Informe de Medios de Cultivo

MEDIOS DE CULTIVO 1.  OBJETIVOS 

Conocer los diferentes tipos de medios de cultivo existentes para el crecimiento de

microorganismos en el laboratorio.  Identificar los diferentes pasos a seguir en la elaboración de un medio de cultivo.

2.  INTRODUCCION En los laboratorios de Microbiología se utiliza una gran variedad de medios de cultivos para mantener mantener las cepas, aislar o identificar identificar microorganism microorganismos os con varias finalidades finalidades:: determinar determinar la existencia de contaminación de alimentos, medicamentos o cosméticos diagnosticar alguna enfermedad, elaboración de vacunas bacterianas, etc.

3. MARCO TEÓRICO !e mane manera ra gene genera rall se deno denomi mina na “Medio de Cultivo a cual"u cual"uier ier materi material al presen presente te una adecuada combinación de nutrientes para permitir el crecimiento o el incremento del n#mero de células de una población microbiana. El ob$etivo #ltimo del cultivo es variado: antibiograma, identificación, multiplicación. %no de los sistema sistemass m&s import important antes es para para la identi identific ficaci ación ón de microo microorga rganism nismos os es observ observar ar su crecimiento crecimiento en sustancias sustancias alimenticias alimenticias artificiale artificialess preparadas preparadas en el laboratorio laboratorio.. El material material alimenticio en el "ue crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo ' el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. (e )an preparado m&s de *+.+++ medios de cultivo diferentes. ara "ue las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de )umedad ' presión de oxígeno adecuado, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. %n medio de cultivo debe contener los nutrientes ' factores de crecimiento necesarios ' debe estar exento de todo microorganismo contaminante.

CLASI!ICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO SE"#N SU ESTADO !$SICO %& L$'UIDOS( %sualmente se denominan caldos 'a "ue contienen los nutrientes de suelos en agua. ermiten obtener suspensiones con un elevado n#mero de microorganismos. E$.: caldo nutritivo.

)& SOLIDOS( Se pueden preparar a partir de medios lí"uidos a los cuales se les a-aden *. a / 0 de agentes solidificantes como agar, gelatina o sílica gel. (e utilizan con frecuencia en el aislamiento ' mantenimiento de los microorganismos en el laboratorio. E$.: 1gar  nutritivo.

*& SEMISÓLIDOS( (e pueden preparar a partir de medios lí"uidos a los cuales se les a-aden +.* a +.20 de agentes solidificantes como agar, gelatina o sílica gel.

SE"#N LA NATURALE+A DE SUS CONSTITU,ENTES %& NATURALES( son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o )& *&

vegetal como ser extractos de te$idos o infusiones ' cu'a composición "uímica no se conoce exactamente. SINT-TICOS( son los medios "ue contienen una composición "uímica definida cualitativamente ' cuantitativamente. (e utilizan para obtener resultados reproducibles. SEMISINT-TICOS( son los sintéticos a los "ue se les a-aden factores de crecimiento  ba$o una forma de un extracto org&nico comple$o, como por e$emplo extracto de levadura.

SE"#N SU !ORMULACIÓN( %& 'u/i*%/e0te dei0ido( se conoce la cantidad exacta de cada uno de los compuestos "ue )a' en el medio .  b3 Co/le4o( se realizan a partir de extractos naturales 4extracto de levadura, sangre, etc.3 no se conoce exactamente cu&l es la composición del medio sin embargo,  presenta la venta$a de "ue 'a est&n presentes todos o casi todos los elementos "ue una célula puede re"uerir.

SE"#N SUS 5RO5OSITOS DE USO( %& Medio 6e0e7%l( medio en donde crecen todo tipo de microorganismos, excepto los "ue )& *& d&

necesitan condiciones especiales 4por e$emplo, agar C5E!3. Medio ele*tivo(  permite seleccionar el crecimiento de una especie o grupo determinado 4)ongos, bacterias entéricas, protozoos...3. Medio die7e0*i%l( permite identificar una especie con otra, ambas en el mismo medio. uede ser por su crecimiento, su metabolismo, su respiración, etc. 4por e$emplo, medio de McCon6e'3. Medio de e07i8ue*i/ie0to( contiene los nutrientes necesarios para apo'ar el crecimiento de una amplia variedad de microorganismos, se utiliza para la cosec)a de diferentes tipos de microorganismos en un mis mo medio.

e& Medio /0i/o( contiene la mínima cantidad de nutrientes posible "ue permite el f3

crecimiento de una especie. Medio de t7%0o7te(  preparado para servir como almacenamiento temporal a especímenes transportados o en transferencia mantienen su viabilidad ' su concentración simple.

5RE5ARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO (iempre es recomendable ' se inclu'e como una regla b&sica la de leer las instrucciones de las eti"uetas de los medios de cultivo, por ello no se recomienda re envasar los medios sino, mantenerlos en los recipientes originales. ara lograr una preparación adecuada de los medios de cultivo es recomendable seguir las siguientes instrucciones:

5RE5ARACION DE LA SOLUCION 5os medios de cultivo deben ser mezclados o )idratados en recipientes limpios, libres de detergente. El agua "ue se utiliza para su mezclado debe ser destilada o desmineralizada. 5os medios de cultivo "ue no contienen agar ni gelatinas, 4li"uidos3 pueden ser disueltos en agua fría o ligeramente caliente. ero si contienen alguna de las dos sustancias deben ser calentados )asta ebullición para solubilizar el agar. 7unca sobre calentar por"ue se puede alterar  su composición. 5os medios "ue presentan turbidez debido a sus componentes insolubles, deben ser agitados  para )omogenizarlos adecuadamente.

ESTERILI+ACION (e esteriliza por autoclave o por ebullición de acuerdo a las instrucciones para cada preparación. Cuando se esterilizan vol#menes grandes de medio se debe aumentar el tiempo de esterilización  para permitir la penetración del calor al interior del recipiente.

SERVIDO DE LOS MEDIOS DE CULTIVO %na vez estéril los medios de cultivo deben ser enfriados a t emperatura promedio de 89  9C  para ser adicionados en los recipientes finales teniendo en cuenta nuevamente las técnicas asépticas.

9.  MATERIALES • • •

8 Erlenme'er de *++ml ; ca$as de etri ; tubos de ensa'o

• • • • • •

8 pipeta de *+ ml 8 probeta de *++ml Esp&tula *+ ml de caldo. E$emplo: ara preparar ; ca$as con agar, multipli"ue ; po* ml ? */+ml Mida el volumen de agua destilada seg#n sus c&lculos. @eniendo en cuenta el volumen de agua a utilizar, )aga la relación de polvo de agar "ue debe pesar de acuerdo a lo especificado en la eti"ueta del medio. ese la cantidad del medio necesario de acuerdo a los c&lculos. Mezcle el polvo con la mitad del volumen de agua medida anteriormente, agite '

•

adicione el restante de agua 5leve a )ervir si es necesario Esterilizar en el autoclave a * lb de presión a */* 9C por * min. (irva **; ml aproximadamente de agar en cada ca$a cuando la temperatura este a +

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 9C, t&pelas ' de$e solidificar, 5o mismo con los caldos sirva >*+ ml en cada tubo ' t&pelos. !é$elos enfriar ' gu&rdelos en la nevera )asta su utilización.

• •

;. CUESTIONARIO 1.< ='u> e A6%7? de do0de e e@t7%e A6%7 e 6el%ti0% de do0de e e@t7%e 5a gelatina es una proteína natural "ue se obtiene del col&geno procedente de los te$idos conectivos de animales 4la gelatina vegetal se conoce como agaragar3. ara su obtención, se extraen por )idrólisis las proteínas del col&geno obtenidas de la piel, )ueso )ervido ' molido, pezu-as, )uesos, tendones ' vísceras de ganado vacuno, porcino, ovino, e"uino ' avícola. Es decir, todo lo "ue no vale de los animales para venderlos en las carnicerías.

2.< =5o7 8u> e utili% %6u% detil%d% e0

l% 7e%7%*i0 de lo /edio de *ultivo

ara la preparación de medios, soluciones ' tampones, debe utilizarse agua destilada "ue )a'a sido sometida a controles periódicos "ue aseguren su calidad. •

=e"uisitos del agua destilada: (e debe llevar un registro actualizado de los mis mos 

Conductividad, p,  Contaminación microbiana,  5ibre de sustancias bactericidas  In)ibidoras o interferentes,

9.< El%)o7e u0% t%)l% i0di*%0do /edio de *ultivo? %*%7 e7/e0t%)le? ite/% i0di*%do7.

MEDIO DE CULTIVO

M.O 'UE CRECE

A+#CAR  !ERMENTAB LE

TI5O DE MEDIO

SISTEMA INDICADOR 

1gar EM<

E.coli

5actosa 'Do sacarosa

Indicadores: eosina ' azul de metileno.

1gar  MacCon6e'

E. coli, Citrobacter, (almonella, ()igella lebsiella  pneumoniae, (. t'p)imurium.

5actosa

Medio de cultivo selectivo ' diferencial Medio de cultivo selectivo ' diferencial Medio de cultivo diferencial

1gar 5I1

(almonella spp

glucosa

Medio de cultivo diferencial

1gar ((

(almonella ' ()igella.

lactosa

1gar @(I

. mirabilis, (. t'p)imurium, (. enteritidis.

Alucosa o sacarosa, lactosa

Medio de cultivo diferencial Medio de cultivo diferencial

1gar @CE( 41gar @iosulfato Citrato