Intr Introd oduc ucci ción ón Generalidad Generalidades es de de los Lípidos: Lípidos: Clasi Clasificaci ficación ón Ácid Ácidos os gras grasos os Trigli iglicé céri rido doss Metabol Metabolism ismo o de lípido lípidoss 5.1. Síntesis de los ácidos grasos 5.2. Formación de triacilglicéridos 5.. Oxidación de los ácidos grasos !. Cole Colest ster erol ol ". Lipo Lipopr prot oteí eína nass ".1. Quilomicrones ".2. !"! ".. !"! ".#. #"! $. Determ Determina inació ción n del %erfil %erfil Lipíd Lipídico ico $.1. $ondiciones %reanalíticas $.2. "eterminación de Triglicéridos Total $.. "eterminación de $olesterol Total $.#. "eterminación de $olesterol #"!&directo' $.5. "eterminación de $olesterol #"! &(eacti)o %reci%itante' $.!. "eterminación de $olesterol !"! &directo' $.". "eterminación de !"!*colesterol de +orma indirecta $.$. "eterminación de !"!*$o de +orma indirecta ,. $alcul $alculo o del índice índice de -ter -terogen ogenici icidad dad de $astelli 1. "eterminación de !í%idos Totales 11. 11. alores alores re+erenciales del %er+il !i%ídico 1/.Trastornos li%ídicos 13.$aso 13. $aso clínico clínico
%E&'IL LI%IDIC( 1. Intr Introd od) )cc cció ión n 0l %er+il li%ídico lo constitue la cuanti+icación analítica de una serie de lí%idos 2ue son trans%ortados en la sangre %or los di+erentes ti%os de li%o%roteínas %lasmáticas. !a determinación de estos %arámetros es un %rocedimiento analítico ásico %ara el diagnóstico seguimiento de en+ermedades metaólicas %rimarias o secundarias. 0ntre estos %arámetros analíticos 2ue se %ueden determinar están5 • • •
Triglicéridos $olesterol total colesterol trans%ortado %or las !"!
$olesterol trans%ortado %or las #"! $olesterol trans%ortado %or las !"! !í%idos totales
-ltos ni)eles de colesterol se asocian a riesgo de %adecer en+ermedades cardio)asculares en es%ecial a2uel unido a las !"! &colesterol malo'. 0l colesterol de las #"! &colesterol ueno' %uesto 2ue re%resenta a2uella +racción de colesterol 2ue se trans%orta al 6ígado %ara su metaoli7ación excreción %or )ía iliar no se asocia con riesgo de en+ermedad.
2. Generalidades de los Lípidos !os lí%idos constituen un gru%o com%le8o di)erso de moléculas 2ue tienen en com9n el ser insolules en agua %or lo cual necesitan de un sistema de trans%orte denominadas li%o%roteínas. !os lí%idos más im%ortantes 2ue se encuentran en el %lasma tenemos5 • • • •
0ntre las )ariadas +unciones de los lí%idos destacan las siguientes5 •
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Función de reser)a son la %rinci%al reser)a energética del organismo. :n gramo de grasa %roduce ,4;cal mientras 2ue los gl9cidos %roteínas %roducen cerca de 41;calara ello los ácidos grasos son degradados en la matri7 mitocondrial %ara otener energía mediante un %roceso llamado ?*oxidación. O ser trans+ormados en triglicéridos. alores normales en %lasma oscilan entre 1 */mg#. Se otienen así un acido graso acti)ado acilo*$o- de cuatro caronos. Todo este %roceso está catali7ado %or un con8unto de en7imas denominadas com%le8o ácido graso sintetasa &S-@'.
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b. 'ormación de triacil+lic-ridos !a síntesis de estas moléculas li%ídicas re2uiere las +ormas acti)adas de sus com%onentes5 •
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@licerol*3*+os+ato &se otiene a %artir de la di6idroxiacetona*3*+os+ato 2ue se +orma durante la glucólisis'. -cil*$o- &otenido a %artir del acido graso sinteti7ado'
!as moléculas de acido graso )an uniéndose mediante enlace ti%o éster +ormando %rimero un monoacilglicérido luego un diacilglicérido +inalmente triacilglicéridos. 0sto tiene lugar en las células 6e%áticas del te8ido adi%oso.
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c. (0idación de los /cidos +rasos 0l %rinci%al mecanismo de otención de energía de los lí%idos lo constitue la llamada ?eta*oxidación de los ácidos grasos 2ue se otienen de los triglicéridos mediante 6idrólisis catali7adas %or li%asas es%ecí+icas. •
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1. !os ácidos grasos se unirán a una molécula de coen7ima - &$o-' en el cito%lasma 2uedando acti)ados como acil*$o-. 2. 0l acil*$o- %enetra en la mitocondria gracias a un trans%ortador es%ecial la carnicitina. . 0l acil*$o- su+re la %rimera oxidación del carono D +ormándose un acil*$oinsaturado con dole enlace. #. 0l acil*$o- se 6idrata con lo 2ue se +orma un D* 6idroxiacil*$o- sin dole enlace. 5. 0l D*6idroxiacil*$o- su+re la oxidación del carono D +ormándose un D*cetoacil* $o-. !. 0l D*cetoacil*$o- interacciona con una molécula de $o- con lo 2ue se rom%e en dos moléculas un acetil*$o- de dos caronos un acil*$o- 2ue %osee dos caronos menos 2ue el 2ue inicio el ciclo de la D*oxidación.
!a acil*$o- %uede iniciar otro ciclo originar otro acil*$o- de dos caronos menos así sucesi)amente 6asta 2ue se otenga un acil*$o- de sólo dos caronos es decir un acetil*$o-. !as moléculas de acetil*$o- +ormadas en los ciclos de ?eta*oxidación %ueden seguir la ruta cataólica del ciclo de Eres degradarse totalmente %or res%iración .
!. Colesterol
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0l colesterol es un esterol de / carono el cuer%o 6umano %osee /gramorimera eta%a5 +ormación del iso%reno es la unidad ásica del colesterol se +orma el 3 6idroxi*3 metilglutarilG $o- %or medio de una en7ima #H@co- reductasa +ormándose me)alonato. Segunda eta%a5 la condensación %rogresi)a del iso%reno %ara +ormar un com%uesto de 3 caronos 2ue se cicla 6asta otener el colesterol en esta %arte inter)iene el sistema citocromo >4. Huc6as )eces el colesterol se esteri+ica con un -@ dando lugar a ésteres de colesterol.
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0l colesterol se trans%orta en el %lasma %redominante como ésteres del colesterol asociados a las li%o%roteínas. • • •
!as !"! trans%ortan el J del colesterol. !as #"! del 1 al /J 0l resto circula unido a las !"! a los Quilomicrones
0l mecanismo más im%ortante %ara degradar eliminar colesterol es la síntesis de ácidos iliares las cuales son secretadas en la ilis 6acia el intestino %ara desec6arse %or 6eces +ecales
Son com%le8os macromoléculas +ormados %or triglicéridos colesterol Fos+olí%idos constituen un sistema de trans%orte. Se %ueden clasi+icar tomando en cuenta su5 densidad migración electro+orética contenido de triglicéridos colesterol +lotación. • • • •
Quilomicrones !i%o%roteínas de mu a8a densidad &!"!' !i%o%roteínas de a8a densidad &!"!' !i%o%roteínas de alta densidad "!'
a. )ilomicrones Son moléculas grandes a%arecen en el %lasma tras la ingestión de grasas son sinteti7adas en las células intestinales. Son rico en triglicéridos su )ida media en sangre es mu corta &menos de 3minutos' su %rinci%al +unción es el trans%orte de los lí%idos exógenos sore todo de triglicéridos.
b. LDL Son li%o%roteínas de mu a8a densidad son sinteti7adas en el 6ígado tamién en el intestino a %artir de los lí%idos exógenos endógenos. Su +unción es la de trans%ortar los triglicéridos endógenos.
c. LDL !as li%o%roteínas de a8a densidad se originan como consecuencia de la degradación de las !"! en el torrente circulatorio. Su +unción esencial es la de trans%ortar el KJ del colesterol circulante 6acia las células de los te8idos %ara su utili7ación. 0ste es el colesterol 2ue en exceso %uede 2uedar ad6erido a las %aredes de los )asos sanguíneos %or lo 2ue es recomendale mantener a8os los ni)eles del colesterol !"!.
d. 3DL 0s la li%o%roteína de alta densidad tiene una densidad esto se dee a su alto contenido de %roteínas &/J %roteínas 4KJ lí%idos'. !i%o%roteínas de alta densidad o #"! recoge el colesterol sorante de los te8idos lo traslada 6asta el 6ígado donde será eliminado. >or tanto cuanto maor sean los ni)eles del colesterol #"! maor cantidad de colesterol será eliminado de la sangre.
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$. Determinación del %erfil Lipídico !a determinación de las concentraciones de lí%idos li%o%roteínas %roteínas relacionadas circulantes %ermite el diagnóstico el tratamiento el seguimiento de las di+erentes disli%emias. • • • • • •
Triglicéridos $olesterol total colesterol trans%ortado %or las !"! $olesterol trans%ortado %or las #"! $olesterol trans%ortado %or las !"! !í%idos totales
a. Condiciones preanalíticas 0s necesario estandari7ar todas las circunstancias 2ue rodean al análisis %ara e)itar todos los %osiles +actores 2ue in+luen en los ni)eles de lí%idos li%o%roteínas5 •
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Co se deen reali7ar estudios en %acientes 2ue están en+ermos tienen in+ecciones emara7adas o 6an tenido in+arto de miocardio %rocesos 2uir9rgicos dentro de los dos meses %re)ios al estudio. 0l %aciente dee mantener su dieta 6aitual el %eso %or lo menos / semanas antes de la extracción. 0l %aciente no dee reali7ar e8ercicios )igorosos durante /4 6s antes de la extracción. Oser)ar estrictamente las 1/ 6oras de auno. 0l %aciente dee %ermanecer sentado durante min. >re+erilemente reali7ar la determinación en suero. $olesterol total $olesterol #"! deen anali7arse lo antes %osile .
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b. Determinación de ,ri+lic-ridos ')ndamento del M-todo: En4im/tico colorim-trico !os triglicéridos son 6idroli7ados %or las li%o%roteín li%asa lierando glicerol ácidos grasos. 0l glicerol es +os+orilado %or glicerol+os+ato des6idrogenasa -T> en %resencia de glicerol 2uinasa %ara %roducir glicerol*3*+os+ato -">. 0l @3> es con)ertido a di6idroxiacetona +os+ato &"->' # /O/ %or la glicerol+os+ato des6idrogenasa &@O"'. -l +inal el # /O/ reacciona en %resencia de la %eroxidasa con 4*aminoanti%irina %* cloro+enol %ara dar origen a un com%uesto coloreado de color cere7a &Quinona' ca%a7 de asorer a nm. !a intensidad de color +ormado es %ro%orcional a la concentración de triglicéridos %resente en la muestra.
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M)estra Suero otenido lire de 6emólisis &%ara e)itar resultados +alsamente ele)ados' >lasma otenido con 0"T- o 6e%arina. 0l analito es estale durante 3 días entre / KL$ 3 días a * 1L$. !a sangre dee ser cogida luego de aunar de 1/ a 14 6oras.
c. Determinación de Colesterol ,otal $olesterol total es la suma de todas las +racciones &$o*#"! $o*!"! $o* !"!' ')ndamento del M-todo: en4im/tico colorim-trico 0l colesterol %resente en la muestra origina un com%uesto coloreado 2ue es ca%a7 de asorer a nm. Seg9n la siguiente reacción5
!a intensidad del color +ormado es %ro%orcional a la concentración de colesterol %resente en la muestra.
M)estra Suero otenido lire de 6emólisis o %lasma cogido con 6e%arina. 0l $olesterol es estale en el %lasma o en lo suero %or 6asta días entre / KL$ 6asta días entre 1 3M$.
%rocedimiento de Medida
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alores referenciales 3asta 2m+6dl
d. Determinación de Colesterol 3DL7directo8 ')ndamento del M-todo: 0n7imático G $olorimétrico. 0l #"! "irecto %ermite una determinación directa sin la necesidad de %reci%itación %re)ia ni tratamiento de la muestra. Son utili7ados reacti)os 2ue reali7an la dosi+icación selecti)a del colesterol conectado al #"!. !as su%er+icies de las li%o%roteínas de a8a densidad &!"!' mu a8a densidad &!"!' de los 2uilomicrones son estaili7ados %or la asorción del %olianión no su+ren la acción de las en7imas modi+icadas %resentes en el reacti)o. 0l #"! sin emargo se soluili7a %or la acción de un detergente %ermitiendo la acción en7imática sore el colesterol conectado a él. "e esta +orma el colesterol*#"! %resente en la muestra origina un com%uesto coloreado 2ue es ca%a7 de asorer a nm. !a intensidad de la coloración +ormada es %ro%orcional a la concentración de colesterol #"! en la muestra.
M)estra Suero otenido lire de 6emólisis %lasma cogido con 6e%arina. 0l $olesterol #"! es estale en el suero %or 6asta días entre / KL$.
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e. Determinación de Colesterol 3DL 7&eacti9o precipitante8 ')ndamento del M-todo !as li%o%roteínas de alta densidad "!' se se%aran %reci%itando selecti)amente las li%o%roteínas de a8a mu a8a densidad &!"! !"!' %resencia de +os+otungstato iones magnesio. !as #"! 2uedan en el sorenadante se%arado %or centri+ugación donde se reali7a la determinación del colesterol ligado a las mismas em%leando el sistema en7imático $olesterol oxidasaeroxidasa con colorimetría seg9n Trinder &Fenol
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