Isolasi Dan Pemurnian Protein

PEMURNIAN PROTEIN Elin lin J ulia ulia nti, nti, PhD

• Lokas okasii protei protein: n: Intr ntra a sel d a n ek e kstr tra a sel • Prote Proteiin intr intra sel: Pro Pro tein yang b ekerj ekerja a di dalam dal am sel • Protein ekstral: Protein yang diekstraksi ke lua lua r sel (dil (dilep epa a ska n ke ke medi med ia ) • Pros Prosed edur ur pe pemur murni nia a n ha harrus membeda membe da ka n protein protein ya ya ng di d iingink nginka an ar pr p ro e n yang a n • Sifat pr protei otein n mer merupa upak ka n kunci kunci da la m mera mer a nc nca a ng protok protokol ol pe pemu murrni nia an

Sifat Protein : • Muatan disebabkan oleh rantai sam in , C OO da n NH3+ • Berat molekul protein bervariasi • Titik isoelektrik, pI, pH ketika muatan total protein nol  J ika protein dengan pI tertentu berada dalam larutan denga n pH tertentu, maka Net+

Net-

• Tahap pertama pemurnian protein intrasel adalah pemec ahan sel. • Pemilihan metode terga ntung pada tipe sel

Protein

Protein intrasel

Protein ekstrasel

Pemecahan sel em sa an se Pemisahan Isolasi protein

Isolasi protein Pemurnian protein

• Solubility : Salting In-Salting Out • Penamba han garam-kelarutan protein

meningkat karena ion anorganik dari garam mengikat protein dan mencegah agregasi

• Konsentrasi garam tinggi-garam lebih

cenderun men ikat air dan men ebabkan agrega si sehingga molekul protein mengalami presipitasi (sa lting ou t) 

Strategi Pemurnian Protein • Muatan: Kromatografi Penukar Ion (ion exchange c romatograp y • epo aran: roma ogra

n era s

ro o

, , elektroforesis, Kromatografi Filtrasi Gel, Ultrasentrifugasi • Spesifisitas: Kromatografi afinitas

• Protein dipisahkan dengan yang lain berdasarkan muatannya

1. Kromatografi penukar kation : muatan total protein negatif  2. Kromatografi penukar anion : muatan total protein positif 

• Prinsip kerja : Pemisahan berdasarkan pada muatan ionik yang berbeda antara komponen sampel terhadap sisi aktif 

Matriks

KROMATOGRAFI PENUKAR ION

GEL FILTRATION SIZE EXCLUSION CHROMATOGRAPHY

GEL FILTRATION SIZE EXCLUSION CHROMATOGRAPHY

• Pemurnian ini dilakukan berdasarkan afinitas enzim atau protein terhadap biomolekul lain (liga n) • Misalnya enzim terhadap substrat, afinitas antibodi terhadap antigennya, atau afinitas hormon ter a ap reseptornya

• SDS-PAGE • U i Aktivitas (cth : enz me assa , hormon assa ) • Sequencing Asam Amino

• Sodium dodecyl sulfate polyacrilamide gel electroforesis • • Mengetahui ukuran protein dan memonitor pemurnian protein

• SDS: protein menjadi bermuatan negatif da n linier • e a mer ap oe ano : memu us a an

su

a

• Perebusan (5 menit, 100oC ) • Berat molekul protein: diba ndingkan terhadap marka protein

(standar) yang suda h diketahui ukurannya

Polikarilamida : monomer a r am a erpo mersas membentuk rantai yang kompleksmelalui ikatan kovalen dan terjadi sambung silang

C ontoh hasil SDS-PAGE

ELEKTROFORESIS GEL DUA DIMENSI (2D)

ELEKTROFORESIS GEL DUA DIMENSI (2D)

C ontoh hasil elektroforesis2D