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Inmunohistoquímica aplicada en musculo  Jorge Carrasco Carrasco Sanhueza  Tecnólogo  T ecnólogo Médico Morfosiopatología y Citodiagnóstico Hospital Dr. uis Cal!o Mac"enna

Sumario • #eneralidades del te$ido %uscular • &plicaciones &plicaciones Diagnosticas de la 'H( • )or%as de procesa%iento • *rocedi%iento de técnica • &nticuerpos utilizados

Sumario • #eneralidades del te$ido %uscular • &plicaciones &plicaciones Diagnosticas de la 'H( • )or%as de procesa%iento • *rocedi%iento de técnica • &nticuerpos utilizados

Generalidades del tejido muscular •  Te$ido  Te$ido

alta%ente %esoder%o

especializado+ especializado+

deri!a

del

• ,esponsa-le de las fuerzas de contracción del

organis%o • o%enclatura especíca/ Célula %uscular  -ra %uscular Me%-rana plas%0tica  Sarcole%a Citoplas%a  sarcoplas%a ,etículo endoplas%atico liso sarcoplas%ico • Mitocondrias sarcoso%as • • • •

 

retículo

Generalidades del tejido muscular • Se

encuentran coordinadas con$unto con te$ido conecti!o/ • )i-ras col0genas • ,eticulares • 1l0sticas • *resentan

una

alta

en

irrigación

sanguínea • *resentan ter%inaciones ner!iosas

Fibras reticulares del sarcolema e irrigación del musculo

Tejido muscular: tipos • Musculo esquelético • 1striado • 2oluntario • *er%ite %o!i%iento

aparato loco%otor

del

• Musculo liso • o posee estrías • )or%a parte de las !ísceras • 3a$o control autóno%o y

hor%onal

• Musculo • Caract.

cardiaco

De %usculo es4uelético y estriado • *er%ite contracción rít%ica

Tejido muscular: organización • 1l

TM 1s4uelético se organiza %ediante agrupaciones de -rillas %usculares 5células %usculares6

• •

sta agrupación es mediada por: Tejido conecti!o   e%pa4uetan las -ras for%ando for%ando pa4uetes %ioconecti!os

•

Sistema de proteínas de unión

 per%iten

la unión %olecular del sarcole%a al te$ido conecti!o

• &%-as per%iten la tras%isión de las fuerzas de

tención de los huesos 4ue unen

"aquetes mioconecti!os: epimisio # perimisio $ endomisio

%plicaciones &iagnosticas de la I'( • “Tipifcación, diagnostico y tratamiento”  •

Tumores  –  –  –  –

•

Des%oide )i-ro%atosis ,a-do%io%a ,a-do%iosarco%a

&istro)as  – Distroa %uscular de Duchenne  – Distroa %iotónica de Steiner  – Distroa %uscular de 3ec"er

%plicaciones &iagnosticas de la I'(: • Fibromatosis tumores • #rupo de proliferaciones de -ro-lastos del te$ido conecti!o 4ue tienen creci%iento inltrati!o+ tendencia a la recidi!a+ sin heterotipía ni %et0stasis. • *ueden ser/  – superfciales de creci%iento lento y ta%a7o pe4ue7o  – Proundas asociadas a te$ido %uscular de  -rosarco%as 8 tu%or des%oide

Fibromatosis mamaria

%plicaciones &iagnosticas de la I'(: • Tumor desmoide tumores

• neoplasia -rosa -enigna originada de

las estructuras %9sculo:aponeuróticas del cuerpo. • Se caracteriza por creci%iento de te$ido -rosos+ duro+ general%ente -ien diferenciado e inltrati!o. • 1stos tu%ores est0n constituidos por la lenta proliferación de %io-ro-lastos diferenciados.

Tumor desmoide

%plicaciones &iagnosticas de la I'(: • rabdomioma tumores • tu%or -enigno %uy infrecuente+ considerado a !eces una %alfor%ación • rabdomiosarcoma • tu%or %aligno u-icado

en!olturas e;tre%idades.

preferente%ente en testiculares+ retroperitoneo+

• Formado por células musculares estriadas,

en general inmaduras y polimoras. • Requiere diagnostico dierencial con Tumor de células pequeñas redondas y azules

*abdomioma + *abdomiosarcoma

%plicaciones &iagnosticas de la I'(: • 1nfer%edades degenerati!as pri%arias del &istro)as musculares %9sculo es4uelético+ 4ue tienen una -ase genética. • #rupo heterogéneo de trastornos hereditarios

4ue cursan con de-ilidad y atroa %usculares • as %as co%unes son ligadas al cro%oso%a .,ecuperación antigénica  –

*ara re!ertir el en%ascara%iento antigénico causado por la for%alina

•

Fijación por congelación

=.*ost$ación en %etanol:acetona =/=  – "ermite una )jación ideal para proteínas de Citoes4ueleto  – Sarcole%a  –  E 1;tracelulares asociadas  –

*rocedi%iento de técnica/ pasos críticos •

Fijación en 0ormalina

1*T+ de fación apropiada -*Temperat!ras de  procesamiento .*/ec!peración antignica apropiada */espetar la2ados 3*il!ción de (c 4 T+ inc!bación 5*$istema de detección6 re2elado

Fijación por congelación 12/a!ados con e3tremo cuidado4 •

•  pese a la adherencia de

 portaobetos, presentan !n % de desprendimiento m!cho mayor a cortes en  parafna

&ilución de %c # T5 incubación • Sistema de detección$ re!elado •

Sistema de proteínas de unión del musculo

Sistema de proteínas de unión del musculo

%nticuerpos 6tilizados en tejido muscular • • • • • • • • • • •

&ctina %usculo especica &ctina %usculo liso Des%ina Disferlina Distrona =+ > y ? 1%erina Merosina Miogenina Mioglo-ina MyoD= Sarcoglicano

&nticuerpos Ftilizados •

%c usados en )jación con 0ormalina

• &ctina %usculo • • • • • •

especica &ctina %usculo liso especica Des%ina Merosina Miogenina Mioglo-ina MyoD=

•

%c usados en )jación por congelación

• Disferlina • Distrona =+ > y ? • 1%erina • Sarcoglicano

%nticuerpos 6tilizados en tejido muscular

• %7TI8% M6S76/, S"7IFI7% 9''F;< • a &ctina+ una proteína citoes4uelética u-icua

alta%ente conser!ada de las células %usculares y no %usculares

• speci)cidad • no reacciona con la a:actina de origen no

%uscular 5células endoteliales6. • ,eacciona con isotipos de a:actina y g:actina de %9sculo liso+ es4uelético y cardíaco. •

"atrón de marcación

Citoplas%0tico

M9sculo o apéndice

%ctina musculo especi)ca 9''F;<

%nticuerpos 6tilizados en tejido muscular •

%7TI8% M6S76/, /IS, S"7IFI7% 91 % =<

• *roteína del Citoes4ueleto de todo te$ido

%uscular liso

• speci)cidad • 'sofor%as de la alfa:actina %usculo liso • ,eacciona con células %usculares lisas de

!asos y diferentes parén4ui%as

•

"atrón de marcación

•

7ontroles

Citoplas%0tico

&péndice o leio%io%a

%ctina musculo liso especi)ca

%nticuerpos 6tilizados en tejido muscular

• &esmina • proteína de tipo ''' de los la%entos inter%edios

del citoes4ueleto intracelular en particular de células %usculares+ tanto estriadas co%o lisas

• speci)cidad • Marca las células del %9sculo liso y estriado+ así

co%o las células %esoteliales+ y constituye una herra%ienta 9til para la identicación de ra-do%iosarco%as+ leio%io%as y %esotelio%as.

•

"atrón de marcación

•

7ontroles

&péndice

Citoplas%0tico

desmina

%nticuerpos 6tilizados en tejido muscular

• &ISF*/I8% • *roteína asociada a la reparación del %usculo

es4uelético+ los defectos en el gen de la disferlina resultan en dos distroas %usculares.

• speci)cidad • ,eacciona con la %olécula Disferlina del %usculo

es4uelético

•

"atrón de marcación

•

7ontroles

*rincipal%ente de %e%-rana+ en %enor grado Citoplas%0tico %usculo procesado congelación G en defecto control negati!o

por

&is0erlina

%nticuerpos 6tilizados en tejido muscular • &IST*,FI8%S 14 > ?  • )a%ilia de proteínas de trans%e%-rana

9@4 A4 B4 C or D<

en!ueltos en un co%ple$o de proteínas responsa-les de

conectar el citoesqueleto de las )bras musculares con la matriz e3tracelular4  pre!iniendo el da7o del sarcole%a de la -ra %uscular tras fuerza %ec0nica e$ercida durante las contracciones %usculares

• a %utación de los genes + I+  or K genes 5no L6 4ue

codican estas proteínas est0n asociados con distroa %uscular

•

"atrón de marcación

•

7ontroles

Membrana

%usculo procesado por congelación G en defecto control negati!o

distro)na

%nticuerpos 6tilizados en tejido muscular

• M*I8% • proteína de la %e%-rana nuclear en

!erte-rados. 1ste %edia el ancla$e de la %e%-rana nuclear al citoes4ueleto

•

"atrón de marcación

%e%-rana

nuclear •

7ontroles

%usculo procesado por congelación G en defecto control negati!o

merina

%nticuerpos 6tilizados en tejido muscular • M*,SI8% • ,eacciona intensa%ente

con la cadena alfa > 5%erosina6 de la la%inina en %9sculo es4uelético hu%ano

• speci)cidad • ,eacciona intensa%ente

con la cadena alfa > 5%erosina6 de la la%inina en %9sculo es4uelético hu%ano

•

"atrón de marcación

•

7ontroles

e;tracelular de %9sculos

%arcación de %atriz

%usculo procesado por congelación G en defecto control negati!o

Merosina

%nticuerpos 6tilizados en tejido muscular

• MI,G8I8% • 1l gen de la %iogenina integra una fa%ilia de

genes reguladores %iogénicos+ incluidos MyoD+ %yfB y M,)@. • Codican un con$unto de factores de transcripción esenciales para el desarrollo del %9sculo.

•

"atrón de marcación

nuclear y en %enor

grado citoplas%atica •

7ontroles %usculo fetal.

ra-do%iosarco%a+ tu%or de ill%s+

miogenina

%nticuerpos 6tilizados en tejido muscular •

MI,G/,-I8%

• He%oproteína

%uscular+ estructural y funcional%ente %uy parecida a la he%oglo-ina+ contiene un grupo he%o con un 0to%o de hierro+ y cuya función es la de al%acenar y transportar o;ígeno.

•

"atrón de marcación

•

7ontroles

%9sculo

citoplas%a

mioglobina

%nticuerpos 6tilizados en tejido muscular

• MEo&1 • proteína hu%ana con un i%portante papel en la

regulación %uscular.

de

la

diferenciación

del

te$ido

• speci)cidad • egati!a para te$ido %uscular %aduro+ %uy

intenso en celulas ra-do%iosarco%as •

"atrón de marcación

•

7ontroles

tu%orales

nuclear

ra-do%iosarco%a

de

M?,&1 en rabdomiosarcoma

%nticuerpos 6tilizados en tejido muscular • Sarcoglicano • )or%a parte

del co%ple$o de proteínas responsa-les de conectar el citoes4ueleto de las -ras %usculares con la %atriz e;tracelular+

• speci)cidad • 1l clon &d=G>N&

detecta la proteína alfa: sarcoglicano 5adhalina6 en el sarcole%a de las -ras %usculares es4ueléticas y cardíacas.

•

"atrón de marcación

•

7ontroles

%e%-rana

%usculo procesado congelación G en defecto control negati!o

por

sarcoglicano

%"/I7%7I8: *%-&,MI,S%*7,M% •  Tu%or %aligno indiferenciado de te$idos -landos

4ue afecta general%ente a ni7os. • *uede afectar estructuras de la ca-eza y cuello+

aparato genitourinario+ y e;tre%idades. • 3a$o la H1 la %orfología indiferenciada de sus

células hace i%posi-le deter%inar a 4ue tipo de patología corresponde. • a ih4 per%ite por lo tanto+ deter%inar con

ciertos %arcadores la estirpe del tu%or

' de rabdomiosarcoma