Informe de Laboratorio Nº 4 BIOQUÍMICA 1 – Semestre 2009-I
UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL FACULTAD DE INGENIERÍA INDUSTRIAL Y DE SISTEMAS ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL
INFORME DE LABORATORIO Nº 4 BIOQUÍMICA 1 TEMA: Proteínas INTEGRANTES: CÓDIGO 2008236305 2008014178 2008030743 2007007562 2008012754
APELLIDOS Y NOMBRES Portillo Ávila, Marcia Quispe Inga, Marlene Rios Gomez, Harry Jean Munive Salas, David Vives Torres, Marcela
CORREO ELECTRÓNICO
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DOCENTE: Ing. Guillermo Chumbe Gutiérrez
Semestre 2009 – I
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I.
INTRODUCCIÓN
Las proteí proteínas nas son princi principio pioss inmedi inmediato atoss orgáni orgánicos cos consti constitui tuidos dos por largas largas cade cadena nass de amin aminoá oáci cido dos, s, los los cual cuales es se unen unen entre entre sí medi median ante te enlac enlaces es peptídico. La existencia del enlace peptídico, de aminoácidos azufrados, puede ponerse de manifiesto en el laboratorio mediante una serie de reacciones coloreadas específicas, que sirve para la identificación de proteínas.
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II.
MARCO TEÓRICO
Las proteínas son macromoléculas compuestas por unidades de alfa –aminoácidos que se unen entre sí mediante enlaces petídicos y que alcanzan un peso molecular igual o superior a 5000 D. El enlace peptídico, caracter ístico ístico de estos compuestos, resulta de la reacción del grupo carboxilo de un aminoácido con el grupo amino del otro aminoácido, lo cual da lugar a un enlace covalente de tipo carbamida .
REACION XANTOPROTEICA: XANTOPROTEICA: La reacción reacción xantoprotei xantoproteica ca es un método método que se puede puede utilizar utilizar para determin determinar ar la cantidad de proteína soluble en una solución, solución, empleando nítrico concentrado pero en nuestro caso en el laboratorio utilizamos H2SO4 . La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de grupos aromáticos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un álcali, álcali , se torna color amarillo oscuro. El REACCION DE BIURET: Es aquel que detecta la presencia de proteínas, proteínas, péptidos cortos y otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de composición desconocida. desconocida. Está hecho de KOH y sulfato cúprico (CuSO4).El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de proteínas, y vira a rosa cuando se combina con polipéptidos de cadena corta.
Objetivos:
Reconocer la presencia de algunos aminoácidos en las proteínas.
Conocer algunas propiedades de las proteínas. proteínas .
Conocer reacción xantoproteica y de biuret.
Aprender cómo reacciona la albumina ante las sustancias respectivas.
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III.
MATERIALES Y MÉTODOS
III.1. Materiales
Muestra •
Clara de huevo
Materiales de vidrio •
Tubos de ensayo
•
Gradilla
•
Varillas de vidrio
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•
Mechero
•
Vasos de precipitados
•
Pipetas
Reactivos •
Acido nítrico concentrado
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•
Hidróxido de
sodio
III.2. Métodos
Usamos Usamos el método método experime experimental ntal en el cual cual implica implica la observac observación, ión, manipul manipulació ación, n, registro de las variables (dependiente, independiente e intervinientes) que afectan un objeto de estudio. A continuación con este método es indispensable usar el método anal analít ític ico o en el cual cual se fund fundam amen enta ta en la apli aplica caci ción ón del del méto método do cien cientí tífifico co,, sus sus características son la exactitud, precisión, sensibilidad, limite de detección, intervalo dinámico, selectividad, seguridad
IV.
DESCRIPCIÓN DE DE LA PRÁCTICA
REACCIÓN XANTOPROTEICA
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2.
3. 4. 5. 6.
Colocar en el tubo de ensayo de 2 a 3 ml de solución problema en este caso clara de huevo Añadir 1 ml de HNO 3 concentrado. Calen Calentar tar al baño baño maría maría a 100 ºc Enfriarlo Añadir Añadir gota gota a gota gota una una disoluc disolución ión de de sosa sosa al 40%. 40%. se torn torna a colo colorr amar amarilillo lo oscu oscuro ro esto esto debi debido do a la pres presen enci cia a de una una sustancia alcalina ( existe grupos aromáticos)
Según las guías químicas es una reacción cualitativa, más no cuantitativa. Por ende determina la presencia o no de proteínas. Para cuantificar se usa otra reacción, como la de Biuret, Biuret, y se hace un análisis a nálisis espectro fotométrico. fotométrico.
REACCIÓN DE BIURET Coger un tubo de ensayo y poner unos 3 ml de albúmina de huevo. 2. Añadir 2ml de solución de de hidróxido sódico sódico al 20%. 3. A conti continuac nuación ión 4 ó 5 gotas gotas de solución solución de de sulfato sulfato cúprico cúprico diluida diluida al 1%. 1%. coloración violeta-rosácea violeta-rosácea característica esto debido debido a la 4. Aparecerá una coloración presencia de enlaces peptídico (- CO- NH -) que se destruye al liberarse los aminoácidos. 1.
El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de proteínas, proteínas, y vira a rosa cuando se combina con polipéptidos de cadena corta. El Hidróxido de Potasio no participa en la reacción, pero proporciona el medio alcalino necesario para que tenga lugar. Se usa normalmente en el ensayo de Biuret, un método colorimétrico que permite determinar la concentración de proteínas de una muestra mediante espectroscopía ultravioleta-visible a una longitud de onda de 560 nm (para detectar el ión Cu2+).
REACCIÓN DE LOS AMINOÁCIDOS AZUFRADOS (CISTEÍNA Y METIONINA)
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1. Poner Poner en el el tubo de ensayo ensayo de 2 a 3 ml de albúm albúmina ina de de huevo huevo (clara (clara de huevo). 2. se añade añade 2 ml de solución solución de hidróxi hidróxido do sódico sódico al 20%. 20%. 3. luego luego se añade añade 10 10 gotas gotas de de soluci solución ón de acetato acetato de plomo plomo al al 5%. 5%. 4. Calen Calentar tar el tubo tubo hast hasta a ebulli ebullició ción. n. 5. se forma forma un precipita precipitado do de color color negruzco negruzco lo cual cual nos indica indica que que se ha formado sulfuro de plomo, utilizándose el azufre de los aminoácidos, lo que nos sirve para identificar proteínas que tienen en su composición.
Cálculos: Para todas todas las reaccione reaccioness se ha preparad preparado o Hidróxido Hidróxido de sodio sodio a 20 % esto a partir de Hidróxido de sodio a 40 %, en una disolución: Numero de moles moles (inicio) = numero numero de moles ( final final ) Por lo tanto molaridad x volumen ( inicio) = molaridad x volumen ( final) • •
La preparación preparación de sulfato cúprico al 1 % fue de la siguiente manera; Se toma 9.9 g de sulfato cúprico con 0.1g de agua destilada Se combina y agita ambas sustancias y luego se forma la disolución deseada La preparación del acetato de plomo al 5 % fue: Se toma 0.5 ml de acetato concentrado con 9.5 ml de agua destilada Se agita las sustancias y se obtiene la disolución
V.
RESULTADOS Y DISCUSIONES
Resultados y Discusiones 1. ¿Cómo se manifiesta manifiesta la desnaturali desnaturalización zación de la clara de de huevo? huevo?
En forma rápida ya que cambia sus propiedades por efecto de un agente externo, se coagula coagula como una ácido, una una base o una sal como en este caso el acido HNO₃.
2. ¿Cuál de los 3 desnaturalización?
agentes
utilizados
tiene
mayor
poder
de
Con el acido sulfúrico se tiene mayor poder de desnaturalización ya que tiene mayor pérdida de estructura nativa por ser éste un acido fuerte.
3.
¿Cómo podríamos saber si una sustancia desconocida es una proteína? UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL Página 8 de 10
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Si es un líquido, primero se agregan ácidos (como el ácido acético) para desnaturalizar la proteína (de ser así, se formarán grumos que pueden o no precipitarse al fondo). Después, a ese precipitado se le agrega el reactivo de biuret, que cambia a violeta en presencia de proteínas, y a rosa cuando se combina con poli péptidos de cadena corta.
4. ¿Qué ¿Qué colo coloraci ración ón da la reacció reacción n del del biu biuret ret? ?
Provoca una coloración rosa - violácea.
5. ¿Una proteína proteína coagulada coagulada podría dar la la reacción reacción del biuret?
Claro que si, el reactivo reacciona con cualquier proteína liquida o solida. Por ejemplo ejemplo cuando cuando haces una cuantific cuantificació ación n de proteína proteínass en suero suero o cuando cuando haces una prueba cualitativa en huevos, carnes, papas, etc. El Reactivo de Biuret es aquel que detecta la presencia de proteínas, péptidos cortos y otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de composición desconocida.
6. ¿Si ¿Si se realiz realizaa la reac reacci ción ón del del biure biurett sobre sobre un amino aminoác ácid ido o co como mo la glicina?¿ Es positiva o negativa?
Si analizamos sólo UN AMINOÁCIDO, AMINOÁCIDO, la reacción debería dar negativa, ya que no hay ningún enlace peptídico (es sólo 1 aminoácido! El enlace peptídico se da entre 2 aminoácidos).
VI.
CONCLUSIONES
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Las proteínas están constituidas por aminoácidos, por los cuales los métodos se basan en el reconocimiento de aminoácidos.
Este proceso nos sirve para reconocer si existe proteínas o no en ciertos tipos de sustancias en una solución.
Segú Según n los los result sulta ados dos, ningu inguna na sust ustancia ncia composición que la solución original.
Las Las prot proteí eína nas s son son sens sensib ible les s con con las las sale sales s metá metáli lica cas s pesa pesada das, s, formando precipitados.
VII.
mues uestra
BIBLIOGRAFÍA
http://html.rincondelvago.com/biologia_41.html http://www.joseacortes.com/practicas/protidos.htm http://es.wikipedia.org/wiki/Prote%C3%ADna - Química General – Oswaldo Jauregui Machicao
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mism isma
