Análisis Microbiológico del Agua: Filtración por Membrana (Practica no. 5) Aragón Mier Fabiola, Corredor Montañez Nilyx Alexandra Fundación Universitaria de San Gil - Unisangil, Facultad de Ciencias Básicas e Ingeniería, Programa de Ingeniería Ambiental Yopal, Colombia
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I.
OBJETIVOS
Comprender el fundamento de la técnica de filtración a través de membrana para la detección de coliformes totales y E.coli en muestras de agua.
Determinar la cantidad de coliformes totales y E.coli de una muestra de agua mediante el método de filtración a través de membrana.
II.
RESULTADOS
Tabla 1: CONTEO DE COLONIAS E-coli 6 UFC/100 ml
Coliformes Totales 18 UFC/100 ml
de organismos fermentadores de la lactosa sin producción de gas capaces de crecer en el medio. Respecto a los resultados obtenidos se pudo observar claramente una pequeña cantidad de colonias de la E.Coli en el filtro de membrana a diferencia de las otras coliformes totales que se presentaron en mayor cantidad, las colonias de coliformes totales son más grandes, en mayor número, y de color rosado; las colonias de E.coli son más pequeñas, se presentan en menor número y además son de color azul, en este procedimiento fue importante la limpieza o esterilización de los materiales que hacían contacto directo con la membrana o con las pinzas especialmente, ya que si hubiese algún otro microorganismo en estos objetos por motivo de contaminación, dependiendo sus características habría de crecer también en la fibra de membrana gracias a la agar nutritivo.
III.
Tabla 2: RESULTADOS Y ASPECTO DE LAS COLONIAS (Ver anexos) Discusión de Resultados En el procedimiento de filtración por membrana se destacaron varias ventajas importantes como lo es la rapidez en la obtención de los resultados, Ahorro de mano de obra, medios, materiales de vidrio, aunque también existen desventajas a la hora de analizar una muestra bastante turbia ya que la membrana tendería a obstaculizarse con las muchas partículas de material lodoso en ella y además las cantidades grandes de organismos no coliformes capaces de crecer en el medio pueden interferir en el crecimiento de los coliformes y no hay indicación de formación de gas ya que algunas tienen gran cantidad 1
La validación del método de filtración por membrana para el análisis de coliformes totales y E.coli en muestras de agua para el consumo humano, permitió obtener resultados reproducibles y confiables.
Se manejaron condiciones adecuadas de limpieza y desinfección ya que se evidencio baja presencia de microorganismos presentes en el ambiente.
El agua analizada en el laboratorio por medio de filtración por membrana no es apta para consumo humano ya que no solo presenta cepas de E. Coli sino que también otras coliformes
Formación académica; Experiencia laboral primer autor Formación académica; Experiencia laboral segundo autor 3 Formación académica; Experiencia laboral tercer autor 2
CONCLUSIONES
totales que pueden ser patógenos para la salud en bajo o alto número de colonias.
IV. [1]
BIBLIOGRAFIA
Recuento de Coliformes Totales. Laboratorio de Tecnología Educativa. Departamento de Microbiología y Genética. Universidad de Salamanca. [Online] Disponible en: http://virus.usal.es/Web/demo_fundacua/demo2/Filtra MembColiT_auto.html
2.
¿En qué consiste la técnica del número más probable (NMP) para el análisis microbiológico de aguas?
RTA: Es una forma de obtener datos cuantitativos en concentraciones de elementos discretos a partir de datos de incidencia positiva/negativa. Es una estrategia eficiente para estimar densidades de población que se emplea cuando una evaluación cuantitativa de elementos individuales no es factible. Este método también es conocido con el nombre de ceros de Poisson. 3.
¿Qué ventajas y desventajas tiene el método de filtración por membrana respecto al NMP?
RTA: Ventajas
[2] ACW UM (2010). Universidad de Murcia. Análisis Microbiológico de Aguas por Filtración. [Online]. Disponible en: http://ocw.um.es/cc.-de-lasalud/higiene-inspeccion-y-controlalimentario/practicas-1/practica-1-analisismicrobiologico-de-aguas-por
[3] SlideShare (2013) Análisis Microbiológico del agua. [Online]. Disponible en: http://es.slideshare.net/Hiinataaaa/protocolo-deanalisis-microbiologico-de-agua
[4] Consulta de la Norma (2015) Normas Técnicas de Calidad del Agua Potable [Online]. Disponible en: http://www.alcaldiabogota.gov.co/sisjur/normas/Norma 1.jsp?i=1327
V. PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS 1.
¿De qué forma funciona el agar Chromocult?, es decir, ¿por qué unas bacterias se observan de color rosadas y otras moradas?
RTA: La formación simultanea de coliformes totales y E.coli se hace posible por la formación de dos sustratos cromógenos: el sustrato Salmon – Gal es separado por la enzima β-D-galactosidasa característico de coliformes y provoca una coloración roja de las colonias de coliformes. La formación de la β-D-Glucoronidasa característica para E.coli tiene lugar mediante el sustrato X-Glucorónido, que al ser cortado por la encima produce una coloración azul para las colonias positivas. Ya que E. Coli separa tanto Salmon-Gal como X-Glucorónido, las colonias se tiñen de violeta – azul oscuro y debido a ellos se pueden diferenciar de los coliformes restantes que se presentan de color rojo.
La capacidad de estimar tamaños poblacionales basados en atributos relacionados a un proceso de selectividad. Provee una recuperación uniforme de las poblaciones microbianas de suelos diversificados. Determina solo organismos vivos y activos metabólicamente. Suele ser más rápido e igual de confiable que los métodos tradicionales de esparcimiento en platos de cultivo, entre otros. Determina cargas microbianas bajas, pero también puede emplearse para determinar cargas mayores utilizando las diluciones apropiadas. Presenta ventajas frente a otros métodos para el caso de muestras de polvos insolubles. El método de filtración por membrana es rápido ya que los resultados se dan en un periodo de 24 horas. Se puede utilizar en pruebas de campo.
Desventajas
4.
El análisis se dificulta en muestras de aguas muy turbias y es difícil determinar la cantidad de microorganismos que se quieren encontrar. No detectan las poblaciones con menos de una célula por mililitro, solo permite microorganismos viables.
¿Cuál es la diferencia entre coliformes totales y coliformes fecales, que tipo de medios de cultivo se emplean para su identificación y crecimiento, en qué consisten estos medios?
RTA: Las bacterias coliformes son un grupo de bacterias que se utilizan como indicadoras de contaminación. El grupo está compuesto por Escherichia coli, Enterobacter, Citrobacter y Klebsiella. Esas son las bacterias coliformes "totales" que se definen como "bacterias que fermentan la lactosa con producción de ácido y gas". Dentro de ese grupo la única bacteria que es de origen fecal (intestino de hombre y animales) es la Escherichia coli, que compone las "coliformes fecales" que son capaces de crecer a 44ºC a diferencia de las otras coliformes que no resisten esa temperatura. Las coliformes totales crecen en medios lactosados con inhibidores de Gram positivos como Caldo Mac Conkey, este consiste en indicar visualmente el pH distinguiendo así las bacterias Gram negativas que pueden fermentar la lactosa y las que no lo pueden hacer; las coliformes totales y fecales también crecen en Caldo Lauril triptosa a 37ºC, este es un medio selectivo ya que el lauril sulfato de sodio inhibe el desarrollo de la flora acompañante. Por la fermentación de la lactosa se produce ácido y gas, este último se evidencia al utilizar las campanas Durham; es rico en nutrientes que permiten un rápido desarrollo de los microorganismos fermentadores de la lactosa. 5.
Consultar la normatividad ambiental vigente que establece las características microbiológicas permisibles para aguas de consumo humano en Colombia
RTA: Decreto 475 de 1998 Nivel Nacional Capítulo I Definiciones Artículo 1: Para los efectos del presente decreto, adóptense las siguientes definiciones: Agua cruda: Es aquella que no ha sido sometida a proceso de tratamiento. Agua para consumo humano: Es aquella que se utiliza en bebida directa y preparación de alimentos para consumo. Agua potable: Es aquella que, por reunir los requisitos organolépticos, físicos, químicos y microbiológicos, en las condiciones señaladas en el presente decreto, puede ser consumida por la población humana sin producir efectos adversos a su salud. Calidad del agua: Es el conjunto de características organolépticas, físicas, químicas y microbiológicas propias del agua. Escherichia Coli, (E-coli): Bacilo aerobio Gramnegativo que no produce esporas, pertenece a la familia de los enterobacteriáceas y se caracteriza por poseer las enzimas b - Galactosidasa y b -
gluoroanidasa. Se desarrolla a 44 ± 0.5 ºC en medios complejos, fermenta la lactosa liberando ácido y gas, produce indol a partir del triptófano y no produce oxidasa. Capitulo III Normas organolépticas, físicas, químicas y microbiológicas de la calidad del agua potable Artículo 6: Las normas organolépticas, físicas, químicas y microbiológicas de la calidad del agua potable establecidas en el presente decreto rigen para todo el territorio nacional y deben cumplirse en cualquier punto de la red de distribución de un sistema de suministro de agua potable. Artículo 24. Los métodos aceptados para análisis microbiológico del agua son los siguientes: Para Escherichia Coli: Filtración por membrana y sustrato definido. Para Coliformes Totales: Filtración por membrana y sustrato definido. Parágrafo. Método de tubos múltiples de fermentación y recuento en placa (siembra en profundidad) se seguirá empleando hasta el año 2000; por lo tanto, a partir de la entrada en vigencia del presente decreto los laboratorios que no empleen los métodos aceptados para análisis microbiológico, deberán implementarlos y estandarizarlos; igualmente se adoptarán otras metodologías debidamente validadas por el Instituto Nacional de Salud y aprobadas por el Ministerio de Salud, mediante el correspondiente acto administrativo. Artículo 25. El agua para consumo humano debe cumplir con los siguientes valores admisibles desde el punto de vista microbiológico: Tabla 3: VALORES ADMISIBLES PUNTO DE VISTA MICROBIOLOGICO Técnica Utilizada Microorganism os Indicadores
Filtración por Membran a
Coliformes Totales
0 UFC/100 cm3
E.Coli
0 UFC/100 cm3
Sustrato Definido
Tubos múltiples de fermentación
0 microorganis mos/100 cm3 0 microorganis mos/100 cm3
