Informe BCT II Catabolismo de La Hemoglobina

 

 

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO 

Facultad De Estudios Superiores Zaragoza  Carrera QFB  BIOLOGIA CELULAR Y DE LOS TEGIDOS II 

Catabolismo de la hemoglobina Grupo: 1501 

 

Equipo: 7 

Prese nta: Armendáriz Roa Alejandro  León Reséndiz Brandon Raúl  Vázquez Hernández José Antonio Profesor responsable: Gabriela Rosas Gavilán

Fecha de entrega:  07 /1 /1 0 /2022 /2022 

 

 

Tabla de contenido Resumen ................................................................................................................................. ....................................................................................... .......................................... 1  Marco teórico ......................................................................................................................... 2  Funciones del d el hígado ................................................. .................................................................................................... ............................................................. .......... 2  Afecciones por bilirrubina alta ............................................................................................... ...................................................................................... ......... 2  Ictericia. Definición y síntomas............................................................ síntomas....... ....................................................................................... .................................. 2  Afecciones por la bilirrubina baja ........................................................ .......................................................................................... .................................. 3  Valores normales de bilirrubina ............................................................................ ............................................................................................. ................. 3  Enfermedad de Kernicterus ................................................ ................................................................................................... ..................................................... 3  Objetivos: ............................................................................................................................... .......................................................................... ..................................................... 3  Material y método: ................................................................................................ ........................................... ...................................................................... ................. 4  Material: ................................................................................................................................ ............................................................................. ..................................................... 4  Reactivos: ............................................................................................. ............................................................................................................................... .................................. 4  Equipo: ........................................................................................................................... ...................................................................... ............................................................. ........ 4  Condiciones de reacción:........................................................................................................ 4  Método: ................................................................................................................ .............................................................. .................................................................... .................. 5  Resultados .............................................................................................................................. 6  Cálculos: ....................................................................................................... .................................................... ........................................................................... ........................ 10  Discusión ................................................... ...................................................................................................... ........................................................................... ........................ 11  Conclusiones ........................................................................................................................ 11 

 

 

Referencias: .......................................................................................................................... .......................................................................................... ................................ 12 

 

 

Resumen El hígado produce y segrega de 250 a 1000 mL de bilis por día, un líquido verde y de sabor amargo que interviene en los procesos de digestión y cuyos componentes son el pigmento  biliar (bilirrubina), sakes biliares, fosfolípidos (principalmente lecti lectina), na), colestrerol y también iones inorgánicos. La bilis sirve como ruta de excresión para el producto resultante de la transformación del grupo hemo de la hemoglobina. Para Pa ra la eliminación de la bilirrubina como componente de la bilis, intervienen varios procesos no orgánicos, primero forma complejos con la albúmina sérica para transportarse al hígado (porque no es soluble), esto se conoce como bilirrubina no conjugada o indirecta. Ya en el hígado, esta se libera de la albúmina en el espacio sinusoidal y es transportada por una proteina llamada ligandina hasta el retículo endoplasmático. Ahí es rapidamente conjugada cuando cuand o los grupos caboxilo de los propionilo de la bilirrubina se esterifican mediante la conjugación con sus moléulas de ácido glucoriónico para fromar bilirrubina conjugada. En esta práctica se analizó la cantidad de bilirrubina total y conjugada que tenía la muestra de sangre extraída a un donador. Para esto, como primer paso se llevó a cabo la extracción de la muestra con el uso de un tubo vacutainer de tapa color rojo, la extracción se llevó a cabo de manera cuidadosa y rápida. Posteriormente este es te tubo se envolvió con papel aluminio  para evitar ser expuesto a demasiada luz ya que esto puede afectar al resultado de la  bilirrubina. Después de esto, el tubo se metió a centrifugar durante 15 minutos y mientras tanto, se prepararon 5 tubos de ensaye, etiquetados para poder introducir los diferentes reactivos en ellos, siendo estos y sus contenidos, suero, el blanco de bilirrubina total con 1.5 mL de reactivo 2 y 100  μL de suero, bilirrubina total con 1.5 mL de reactivo 2, 50  μL de reactivo 3 y 100 μL de muestra de suero, blanco de bilirrubina directa con 1.5 mL de reactivo 1 y 100 μL de muestra y bilirrubina directa con 1.5 mL de reactivo 1 y 100 μL de suero. Al momento de poner el suero dentro de los tubos, se contaron 5 minutos para incubar la muestra a 25 ºC a partir de que se entra en contacto el suero con el reactivo. Después de esto, inmediatamente se procedió a medir las absorbancias de todas estas muestras y con un blanco de agua destilada. Estos resultados de absorbancia se debían comparar con un estándar  preparado por un equipo pero esto no se realizó, se proporcionó un dato ya realizado y comparando nuestros resultados, estos quedaron fuera de los parámetros establecidos, dándonos un valor de bilirrubina total de 1.337, bilirrubina conjugada 0.2101 y bilirrubina no conjugada 1.1269. 12  1 | 12 

 

Marco teórico Funciones del hígado  

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Compensación, depuración de la bilirrubina (si se produce una acumulación de  bilirrubina, la piel y los ojos se ponen amarillos). Producción de bilis (ayuda a transportar los desechos y a descomponer las grasas en el intestino delgado durante la digestión) Producción de ciertas proteínas para el plasma sanguíneo Producción de colesterol y proteínas especiales para ayudar a transportar las grasas  por todo el cuerpo Conversión del exceso de glucosa en glucógeno de almacenamiento (este glucógeno

 

más tarde se puede convertir nuevamente en glucosa para la obtención de energía) Equilibrio y producción de glucosa según fuera necesario Regulación de los niveles de aminoácidos en la sangre (son las unidades formadoras

 

de proteínas) Procesamiento de la hemoglobina para la distribución de su contenido de hierro (el

 

hígado almacena hierro) Conversión del amoníaco tóxico en urea (la urea es uno de los productos finales del

 

metabolismo de las proteínas y se excreta en la orina) Depuración de fármacos y otras sustancias tóxicas de la sangre

 

Regulación de la coagulación sanguínea

 

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 Afecciones por bilirr bilirrubina ubina alta Los niveles más altos de bilirrubina están relacionados con un amplio abanico de enfermedades y problemas, entre las que estarían la ictericia relacionada con hepatitis y cirrosis, anemia, la enfermedad de Gilbert y la enfermedad de la célula de hoz. La ictericia es habitual en bebés. Un nivel muy alto en bebés puede provocar daños permanentes.

Ictericia. Definición y síntomas Trastorno que provoca un exceso de la bilirrubina. Ésta es un producto de desecho de la hemoglobina, que es el principal contenido de los glóbulos rojos. Esta bilirrubina está transformada en el hígado y transportada a través de la vía biliar al intestino delgado y se elimina por las heces. Por ello, la ictericia se produce cuando existe un aumento en el ritmo de destrucción de los glóbulos rojos, en las enfermedades hepáticas y en las enfermedades en las que se produce una obstrucción de la vía biliar. 12  2 | 12 

 

El principal síntoma de la ictericia es la coloración de la piel amarillenta y de las mucosas. En algunos casos, pueden presentarse otros síntomas como la coluria (orinas de color muy oscuro) y la acolia (heces muy claras por la ausencia de pigmentos derivados de la  bilirrubina).

 Afecciones por la bilirr bilirrubina ubina baja La hipobilirrubinemia (valores de bilirrubina en sangre por debajo de lo normal) es poco frecuente y no se considera de importancia. Incluso en muchos laboratorios se admiten como valores normales valores de cero o no detectados de bilirrubina total. Sin embargo, algunos estudios consideran que valores bajos de bilirrubina en sangre son un factor de riesgo para sufrir una enfermedad coronaria (angina de pecho, infarto, etc.).

Valores normales de bilirrubina   Bilirrubina total → 0.2 a 1.0 mg/d L

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  Bilirrubina conjugada → 0 a 0.2 mg/dL  

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  Bilirrubina no conjugada → 0.2 a 0.8 mg/dL

Enfermedad de Kernicterus

El kernícterus es la lesión encefálica causada por el depósito de bilirrubina no conjugada en los ganglios basales y los núcleos del tronco encefálico. la bilirrubina puede atravesar la  barrera hematoencefálica y causar kernícterus cuand cuandoo la concentración de bilirrubina sérica séri ca es muy alta (hiperbilirrubinemia), y cuando la concentración concen tración de albúmina sérica es muy baja,  por ellos es común en recién nacidos y puede provocar parálisis cerebral atetoide, pérdida auditiva, problemas en la vista y los dientes; y puede provocar, algunas veces, discapacidades intelectuales.

Objetivos:   Conocer la estructura de la bilirrubina, de donde proviene y como se metaboliza.

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  Entender la importancia de las determinaciones sobre la bilirrubina y las principales

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enfermedades que provocan los valores anormales de esta.   Aplicar las técnicas y metodología adecuadas para las determinaciones así como

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interpretar sus resultados

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Material y método:  método:  Material:  Material:    Material Biológico: Suero libre de hemolisis

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  Tubos para extracción sanguínea tapón color rojo

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  Sistema de extracción sanguínea: Ligadura, capuchón y aguja

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  Algodón (torundas con alcohol)

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  Celdas

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  Pipetas graduadas de 0.1 mL

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  Pipetas graduadas de 5 mL

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  Papel aluminio

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  Sanitas

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  Reloj/cronómetro

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  Vasos de precipitados de 250 mL

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  Gradilla

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  5 tubos de ensaye 13x100

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Reactivos:   Kit de reactivos para bilirrubina Spinreact •

  Alcohol

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  Hipoclorito de sodio

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Equipo:   Espectrofotómetro

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  Centrífuga   Balanza de dos platos

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Condiciones de reacción:   Longitud de onda: 555 nm

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  Temperatura 15-25 ºC

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  Tiempo de reacción: 5 minutos

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  Centrifugadora: 3500 rpm

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Método:  Se extrajo una muestra sanguínea del paciente, con uso del tubo para extracción sanguinea tapón color rojo. Se prepararon todos los tubos de ensaye 13x100 etiquetando cada uno y se colocaron en gradilla para su uso posterior, luego procedió a centrifugar la muestra de sangre a 3500 rpm durante 15 minutos. Una vez terminada la centrifuga se cubrió el tubo con papel aluminio.  NOTA: Es importante tapar el tubo con papel aluminio inmediatamente después de la extracción sanguínea, esto para evitar la degradación de la bilirrubina por la luz. Una vez centrifugada la muestra, se procedió a extraer el suero sanguíneo y pasando a un tubo de ensaye previamente etiquetado, (cuidando que éste se encuentre completamente tapado con papel aluminio). Después se conecto el espectrofotómetro 15 min antes de utilizarlo, pasados los 15 minutos se ajustó a cero con una celda que contenía agua destilada. Cada tubo de ensaye se rotuló de la siguiente manera: el tubo uno “Blanco de Bilirrubina total”,

el tubo dos “Bilirrubina total”, el tubo tres “Blanco de bilirrubina directa” y él tuvo cuatro “Bilirrubina directa”. Los reactivos que se utilizaron para esta práctica contenían: Reactivo 1, ácido sulfanilico reactivo diazo (30 mmol/L) y ácido clorhídrico (150 mmol/L). Reactivo 2: ácido sulfanilico (30 mmol/L), ácido clorhídrico (50 mmol/L) mmo l/L) y dimetilsulfoxido (7 mmol/L) “acelerador”  Reactivo 3: Sodio nitrito (29 mmol/L) “Desarrollador”  Una vez identificado los reactivos y los tubos de ensayo a utilizar, se procedió a colocar alícuotas de la siguiente manera: Tubo blanco de bilirrubina total: 1.5 mL de Reactivo dos y 100 micro litros de muestra de  plasma sanguíneo. Tubo Bilirrubina Total: 1.5 mL de Reactivo dos y 50 micro Litros de reactivo tres y 100 micro litros de muestra de plasma sanguíneo Tubo Blanco de Bilirrubina Directa: 1.5 mL de reactivo uno y 100 micro litros de muestra de  plasma sanguíneo. Tubo Bilirrubina directa: 1.5 mL de reactivo uno, 50 micro litros de reactivo tres y 100 micro litros de muestra de plasma sanguíneo

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Teniendo las mezclas en cada tubo de ensayo se procedió a mezclar por inversión e incubar  por 5 min en un baño maría de tal manera que la temperatura se mantenga en en un rango de 15 a 25 °C. NOTA: Inmediatamente después de los 5 minutos, se colocaran las muestras en la celda para lectura de absorbancia. Finalmente, se colocaron en ¾ de celda, una muestra de cada tubo de ensaye y se leyó la absorbancia de cada una a 555nm. Se realizo los cálculos pertinentes para la determinación de bilirrubina total y bilirrubina directa.  NOTA: El espectrofotómetro debe encenderse 15 minutos antes de utilizarse para leer absorbancias, primero se calibra con el blanco y posteriormente se lee la muestra.

Resultados Descripcion

Muestra

de

sangre

Imagen

extraida

exitosamente, cubierta de inmediato con papel aluminio para evitar el contacto con la luz

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Tubo de muestra de sangre cubierta con pepel aluminio

Muestra de sangre despues de centrifugar durante 15 minutos a 3500 rpm

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Extraccion de plasma sanguineo

Reactivos utilizados

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Tubos de ensaye etiquetados con mezcla de reactivos y muestra como corresponde

Incubacion de tubo de bilirrubina directa

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Diferencias de color al preparar las mezclas. (izquierdo blanco de  bilirrubina total, derecha  bilirrubina bilirrubina total)

Tabla 1. Imágenes capturadas durante la realizacion de la practica Componente

Absorbancia

Blanco de bilirrubina total

0.017

Bilirrubina total

0.087

Blanco de bilirrubina directa

0.019

Bilirrubina directa

0.030

Cálculos: Tablaa 2. Datos oobteni Tabl btenidos dos en es ectro ectrofotóme fotómetro tro a 555 nm Con factor:   Para Bilirrubina Total y Conjugada (directa)

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((A) Muestra –  (A)  (A) Blanco muestra) x Factor = mg/dL bilirrubina en la muestra *Factor: 19.1 mg/dL Bilirrubina Total: BT= (0.087 –  0.017)  0.017) (19.1 mg/dL) = 1.337 mg/dL BC= (0.030 –  0.019)  0.019) (19.1 mg/dL) = 0.2101 mg/dL   Para Bilirrubina No Conjugada (Indirecta)

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BNC= BT –  BC  BC BNC= (1.337 –  0.2101)  0.2101) BNC= 1.337 mg/dL

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Discusión La muestra sanguínea se tomó adecuadamente con supervisión de la profesora Gabriela Rosas Gavilán, obteniendo una muy buena porción de sangre, de modo que se obtuvo suficiente material biológico con el que trabajar la determinación. Una vez obtenidos los resultados de la cuantificación espectrofotométrica nos percatamos de un resultado anormal para la bilirrubina no conjugada, debido a que el valor resulto más elevado de los rangos normales, este resultado se dio en más equipos del laboratorio, considerando que los tiempos de reacción en incubación se respetaron así como el cuidado de la muestra para que la luz no influyera en ella y afectara la molécula a determinar, se le atribuye la anormalidad en el dato a que el reactivo 2 tenía una fecha fech a de caducidad ya vencida, y se considera que ese fue el factor determinante para la dispersión del dato. Otro error a considerar podría ser al centrifugar la muestra que aall meter y sacar la muestra de la centrifuga se tuvo que quitar el papel aluminio y al sacarlo se colocó de nuevo, por lo que  pudo haber una interacción de la luz. Se aconseja trabajar con una parrilla de calentamiento en las mejores condiciones posibles ya que la temperatura se debe mantener estrictamente entre los 15 y 25 grados centígrados, de lo contrario puede haber una desnaturizacion de la molécula. Del mismo modo usar un termómetro en buenas condiciones, propio de preferencia ya que muchos de los prestados  por el laboratorio están ffraccionados raccionados y esto da una lectura err errónea ónea de la temperatura usada  para las reacciones necesarias.

Conclusiones Con la realización de esta práctica logramos comprender el metabolismo de la bilirrubina y aprendimos a cuantificar la bilirrubina total y la bilirrubina conjugada con base en los resultados obtenidos de la muestra del paciente. La metodología se llevó a cabo de manera correcta, desde la extracción de la muestra hasta el final midiendo las absorbancias. Al momento de interpretar los resultados de bilirrubina no conjugada, estos es tos no estaban dentro del valor establecidos como normales en un adulto, esto no quiere decir que el paciente  presente alguna enfermedad o que tenga llos os valores elevados, esto puede ser debido al exceso de reactivo 1 o 2 al momento de pipetearlos al tubo de ensaye y debido a otros errores al momento de manipular los instrumentos o el material ma terial como la temperatura de incubación, el 12  11 | 12 

 

tiempo de incubación o al momento de poner el papel aluminio para proteger la muestra de la luz.

Referencias: 1.  Gonzales de Buitrago J. Tecnología y métodos del laboratorio clínico. Barcelona, 1998 2.  Ruiz Argüelles, Guillermo J. Fundamentos de Hematología 2ª ed. México D.F. Médica Panamericana, 1998 3.  McKenzie, Shirley B. Hematología clínica. 2ª ed. México. Manual moderno, 2000 4.  Turgeon, Marg Louise. Hematología clínica: Teoría y procedimientos. 4ª ed. México D.F. Manual moderno, 2006 5.  Tortora Gj, Grabowski S. Principios de Anatomía y fisiología. 9ª ed. México: Oxford University Press, 2002

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