BIOSEGURIDAD ESTERILIZACIÓN Y MEDIOS DE CULTIVOS Bello Bernal Luisa Fernanda, Chaparro Pérez Neila Patricia, Grisales Castiblanco Luisa Fernanda, Parra Fino Flor Ángela María. Fundación Universitaria de San Gil - Unisangil, Facultad de Ciencias Naturales e Ingeniería Ingeniería Ambiental Yopal, Colombia
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— En muchos aspectos, el pequeño tamaño de los microorganismos los hace sujetos i d e a l e s p a r a s u experimentación. Se pueden cultivar millones de microorganismos en un solo mililitro de medio para su estudio como se realizó en la práctica con el cultivo plate count agar donde se pudo observar el crecimiento de microorganismos y bacterias para el caso de la muestra contaminada.
I.
Resumen
En una segunda muestra, y con las condiciones necesarias de esterilización a fin de eliminar toda forma de vida o tipo de organismos que puedan crear una deficiencia en la misma se pudo obtener un cultivo estéril.
Los medios de cultivo son un conjunto de componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos, los cuales se definen como seres vivos de reducido tamaño que solo pueden ser visibles al microscopio. Para la realización exitosa de un medio de cultivo se deben tener en cuenta parámetros que van desde la esterilización que consiste en la eliminación completa de cualquier forma de vida o microorganismos presentes en los materiales, así como también el entorno de trabajo con el propósito de tener un ambiente seguro y ordenado.
Palabras clave— Agar (plate count), bacterias,
esterilización, organismos.
medio,
microorganismos,
y
Abstract - In many ways, the small size of
microorganisms makes them ideal subjects for experimentation. They can grow millions of microorganisms in a single milliliter of medium for study as performed in practice with plate count agar culture where it was observed the growth of microorganisms and bacteria in the case of the contaminated sample. In a second sample, and with the conditions of sterilization to eliminate all forms of life or type of organisms that can create a deficiency it could obtain a sterile culture. Keywords - Agar (plate count), bacteria, sterilization, medium, microorganisms and organisms.
INTRODUCCIÓN
II.
MATERIALES Y MÉTODOS
2 cajas Petri estériles 2 pipetas de 10mL estériles 1 Erlenmeyer de 250mL 2 probetas de 50 ml 1 mechero Bunsen 1 balanza de precisión 1 estufa de eléctrica 1 espátula 1 autoclave 1 medio e cultivo deshidratado (simple, selectivo o diferencial) 150ml de agua destilada Alcohol 70% Toallas desechables Cinta de enmascarar
B. VERTIDO DE LOS MEDIOS EN CAJAS DE PETRI Y SOLIDIFICACIÓN
Se dejó hasta que alcanzara una temperatura adecuada, teniendo en cuenta que si la temperatura era muy elevada podía evaporarse y producir gotas que dañaran el resultado; si por el contrario su temperatura era muy baja podía rápidamente solidificarse en el Erlenmeyer.
Luego se esterilizo el área de trabajo con alcohol para eliminar cualquier microrganismo presente en el ambiente, se encendió el mechero con el fin de esterilizar la boca del Erlenmeyer, cerca del mismo se colocó la caja de Petri abriéndola lentamente para ir agregando aproximadamente la mitad del cultivo en cada caja de Petri. Tomando una de las cajas de Petri se expuso al ambiente con el propósito de contaminarla. Finalmente se rotulo cada caja como: contaminada y no contaminada, dejándolas solidificar, colocándolas con la tapa hacia abajo y llevándolas a la incubadora a 37°C por 24 horas.
Figura 1. Materiales usados en la práctica
A. PROCEDIMIENTO PARA LA PREPARACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Se realizaron los cálculos respectivos para 50ml de medio de cultivo plate count agar.
Luego se desinfecto el área de trabajo con alcohol y una toalla desechable.
Seguidamente se pesó la cantidad de medio de cultivo calculada (1.35 g) y se midió el volumen del agua destilada con la probeta.
Aparte se mezcló el medio de cultivo con la mitad del agua, agitando hasta diluirse para agregar el agua restante hasta obtener una solución homogénea, siendo necesario utilizar el agitador magnético para una mayor homogenización; se cubrió el Erlenmeyer con papel craff llevándolo a la plancha de calentamiento hasta llegar a su punto de ebullición para activar el agar.
Se llevó a la autoclave para esterilizar cualquier tipo de contaminación adquirida durante el proceso, dejándolo alcanzar una presión de 15lb o 120°C durante 10 minutos ya que la autoclave se encontraba encendido previamente.
Figura 3. Vertido y solidificación de medios en cajas de Petri.
Finalmente se apagó la autoclave esperando bajar la presión a cero.
III. A.
Figura 2. Preparación de los medios de cultivo.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
MEDIO DE CULTIVO CONTAMINADO
Figura 4. Medio de cultivo contaminado
En las siguientes tablas se muestran los resultados obtenidos al culminar la preparación de los medios de cultivo plate count agar. Tabla 1. OBSERVACIONES MEDIO DE CULTIVO CONTAMINADO
B. MEDIO DE CULTIVO NO CONTAMINADO
Teniendo un manejo adecuado y cumpliendo algunas condiciones óptimas para el desarrollo del medio como: el control de la temperatura, el grado de humedad, la consistencia adecuada del medio, la esterilización de los instrumentos utilizados y del área de trabajo, entre otras condiciones se puede llegar a tener un medio de cultivo libre de algún agente de tipo contaminante como el obtenido en unas de las muestras, donde se pudo evidenciar que no hubo afectación por crecimiento o invasión de otro tipo de microorganismos tales como bacterias que son de tipo más común. Si por el contrario no se toman en cuenta las medidas necearías se puede correr el riesgo de contaminación en el medio, por lo general esto se debe a diversos factores como: la contaminación humana como fuente primaria, los equipos y el instrumental en general mal esterilizados, las condiciones o exposición al ambiente de los medios o un manejo inadecuado al momento de almacenar las muestras ya que estas deben quedar dispuestas boca abajo a fin de evitar evaporación o exceso de humedad durante la incubación y se pueda ver afectada la placa o muestra. Para el caso de la placa contaminada obtenida, las razones que dieron origen a su estado estuvieron sujetas a la exposición voluntaria al ambiente, de ahí el resultado evidenciando en la aparición de colonias bacterianas por contaminación biológica, esto debido a que los medios de cultivo proporcionan un medio ideal para el crecimiento de contaminantes microbianos.
IV.CONCLUSIÓN Figura 5. Medio de cultivo no contaminado Tabla 2. OBSERVACIONES MEDIO DE CULTIVO NO CONTAMINADO
Según los resultados de la preparación de los medios donde se obtuvieron dos cultivos, uno contaminado y otro no contaminado se pudo llegar a la conclusión que:
A manera de conclusión podemos decir que: Los medios de cultivo son un gran método por el cual se pueden estudiar diversas características atribuidas a los microorganismos ya que nos permite conocer información valiosa respecto a su composición bilógica, comportamiento, desarrollo y otras condiciones. Además se comprobó que con el manejo adecuado de los instrumentos, equipos y área de trabajo se pueden obtener resultados satisfactorios como en el caso de la muestra que se obtuvo libre de contaminación u otros microorganismos. Por otra parte cabe resaltar las destrezas y conocimientos adquiridos respecto al tema como por ejemplo: la utilización de medios de cultivo en la industria farmacológica para la elaboración de un sin número de productos, o en la industria alimenticia. En fin los medios de cultivo dan la posibilidad de desarrollar diversas actividades que aportan al desarrollo del campo de la microbiología.
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