Informe Cromatografia de Capa Fina

UNIVERSIDAD CENTRAL DE VENEZUELA FACULTAD DE AGRONOMÍA DEPARTAMENTO DE QUÍMICA Y TECNOLOGÍA

Sección: __________________ Fecha: __________________ Integrantes: Victor Monasterio Adriana Mendoza

CÁTEDRA: ANÁLISIS DE PRODUCTOS AGRÍCOLAS I ETAPA I

INFORME POST - LABORATORIO CROMATOGRAFIA CAPA FINA 1.- Introducción: La cromatografía es una técnica sumamente empleada en varias aéreas científicas debido a que permite la separación de una mezcla de solutos, basándose esta separación en la diferente velocidad con que se mueve cada uno de los solutos a través de un medio poroso, arrastrados por un disolvente en movimiento. Actualmente existen diversas técnicas de cromatografía, siendo la cromatografía de capa fina (CCF) una de las más utilizadas debido a que permite separaciones por reparto (aislar e identificar), filtración sobre gel, adsorción e intercambio iónico en escalas de tiempo muy corta, sin afectar la muestra a analizar. (Abbott D. Et al. 1973). Es por ello que diversos autores como (Rodríguez, S., et all 2012) han utilizado esta técnica para la cuantificación de polisacáridos en especies de (Opuntia) en la agroindustria, asimismo (Mennickent, S., Et al. 2000), realizo una metodología para la cuantificación del ácido acetilsalicílico a través de CCF, el cual es un antiinflamatorio que se hidroliza fácilmente en contacto con la humedad atmosférica, tradicionalmente este compuesto es analizado por cromatografía liquida de alta resolución, lo cual es mucho más lento y más costoso que la CCF, debido a que la CCF permite analizar varios analitos en una sola placa ahorrando tiempo y solventes lo cual se traduce en disminución de costos. Por este orden de ideas su versatilidad y rapidez la hace ideal para la enseñanza de la cromatografía, dirigida a los estudiantes de la UCV-FAGRO de la cátedra de análisis de productos agrícolas I, en la cual se realizara una práctica de CCF con la finalidad de aislar e identificar los compuestos de un analito de importancia agrícola.

2. Objetivos de la práctica: 

Realizar inoculaciones de muestras en placas cromatografías



Determinar el Rf de las distintas manchas desarrolladas en Cromatografía de capa fina.

Muestras utilizadas y fundamento de los equipos utilizados Muestras: Colesterol al 1,2 %, Tinta roja, tinta azul, extracto de naranja, extracto espinaca y extracto limón Placa Cromatografía con silicagel G-60: Es una placa de vidrio de (20x20) cm con silicagel G-60, el cual es un absorbente que funcionara como fase estacionaria en donde se inoculara el analito a estudiar y se desplazara la fase móvil, seguidamente las

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iníciales G-60 indican el nivel de granulometría del absorbente y dependiendo de las características de la fase móvil este se desplazara con mayor facilidad. (Abbott D. Et al. 1973). Placa cromatografía con silicagel F-254: Posee el mismo fundamento de la placa cromatografía de silicagel G-60, con la diferencia de que posee Fluoresceína que es capaz de detectarse a una longitud de onda de 254 Å, que al revelarse en luz ultra violeta, permite localizar los compuestos del o los analitos a estudiar. (Abbott D. Et al. 1973). Estufa de secado: Para la activación de las placas se introducen en una estufa en donde se secaran a un temperatura entre (100- 105) °C durante 1 hora, de esta forma se elimina la humedad de la placa y se deja lista para ser introducidas en las cámaras de desarrollo. (Abbott D. Et al. 1973). Cámara de desarrollo [cloroformo (1): benceno (2) y Etanol (1): butanol (3): amonio (1)]: consiste en una cubeta en donde se encuentra la fase móvil, en el interior de la cubeta debe colocarse un papel de filtro, empapado de disolvente, que cubra las paredes interiores de la misma, para conseguir que la atmosfera este empapada del disolvente (fase móvil). El fondo de la cubeta se cubre de disolvente hasta una altura de 0,5 a 1 cm luego se introduce la placa, sin mover la cubeta, se deja que ascienda el disolvente unos 10 cm por encima del origen repartiendo los componentes que sean afines a la fase móvil y a la fase estacionaria, se saca la placa y se deja evaporar al ambiente. (Abbott D. Et al. 1973). Cámara de revelado de vapores de Iodo: consiste en una cámara con una cubeta que contiene en el fondo cristalitos de Yodo, en el cual se introduce la placa cromatografica y se deja reposar unos minutos. Los vapores de el yodo tiende a concentrarse alrededor de los compuestos hacer analizados, por lo cual aparece una mancha marrón oscura, sobre un fondo amarillo pálido, este método es uno de los más utilizados para la revelación debido a su carácter no destructivo.(Abbott D. Et al. 1973). Cámara de revelado de luz ultra violeta: Consiste en una cámara con una lámpara que emite luz ultra violeta, su fundamento consiste en que muchos compuestos orgánicos, no saturados, presentan fluorescencia, debido a la propiedad de absorber las radiaciones ultravioleta y emitir radiaciones de mayor longitud de onda, por ello estos compuestos, aunque invisibles en el cromatograma con la luz ordinaria, pueden detectarse con una lámpara de rayos ultra violeta, asimismo algunas placas comerciales y absorbentes contienen sustancias fluorescentes como aditivos para el revelado de los compuesto. Según la longitud de onda de la luz emitida y por consiguiente, el color que presenta, representa una característica del compuesto y se usa como método de identificación. (Abbott D. Et al. 1973).

3. Resultados: A. Esquematice el procedimiento empleado para el desarrollo de cada Práctica. FE: Silicagel G-60 activa. 1 hora a 100 ° C grosor de la placa 0,25 mm

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1

2

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4

5

10 μl

20 μl

30 μl

40 μl

50 μl

2

3

4

1

5

Muestra: Colesterolo 1,2 % Fase móvil: Cloroformo (1): Benceno (2)

Vapores de Yodo Revelar Frentecámara solvente de10 vapores cm Yodo

Desarrollar en cámara

Medir distancia recorrida por las manchas

Calcular Rf de c/u ellas M1

M2 M3 M4

M5

2da parte FE: Silicagel F-254 activada por 1 hora a 100 °C, espesor de la placa 0,25mm Muestra: Tinta roja, tinta azul, extracto de naranja, extracto espinaca y extracto limón. Tinta roja 10 ml

Tinta azul 10 ml

Extracto Naranja 10 ml

Extracto Espinaca 10 ml

Extracto limón 10 ml

F.M: Butanol (3), estanol (1), amonio (1)

Desarrollar en cámara de revelado de luz ultra violeta

Fuente del solvente 10 cm

Medir la distancia recorrida por las manchas Pág. 3 de 7

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Luz visible

Hacer dibujo de placas

M1

M2

M3

M4 M5

Cuadro 1. Calculo de Rf de colesterol al 1,2%. Colesterol al 1,2% distancia distancia recorrida recorrida de del compuesto por el frente (cm) (cm)

Concentración

color del compuesto

10 μl

amarillo pálido

2,5

10

0,25

20 μl

amarillo pálido

2,5

10

0,25

30 μl

amarillo pálido

2,5

10

0,25

40 μl

amarillo pálido

2,5

10

0,25

50 μl

amarillo pálido

2,5

10

0,25

Rf

Cuadro 2. Calculo de Rf de tinta roja, tinta azul, extracto de naranja, extracto espinaca y extracto limón.

Tinta roja, tinta azul, extracto de naranja, extracto espinaca y extracto limón.

1M-Tinta roja

V. yodo

UV

Luz visible

Distancia recorrida por el compuesto (cm)

1A

negativo

Verde manzana

Rosado

6

10

0,6

1B

negativo

Naranja intenso

Fuccia

6,5

10

0,65

1C

negativo

Naranja intenso

fuccia claro

7,25

10

0,725

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Distancia recorrida Rf por el frente (cm)

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2M- Tinta azul 3MExtracto naranja 4MExtracto espinaca

5MExtracto limon

1D

Positivo

Naranja intenso

ocre

8

10

0,8

2A

negativo

incoloro

azul claro

5

10

0,5

2B

Positivo

verde claro

ocre

9,5

10

0,95

3A

Positivo

verde claro

amarillo

4

10

0,4

3B

negativo

azul claro

incoloro

9,5

10

0,95

4A

Positivo

verde claro

ocre

4

10

0,4

4B

negativo

azul claro

incoloro

9,5

10

0,95

5A

Positivo

azul claro

incoloro

1,5

10

0,15

5B

negativo

azul claro

incoloro

2,75

10

0,275

5C

negativo

azul claro

incoloro

9,5

10

0,95

4. Discusión de resultados: 1era parte: Análisis de colesterol al 1,2 %: El análisis determino que la muestra de colesterol está conformada por un solo compuesto, debido a que a diferentes concentraciones se obtuvo una sola mancha del mismo color (amarillo pálido) y el cálculo de Rf arrojo el mismo resultado para todas las concentraciones, por lo cual se verifica que no existe la presencia de otros compuestos y que a pesar de que el diámetro de la mancha varié debido a las diferentes concentraciones realizadas en práctica el Rf permanece igual debido a que los compuestos poseen la misma afinidad por la fase móvil y esta es independiente de la concentración del analito. 2da parte: Análisis de Tinta roja, tinta azul, extracto de naranja, extracto espinaca y extracto limón: El análisis determino que los analitos estudiados están conformados por varios compuestos, y se observo su capacidad de reacción en presencia de Vapores de yodo (incoloro o amarillo pálido), color de su Fluorescencia en presencia de rayos U.V y color frente a luz visible. Asimismo los resultados de Rf en la gran mayoría de los compuestos fueron distintos. Cabe destacar que se pudo observar que existe una relación entre los analitos (extracto naranja, extracto espinaca y extracto limón), debido a que en los resultados obtenidos sus compuestos (3B, 4B Y 5C) arrojaron los mismo resultados en V.P de yodo, rayos UV y color en presencia de luz visible, por lo cual se pudiese tratar de el mismo compuesto. 5. Conclusión: En la muestra analizada en la primera parte de la práctica el analito de colesterol al 1,2% es una muestra pura y simple debido a que se pudo observar que el analito está conformado por un solo compuesto y que su Rf es el mismo para todas las concentraciones. Con respecto a la segunda practica se determino que los

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analitos estudiados (Tinta roja, tinta azul, extracto de naranja, extracto espinaca y extracto limón) son sustancias complejas y no puras debido que están conformadas por varios compuestos y poseen distintos Rf, seguidamente se pudo observar que existe una relación entre los analitos (extracto naranja, extracto espinaca y extracto limón), debido a que en los resultados obtenidos sus compuestos (3B, 4B Y 5C) arrojaron los mismo resultados en V.P de yodo, rayos UV y color en presencia de luz visible, seguidamente para verificar la acertividad de esta relación se sugiere la revisión de bibliografía en donde otros investigadores hayan realizado pruebas con los analitos estudiados en práctica o buscar en tablas los analitos estudiados con los mismos resultados en práctica en libros o publicaciones acreditadas. Por último la CCF es un análisis cualitativo de rápida manipulación y obtención rapida de resultados lo cual según (Abbott D. Et al. 1973) se verifica que permite una enseñanza mucho más fácil de la cromatografía, donde esta otorga al estudiante una herramienta más para el análisis de productos agrícolas. 6. Bibliografía 

Abbott, D. y Andrews, R. 1973. Introducción a la cromatografía. Madrid, España, Alhambra. Pag 1; 33; 49-60.



Scheinvar, L. Et al, 2011. Estado del conocimiento de las especies del Nopal (Opuntia spp.) Productoras de Xconostles silvestres y cultivadas. Instituto de Biologia

UNAM.

(21

Oct

2013)

[En

línea]

http://www.biodiversidad.gob.mx/genes/centrosOrigen/Opuntia/Informe_Final/I nforme%20final%20Opuntia.pdf 

Mennickent, S., Et al. 2000. Desarrollo de un método por cromatografía en capa fina instrumental para análisis cuantitativo de acido acetilsalcilico. Boletin de la sociedad chilena de química. Vol. 45, N° 4 concepcion. (21 Oct 2013) [En línea] http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S036616442000000400015&lang=pt.

7. Anexos REALICE UN BREVE RESUMEN DE LA SEPARATA QUE SE PRESENTA A CONTINUACION: Resumen: Las especies de Opuntia son de gran importancia en la biodiversidad de mexico, gran parte de estas especies silvestres están en peligro de extinción debido al desplazamiento por parte de las actividades humanas y al cambio climatico (Scheinvar, L., et al. 2011), además según (Rodriguez, S., et all 2012) diversos autores han hecho referencias sobre sus posibles beneficios para la industria alimentaria y farmacéutica, por este orden de ideas (Rodriguez, S., et all 2012) realización un trabajo de investigación aplicando cromatografía de capa fina o cromatografía de capa delgada en la caracterización de musilago de (Opuntia hyptiacantha) con la finalidad de caracterizar sus polisacáridos, en la metodología empleada se usaron CCF con lavados y sin lavados a temperatura ambiente, 65°C, 75°C y 83°C a diversas concentraciones de nopal con H2O (sin H2O, Pág. 6 de

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(1:1), (1:2) durante un tiempo de (0 min, 1 hora y 2 horas), Nopal en concentraciones H2O con etanol a 50% y 80% sin temperatura y tiempo de extracción y musilago en polvo en concentraciones de etanol a 96%. Cabe destacar que la concentración de agua afecto considerablemente la concentración de monosacáridos, polisacáridos y ácidos uronicos, por lo tanto para futuros análisis se recomienda concentraciones de H2O (1:1) para obtener resultados confiables, de las CCF empleadas la más eficiente fue la CCF con musilago precipitado con etanol al 96% debido a que logra precipitar el polisacárido sin la presencia de los monosacáridos y los ácidos uronicos, trayendo como consecuencia que esté listo para estudios de importancia a nivel de agroindustria y la industria farmacéutica.

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