INFORME nº6

INFORME Nº6:

Determinaciones absorciométricas en el ultravioleta

Nombres: Gabriela Gatica V. Digna Navarro V.

Fecha:

06 de Junio de 2013

Resumen: Para este práctico se utilizó nuevamente el espectrofotómetro Spectronic 20, con el cual debimos efectuar un espectrograma entre las longitudes de onda correspondiente al espectro UVmedio (200-350nm). Para esto se nos entregó una muestra desconocida de la cual, a partir de su espectrograma debimos buscar coincidencias en la literatura (atlas entregados en el laboratorio) para obtener la sustancia que se nos habría facilitado. A partir de esto se obtuvo que nuestra muestra era sulfanilamida y que su max absorción se presentó a (valor no me acuerdo)nm, presentando una absorbancia de 0,924. Luego de esto se procedió semejantemente a los prácticos anteriores, efectuando una curva de calibración a partir de soluciones de concentraciones decrecientes conocidas para finalmente obtener la concentración del analito de Sulfanamida por medio de los métodos Absoluto, Factor y de Grafico. Se resumen en la siguiente tabla.

Cuadro 1: Comparación de las concentraciones obtenidas del analito de Hierro en los tres métodos utilizados. Concentración Muestra Problema (M) Método del factor #M P

6

Método absoluto

Método de la gráfica

MP diluida

MP concentra da

MP diluida

MP concentra da

MP diluida

MP concentra da

3,96x10-3 M

1,98x10-2 mg/ml

4,08x103 mg/ml

2,04 x10-2 mg/ml

4,06 x10-3 M

2,03x10-2 mg/ml

Resultados: Se entregó una muestra problema, en nuestro caso fue la Muestra Nº6, con esta se debió confeccionar un espectrograma utilizando el espectofotómetro Shimadzu-UVmini-1240. Para realizarlo, se realizó una disolución 1+4 de la muestra, es decir, 5ml de muestra enrasando el matraz a 25ml con disolvente, en este práctico se utilizó agua. Se utilizó un blanco de agua destilada, con esto se calibró el instrumento y se procedió a realizar el espectrograma. Se realizó en un intervalo de 320 a 220 nm, ya que son las que pertenecen a la región del UV cercano. El espectrograma fue medido en Absorbancia (A) y Porcentaje de Transmitancia (%T).

Grafico Nº1: Espectrograma Absorbancia frente a Longitud de Onda.

Gráfico Nº2: Espectrograma de %T frente a Longitud de Onda.

Se procedió a calcular la absortividad con la longitud de onda (λ) de mayor absorción y a longitud de onda de menor tramitancia. Se utilizó la ecuación de la Ley de Lambert-Beer A=a*b*c , en este caso se utilizó la concentración en mg/ml por lo que se utiliza la absortividad, a diferencia del práctico anterior en donde se utilizó la absortividad molar (ε).

Absortividad teórica del complejo: 11.100 M-1cm-1

a= A/b*C

A= a x b x c

a=

Absortividad: 92,4

Estos valores se utilizaron para compararlos en un atlas con las sustancias que podían corresponder a la muestra problema.

Se comparó observando: -

Bandas de absorción y posición en escala de longitud de onda. Tanto en los máximos y mínimos.

-

Calculando las absorbancias prácticas en los máximos de absorción.

-

Comparando las posiciones de λ máx. en cada máximo de absorción y las absortividades respectivas.

Se identificó la sustancia como sulfanilamida.

Una vez que se identificó se solicitó una muestra problema y una solución estándar de la sustancia que nos correspondió para realizar el análisis cuantitativo.

Con la longitud de onda de máxima absorción llamada λ T (longitud de onda de trabajo se preparó una curva de calibración. Para esto se tuvo que determinar los volúmenes necesarios para preparar una disolución determinada que tuviera la absorbancia de 0,2;0,4;0,6;0,8;1 y 1,2.

Los datos obtenidos se registraron en la siguiente tabla:

Absorbanci Concentración a teórica Teórica

Volumen volumen Concentración patrón patrón Absorbancia real(M) requerido tomado

%T

Absortividad

0,2

0,0021645

1,08

1,1

0,0022

0,192

64,27

87,27

0,4

0,004329

2,16

2,2

0,0044

0,419

38,11

95,23

0,6

0,00649351

3,25

3,2

0,0064

0,59

25,70

92,19

0,8

0,00865801

4,33

4,3

0,0086

0,797

15,96

92,67

1

0,01082251

5,41

5,4

0,0108

1,004

9,91

92,96

1,2

0,01298701

6,49

6,5

0,013

1,192

6,43

91,69

0,377

41,98

M.P.

Absorbancia de la muestra problema: 0,377

Determinación de la concentración de la muestra problema Con los datos de la columna 5 y 6 de la tabla anterior, los que corresponden a la absorbancia y la concentración se realizó una curva de calibración para posteriormente calcular la concentración de la Muestra Problema. Se calculó la pendiente (indicada en el gráfico Nº1) Gráfico Nº1: Curva de calibración realizado a partir de los datos de la Tabla Nº1.

Curva de Calibración 1,4

y = 92,371x

Absorbancia

1,2

2

R = 0,9994

1 0,8 0,6 0,4 0,2 0 0

0,002

0,004

0,006

0,008

0,01

0,012

0,014

Concentración

Se determinó la concentración de la muestra problema por el método gráfico, del factor y método de la curva de calibración.

1.- Método absoluto:

A= a x b x c C= A/(b x a)

C= 0,377/(1cm x 92,4 cm2/mg)

C= 4,08x10-3mg/ml muestra diluida, multiplicar por factor de dilución 5, porque 5 ml de muestra fueron diluidos en 25 ml de agua. = 4,08 x10-3 mg/ml x 5 = 2,04 x10-2 mg/ml muestra concentrada.

2.-Método del factor:

4,4x10-3

0,419

x

0,377

x = 3,96x10 -3 M de muestra diluida, multiplicar por factor de dilución 5. = 3,96 x10-3 mg/ml x 5 =1,98x10-2 mg/ml muestra concentrada.

3.-Método de la curva de calibración: Reemplazando en la ecuación: y= 92,371X x=y/92,371 x= 0,377/92,71 multiplicar por factor de dilución 5: = 4,06x10-3 mg/ml x 5 = 2,03x10-2 mg/ml muestra concentrada.

Cálculo del error

dC/C = Error equipo + error pipeta + error matraz =

x= 4,06 x10 -3 M muestra diluida,

Discusión: Se puede deducir, con respecto a los valores de las concentraciones obtenidas, de que este método, en comparación con los anteriormente utilizados, presenta mayor resolución y mayor fidelidad, puesto que en los distintos métodos de cálculo fluctuaron en números muy semejantes. Y así también recalcar que todas las absorbancias cumplieron con la Ley de Lambert-Beer obteniendo una R=0.9994 lo que denota también la gran capacidad sensible que presenta esta técnica, aun sabiendo que éste no se trabaja con sustancias coloreadas lo que hace suponer que puede ser una capacidad fundamental en el momento de analizar sustancias. Sin embargo para nuestra percepción podemos decir que inclusive es mucho más conveniente utilizar el rango UV ya que no es necesaria la etapa preanalitica de la formación de un complejo coloreado a partir de un reactivo cromogenico, sino que solamente se necesita el espectrofotómetro, el fotocolorímetro adecuado y la muestra problema.