Katie Isabella Melo Narvaez - Cuantificación de Proteínas

 

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GESTIÓN DE LABORATORIOS CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS

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OBJETIVOS Conocer métodos Conocer métodos de cuantificac cuantificación ión de proteínas proteínas y aplicar aplicar los conceptos conceptos de curva de calibración. Relaci Rela ciona onarr las las pr propi opied edad ades es es estr truc uctu tura rale les s y quím químic icas as de los los amin aminoá oáci cido dos s y prot proteí eína nas, s, a part partir ir de pr proc oced edim imie ient ntos os de labor aborat ator orio io que que de desc scri ribe ben n su comportamiento bioquímico.

ALCANCE El estudiante relaciona los procedimientos de laboratorio sobre la estructura de las proteínas, a través de medidas experimentales físicas y químicas.

GENERALIDADES INTRODUCCIÓN Para el estudio de la estructura de una proteína, de la actividad de una enzima o el contenido contenido proteínico de un alimento, alimento, es necesario necesario conocer cuantitativam cuantitativamente ente la concentración de las proteínas. Existen diferentes métodos para la cuantificación de proteínas. Muchos de estos métodos se basan en: a) la propiedad intrínseca de las proteínas para absorber  luz en el UV, b) para la formación formación de derivados derivados químicos, químicos, o c) la capacidad capacidad que tienen las proteínas de formar complejos. Entre los métodos que se basan en la formación de complejos colorimétricos entre las proteínas y reactivos específicos se encuentran: Bradford, Lowry y Biuret.

Método de Bradford Está basado en el cambio de color del colorante azul brillante de Coomassie en resp respue uest sta a a di dife fere rent ntes es co conc ncen entr trac acio ione nes s de prot proteí eína nas. s. Este Este comp compue uest sto o interacciona interac ciona con aminoácidos aminoácidos básicos (especialmen (especialmente te arginina) arginina) y aromáticos. aromáticos. Esta unión del colorante con las proteínas provoca un cambio en el máximo de absorción del colorante desde 465 a 595 nm. Por lo tanto, este método se basa en la propiedad del Azul Brillante de Coomasie G-250 de presentarse en dos formas con colores diferentes, rojo y azul. La forma roja se convierte en azul cuand cua ndo o el color colorant ante e se une une a la pr prot oteí eína. na. Expe Experi rime ment ntal alme ment nte e se mide mide la

 

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diferencia de Absorbancias entre 595 y 465 nm.

Vídeo de cuantificación de proteínas. Visualice el siguiente video donde se explica los fundamentos de la de cuantificación de proteínas Peñaranda L. 2020. Cuantificación de proteínas [Archivo de vídeo] recuperado en https://youtu.be/NH7BBGUXqos

RECURSOS A UTILIZAR EN LA PRÁCTICA (EQUIPOS / INSTRUMENTOS) Equipo de cómputo con conexión a internet. SOFTWARE

A UTILIZAR EN LA PRÁCTICA U OTRO REQUERIMIENTO PARA EL DESARROLLO DE LA PRÁCTICA

TIPO

DE

Peñaranda L. 2020. Cuantificación de proteínas [Archivo de vídeo] recuperado en https://youtu.be/NH7BBGUXqos Simulador en línea Herráez A. s.f . Biom Biomod odel el.. Espe Es pect ctro roffotóm otómet etro ro UV-V UV-VIS IS Vi Virt rtua uall [di disp spon oniible ble en http://biomodel.uah.es/lab/abs/espectro.htm

Labo Labora rato tori rios os vi virt rtua uale les. s. lí líne nea] a] disp dispon oniible ble en

METODOLOGÍA 1. Ingres Ingrese e al sim simulad ulador or de espect espectrof rofoto otomet metría ría UVUV-VIS VIS en el sig siguie uiente nte deberá enlace   http://biomodel.uah.es/lab/abs/espectro.htm   y enlace observar en su computador el simulador como se observa en el la figura 1.

 

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Figura 1. Simulador de espectrofotómetro UV-VIS disponible en línea http://biomodel.uah.es/lab/abs/espectro.htm

2.

Vi Visu sual aliz izar ar el si sigu guie ient nte vi vide deo o 2020. dond donde se tica expl exaplic ica el trucci func fuccione ncio iona nami ento to del del simula sim ulador. dor. Bioquí Bioquímic mica ae UNAD. UNA D. 202 0.e Práctic Prác 5.a Instru Ins ones smien simula sim ulador  dor  espectrofotómetro UV-VIS [archivo de video] disponible en https://youtu.b e/sTdNFBhE9e BhE9eA A. https:// youtu.be/sTdNF

3.

Leer atenta Leer atentamen mente te las instrucc instruccione iones s y procede procederr a realiza realizarr las Activi Actividad dades, es, siguiendo paso a paso las instrucciones dadas por el simulador:

 

Actividad 1. Relación entre absorbancia y concentración.

 

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Figura 2. Simulador de espectrofotómetro UV-VIS disponible en línea

 

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http://biomodel.uah.es/lab/abs/espectro.htm

 Actividad 2 y 2A. Fundamento de un ensayo de cuantificación de proteínas.

Figura 3. Simulador de espectrofotómetro UV-VIS disponible en línea http://biomodel.uah.es/lab/abs/espectro.htm

Actividad 3. Espectro de absorción de la hemoglobina.

Figura 4. Simulador de espectrofotómetro UV-VIS disponible en línea http://biomodel.uah.es/lab/abs/espectro.htm

Nota No ta:: Recuerde tomar capturas de los datos y espectros en cada fase del proceso en cada actividad.

4. Responder los interrogantes que encuentra en cada actividad en los ítems

Análisis cualitativo de resultados y Análisis cuantitativo de resultados .

 

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INFORME: CUANTIFICACIÓN CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS Nombre:Diego Fernando Naranjo - Katie Katie Isabella Melo Narvaez Fecha: 10/12/2021 RESUMEN

PALABRAS CLAVES observancia , longitud d dee onda , concentración , muestra , espectrofotóm espectrofotómetro etro OBJETIVO  _____________________________________________________________  ________________________________________________________________________ ___________  ________________________________________________________________________  _____________________________________________________________ ___________ INTRODUCCIÓN En el presente informe se hará uso del emulador de espectrofotometría presentado por la docente Diana, Este simulador nos presenta una serie de ejercicios o actividades con el fin de profundizar y evaluar en el conocimiento. Haciendo uso del respectivo simulador y de las indicaciones brindadas por la docente se intentará dar respuesta a las preguntas planteadas y solucionar dichas actividades.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

 Actividad 1. Relación entre absorbancia y concentración. Capturas de datos y espectros

 

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Curva_ 

Análisis cualitativo de resultados En la primera cubeta se observa un color transparente y en la segunda un ligero color amarillo palido de pNF y en la tercera tercera un amarillo mas concentrado con un mayor valor de absorbancia Se puede observar que a mayor concentración de pNF habrá mayor absorbancia,

 

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debido a que son directamente proporcional.

Análisis cuantitativo de resultados En la gráfica se puede observar una tendencia lineal, en donde la absorbancia es proporcional a la concentración de pNF. Concentración de pNF en la mezcla final de cada cubeta C1 X V1 = C2 X V2 Cubeta 1 80*0= X*3 ml 0/3=x 26.6=x

Cubeta 2 80*1= x*3 ml 80/3=x 53.3=x cubeta 3 80*3=x*3 160/3=x 80=x

Actividad 2 y 2A. Fundamento de un ensayo de cuantificación de proteínas . Capturas de datos y espectros

 

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Análisis cualitativo de resultados Se puede observar que a mayor concentración de proteínas habrá mayor absorbancia debido a que son directamente proporcional

Análisis cuantitativo de resultados C1 X V1 = C2 X V2 Cubeta 1

800 mg/L*0= X*3 ml 0/3=x

 

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0=x Cubeta 2 800 mg/L*1= x*3 ml 800/3=x 266.66=x cubeta 3 800 mg/L*2=x*3ml 1,600/3=x 533.33=x

En la gr gráf áfic ica a se obse observ rva a un comp compor orta tami mien ento to line lineal al,, la abso absorb rban anci cia a es directamente proporcional a la concentración

Actividad 3. Espectro de absorción de la hemoglobina.

 

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Capturas de datos y espectros

Análisis cualitativo de resultados

 ________________________________ Análisis cuantitativo de resultados

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CONCLUSIONES  ____________________________________________________ ______________   __________________________________________________________________   __________________________________________________________________   ____________________________________________________ ______________ 

REFERENCIAS  _______________________________  _____________________ ____________________ ____________________ ______________________ ____________  _____________________  __________ _____________________ ____________________ ____________________ ______________________ ____________