Informe de Electroforesis

Práctica No. Electroforesis de acidos nucleicos. Paula Vargas, Tania Álvarez, María Ruidiaz. Facultad de Ciencias Básicas, Programa de Química, Laboratorio de bioquímica. Ciudadela Universitaria, Universidad del Atlántico, km 7 Vía Puerto Colombia, PBX: 3197010, Barranquilla, Colombia. Entregado 16 de mayo 2014

Resumen El término electroforesis se usa para describir la migración de una partícula cargada bajo la influencia de un campo eléctrico; existen diferentes métodos de electroforesis, en la siguiente practica se trabaja sobre La electroforesis en gel de agarosa la cual es la más utilizada para analizar y caracterizar acidos nucleicos, sometiendo una muestra de ADN a las condiciones más optimas para su respectivo análisis, utilizando para ello equipos una cámara de electroforesis, una fuente de poder y un regulador de voltaje.

Palabras claves: electroforesis, acidos nucleicos, gel de agarosa, campo eléctrico.

Introducción. La electroforesis en gel de agarosa es un método bastante utilizado para separar, identificar y purificar fragmentos de ADN La agarosa es un polímero lineal extraído de algas marinas, en el cual las moléculas de ADN de doble cadena migran de manera inversamente proporcional al logaritmo en base 10 (log 10) de sus tamaños moleculares. Dado que el ADN está cargado negativamente debido a los grupos fosfato de la molécula, la migración en

la cámara de electroforesis ocurre del polo negativo al polo positivo. Entre los factores que afectan la tasa de migración del ADN en los geles de agarosa se incluyen: el tamaño del fragmento, concentración de agarosa, la conformación del ADN, voltaje aplicado y amortiguador utilizado Las moléculas de ADN de 50 pares de bases (pb) a varias megabases en longitud pueden 1

ser separadas en geles de agarosa de varias concentraciones y configuraciones. Fragmentos pequeños de ADN (50 – 20000 pb) son

separados en geles de agarosa corridos en configuración horizontal en un flujo eléctrico de

fuerza y dirección constante. Bajo estas condiciones, la velocidad de los fragmentos de ADN decrece a medida que incrementa la longitud de estos y es proporcional a la fuerza del flujo eléctrico.

principio de migración electroforética y su aplicación en este tipo de muestras.

La resolución y velocidad de separación de fragmentos de ADN por electroforesis son reguladas a través de la concentración de agarosa (o acrilamida) en el gel y el voltaje aplicado durante la electroforesis. La agarosa funciona como un filtro en el que los fragmentos de menor tamaño migran más rápidamente hacia el ánodo que aquellos de mayor tamaño. Al aumentar la concentración de agarosa se dificulta el movimiento de los fragmentos a lo largo del gel, permitiendo obtener una mayor resolución en los fragmentos de menor longitud.

que debe ser manejado con extremo cuidado en el laboratorio.

Parte experimental.

En la siguiente practica se lleva a cabo este proceso de electroforesis con una muestra de ADN humano obtenida con el fin de reconocerel

El incremento del voltaje aumenta proporcionalmente la velocidad de migración de los fragmentos en el gel Los ácidos nucleídos separados en geles de agarosa pueden visualizarse mediante tinción con colorantes fluorescentes, lo cual permite evaluar su integridad y estimar su concentración mediante un análisis comparativo con patrones de concentración conocida. Los colorantes fluorescentes actúan mediante inserción entre las pares de bases que conforman el ácido nucleíco. El bromuro de etidio es ampliamente utilizado para la visualización de ADN y ARN. Sin embargo, éste es un reactivo altamente tóxico, con propiedades mutagénicas, por lo 2

Figura 1. Esquema general de electroforesis. solución tampón que contiene una mezcla de tris base, acido borico y EDTA; actuando el EDTA como quelante y asu vez protege a los acidos nucleicos a la degradación enzimática. Este tampón logra mantener el ADN

Resultados y discusión. En el proceso de electroforesis de ADN realizado se trabajo con TBE el cual es una 3

desprotonado y soluble en agua para poder llevar a cabo el recorrido de la muestra. Todo esto con un voltaje de 100 V por 20 minutos.

Conclusión

Bibliografía Al momento de tener el tampón adecuado, y disolver la agarosa en en calentamiento se adiciono el bromuro de etidio el cual actuo como marcador de del acido nucleico para la identificación de la muestra. En ocaciones se somete a luz UV y muestra la colocación rojanaranja lo que indica que se unió a la cadena de ADN.(figura 2)

1.universidad javeriena,bogota. Electroforesis en geles de agarosa. http://pujportal.javeriana.edu.co/portal/page/porta l/Facultad%20de %20Ciencias/zgi_enf_infecciosas/1_pdf/ Protocolos%20Curso.pdf

complementar

2.Duina Posso Duque, Thaura Ghneim Herrera. 2008. Uso de Marcadores Microsatélites para la Estimación de ad Genética en Plantas. Ediciones IVIC.

Figura 2. Adicion del bromuro de etidio a la cadena ADN 4