa proses keseluruhannya adalah fenomena migrasi secara diferensial yang dihasilkan oleh tenaga pendorong tidak selektif berupa aliran fase bergerak.

2.1.2 Klasfikasi Metode Kromatografi 

Metode-metode kromatografi tidak dapat dikelompokan dengan hanya meninjau suatu macam sifat. Artinya kita dapat menyatakan teknik-teknik kolom seperti destilasi, ekstraksi pelarut, penukar ion ke dalam satu kelas, tetapi teknik tersebut dapat juga diklasifikasikan dengan berdasarkan metodemetode differential migration. Pada semua metode differential migration, pemisahan berbagai komponen campuran yang bermigrasi pada berbagai medium tergantung pada karakteristik laju individual komponen-komponennya, sehingga dapat dikatakan bahwa dalam kalsifikasi, sesungguhnya terjadi tidak hanya satu sifat fisis saja yang ditinjau tetapi ganbungan-gabungan yang digunakan dalam teknik pemisahan. Semua metode-metode pemisahan dapat diklasifikasikan seperti dalam tabel 2.1, didasarkan pada sifat fisiknya dan pemisahan fasenya.

 

Tabel 2.1 Klasifikasi Kromatografi Memebedakannya dalam fase

Pemisahan fase kedua  No 

tunggal 

Dasar  Dengan Dengan reagen 

panas 

1. 

2. 

3. 

Penguapan  Koefisien partisi  Penukaran 

Destilasi 

Dengan

Konsentrasi

bidang batas 

tidak seragam 

- 

- 

- 

Kromatografi gas 

- 

- 

- 

Penukar ion 

- 

- 

- 

Foam fraction 

- 

- 

- 

Elektro foresis

Adsorpsi pada Aktivitas 4. 

permukaan 

- 

kromatografi gaspadat  Moleculer sieve

5. 

Ukuran molekuler 

- 

Filtrasi gel Analisis eksklusi ion 

6. 

Migrasi

- 

- 

listrik 

Dibandingkan dengan metode pemisahan secara keseluruhan, klasifikasi metode kromatografi, relative lebih sederhana. Fase gerak dapat berupa gas atau cairan, sedangkan fas diam dapat berupa zat cair atau padat. Jadi kita memiliki kombinasi cair-cair, gas-cair, gas-padat. Jika pemisahan terutama meliputi suatu partisi sederhana antara fase diam cair dan fase gerak cair juga, maka proses ini dikenal sebagai kromatografi partisi. Jika gaya fisika ke permukaan terutama meliputi kemampuan retensi dari fase diamnya, maka proses disebut sebagai kromatografi adsorpsi. Jika fase bergeraknya adalah gas, metode ini disebut sebagai kromatografi gas cair atau kromatografi gas-padat. gas -padat.

 

Untuk senyawa yang mudah menguap, kromatografi gas merupakan cara yang menawarkan resolusi tinggi, waktu analisis pendek dan kepekaan di daerah ppm. Metode kromatografi cair memanfaatkan fase gerak cair untuk menggeser sampel sepanjang kolom partisi yang diisi oleh pengadsorpsi padat atau zat padat yang diselimuti cairan seperti dalam HPLC. Di dalam kromatografi, pertukaran ion ikatan kimia heteropolar terbentuk secara reversible antara komponen-komponen ion di dalam fase bergerak dan fase diam. Penyerapan gel atau filtrasi gel adalah suatu contoh kromatografi eksklusi. Kromatografi kertas dan kromatografi lapis tipis adalah contoh-contoh kromatografi partisi. Suatu deskripsi singkat dari berbagai metode pemisahan akan dibahas berikut ini untuk mengetahui prinsip-prinsip dasar dan aspek-aspek analitik masing-masing metode. a.  Destilasi : ini adalah penguapan zat cair dan kondensasi dari uap kembali ke fase cair. Penguapan zat cair sebanding dengan tekanan uapnya dan berbanding terbalik terhadap titik didih cairnya. Sublimasi juga suatu metode pemisahan baik. Keberhasilan metode ini tergantung pada kemudahan massa transfernya dilaksanakan jika zat berada dalam fase gas. b.  Ekstaraksi pelarut. c.  Kromatografi adalah proses melewatkan sampel melalui suatu kolom, perbedaan kemampuan adsorpsi terhadap zat-zat yang sangat mirip mempengaruhi resolusizat terlarut dan menghasilkan apa yang disebut kromatogram. Prinsip kromatografi adsorpsi berhubungan juga dengan bidang-bidang lain seperti kromatografi zat padat. Pemisahan campuran ionik atau bermutan dengan differential migration dibawah pengaruh gaya pendorong potensial listrik telah dikembangkan. Pertama meliputi migrasi bebas dalam medium homogen dan migrasi kedua yang terjadi pada medium berpori yang stabil. Pertama disebut sebagai elektrofase dan yang kedua dikenal sebagai ionoforesis atau elektromatografi. Teknik yang kedua banyak diapakai dalam pemisahan. d.  Teknik ring oven : oven : teknik ini berkaitan dengan pengujian suatu tetesan tunggal larutan pada suatu kertas menyaring untuk mengetahui komponen-komponen larutan. Larutan ditetesi satu kali pada pusat kertas saring (yang berbentuk lingkaran), kemudian satu atau beberapa komponen sampel akan terekat pada kertas dengan pengendapan. Komponen-komponen terlarut dipindahkan dengan pelarut yang tepat sehingga bergeser dari pusat sampai bagian tepi kertas saring. Begitu larutan mencapai bagian tepi, penguapan pelarut terjadi dan zat terlarut akan tertinggal pada suatu area dalam bentuk cincin-cincin yang manunjukkan bahwa pemisahan dari bercak tetesan mula-mula.

 

e.   Zone melting : melting : di sini dua wilayah tertentu yang meliputi penampang lintang suatu zat padat dilelehkan dengan perlahan-lahan digerakkan sepanjang batang zat padat. Zat terlarut akan dibebaskan pada saat pembekuan pada bidang batas padat-cair dan terbawa sepanjang wilayah serta akan menggumpal pada salah satu ujung zat padat. Imi merupakan mer upakan proses selektif untuk mengluarkan pengotor.

f.  Penukar ion. Dalam ekslusi sifat-sifat fisika materi  materi  sintetik baru memberikan suatu era baru terhadap pemekaian materi-materi tersebut dalam pemisahan secara difusi. Misalkan dalam pengaliran larutan dengan pelarut air melalui resin, zat yang bersifat non ionik akan mendistribusikan dirinya sedemikian rupa sehingga dapat melalui fase resin, sedangkan yang senyawa ionik ditolak dari fase resin. g.  Dialisis : osmosis adalah proses pemisahan berdasarkan difusi yang paling dikenal dan ini disebabakan aliran spontan sutu pelarut melalui membrane dari larutan yang encer ke larutan yang lebih pekat. Membrannya bersifat semi permeabel terhadap partikel zat terlarut. Dialisis dan osmosis sering kali terjadi secara spontan di dalam system. Dengan dialisis garam-garam dapat dipisahkan dari suspense koloid. h.  Presipitasi, kopresipitasi dan sebagainya. Ini adalah suatu proses dimana suatu zat terlarut diubah ke bentuk tidak larut yang selanjutnya dapat dipisahkan dari larutannya. i.  Flotasi : senyawa-senyawa dengan kerapatan lebih besar dari pada cairan yang menyelimutinya dapat dikonsentrasikan pada permukaan zat cair. Ini dikenal sebagai pemisahan dengan teknik flotasi. Pengaliran udara melalui larutan diperlukan pada metode ini. Suatu partikel dapat distabilkan pada permukaan seperti bidang batas permukaan gas-cair jika suatu kontak antara padatan dan cairan nilainya tertentu. Perbedaan sudut kontak ini menghasilkan flotasi selektif. Bagaimanapun hanya metode kromatografi yang mempunyai peranan sangat berarti dalam analitik.

2.1.3 Terminologi Kromatograf Kromatografii 

Kromatografi dapat dilukiskan dengan berbagai istilah. Istilah yang paling sering dijumpai adalah nilai Rf  juga dikenal sebagai faktor retardasi, atau dinyatakan juga sebagai volume retensi (V R) atau waktu retensi (t  (t R). semua ini adalah suatu besaran yang menyatakan berapa lama fraksi waktu molekul zat terlarut tinggal dalam fase bergerak. Masing-masing senyawa mempunyai nilai R  atau V R yang berbeda dengan berubahnya kombinasi pelarut penyerap. Suatu koefisien partisi (K  (K d) menyatakan konsentrasi zat terlarut dalam tiap fase. Jika C s,  C M adalah konsentrasi zat terlarut dalam fase diam dan

 

fase bergerak, maka K d = C c / C m. faktor retardasi (R (Rf ) menyatakan perbandingan kecepatan pergeseran zat terlarut terhadap senyawa standar ideal yang tidak terlarutkan ataupun yang tidak teradsorpsi oleh fase diam. Berarti untuk zat senyawa standar K d = 0, sedangkan R adalah Jika t m, t s adalah waktu tinggal molekul di dalam fase bergerak dalam fase diam. Jika penampang lintang dan K d tidak konstan sepanjang lintasan zat terlarut, kita memiliki Rf sebagai berikut : Karena kecepatan gerak zat pelarut lebih besar dari pada fase bergerak, maka R lebih besar dari Rf sebesar 15%. Jika R  adalah fraksi zat terlarut pada keadaan kesetimbangan pada fase berserak, maka (1(1- R  R)) adalah fraksi zat terlarut pada keadaan kesetimbangan di fase diamnya. Maka : Dimana : C M = volume fase bergerak V M = konsentrasi fase bergerak C S = volume fase diam V S = konsentrasi fase bergerak Pada kromatografi adsorpsi V s dapat menggantikan A menggantikan As dan dipunyai Jika A Jika  As adalah luas daerah fase diam. Persamaan untuk faktor retardasi adalah mirip dengan %E, %E, persen ekstraksi dalam ektraksi pelarut yang menyatakan , maka Karena D  ≈ K D, D, sedangkan V w  dan V o adalah volume fase air dan fase organic. Dalam suatu kromatografi kolom, maka terdapat volume yang cukup berarti dari fase gerak yang meninggalkan kolom pada saat jumlah zat terlarut mencapai maksimum ketika meninggalkan kolom. Keadaan puncak maksimum zat terlarut dicapai pada saat seoaruh zat terlarut sudah terelusi dengan volume retensi V (juga dikenal dengan V maks maks) dan separuh lainnya masih tinggal di dalam kolom pada fase gerak V M + V s dimana V R C M = V M C M + V S C S  V R = V M + V S  x K d  d  

2.1.4 Prosedur Kromatografi 

 

Untuk melaksanakan pemisahan secara kromatografi kolom, ada tiga cara dapat dilakukan : a)  Analisi frontal b)  Analisis elusi

c)  Pergeseran Dalam arus kromatografi, effluent dikumpulkan dalam fraksi-fraksi yang berbeda dan masingmasing komponen terdeteksi dalam aliran effluent. Pada analisis frontal, larutan contoh dilewatkan secara kontinu melalui pengadsorpsi. Pusat-pusat aktif mengadsorpsi akan di duduki oleh komponen yang lebih kuat teradsorpsi sedangkan komponen yang kurang kuat teradsorpsi berakumulasi pada fase yang bergerak. Pada mulanya pelarut murni dan zat telarut A yang teradsorpsi paling lemah akan meluncur ke luar kolom. Jika di plotkan %E terhadap volume effluent, maka diperoleh suatu kurva yang berbentuk tangga, dimana bagian datarnya menyatakan keluarnya suatu komponen zat terlarut. Pada zat-zat terlarut yang sedikit teradsorpsi, analisis frontal akan memeberikan hasil yang baik bila kolomnya sempit dan volume yang digunakan kecil. Analisis elusi adalah teknik yang paling popular. Eluent (dapat saja pelarut murni) dilewat melalui kolom yang dapat menyebabkan differential migration zat-zat terlarut dalam fase bergerak. Jika laju alirannya tertentu, maka pemisahan tergantung pada K D. D. Jika masing-masing komponen mempunyai perbedaan K D besar, masing-masing komponen akan terpisah sempurna. Pada teknik penggeseran, pemisahan tercapai dengan mengalirkan suatu reagen yang teradsorpsi lebih kuat ke dalam kolom. Agen penggeseran ini teradsorpsi dan konsentrasi pada suatu wilayah puncak kolom. Semua komponen sampel terdorong keluar dan oleh pergerakan maju agen penggeser sepanjang kolom. Terbentuklah wilayah-wilayah dengan kekuatan penyerapan yang makin menurun. Komponen yang paling lemah terikat akan keluar pertama dari kolom sedangkan agen penggeser akan keluar terakhir. Keuntungan teknik ini adalah kolom dapat diisi dengan sampel cukup banyak. Untuk tujuan prepatatif, kadang kala pemisahan yang sempurna tidak tercapai, meskipun tailing sudah diusahakan seminimum mungkin. Metode penggeseran sangat bermanfaat dalam kromatografi partisi. Elusi secara bertahap (gradient (gradient elution) elution) merupakan salah satu variasi kondisi elusi selama terjadinya pemisahan. Pada kroatografi gas, cairan dengan kemampuan menggeser lebih kuat digunakan. Dengan cara demikian pelebaran pita dan waktu elusi yang terlalu lama dapat dihindarkan.

 

2.1.5 Dinamika Kromatografi 

Efektivitas pemisahan tergantung pada penguraian komponen-komponen pada saat komponen tersebut berpindah dan kepadatan wilayah yang ditempati komponen-komponen tersebut. Oleh karena itu ukuran efisiensi kolom dapat dinyatakan oleh jumlah piringan : W  =  = lebar puncak elusi W e = lebar kurva elusi kesetimbangan (yaitu tengah – tengah – tengah  tengah jarak C max max dan W ) Kolom dapat dibagi atas sejumlah piringan dimana dianggap kesetimbangan sempurna terjadi antara fase bergerak dan fase diam pada masing-masing piringan. Jumlah piringan dan tinggi piringan adalah suatu indeks efisiensi kolom yang berguna untuk menggambarkan seberapa jauh suatu puncak dan wilayah pita telah melebar sebagai akibat fenomena transpor fisika. Biasanya tinggi piringan dinyatakan sebagai ∆ atau H = L/N.  L/N.  Tingkat pemisahan dua komponen adalah suatu masalah yang umum dijumpai dalam semua metode kromatografi. Pada prakteknya yang dapat dilakukan adalah meminimalkan tumpangsuh (overlap overlap)) atau kontaminasi timbal balik antara wilayah-wilayah yang berdekatan ke suatu tingkatre solusi eksperimental yang dikehendaki, yaitu :  Z   = = pemisahan pusat wilayah atau puncak Gaussian dan = deviasi standar zona. Jika Rs < 1,0, tumpangsuh (overlap ( overlap)) terjadi. Kontaminasi terjadi terutama pada titik tengah antara wilayah tumpangsuh pada jarak dibawah jarak 2  , yaitu 2%, Rs = 1,5 tidak ada kontaminasi timbal balik. Dapat dikatakan : Dimana W 2 dan W 1 = lebar pucak rata-rata. Pada umumnya makin besar jumlah piringan makin baik resolusinya. N dapat diperbaiki dengan memeperpanjang. Tetapi memperpanjang kolom saja tidak bermanfaat. Yang lebih baik adalah memperbesar jumlah piringan dan penampang kolom yang sempit. Untuk memperoleh analisis yang sempurna diperlukan pemilihan kondisi sehingga nilai waktu retensinya tidak terlalu besar. Unutk analisis effluent secara kontinu, perlengkapan otomatis dan kolektor fraksi sangat tepat digunakan. Hendaknya yang diukur merupakan sifat yang berfungsi secara linear terhadap sifat fase bergeraknya. Jumlah total dari zat terlarut yang terelusi diukur dari luas puncak kurva elusi.

 

  2.2 Definisi Kromatografi Lapis Tipis 

Kromatografi Lapis Tipis (KLT) pertama kali dikembangkan oleh Izmailoff dan Schraiber pada tahun 1938. KLT merupakan bentuk kromatografi planar , yang fase diamnya berupa lapisan seragam (uniform uniform)) pada permukaan bidng datar yang didukung oleh lempeng kaca, plat aluminium, atau plat plastik (Gandjar dan Rohman, 2007). KLT merupakan salah satu metode isolasi yang terjadi berdasarkan perbedaan daya serap (adsorpsi) dan daya partisi serta kelarutan dari komponen-komponen kimia yang akan bergerak mengikuti kepolaran eluen. Oleh karena daya serap adsorben terhadap komponen kimia tidak sama, maka komponen bergerak dengan kecepatan yang berbeda sehingga hal inilah yang menyebabkan pemisahan (Hostettmann et al, 1995). Pada proses adsorpsi senyawa kimia dapat terpisah-pisah disebabkan oleh daya serap adsorban terhadap tiap-tiap komponen kimia tidak sama. Sedangkan partisi adalah kelarutan tiap-tiap komponen kimia dalam cairan pengelusi (eluen) tidak sama dimana arah gerakan eluen disebabkan oleh gaya sentrifugal sehingga komponen kimia dapat bergerak dengan kecepatan yang berbeda-beda. Kromatografi lapis tipis merupakan jenis kromatografi yang dapat digunakan untuk menganalisis senyawa secara kualitatif maupun kuantitatif. kuantitatif. Lapisan yang memisahkan terdiri atas bahan bahan berbutir (fase diam) ditempatkan pada penyangga berupa pelat gelas, logam, atau lapisan yang cocok. Campuran yang akan dipisah berupa larutan, ditotolkan berupa bercak atau pita, setelah pelat/lapisan ditaruh dalam bejana tertutup rapat yang berisi larutan pengembang yang cocok (fase gerak). Pemisahan terjadi setelah perambatan kapiler (pengembangan), selanjutnya senyawa yang tidak berwarna harus ditampakkan/dideteksi. Deteksi dilakukan dengan menggunakan sinar UV (Sudjadi, 1988). Teknik ini dikembangkan tahun 1938 Ismailoff dan Schraiber. Adsorbent dilapiskan pada lempeng kaca yang bertindak sebagai penunjang fase diam. Fase bergerak akan menyerap sepanjang fase diam dan terbentuklah kromatogram. Ini di kenal juga sebagai kromatografi kolom terbuka. Metode Metode ini sederhana, cepat dalam pemisahan dan sensitif. Kecepatan pemisahan tinggi dan mudah untuk memperoleh kembali senyawa-senyawa yang terpisahkan. ter pisahkan. Biasanya yang sering digunakan sebagai materi pelapisnya adalah silika gel, tetapi kadang kala bubuk selulosa dan tanah diatome juga dapat digunakan. Untuk fase diam hidrofilik dapat digunakan

 

pengikat seperti semen Paris, kanji, disperse koloid plastic, silica terhidrasi. Untuk meratakan pengikat dan zat pada pengadsorbsi digunakan suatu aplikator. Sekarang inin telah banyak tersedia kromatografi lapisan tipis siap pakai yang dapat berupa gelas kaca yang telah terlapisi, kromatotube, dan sebagainya. Kadar air dalam lapisan ini harus terkendali agar didapat hasil analisis yang reprodusibel.

Pemilihan sistem pelarut dan komposisi lapisan tipis ditentukan oleh prinsip kromatografi yang akan digunakan. Untuk meneteskan sampel yang akan dipisahkan digunakan suatu mikro-syringe (penyuntik berukuran mikro). Sample diteteskan pada salah satu bagian tepi pelat kromatografi. Pelarut harus nonpolar dan mudah menguap. Kolom-kolom dalam pelat dapat diciptakan dengan mengerok lapisan vertical searahgerakan pelarut. Teknik ascending ascending   digunakan untuk melaksanakan pemisahan yang dilakukan pada temperature kamar, sampai permukaan pelarut mencapai tinggi 15-18 cm. waktu yag diperlukan antara 20-40 menit. Semua teknik yang digunakan untuk kromatografi kertas dapat di pakai juga untuk kromatografi lapis tipis. Resolusi KLT juah lebih tinggi daripada kromatografi kertas karena laju difusi yang luar biasa kecilnya pada lapisan pengadsorpsi. RRPC dapat juga dilakukan pada kromatografi lapisan ini, dengan menggunakan me nggunakan lapisan yang sudah dicelupkan lebih dahulu pada pe perafin, rafin, minyak silikon, dan lain-lain. Pelarut yang digunakan adalah CH 3COOH atau asetonitril. Kadangkala untuk RPPC, waktu yang diperlukan cukup lama. Zat-zat warna dapat terlihat langsung, tetapi dapat juga digunakan reagent penyemprot untuk melihat bercak suatu zat. Asam kromat sering digunakan untuk zat organic. Demikian juga penandaan secara radiokomia juga dapat digunakan. Untuk menempatkan posisi suatu zat, reagent dapat juga disemprotkan pada bagian tepi saja. Bagian yang y ang lainnya dapat diperoleh kembali tanpa pengotoran dari dar i reagent dengan pengerokan setelah pemisahan selesai. Untuk analisis kuatitatif dapat digunakan plot fotodensitometri. Analisisnya dapat dilakukan dengan spektrofotometer UV, sinar tampak, IR atau flourosens atau dengan reaksi kolorimeter dengan reagent kromogenik. Aplikasi KLT sangatlah luas. Senyawa-senyawa yang tidak mudah menguap serta terlalu labil untuk kromatografi cair dapat dianalisis dengan KLT. Ia dapat pula untuk memeriksa adanya zat pengotor dalam pelarut. Ahli kimia foresik menggunakan KLT untuk bermacam pemisahan. Pemisahan berguna dari plasticizer, antioksidan, tinta dan formulasi zat pewarna dapat ditentukan dengan KLT. Pemakaiannya juga meluas dalam pemisahan anorganik.

 

2.3 Kelebihan dan Kekurangan Kromatografi Lapis Tipis 

Beberapa kelebihan KLT yaitu: 1.  KLT lebih banyak digunakan untuk tujuan analisis.

2.  Identifikasi pemisahan komponen dapat dilakukan dengan pereaksi warna, fluoresensi, atau dengan radiasi menggunakan sinar ultraviolet. 3.  Dapat dilakukan elusi secara mekanik (ascending (ascending), ), menurun (descending (descending), ), atau dengan cara elusi 2 dimensi. 4.  Ketepatan penentuan kadar akan lebih baik karena komponen yang akan ditentukan merupakan bercak yang tidak bergerak. 5.  Hanya membutuhkan sedikit pelarut. 6.  Biaya yang dibutuhkan terjangkau. 7. 

Jumlah perlengkapan sedikit.

8.  Preparasi sample yang mudah 9.  Dapat untuk memisahkan senyawa hidrofobik (lipid dan hidrokarbon) yang dengan metode kertas tidak bisa (Gandjar dan Rohman, 2007). Adapun kekurangan KLT yaitu:

1.  Butuh ketekunan dan kesabaran yang ekstra untuk mendapatkan bercak/noda yang diharapkan. 2.  Butuh sistem trial and eror  untuk  untuk menentukan sistem eluen yang cocok. 3.  Memerlukan waktu yang cukup lama jika dilakukan secara tidak tekun

2.4 Prinsip Kerja Kromatografi Kromatografi Lapis Tipis 

Pada dasarnya KLT digunakan untuk memisahkan komponen-komponen berdasarkan perbedaan adsorpsi atau partisi oleh fase diam di bawah gerakan pelarut pengembang (Watson, 2010). KLT sangat

 

mirip dengan kromatografi kertas, terutama pada cara pelaksanaannya. Perbedaan nyata terlihat pada fase diamnya atau media pemisahnya, yakni digunakan lapisan tipis adsorben sebagai pengganti kertas. Pada proses pemisahan dengan kromatografi lapis tipis, terjadi hubungan kesetimbangan antara fase diam dan fasa gerak, dimana ada interaksi antara permukaan fase diam dengan gugus fungsi senyawa organik yang akan diidentifikasi yang telah berinteraksi dengan fasa geraknya. Kesetimbangan ini dipengaruhi oleh 3 faktor, yaitu : kepolaran fase diam, kepolaran fase gerak, serta kepolaran dan ukuran molekul.

2.5 Pembuatan Lapisan Tipis

Penyerap dituangkan diatas permukaan plat yang kondisi bentuknya baik, biasanya digunakan plat kaca / aluminium. Ukuran yang digunakan tergantung pada jenis dari pemisahan yang akan dilakukan dan jenis dari bejana bejana kromatografi. Seringkali bentuk plat kaca / aluminium dijual dengan ukuran 20 x 5 cm atau 20 x 20 cm, dua ukuran ini dianggap sebagai “standard”.  “standard”.  Hal yang penting yaitu bahwa permukaan dari plat harus rata. Plat -plat kaca / aluminium sebelum d dipakai ipakai dicuci terlebih dahulu dengan air dan detergent kemudian dikeringkan. Terakhir, dapat dicuci dengan aseton, tetapi hal ini tidak mesti dilakukan. Satu hal yang perlu diperhatikan jangan menyentuh permukaan dari plat yang bersih dengan jari tangan karena bekas jari tangan yang menempel akan merubah tebal dari permukaan penyerap pada plat. Untuk membuat penyerap, pertama bahan penyerap dicampur dengan air sampai menjadi bubur, biasanya dengan perbandingan x gram penyerap dan 2x ml air. Bubur diaduk sampai rata dan dituangkan diatas plat dengan berbagai cara. Tebal lapisan merupakan faktor yang paling penting dalam kromatografi lapisan tipis. Tebal standard adalah 250 mikron. Lapisan-lapisan yang lebih tebal ( 0.5 - 2.0 mm

)

digunakan

untuk

pemisahan-pemisahan

yang

sifatnya

besar,

dengan

menggunakan

penyerap hingga 250 mg untuk plat dengan ukuran ukuran 20 x 20 cm. Salah satu k kesukaran esukaran dengan lapisan tebal ialah adanya tendensi mengelupas bila kering. Tabel 2.2 Perbandingan untuk membuat bubur penyerap Penyerap 

Medium bubur penyerap 

Perbandingan, gram dalam ml 

 

Silika gel 

Metilena klorida : methanol (2:2,

35 gr dalam 100 ml 

v/v)  Serbuk selulosa 

Metilena

klorida

:

methanol

50 gr dalam 100 ml 

:

methanol

60 gr dalam 100 ml 

(50:50, v/v)  Alumina

Metilena

klorida

(70:30, v/v) 

Sifat yang terpenting dari penyerap adalah besar partikel bubur penyerap dan homogenitasnya, karena adhesi terhadap plat sangat tergantung pada kedua sifat tersebut. Besarnya partikel yang biasa digunakan adalah 1  –  –   25 mikron. Partikel yang butirannya butirannya sangat kasar tidak a akan kan memberikan hasil yang memuaskan dan salah satu alasan untuk menaikkan hasil pemisahan adalah menggunakan penyerap yang butirannya halus. Sedangkan dalam kolom partikel yang sangat halus akan mengakibatkan aliran pelarut menjadi lambat, pada lapisan tipis butiran yang halus halus memberikan aliran pelarut yang lebih cepat. Beberapa contoh penyerap yang digunakan untuk pemisahan-p pemisahan-pemisahan emisahan dalam kromatografi lapisan tipis adalah sebagai berikut : Tabel 2.3 Macam-macam penyerap untuk kromatografi lapisan tipis Zat padat 

Digunakan untuk memisahkan 

Silika 

Asam- asam amino, alkaloid, gula, asam-asam lemak, lipida, minyak esensial, anion, dan kation organic, sterol, terpenoid. 

Alumina 

Alkaloid, zat warna, fenol, steroid, vitamin-vitamin, karoten, asam-asam amino 

 

Kieselguhr 

Gula, oligosakarida, asam- asam lemak, trigliserida, asam -asam amino, steroid.

Bubuk selulosa 

Asam-asam amino, alkaloid, nukleotida 

Pati 

Asam-asam amino 

Sephadex 

Asam-asam amino, protein 

2.6 Definisi Kromatogram 

Kromatogram adalah output visual yang diperoleh dari hasil pemisahan.

Sebuah garis menggunakan pinsil digambar dekat bagian bawah lempengan dan setetes pelarut dari campuran pewarna ditempatkan pada garis itu. Diberikan penandaan pada garis di lempengan untuk menunjukkan posisi awal dari tetesan. Jika ini dilakukan menggunakan tinta, pewarna dari tinta akan bergerak selayaknya kromatogram dibentuk. Ketika bercak dari campuran itu mengering, lempengan ditempatkan dalam sebuah gelas kimia bertutup berisi pelarut dalam jumlah yang tidak terlalu banyak. Perlu diperhatikan bahwa batas pelarut berada di bawah garis dimana posisi bercak berada. Alasan untuk menutup gelas kimia adalah untuk meyakinkan bawah kondisi dalam gelas kimia terjenuhkan oleh uap dari pelarut. Untuk mendapatkan kondisi ini, dalam gelas kimia biasanya ditempatkan beberapa kertas saring yang terbasahi oleh pelarut. Kondisi jenuh dalam gelas kimia dengan uap mencegah penguapan pelarut. Karena pelarut bergerak lambat pada lempengan, komponen-komponen yang berbeda dari campuran pewarna akan bergerak pada kecepatan yang berbeda dan akan tampak sebagai perbedaan bercak warna.

 

Gambar menunjukkan lempengan setalah pelarut bergerak setengah dari lempengan. Pelarut dapat mencapai sampai pada bagian atas dari lempengan. Ini akan memberikan pemisahan maksimal dari komponen-komponen yang berwarna untuk kombinasi tertentu dari pelarut dan fase diam.

2.7 Fase Diam dan Fase Gerak  

Fase diam yang digunakan dalam KLT merupakan penjerap berukuran kecil dengan diameter partikel antara 10-30 µm (Gandjar dan Rohman, 2007). Semakin kecil ukuran rata-rata partikel fase diam dan semakin sempit kisaran ukuran fase diam, maka semakin baik kinerja KLT dalam hal efisiensi dan resolusinya. Silika gel salah satu contoh fase diam yang terbentuk dari silikon dioksida (sil (silika). ika). Atom silikon dihubungkan oleh atom oksigen dalam struktur kovalen yang besar. Namun, pada permukaan silika gel, atom silikon berlekatan pada gugus -OH. Jadi, pada permukaan jel silika terdapat ikatan Si-O-H selain SiO-Si. Permukaan silika gel sangat polar dan karenanya gugus -OH dapat membentuk ikatan hidrogen dengan senyawa-senyawa yang sesuai disekitarnya, sebagaimana halnya gaya van der Waals dan atraksi dipol-dipol. Fase diam lainnya yang biasa digunakan adalah alumina dari aluminium oksida. Atom aluminium pada permukaan juga memiliki gugus -OH. Pada dasarnya sifat serta penggunaannya mirip silika gel. Tabel 1. Fase diam yang sering digunakan pada KLT (Kealey dan Haines, 2002) Fasa Diam 

Mekanisme Sorpsi 

Penggunaan

Silika gel 

Adsorpsi 

Asam amino, hidrokarbon, vitamin, alkaloid 

Serbuk selulosa 

Partisi 

Asam amino, nukleotida, karbohidrat 

Selulosa

Pertukaran ion 

Asam nukleat, nukleotida, halida dan ion-ion

penukar

ion  Gel sephadex 

logam  Eksklusi 

Polimer, protein, kompleks logam 

 

Β-siklodekstrin 

Interaksi

adsorpsi

Campuran enansiomer 

stereospesifik 

Adsorben yang sering digunakan antara lain : a)  Silika gel Yang paling banyak digunakan dalam pengujian, bersifat asam lemah, sering ditambah CaSO4 (gibs) sebagai pengikat agar melekat kuat pada penyangga. Penambahan ini juga mempercepat mengeringnya lapis tipis. Juga dapat ditambahkan indicator fluoresensi yang akan berfluoresensi di bawah sinar UV pada 254 nm, hingga noda yang mengabsorpsi pada frekuensi ini menjadi sangat kontras terhadap latar belakang yang berfluoresensi hijau kuning. Silica gel sangat higroskopis, pada humaditas relative 45  –  –   75% akan menarik air sampai 7  –  –   20%. Derajat diaktivasinya ditentukan oleh kelembaban ruangan dimana pemisahan akan dilakukan atau tempat penyimpanan lapis tipisnya. Kemurnian juga penting karena dapat mempengaruhi watak kromatografi beberapa senyawa tertentu. Pencemar dalam adsorben ini dapat juga menyebabkan dekomposisi senyawa yang hendak dianalisa. b)  Alumina Bersifat basa lemah. Tidak sebaik silica gel dan lebih relative secara kimia hingga untuk senyawa yang sensitive dapat terdegrasi. Juga dapat ditambah Ca2SO4 dan indicator fluoresensi. c)  Kieselguhr (tanah diatome) Merupakan adsorben netral dengan aktivitas rendah. Daya resolusinya juga kecil. Dapat ditambahkan sebagai campuran pada silikagel yang akan memberikan adsorben campur yang kurang aktif. Juga dapat ditambah Ca2SO4. d)  Selulosa Dengan menggunakan selulosa sebagai adsorben akan didapat lapis tipis yang sifatnya analog dengan kromatografi kertas. Memberikan lapis tipis yang baik tanpa pengikat. Adsorben ini dapat ditambah indicator fluoresensi atau Ca asetat. Kerugian penggunaan selulosa ini ialah tidak dapat digunakannya pereaksi yang korosif seperti asam sulfat atau pereaksi destruktif lainnya.

 

e)  Poliamida Merupakan magnesium silikat. Daya melekatnya tidak sebaik adsorben lainnya. Biasanya ditambahkan pengikat seperti selulosa atau amilum. Mempunyai kapasitas yang besar dan banyak digunakan untuk pemisahan fenol. Selain fasa diam, dalam KLT juga diperlukan fasa gerak/ gerak/eluent  eluent  yang  yang berperan penting pada proses elusi bagi larutan umpan ( feed ) untuk melewati fasa diam (adsorbent  ( adsorbent ). ). Interaksi antara adsorbent dengan eluent sangat menentukan terjadinya pemisahan komponen. Oleh sebab itu pemisahan komponen secara kromatografi dipengaruhi ol oleh eh laju alir eluent dan jumlah umpan. Eluent dapat digolongkan menurut ukuran kekuatan teradsorpsinya pelarut atau campuran pelarut tersebut pada adsorben dan dalam hal ini yang banyak banyak digunakan adalah jenis adsorben alumina atau sebuah lapis lapis tipis silika. Suatu pelarut yang bersifat larutan relatif polar, dapat mengusir pelarut yang tak polar dari ikatannya dengan alumina (gel silika). Semakin dekat kepolaran antara senyawa dengan eluen maka senyawa akan semakin terbawa oleh fase gerak tersebut. Hal ini berdasarkan prinsip “like dissolved like” (Watson, 2010).

2.8 Prosedur Kerja dengan Kromatografi Lapis Tipis  

Pada KLT, fasa diam berupa plat yang biasanya disi dengan silica gel . Sebuah garis pensil digambar dekat bagian bawah fasa diam dan setetes larutan sampel ditempatkan di atasnya. Sampel ditotol dengan bantuan pipa kapiler. Garis pada fasa diam berguna untuk menunjukkan posisi asli sampel. Pembuatan garis harus menggunakan pensil karena jika semua ini dilakukan dengan tinta, pewarna dari tinta juga akan bergerak sebagai kromatogram berkembang. Ketika titik campuran kering, fasa diam diletakkan berdiri dalam gelas tertutup yang telah berisi fasa gerak dengan posisi fasa gerak di bawah garis. Digunakan gelas tertutup untuk memastikan bahwa suasana dalam gelas je jenuh nuh dengan uap pelarut. Pelarut (fasa gerak) perlahan-lahan bergerak naik. Komponen-komponen yang berbeda dari campuran berjalanan pada tingkat yang berbeda dan campuran dipisahkan memiliki warna yang berbeda.

 

Diagram menunjukkan plat setelah pelarut telah bergerak sekitar setengah jalan. Pelarut diperbolehkan untuk naik hingga hampir mencapai bagian atas plat yang akan memberikan pemisahan maksimal dari komponen-komponen pewarna untuk kombinasi tertentu dari pelarut dan fase diam. Identifikasi dari senyawa-senyawa yang terpisah pada lapisan tipis lebih baik dikerjakan dengan pereaksi kimia dan reaksi-reaksi warna. Untuk identifikasi menggunakan harga Rf  meskipun harga-harga Rf  dalam   dalam lapisan tipis kurang tepat bila dibandingkan pada kertas. Seperti halnya pada kertas harga R f   didefinisikan sebagai berikut (Gritter et al, 1991): Harga-harga Rf  untuk  untuk senyawa-senyawa murni dapat dibandingkan dengan harga-harga standard. Perlu diperhatikan bahwa harga-harga Rf  yang   yang diperoleh berlaku untuk campuran tertentu dari pelarut dan penyerap yang digunakan, meskipun daftar dari harga-harga Rf   untuk berbagai campuran dari pelarut dan penyerap dapat diperoleh (Gritter et al, 1991).

2.9 Deteksi Bercak 

Ada dua cara untuk menyelesaikan analisis sampel yang tidak berwarna, yaitu: 1.  Menggunakan pendarflour Fase diam pada sebuah lempengan lapis tipis seringkali memiliki substansi yang ditambahkan kedalamnya, supaya menghasilkan pendaran flour ketika diberikan sinar ultraviolet (UV). Itu berarti jika sinar UV disinarkan, maka sampel akan berpendar. Pendaran ini ditutupi pada posisi dimana bercak pada kromatogram berada, meskipun bercakbercak itu tidak tampak berwarna jika dilihat dengan mata. Itu berarti bahwa jika disinarkan sinar UV pada lempengan, akan timbul pendaran dari posisi yang berbeda dengan posisi bercak-bercak. Bercak tampak sebagai bidang kecil yang gelap. Sementara UV tetap disinarkan pada lempengan,, kita harus menandai posisi-posisi dari bercakbercak

dengan

menggunakan

pensil

dan

melingkari

daerah daerah

bercak-bercak

 jika kita mematikan sinar UV tersebut, bercak-bercaknya tidak tampak kembali. 2.  Penunjukkan bercak secara kimia

itu.

Karena

 

Dalam beberapa kasus, dimungkinkan untuk membuat bercak-bercak menjadi tampak dengan cara mereaksikannya dengan zat kimia sehingga menghasilkan produk yang berwarna. Sebuah contoh yang baik adalah kromatogram yang dihasilkan dari campuran asam amino. Kromatogram dapat dikeringkan dan disemprotkan dengan larutan ninhidrin ninhidrin.. Ninhidrin bereaksi dengan asam amino menghasilkan senyawa-senyawa berwarna, umumnya coklat atau ungu. Dalam metode lain, kromatogram dikeringkan kembali dan kemudian ditempatkan pada wadah bertutup (seperti gelas kimia dengan tutupan gelas arloji) bersama dengan kristal iodium. iodium. Uap iodium dalam wadah dapat berekasi dengan bercak pada kromatogram, atau dapat dilekatkan lebih dekat pada bercak daripada lempengan. Substansi yang dianalisis tampak sebagai bercak-bercak kecoklatan.

2.10 Instrument Kromatografi Lapis Tipis 

1.  Detektor Detektor pada alat TLC Scanner 3 CAMAG menggunakan photomultipliers. Komponen didalam phot omultipier (PMT) sendiri adalah photomultiplier tube (tabung vakum photomultiplier), photocathode (katoda metalik yang terbuat dari bahan logam multi alkali), struktur dynode (berbentuk lempengan cekung) dan anoda (memilki spectral sensitivity 185-850 nm). Prinsip kerja dari PMT adalah permukaan logam katoda disinari dengan seberkas cahaya dan sejumlah elektron terpancar dari permukaannya, yang biasa disebut dengan efek fotoelektrik dengan kondisi hampa udara. Elektron yang terpancar dan terlepas karena adanya sekumpulan energi yang timbul dan dikuatkan oleh susunan komponen dynode (linier -focused type) secara berurutan dan keluar mengenai anoda. Elektron tersebut terikat dalam logam dengan energi W (eV), yang dikenal sebagai fungsi kerja (work function), logam yang berbeda memilki fungsi kerja yang berbeda pula. Dan logam katoda yang digunakan

sebagai

permukaan

fotosensitif,

dibawah

panjang

gelombang

pancung (cutoff wavelength) λc, sembarang sumber sumber cahaya, selemah apapun, akan menyebabkan terjadinya pemancaran fotoelektron.

 

Cahaya yang masuk difokuskan dengan melewati focusing electrode dan elektron mengenai dynode pertama kemudian dipantulkan dan dipancarkan ke dynode kedua sampai ke dynode yang terakhir (proses pengalian) sehingga terjadi muatan elektron yang lebih besar dan timbul tegangan. 2.  Monokromator Monokromator adalah alat yang paling umum dipakai untuk menghasilkan berkas radiasi dengan satu panjang gelombang. Monokromator untuk radiasi ultra violet, sinar tampak dan infra merah adalah serupa, yaitu mempunyai celah (slit), lensa, cermin dan prisma atau grating. Terdapat 2 macam monokromator yaitu monokromator prisma Bunsen dan monokromator grating Czerney-Turney Fungsi prisma adalah untuk memisahkan sinar polikromatis dari sumber cahaya menjadi sinar monokromatis.

Bila seberkas cahaya cahaya dilewatkan melalui sebuah prisma, maka cahaya tersebut

akandiuraikan menjadi beberapa warna (terdapat berbagai warna merah, jingga, hijau hijau,, biru, dan lainlain). 3.  Absorbansi Penyerapan hanya terjadi jika energi foton yang datang cocok dengan energy yang diperlukan untuk memindahkan satu elektron terluarnya dari tingkat dasar ke tingkat tereksitasi (atau dari pita valensi ke pita konduksi di dalam zat padat). Dengan spektroskopi dari cahaya transmisi bisa diketahui diketahui tingkat/pita energi dari suatu atom/molekul/zat padat. Berkas radiasi elektromagnet bila dilewatkan pada sampel kimia maka sebagian akan terabsorpsi. Energi elektromagnet yang ditransfer ke molekul sampel akan menaikan tingkat energi (tingkat tereksitasi). Molekul akan dieksitasi sesuai dengan panjang gelombang yang diserapnya. Rumus yang digunakan untuk menghitung besarnya energi yang diserap: E = h x ν = h x C /λ = h = h x C / v dimana, E = energi yang diserap h = tetapan Planck = 6,626 x 10 1 0-34  v = frekuensi C = kecepatan cahaya = 2,998 x 108 m/det

 

 

λ = panjang gelombang  gelombang  ν = bilangan gelombang  gelombang  Absorbansi dengan simbol A dari suatu larutan merupakan logaritma dari 1/T atau logaritma

Io/It. A = log (1/T) = log (Io/It) = - log (T)

(1.4)

dimana, A = Absorbansi / serapan Io = Intensitas sinar yang datang It = Intensitas sinar yang diteruskan T = Transmitance / transmitansi 4.  Transmitansi Apabila suatu berkas sinar radiasi dengan intensitas Io dilewatkan melalui suatu larutan dalam wadah transparan maka sebagian radiasi akan diserap sehingga intensitas intensitas radiasi yang diteruskan It menjadi lebih kecil dari Io. Transmitansi dengan simbol T dari larutan merupaka merupakan n fraksi dari radiasi yang diteruskan atau ditansmisikan oleh larutan, yaitu : T = It/Io. Transmitansi biasanya dinyatakan dalam persen (%).

2.11 Faktor – Faktor yang Mempengaruhi Kromatografi Lapis Tipis 

Faktor-faktor yang mempengaruhi gerakan noda dalam kromatografi lapisan tipis yang juga mempengaruhi harga Rf   adalah : 1.  Struktur kimia dari senyawa yang sedang dipisahkan. 2.  Sifat dari penyerap dan derajat aktifitasnya. Biasanya aktifitas dicapai dengan pemanasan dalam oven, hal ini akan mengeringkan molekulmolekul air yang menempati pusat-pusat serapan dari penyerap. Perbedaan Perbe daan penyerap akan memberikan perbedaan yang besar terhadap harga Rf  meskipun menggunakan fase bergerak dan zat terlarut yang

 

sama tetapi hasil akan dapat diulang diulang dengan hasil yang sama, jika menggunakan p penyerap enyerap yang sama, ukuran partikel tetap dan jika pengikat (kalau ada) dicampur hingga hingga homogen. 3.  Tebal dan kerataan dari lapisan penyerap. Pada prakteknya tebal lapisan tidak dapat dilihat pengaruhnya, tetapi perlu diusahakan tebal lapisan yang rata. Ketidakrataan akan menyebabkan aliran pelarut menjadi tak rata pula dalam daerah yang kecil dari plat. 4.  Pelarut (dan derajat kemurniannya) fase bergerak. Kemurnian dari pelarut yang digunakan sebagai fase bergerak dalam kromatografi lapisan tipis adalah sangat penting dan bila campuran pelarut digunakan maka perbandingan yang dipakai harus betul-betul diperhatikan. 5.  Derajat kejenuhan dan uap dalam bejana bej ana pengembangan yang digunakan. 6.  Teknik percobaan. Arah pelarut bergerak di atas plat. (Metoda aliran penaikan yang hanya diperhatikan, karena cara ini yang paling umum meskipun teknik aliran penurunan dan mendatar juga digunakan). 7.  Jumlah cuplikan yang digunakan. Penetesan cuplikan dalam jumlah yang berlebihan memberikan hasil penyebaran noda-noda dengan kemungkinan terbentuknya ekor dan efek tak kesetimbangan lainnya, hingga akan mengakibatkan kesalahan-kesalahan pada harga-harga Rf . 8.  Suhu. Pemisahan-pemisahan sebaiknya dikerjakan pada suhu tetap, hal ini terutama untuk mencegah perubahan-perubahan dalam komposisi pelarut yang disebabkan oleh penguapan atau perubahanperubahan fase. 9.  Kesetimbangan. Ternyata bahwa kesetimbangan dalam lapisan tipis lebih penting dalam kromatografi kertas, hingga perlu mengusahakan atmosfer dalam bejana jenuh dengan uap pelarut. Suatu gejala bila atmosfer dalam bejana tidak jenuh dengan uap pelarut, bila digunakan pelarut campuran, akan terjadi

 

pengembangan dengan permukaan pelarut yang berbentuk cekung dan fase bergerak lebih cepat pada bagian tepi-tepi dan keadaan ini harus dicegah.

2.12 Aplikasi KLT Pada Bidang Pangan 

Pada penelitian analisis kualitastif pewarna rhodamin B dalam sampel saus tomat. Sampel dianalisis dengan metode Kromatografi Lapis Tipis. Zat warna dari sampel saus tomat ditarik kedalam benang wol bebas lemak dalam suasana asam sampai benang wol tersebut terwarnai oleh pewarna saus tomat. Setelah benang wol terwarnai oleh pewarna saus tomat, pewarna tersebut dilepaskan ke dalam larutan basa. Larutan basa tersebut selanjutnya akan digunakan sebagai cuplikan sampel pada analisis Kromatografi Lapis Tipis. Noda totolan sampel dibandingkan dengan noda totolan baku standar rhodamin B yang telah dieluasi bersama-sama bersama-sama dan dilihat di bawah lampu UV pada λ 366 dan λ 254 nm, apabila terdapat zat pewarna rhodamin B dalam sampel maka noda pada lempeng KLT akan berflouresensi di lampu UV pada λ 366 nm dan tidak berflorousensi dilampu UV pada λ 254 nm, pada penelitian ini noda totolan sampel pada lempeng KLT tidak menunjukan flouresensi di lampu UV pada λ 366 nm, sehingga dapat disimpulan bahwa pada sampel saus tomat ini tidak terkandung zat pewarna rhodamin B

BAB III  PENUTUP 

3.1 Kesimpulan

1.  Kromatografi adalah teknik pemisahan campuran didasarkan atas perbedaan distribusi dari komponenkomponen campuran tersebut diantara dua fase, yaitu fase diam (padat atau cair) dan fase gerak (cair atau gas).

 

2.  KLT merupakan salah satu metode isolasi yang terjadi berdasarkan perbedaan daya serap (adsorpsi) dan daya partisi serta kelarutan dari komponen-komponen kimia yang akan bergerak mengikuti kepolaran eluen, 3.  Keuntungan KLT yaitu ketepatan penentuan kadar baik karena komponen yang akan ditentukan merupakan bercak yang tidak bergerak. Kerugiannya memerlukan waktu untuk menentuan sistem eluen yang cocok. 4.  Prinsip KLT yaitu pemisahan komponen-komponen berdasarkan perbedaan adsorpsi atau partisi oleh fase diam dibawah gerakan pelarut pengembang. 5.  Pembuatan lapis tipis KLT dimulai dari penyerap dituangkan diatas permukaan plat yang kondisi bentuknya baik, biasanya digunakan plat kaca / aluminium. Ukuran yang digunakan tergantung pada  jenis dari pemisahan yang akan dilakukan dan jenis dari bejana kromatografi. Seringkali bentuk plat kaca / aluminium dijual dengan ukuran ukuran 20 x 5 cm atau 20 x 20 cm, dua ukuran ini dian dianggap ggap sebagai “standard”.   “standard”. 6.  Kromatogram adalah output visual yang diperoleh dari hasil pemisahan. 7.  Fase diam yang digunakan dalam KLT merupakan penjerap berukuran kecil dengan diameter partikel antara 10-30 µm (Gandjar dan Rohman, 2007). Fasa gerak/eluent  gerak/eluent   yang berperan penting pada proses elusi bagi larutan umpan ( feed   feed ) untuk melewati fasa diam (adsorbent  (adsorbent )).. 8.  Kerja dengan KLT dimulai dari penyiapan plat, eluen dan sampel, penotolan, elusi, dan deteksi bercak/noda. 9.  Cara mendeteksi bercak ada 2 yaitu menggunakan UV dan campuran zat kimia tertentu. 10.  Terdapat beberapa instrument pada kromatografi lapis tipis diantaranya adalah detector, monokromator, absorbansi, dan transmitansi. 11.  Faktor-faktor yang mempengaruhi gerakan noda dalam kromatografi lapisan tipis yang juga mempengaruhi harga Rf   adalah : a.  Struktur kimia dari senyawa yang sedang dipisahkan.

b.  Sifat dari penyerap dan derajat aktifitasnya.

 

c.  Tebal dan kerataan dari lapisan penyerap. d.  Pelarut (dan derajat kemurniannya) fase bergerak. e.  Derajat kejenuhan dan uap dalam bejana pengembangan pe ngembangan yang digunakan.

f.  Teknik percobaan. g.  Jumlah cuplikan yang digunakan. h.  Suhu i.  Kesetimbangan. 12.  Aplikasi KLT pada bidang pangan adalah pada penelitian analisis kualitastif pewarna rhodamin B dalam sampel saus tomat.

3.2 Saran

1. Bagi Pemerintah Dalam

rangka

meningkatkan

ketahanan

pangan

Indonesia

hendaklah

pemerintah

memperhatikan kualitas pangan Indonesia serta agar terus mengembangkan teknologi yang menunjang pada penelitian dalam bidang pangan. 2. Untuk Mahasiswa Memberikan nuansa baru dalam menambah wawasan pengetahuan yang memungkinkan mahasiswa berkesempatan untuk memperbaiki cara dan sikap dalam memahami materi kromatografi lapis tipis.

Daftar Pustaka 

Kromatografi fi Lapis Tipis. http://nonasandha. Arifin, Fury. 2012. Kromatogra http://nonasandha.blogspot.com. blogspot.com. Diakses  Diakses : 03 Desember 2014

 

Ayu. 2013. Analisa Pengukuran Kadar Larutan. http://s1farmasiayu.blogspot.com.  http://s1farmasiayu.blogspot.com. Diakses : 03 Desember 2014 Clark, Jim. 2007. Kromaografi Lapis Tipis. http://www.chem-is-try.org.  http://www.chem-is-try.org. Diakses  Diakses : 03 Desember 2014 Khopkar, SM. 2010. Konsep Dasar Kimia Analitik. Jakarta : Universitas Indonesia Press.

Nurhidayat, Iim. 2011. Kromaografi Lapis Tipis.  http://sectoranalyst.blogspot.com.  http://sectoranalyst.blogspot.com. Diakses  Diakses : 03 Desember 2014 Sendana, Endra. 2013. Kromatografi Lapis Tipis. http://ndrasendana.blogspot.com.  http://ndrasendana.blogspot.com. Diakses  Diakses : 03 Desember 2014