Introducción Al Laboratorio de Microbiología

INTRODUCCIÓN AL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA I TECNICAS DE OBSERVACIÓN OBSERVACIÓN DE BACTERIAS II

Juan Eduardo López Gómez, Rosa Angélica Miranda Sánchez, Geraldine Polo Peñae, !arolina Julieh "ergara

UNIVERSIDAD DE CORDOBA FACULTAD DE EDUCACION Y CIENCIAS HUMNAS LICENCIATURA EN CIENCIAS NATURALES Y EDUCACION AMBIENTAL VII AREA MICROBIOLOGIA MONTERIA 2017

#$ INTRODUC INTRODUCCION CION::

El la%oraorio de micro%iolog&a es un lugar con'enienemene

ha%iliado donde se mane(an ) e*aminan microorganismos$ Ese ipo de ra%a(o de%e ser lle'ado a ca%o con una %uena écnica asépica, ) por ano se re+uiere un am%iene limpio ) ordenado$ !uando mane(amos cual+uier ipo de muesra de%emos e'iar +ue microorganismos a(enos a nuesros culi'os ) presenes en el am%iene se inroduzcan en ellos conaminándolos, o +ue los microorganismos de la muesra nos conaminen a nosoros$ Por ello ra%a(aremos siempre en condiciones de eserilidad$ En el la%oraorio de micro%iolog&a enconramos esas condiciones %ien en campanas de seguridad %iológica o %ien en la pro*imidad de la llama de un mechero de alcohol o de gas$

Todos odos los !o"#d !o"#d$% $%$#& $#&'os 'os ()# s# ll# ll#*#& *#& + "+,o "+,o d#&'!o d#&'!o d#l l+,o!+ l+,o!+'o! 'o!$o $o d# %$"!o,$olo-.+ %$"!o,$olo-.+ d#,#& #s'+! #&%+!"+dos d#&'!o d#l "o&"#'o d# ,$os#-)!$d+d/ La %ioseg %iosegurid uridad ad ha sido sido deini deinida da por el Minis Miniseri erio o de Proec Proecció ción n Social Social como #l

"o&)&'o d# %#d$d+s !#*#&'$*+s d#s'$&+d+s + %+&'#&#! #l "o&'!ol d# 3+"'o!#s d# !$#s-o !$#s-o l+,o!+ l+,o!+l#s l#s !o"#d !o"#d#&' #&'#s #s d# +-#&'# +-#&'#ss ,$ol4,$ol4-$"o $"os s 3.s$"o 3.s$"oss o ().%$" ().%$"os os lo-!+&do l+ !#*#&"$4& d# $%+"'os &o"$*os +s#-)!+&do ()# #l d#s+!!ollo o !od)"'o 3$&+l d# d$"5os !o"#d$%$#&'os &o +'#&'#s "o&'!+ l+ s+l)d 6 s#-)!$d+d d# '!+,++do!#s d# l+ s+l)d +"$#&'#s *$s$'+&'#s 6 #l %#d$o +%,$#&'#/ (Manual  de cond conduct uctas as básic básicas as en biose biosegu gurid ridad ad.. Minist Ministeri erio o de Salud Salud.. 1997 1997). ).  Aun+ue los

microo microorga rganis nismos mos +ue se manipu manipulen len no sean sean consid considera erados dos paóge paógenos nos,, odos odos los culi'os de odos los microorganismos de%en ser mane(ados con precaución Por lo anerior es imporane cumplir con los siguienes re+uisios %ásicos•

Resringir la presencia de los microorganismos a sus recipienes ) medios de culi'o para e'iar el riesgo de conaminarse uno mismo o a un compañero$

•

E'iar +ue los microorganismos am%ienales .presenes en pile, ca%ello, aire, ropa, ec$/ conaminen nuesras muesras$

Por oro oro lado lado los seres seres 'i'os 'i'os presen presenan an 'aried 'ariedad ad en amaño amaño,, orma orma,, esruc esrucur ura, a, unción, ec$ !on relación al amaño ése 'ar&a, el o(o humano logra ideniicar o%(eos hasa de 011 micras, por lo +ue se hace necesario recurrir a insrumenos ópicos +ue aci acililie en n la o%se o%ser' r'ac ació ión n de o%(e o%(eo oss de meno menorr ama amaño ño,, ese ese ins insru rume men no o es el microscopio, +ue consise en (uegos de lenes +ue agrandan la imagen$ El microscopio se in'enó, hacia #2#1, por Galileo, seg3n los ialianos, o por Jansen, en opinión de los holandeses$ La pala%ra microscopio ue uilizada por primera 'ez por 

los componenes de la 4Accademia dei Lincei4 una sociedad cien&ica a la +ue perenec&a Galileo ) +ue pu%licaron un ra%a(o so%re la o%ser'ación microscópica del aspeco de una a%e(a$ Sin em%argo las primeras pu%licaciones imporanes en el campo de la microscopia aparecen en #221 ) #225 cuando Malpighi prue%a la eor&a de 6ar'e) so%re la circulación sangu&nea al o%ser'ar al microscopio los capilares sangu&neos ) 6oo7e pu%lica su o%ra Micrographia$  A mediados del siglo 8"99 un comerciane holandés, Leen:enhoe7, uilizando microscopios simples de a%ricación propia descri%ió por primera 'ez proozoos, %acerias, espermaozoides ) gló%ulos ro(os$ ;urane el siglo 8"999 el microscopio surió di'ersos adelanos mecánicos +ue aumenaron su esa%ilidad ) su acilidad de uso aun+ue no se desarrollaron me(oras ópicas$ Las me(oras más imporanes de la ópica surgieron en #eiss me(ora la microscop&a de inmersión susiu)endo el agua por aceie de cedro lo +ue permie o%ener  aumenos de 0111A principios de los años ?1 se ha%ia alcanzado el limie eórico para los microscopios ópicos no consiguiendo esos, aumenos superiores a 5118 o #1118 sin em%argo e*isia un deseo cien&ico de o%ser'ar los dealles de esrucuras celulares . n3cleo, miochondria$$$ ec$/$  Al principio, el microscopio surgió como una lene +ue agranda la imagen .lupa/, lo +ue dio origen al microscopio ópico compueso, +ue consa de (uego de lenes .pare ópica/, sosenida por esrucuras meálicas .pare mecánica/$ Para o%ser'ar los o%(eos a ra'és del microscopio ópico compueso, es necesario colocarlos so%re una laminilla de 'idrio .Pora o%(eos/ ) generalmene se le coloca ora laminilla de 'idrio más delgada .!u%re o%(eos/@ en esa orma se o%iene la preparación microscópica@ la +ue puede durar poco iempo .preparación emporal/, o puede ser guardada .preparación permanene/, lo +ue nos da la clasiicación de preparaciones de acuerdo a su duración$ La ma)or&a de los microorganismos se encenran disri%uidos en una gran 'ariedad de há%ias ) se encuenran ormando po%laciones mi*as con oros microorganismos, los culi'os de esas mezclas se denominan culi'os mi*os$ La amplia disri%ución de los microorganismos puede ser demosrada e*poniendo medios de culi'os esériles al conaco con el medio am%iene ) dierenes supericies, en esos medios los

microorganismos crecen ormando colonias$ El aspeco de las colonias, el amaño, su color, ec$, permien dierenciar 'arios ipos de %acerias, aun+ue son propiedades mu) generales inluenciadas por las condiciones en +ue se realice el culi'o$

2/ M+'#!$+l#s 6 M8'odos 2/1/

M#'odolo-.+/ Se inició con la charla de %ioseguridad en donde se resala%a la imporancia de ener presene la peligrosidad de un agene +ue esá direcamene relacionado con el ipo de manipulación a la +ue es someido, para lo +ue se presenan las normas %ásicas de %ioseguridad en un la%oraorio de micro%iolog&a, como disciplina en el e(ercicio cien&ico$ Reiriéndose el docene en urno a +ue-

6a) +ue ra%a(ar con calma ) concenración

Es imprescindi%le en odo momeno el uso del e+uipo de proección personal EPP . ,+'+s -)+&'#s ol+$&+s -o!!o '++,o"+s/$

 Al iniciar ) inalizar la prácica, el esudiane se la'ará las manos con agua ) (a%ón

El lugar de ra%a(o siempre de%e esar limpio ) ordenado

Esá prohi%ido comer, %e%er ) umar en el la%oraorio

!ual+uier maerial +ue no se uilice en l realización de la prácica de%e esar aparado del lugar de ra%a(o

Los microorganismos de%en mane(arse siempre alrededor de la llama del mechero

o se de%e pipeear nunca con la %oca

Para deshacernos del maerial conaminado uilizaremos siempre los recipienes adecuados

Ba(o ning3n concepo de%e sacarse ninguna muesra conaminada del la%oraorio

 Aseg3rese de conocer el procedimieno anes de realizar  cual+uier e*perimeno, si iene dudas, no dude en consular a su insrucor

Codos los medios de culi'o de%en ser ransporados en posición 'erical ) almacenados en igual posición en sus respeci'os recepores

Codos los maeriales usados durane la prácica de%en ser  reornados a los lugares de donde ueron o%enidos

Mar+ue en orma legi%le los u%os ) ca(as de Peri +ue se 'a)an a usar$  Además de ser un compromiso, es una prioridad ener presene esas normas de %iseguridad$

2/2/

R#"o&o"$%$#&'o d# Materiales y Equipos #& #l l+,o!+'o!$o d# %$"!o,$olo-.+/

E9UIOS Y MATERIALES •

Esco%illones de algodón eséril .copios esériles/

•

Pipeas

•

e'era

•

Reaci'os +u&micos

•

Pora D%(eos ) !u%re D%(eos

•

Papel impreso .periódico/ con lera pe+ueña

•

Ci(eras ) ho(a de aeiar nue'a

•

Papel ) lápiz

•

Lápiz de colores

•

Lana o algodón de colores

•

!orcho

•

Polen de lor

•

Pol'illo de ala de mariposa

•

Ja%ón ani%acerial

•

Rollo de papel secane .oallas de papel de cocina/

•

 Alcohol anisépico

•

Encendedor 

•

!ina pegane de papel

MATERIALES F!+s"o -o'#!o

FUNCIÓN Recipienes en general de plásico .am%ién pueden ser de 'idrio/, con apón ) un u%o ino ) do%lado, +ue se emplea para conener agua desilada o

M$"!os"o$o "o%)#s'o

o!'+ 6 "),!# o,#'os

As+ ,+"'#!$ol4-$"+

desionizada$ Se emplea para dar el 3limo en(uague al maerial de 'idrio después de la'ado, ) en la preparación de disoluciones$ Esos rascos nunca de%en conener oro ipo de l&+uidos$ El rasco sólo se a%re para rellenarlo$ El microscopio es un insrumeno ópico +ue ampliica la imagen de un o%(eo pe+ueño$ Es el insrumeno +ue más se usa en los la%oraorios +ue esudian los microorganismos$ Mediane un sisema de lenes ) uenes de iluminación se puede hacer 'isi%le un o%(eo microscópico$ Los microscopios pueden aumenar de #11 a cienos de miles de 'eces el amaño original n o!'+o,#'os es una ina placa de crisal so%re el cual se disponen o%(eos para su e*amen microscopico$ Sus dimensiones son de =5 mm * 05 mm ) esan disponi%les en ca(as de 51 unidades$ El o%(eo a o%ser'ar suele disponerse so%re ese areaco para después siuarse en el microscopio ) ser  o%ser'ado$ Cam%ien disponi%les cu%reo%(eos para cu%rir la muesra o%ser'ada$ n "),!#o,#'os es una ina ho(a de maerial ransparene de plana cuadrada$ Se coloca so%re un o%(eo +ue 'a a ser o%ser'ado %a(o microscopio, el cual se suele enconrar  so%re un porao%(eos$ ;isponi%les en disinos amaños .#iehlIeelsen es la écnica com3nmene usada en el diagnósico ruinario de u%erculosis$00,0? Es una écnica rápida, ácil ) de %a(o coso,0F lo +ue permie +ue se pueda realizar en casi cual+uier la%oraorio cl&nico$ Esa inción permie dierenciar a las %acerias en dos grupos- a+uellos +ue son capaces de resisir la decoloración con alcoholIácido ) a+uellos +ue no lo son$05 La sensi%ilidad de esa inción para idenii car %acilos ácidoIalcohol resisenes es del =FK$

T$&"$4& d# K!$-5'  La inción de Yrigh es una écnica +ue se emplea generalmene para la dierenciación de elemenos celulares de la sangre ) es clasii cada como una inción policromáica, dado +ue puede eñir compuesos ácidos o %ásicos presenes en una célula$01 Tue desarrollada por el paólogo James 6omer Yrigh en #O10 a parir de la modii cación de la )a e*isene inción de Romano:s7), uilizada para dierenciar  elemenos ormes de la sangre$0#

T$&"$4& d# +)l +l-od4& d# l+"'o3#&ol  El e*amen microscópico es de gran imporancia en micolog&a para la o%ser'ación de las dierenes especies de hongos de inerés cl&nico$ Se de%en uilizar inciones +ue logren preser'ar la inegridad de las esrucuras 3ngicas$#< Para la correca idenii cación de hongos de inerés cl&nico, )a sea con i nes de diagnósico o esudios a*onómicos, es necesario o%ser'ar las esrucuras 3ngicas con una ala calidad ) conrase@ para ello se uilizan di'ersos compuesos +u&micos +ue permian la inción enre la pared ) el cioplasma de las células 3ngicas$?# .hp-NN:::$medigraphic$comNpdsNin'disNirI01#FNir#F#%$pd /

=$ Realiza una lisa de %acerias +ue sineicen cápsulas$ Los limos•

Leuconostoc mesenteroides ransorma la sacarosa en de*rano, por un lado es

un conaminane e*remadamene moleso en el proceso de a%ricación de az3car  donde la a%undane espuma de los l&+uidos conaminados le 'alió el apodo de

4%aceria del deso'e de las ranas4 .'ea en ese clip el aspeco de un auenico deso'e de rana/ ) por el oro la %ase de la a%ricación de dos producos de alo 'alor agregado- susiuo del plasma sangu&neo ) gel para separaciones cromaográicas$ •

Streptococcus salivarium 6 Streptococcus mutans ransorma la sacarosa

en l#*+&os .polirucosa/, esos se i(an en los dienes ) consiu)en la %ase para •

la producción de ácidos +ue a'orecen las caries denales$ Los limos manienen en grupos a las %acerias . Zooglea) o %ien en pel&culas supericiales como en Acetobacter aceti su%sp$ xylinum, en ese caso el produco e*creado es celulosa +uien da la consisencia correosa +ue la lle'ó a ser  conocida como 4 %6"od#!%+ +"#'$4

CONCLUSIÓN El maerial de la%oraorio es esencial denro del área de micro%iolog&a, no solo de manera cl&nica sino am%ién en alimenos, indusrial ) am%ienal$ a +ue las prue%as para la ideniicación de %acerias, écnica de recuena de %acerias, la o%ser'ación de los microorganismos, culi'o de %acerias, prue%as de micolog&a, 'irológica, genéica %aceriana, écnicas serológicas, pueden 'ariar en el proceso, pero %ásicamene se uiliza el mismo maerial ) e+uipo, por eso es imporane conocer las caracer&sicas ) la écnica de mane(o adecuado para cada insrumeno empleado en el la%oraorio$ Es de suma imporancia conocer las écnicas de eserilización para e'iar la conaminación de agenes e*ernos a las prue%as realizadas, as& como e'iar +ue el personal se inecado por un microorganismo paógeno por eso es necesario +ue el maerial enga un proceso de limpieza procesamieno, manenimieno, super'isión de programas para la eserilización, carga de aparaos eserilizados, conrol de almacena(e de ar&culos procesados, disri%ución de ar&culos procesados, suminisro de ar&culos esériles, conrol de ar&culos contaminados ! descontaminación.

B$,l$o-!+3$+

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hp-NN:::$%iologia$edu$arN%aceriasNmicro