Informe de Benedict

 

INTRODUCCIÓN Entre las características químicas que rutinariamente realizamos a las muestras de orina en el laboratorio clínico tenemos: pH, proteínas, glucosa, urobilinógeno, bilirrubina, cuerpos cetónicos, nitritos, densidad, sangre (hematíes/hemoglobina). En los inicios del laboratorio clínico todas estas pruebas necesitaban métodos engorrosos y laboriosos para su determinación, pero en la actualidad contamos con las TIRAS REACTIVAS, las cuales son un recurso muy valioso, por ser prácticas y de fácil ejecución.  Aunque actualmente aún se recorre a esos métodos engorrosos cuando no se dispone de las tiras reactivas o cuando se necesita una mayor sensibilidad especificidad. Además es necesario conocer estos procedimientos manuales a fin de entender sus fundamentos que son esenciales en la interpretación clínica de los resultados obtenidos con estas técnicas. En esta práctica damos a conocer algunas de esas técnicas manuales más usadas dentro del laboratorio clínico. Una de las primeras pruebas a estudiar es la usada para la detección de sustancias reductoras (glucosa) en la orina, mediante el test de Benedict. La glucosa se determina habitualmente en un análisis de sangre (glucemia) o en un análisis de orina (glucosuria). ( glucosuria). La glucosa es la principal fuente de energía para el metabolismo celular. Se obtiene fundamentalmente a través de la alimentación, y se almacena principalmente en el hígado, el cual tiene un papel primordial en el mantenimiento de los niveles de glucosa en sangre (glucemia). La determinación de glucosa en orina (glucosuria), suele formar parte del análisis de orina rutinario. En condiciones normales, no debería hacer glucosa en la orina, pero cuando la cantidad en sangre supera un determinado limite empieza a sr eliminada a través del riñón con la orina. Cuanto más cantidad de glucosa haya en la sangre, más se eliminará por la orina. La determinación en orina es menos exacta y menos útil que la determinación en sangre.

 

OBJETIVOS  - Aprender la técnica correspondiente al momento de usar una tira reactiva. - Mediante la prueba de Benedict reconocer la presencia de glucosa en orina (sustancia reductora), e identificar las variantes que tienen estas al evaluar un paciente diabético. - Comparar la calidad de resultad resultados os de las diferentes pruebas empleadas y analizar el porqué la prueba de Benedict tiene un nivel de especificidad superior al de las tiras reactivas

IDENTIFICACIÓN DE AZUCARES REDUCTORES EN ORINA. PRUEBA DE BENEDICT.  La glucosa es un monosacáridos monosacáridos que no de debe be estar presente en las muestras de orina, esto ocurre cuando se traspasa su umbral renal y es frecuente en los pacientes diabéticos o con trastornos en el metabolismo de los carbohidratos. La prueba de Benedict es otra de las reacciones de oxidación, que como conocemos, nos ayuda al reconocimiento de azucares reductores, es decir, aquellos compuestos que presentan su OH anomérico, como por ejemplo la glucosa, lactosa, maltosa o celobiosa, en la reacción de Benedict, se puede reducir el Cu+2  presenta un color azul, en un medio alcalino, el ión cúprico (otorgado por el sulfato cúprico) es capaz de reducirse por efecto del grupo aldehído del azúcar (CHO) a su forma de Cu +. Este nuevo ion se observa como un precipitado rojo ladrillo correspondiente al oxido cuproso (Cu 2O), que precipita de la solución alcalina con un color rojo-naranja, a este precipitado se lo considera como la evidencia de que existe en un azúcar reductor. El reactivo de Benedict está compuesto por: -

Sulfato cúprico.

-

Citrato de sodio. Carbonato anhidro de sodio.

La evidencia de la reacción de Benedict es la formación del precipitado Ion Cuproso (Cu2O). Cu+2 ------------------------------------ Cu+1 Ion cúprico pasaría ----------------------- Ion cuproso

 

Preparación del Reactivo de Benedict. 1. Disolver los cristales de sulfato cúpric cúprico o por calentamiento en 100 ml de agua destilada (solución A). 2. Disolver el citrato trisódico y el carbonato sódico aproximadamente en 800 ml de agua (solución B). 3. Añadir la solución constantemente.

A

lentamente

a

la

solución

B,

removiendo

4. Completar a 1000 ml.

PROCEDIMIENTO PARA PRUEBA DE BENEDICT 1. Colocar 5 ml de reactivo en un tubo de ensay ensayo o 13 x 100. 2. Agregar 8 gotas de orina y ho homogenizar. mogenizar. 3. Colocar el tu tubo bo en llam llamas as hasta s su u ebullición du durante rante 1-2 minut minutos. os. 4. Dejar que se enfrié le lentamente. ntamente.

La prueba por lo general se gradúa en intensidad de acuerdo con lo que sigue: Negativa

Color azul claro, puede formarse un precipitado azul.

Trazas

Color verde azulado.

1+

Color verde, precipitado verde o amarillo.

2+

Color amarillo o verde, precipitado amarillo.

3+

Color amarillo-anaranjado, precipitado amarillo-naranja.

4+

Color amarillo rojizo, precipitado rojo ladrillo o rojo.

 

1. Este procedimiento es muy sensible, y puede detectar hasta concentraciones de hasta 0.02% o del 0.05% de sustancias reductoras, y en el otro extremo de hasta 4%. 2. Debido a su extrema sensibilidad, individuos s sanos anos pueden pres presentar entar una reacción con trazas.

Resultados falsos positivos:    El reactivo de Ben Benedict edict es también re reducido ducido por glucoróni glucorónidos dos y por el ácido homogenetístico.



  Dosis masiva de diferentes fármacos incluyendo penicilina, estreptomicina, salicilatos, oxitetraciclina, polivinilpirrolidona, dextrán y el ácido para-amino salicílico pueden dar reacciones positivas falsas.



  Los c conservadores onservadores urinarios, formalina y el formalde formaldehído, hído, so son n sustanc sustancias ias reductoras, de modo que su presencia puede dar lugar a resultados falsos positivos, éstos también son posibles, según Bradley y colaboradores, con la ebullición prolongada durante el procedimiento.



  Una pro proteinuria teinuria mu muy y import importante ante y considerables depósitos de urato pueden pueden también interferir la reacción, dando resultados falsos positivos.



  Las p proteínas roteínas pu pueden eden eliminarse mediante su precipit precipitación ación y filtrado de la orina antes de realizar el procedimiento.



Resultados falsos negativos   Sólo so son np posibles osibles si el procedimiento no ha sido seguido correctamente.



Resultados de nuestra Práctica Elva => 1+----- color verde, precipitado verde o amarillo. Mirian => Negativo----- color azul claro. Kathy => 1+ ----- color verde, precipitado verde o amarillo.

 

PROCEDIMIENTO PARA LA TIRA REACTIVA 1. Recolectar mues muestras tras de orina orina de dis distintas tintas personas con diabetes. 2. Identificación de:   Aspecto:



Kathy => transparente Elva => turbio Mirian => ligeramente turbio   Color:



Kathy => amarillo Elva => amarillo claro Mirian => amarillo claro 3. Transferir orina del depósito recolec recolector tor hacia un tubo de ensayo ensayo de 13 x 100. 4. Llenar el tubo hast hasta a antes de 1 cm. 5. Colocar la tira reactiva hasta que esté total mente sumergida y retirar inmediatamente y secar el exceso de orina en papel absorbente. 6. Inmediatamente realizar la lectura e empezando mpezando por el parámetro de Ph y Densidad y luego los que siguen pero dejando reaccionar por dos minutos los parámetros de Sangre y Leucocitos. R esult esulta ados:

Kathy

Leucocitos: 500 leu/ul

PH: 6 Densidad: 1.005 Leucocitos: 25 leu/ul Elva PH: 6 Densidad: 1.010 Proteínas: trazas Bilirrubina: ++

Mirian PH: 6 Densidad: 1.005 Leucocitos: 500 leu/ul

 

CONCLUSIONES -

El uso de las tiras reac reactivas tivas es una gran ayuda en el examen de orina pero que esto solo es un test rápido y da rresultados esultados no específicos. 

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Para lleg llegar ar a determinar la presen presencia cia de glucosa en orin orina a la técnica de laboratorio más efectiva es la prueba de Benedict.

CUESTIONARIO 1. ¿Qué es el recuento de Addis y en q qué ué consis consiste? te? Es un análisis de orina que permite valorar la funcionalidad renal mediante el estudio microscópico de los sedimentos urinarios. La prueba consiste en el conteo celular y de cilindros en la orina centrifugada, donde el paciente es sometido a una dieta restrictiva de líquidos, para luego recolectar la orina, la cual debe hacerse de forma cronometrada en 2 h, 4 h o 24 h. La determinación de proteinuria minutada debe hacerse por el método de Biuret. La prueba debe su nombre al científico estadounidense Thomas Addis, que fue quien la desarrolló en 1926. Las cifras o valores normales son: Proteínas: menor a 0.03 mg/min. Hematíes y leucocitos: menor 1000/min. Cilindros: menor 250/min. 2. ¿Cómo se prepa prepara ra el Reactivo de Exton y cuál es su utilidad utilidad? ? Solución de 200 g de sulfato de sodio y 50 g de ácido sulfosalicílico en 1.000 ml de agua destilada. Se usa para la determinación cualitativa de la albúmina en la orina. 3. ¿Qué pruebas bioquímicas se utilizan para determinar la presencia presencia de Urubilinogeno o Urobilina en orina? Describa el método. m étodo. Se usa el Método con reactivo de Ehrlich

Objetivo: Determinar cualitativamente urobilina y Urubilinogeno en muestras de orina. Fundamento: Se basa en la reacción colorimétrica del Urubilinogeno en presencia de paradimetilaminobenzaldehído que origina un color rojo brillante.

 

Reactivo necesario: Reactivo de Ehrlich. Solución de cloruro de calcio al 10%.

Aparatos, utensilios y medios de medición.  Tubos plásticos de 10 ml graduados de centrífuga. Tubo de ensayo de 13 x 100 ó 15 x 125 mm. Gradilla para los tubos de ensayos. Pipetas graduadas de 5 ml. Gotero. Centrífuga. Muestra: Orina de micción espontánea más de 5 ml de la misma.

Procedimiento: Si la muestra contiene pigmentos biliares, mezclar cuatro partes de orina con una parte de solución de cloruro de calcio al 10% y filtrar. En un tubo para ensayo 2 ml de orina filtrada o centrifugada a 1500 rpm durante 5 min.  Añadir 3 o 4 gotas de reactivo reactivo de Ehrlich. Dejar reposar de 3 a 5 min. Si la muestra contiene gran cantidad de urobilinógeno, aparecerá un color cereza, si la cantidad es normal el color será ligeramente rosado. Si no aparecen dichos colores debe dejarse la reacción en reposo más tiempo y calentarse. Si tampoco aparece el color rosado o cereza la muestra no contiene urobilinógeno. Esta prueba puede hacerse semi-cuantitativa realizando diluciones seriadas de la muestra de orina filtrada y realizando el proceder. Se informa como positiva a la última dilución.

Informe de los resultados: Positiva: Si hay presencia del color característico. Negativa: Ausencia del color característico. Fuentes de Error. 1. No homogenizar bien las muestras de orina. 2. Nivel de adiestramiento del técnico. 3. Limpieza de la cristalería. 4. No centrifugar la orina antes de proceder.