Informe 5 de Bacterias Laboratorio de Microbiologia

 

Universidad nacional int intercult ercultural ural de la amazonia Facultad de ingeniería ciencias y ambientales Informe N 05

Obs ervación m morfológica orfológica de divers as B ac actteria en el mic micros ros copio, copio, diferenciación de bacterias Gram.  

DOCENTE

: I ng.Darwin.J Estacio Al bornoz

CURSO

: Microbiología Microbiología Agroindustrial

ESTUDIANTE: Lleyns cuja Reátegui Reátegui CICLO

:V

AÑO

: 2021

FECHA DE ENTR ENTREGA: EGA: 14-02-21 14-0 2-21

Lima santa clara 14 de febrero de 2021.

 

I. Introducción El present prese nte e informe tiene como objetiv objetivo o con conocer ocer la morfologí morfología a bacteriana a través del método tinción de Gram o método esporulado, consiste en el uso de sustancias químicas, lugol, safranina, alcohol, cristal de violeta, que permite clasificar clasifi car según las coloracio coloraciones nes

que tiñen tiñen llos os cul cultivos tivos bacteria bacterianos, nos, la pared

celular del bacteria es de gran importancia en la clasificación por el contenido de peptidoglicano, es el responsable de adquirir o retener la coloración cristal de violeta, según las investigaciones las bacterias de Gram positiva tienden a dar coloración azul, morado o violeta y las bacterias Gram negativas una coloración rojo, anaranjado o amarillento. Todas las informaciones y datos son obtenidos de fuentes bibliográficas, informes, etc. La práctica se realizó virtualmente y apoyado por videos tutoriales y así mismo el ingeniero de la práctica dio información el uso de placa petrifilm, de esta manera la práctica se procedió a concluir   II. Objetivos Objetivos   2.1. Objet Objetivo ivo general Observar la morfología de la célula bacteriana, a través del método tinción Gram, en los diferentes cultivos.  cultivos.  2.2. Objet Objetivos ivos específicos Identificar las características de las bacterias presentes en los cultivos si son Gram positivos o Gram negativos. Diferenciar las bacterias de Gram positiva y Gram negativa de acuerdo a las coloraciones que adquieren con el colorante cristal de violeta. Inv nvestiga estigarr la metodología correcta de tinción Gram y el uso de placas petrifilm así mismo el recuento de colonias bacterianas en un cultivo. III. Marco teórico 3.1. Las bacterias Las bacterias son microorganismos procariotas que presentan un tamaño de unos pocos micrómetros entre 0,5 y 5 μm de longitud y diversas formas, incluyen inclu yendo do filamentos, coc cocos os bacilos, baci los, v vibri ibrios os y espi espirilos. rilos. (carbajal,  (carbajal, 2015)  2015)  3.2. Clasifi Clasificación cación por p pared ared celular   a. Gram positivas:   Aquellas bacterias que se tiñen de azul oscuro o violeta por la tinción de Gram. Esta característica química está íntimamente ligada a la estructura de la envoltura celular, por lo que

 

refleja un tipo natural de organización bacteriana. Está formada en un 90% por peptidoglicano,que permite diferenciarlas con la pared de las Gram negativas, gracias al grosor que éste le proporciona, que se logra mantener la coloración del cristal violeta en el interior de la célula al teñirla con la tinción Gram.Bacillus anthracis,Clostridium,  Streptococcus,  Staphylococcus,Enterococcus. b. Gram negativa negativas: s:   Se refieren a un grupo de células bacterianas que quedan coloreadas de rojo debido a un colorante de contraste en el test de coloración de Gram y son caracterizadas por el pequeño contenido de peptidoglicano en su pared celular y por poseer una membrana externa. La membrana externa es el elemento estructural saliente. Contiene numerosas proteínas como el lipopolisacárido,porinas que son proteínas que forman poros en la membrana y permiten el paso de sustancias

hidrofílicas

de

bajo

peso

molecular para

el espacio

periplásmico.Escherichiacoli,Klebsiella,Salmonella,Legionella,   Enterobacter   (carbajal, 2015)  2015)  3.3. Clasifi Clasificación cación por forma a. Bacilos:  Bacilos:   Son las bacterias que tienen forma alargada, similar a un bastón. La clasificación que tiene que ver con la cantidad de bacilos combinados. La estructura que tiene dos bacilos en cadena se conoce como diplobacilo.Si la estructura tiene varios bacilos conectados se denomina

estreptobacilo.

E.coli,

siguella,

salmonella,

yersinia,

enterobacter sakazakii. b. Cocos:  Cocos:   Son aquellas bacterias cuya forma es redondeada. La clasificación que se hace de los bacilos por la cantidad de individuos en cada estructura también aplica para los cocos. Si la estructura está formada por dos cocos, ésta se denomina diplococo. Las estructuras con formas de cadena son llamadas estreptococos, y aquellas que tienen forma irregular son so n conocidas como estafilococos. c. Helicoidales:  Helicoidales:   Estas bacterias presentan forma de espiral, similar a una hélice. Cuando son rígidas se les denomina espirilos, y cuando son flexibles se les llama espiroqueta. Hay un tercer grupo llamado Vibrio, que se caracteriza por no tener forma de espiral, sino curva.  curva.  

 

3.4. Contaminación alimentar alimentaria ia con las bacterias Las bacterias son más conocidas en la contaminación alimentaria, son los más habituales y los más estudiados. Las bacterias pueden causar infección e intoxicación. La infección se produce por la ingesta de alimentos contaminados con bacterias vivas que entran en el huésped y provocan la enfermedad. La intoxicación, en cambio aparece cuando se ingieren alimentos que antes se han contaminado con bacterias que producen toxinas, y estas últimas son las que causan la enfermedad Salmonella, Campylobacter, Clostridium, perfringens, Bacilluscereus, Staphylococcus aereus.Listeria, Monocitogenes, Eschericchiacoli. 3.5. Importanci Importancia a ecológica y económica de las bacterias Las bacterias son de importancia en la naturaleza. Algunas de ellas cuentan con una actividad enzimática intensa que puede aprovecharse en las industrias de fermentación. Las bacterias son los agentes de las fermentaciones y putrefacciones que transforman las materias orgánicas en gases y sustancias inertes aptas para reincorporarse al ciclo vital, además fijan el gas atmosférico, enriquecen el suelo en nitrógeno y de este modo, proporcionan a los vegetales algunos alimentos inorgánicos que les son indispensables para el desarrollo. 3.6. Método tinción de Gram Lugol:   Es una disolución de yodo molecular y yoduro potásico en agua Lugol: destilada, destilad a, Se emplea en

microbiologí microbi ología a en la tinción de Gram para

retener el colorante cristal violeta. Cristal de violeta:  violeta:   son mezclas de: N-tetra, N-Penta y N-hexametil prosanilinas.se utiliza como colorante para determinar las morfologías bacterianas para Gram positivo y Gram negativo. Safranina:   La safranina O es un colorante biológico también conocido Safranina: como di metil safranina y rojo básico 2, se utiliza en la Tinción de Gram para proporcionar un color violeta más intenso a las bacterias Gram+ y tiñe de rosa a las bacterias GMétodo:   Se Método: Se e enciende nciende el mechero bu bunsen nsen y a cont continuación inuación se esteriliza el aza de siembra y Se toma una muestra de la colonia dentro del campo estéril y se ubica en el portaobjetos, luego se tiñe con cristal de violeta, y se deja en reposo durante un minuto pasado el tiempo se lava con agua

 

y se flamea

para de después spués teñir con Lugol, duran durante te un minuto se llava ava

con alcohol-acetona. A continuación se tiñe por última vez con safranina por un minuto, y se lava n nuevamente uevamente con agua, finalmente se flamea y se observa al microscopio este procedimiento se realiza con todas las muestras. (Reategui, muestras.  (Reategui, 2018)  2018)  3.7. Placas Petrifi Petrifilm lm para Recuento de formadores de colonias Las Placas Petrifilm para Recuento de Aerobios Totales, son un medio de cultivo listo para ser empleado, que contiene nutrientes del Agar, se utilizan para el recuento de la población total existente de bacterias aerobias en productos, superficies, etc.

Imagen1:E.coli

Las Placas Petrifilm EC para el Recuento de E.coli/Coliformes contienen nutrientes de Bilis Rojo-Violeta, Cerca del 95% de las E. coli producen gas, representado por colonias entre azules y rojo-azules asociadas con el gas atrapado en la Placa Petrifilm Petrifilm EC. Fórmula para realizar conteo de colonias. En un cultivo cuando vemos mayor cantidad de formadores de colonias, en placa petrifilm se selecciona al azar 3 o 4 cuadrados tal como se observa en imagen 1 y 1 y luego se realiza los conteos de dicho cuadros y es dividido entre los cuadros seleccionados y multiplicado por la cantidad de cuadros existentes en una placa petrifilm y las unidades en MNPC (Muy numerosos para contar)  contar)   (Mora, 2018)

 =

             

       (Mnpc) 

 

3.8. Observaci Observación ón microscópica Tinción Gram positivo y n neg egativo ativo Imagen fuente (UNIA- (Reategui, 2018) Muestr 

imagen image n

Tipos de Gram

color

forma

a Cultivo

cocos Gram -

-

cultivo

bacilos Violeta oscuro

Gram +

cultivo

cocos Gram -

Rojo oscuro

cultivo Gram-

Morado -rojizo

Hongo

Se podían presentar cocos, diplococos y bacilos. Tiene forma de hifas o micelios tubulares

Imagen 1.La imagen es visualizada con microscopio a 1.4x/0.1 RP se observa la cantidad de cocos pero no se visualiza la coloración es Gram –  –   Imagen 2.se visualiz visualiza a a

1.4x/ 1.4x/0.1 0.1 RP RP se observ observa a la coloración violeta

oscuro es de Gram + Imagen 3.se visualiza una coloración rojiza oscura se observa cocos y otros más a 10x/1.25 RP OIL es de Gram  –  –   Image magen n 4. Se visualiza un una a coloraci colora ción ón

morad morado o roji rojiza za

se pod podrían rían

presentar cocos baci bacilos los diplococos es de Gram Gram –  –,E.coli ,E.coli Imagen 5. Se observa de cu cultivo ltivo de hongo hongo y se observa los ffilamentos ilamentos en forma de micelios o hifas a 100x/1.25 RP OIL

 

IV. Materi Materiales ales y métodos 4.1. Materiales Para esta práctica no se considera materiales de laboratorio, excepto de laptop, celular y placas de petrifilm (imágenes). 4.2. Metodología El docente de la práctica por aula virtual menciono el uso y el manejo de placas petrifilm y así mismo el recuento de colonias, y para finalizar la práctica observamos los videos tutoriales y las informaciones de fuentes bibliográficas etc. V. Resultados Las bacterias bacteri as que dan col coloraci oración ón

violeta o azu azull oscura, se les llama

bacterias Gram positivas y pueden ser uno de ellos:   Bacillus anthracis, Clostridium, Streptococcus, Staphylococcus, Enterococcus. Las bacterias que dan coloración roja o rojiza se les llama bacterias Gram negativas y pueden ser uno de ellos: Escherichiacoli, Klebsiella, Salmonella, Legionella, Enterobacter. Las bacterias Gram positivas, tienen la pared celular de grosor conformado 90% de peptidoglicano que retiene el cristal de violeta, en cambio las bacterias Gram negativas está conformado de membrana externa con proteínas lipopolisacaridos e interno un pequeño de peptidoglicano. Las placas petrifilm son cultivo con nutrientes de agar, listos para ser empleados y las marcas establecidas para recuento recuento de colon colonias. ias. El método tinción de Gram utiliza los siguientes sustancias químicas: cristal de violeta, lugol, alcohol acetona y safranina.

 

  VI. Discusiones (et.al, 3/3/2016)Dentro 3/3/2016)Dentro de su informe plantea que las bacterias tienden a clasificarse de acuerdo a su pared celular de peptidoglicano, efectivamente es cierto pero en comparación con el autor   (Lopez Arellano , 2010)las 2010)las bacterias para su debido clasificación debe presentar una pared celular sana, caso contrario si sufre daño de la pared u otra cosa se vuelve Gramnegativo o Gram positivo. Dos autores tienen toda la razón pero para clasificar se requiere la coloración de las bacterias. (carbajal, 2015)El 2015)El método tinción de Gram no es fiable si los medios de cultivo son pobres en nutrientes, para salir de las falencias revisamos el fuente del (Reategui, 2018)El 2018)El método tinción de Gram o esporulado es fiable siempre y cuando si los cultivos no son tratados con antibióticos ya que se degradan los peptidoglicanos de pared celular, realmente dos autores coinciden de alguna forma pero para asegurar el método tinción mayormente se requiere un medio de cultivo estéril. (Reategui, 2018)Todo 2018)Todo el cultivo tratado con antibióticos químicos como penicilina mata la presencia de Gram negativa y positiva. Sin embargo  embargo  (carbajal, 2015)  2015)  especifica que las Gram negativas no son efectos con penicilina, pero Gram positivas mueren con penicilina. Efectivamente las negativas no mueren por la presencia de lipopolisacaridos en cambio positivas muere ya que el antibiótico bloquea la formación de enlaces peptídicos.   peptídicos. Según (Mora, 2018) Las placas petrifilm son medios de cultivos listos para realizar la incubación microbiana y el conteo total de colonias propagadas en el medio. medio. En mi opinión personal estoy de acuerdo que las placas petrifilm son cultivos ya listos para cultivar microbiana, sin embargo muchas veces no se llega al conteo total de colonias por la cantidad de sobrepoblación. Bajo estos problemas según el ingeniero D. Estacio  Estacio  mencionaba que los microrganismos pobladas en mayor cantidad, muchas veces no son contables y para ello se aplica una formula Mnpc.

 

  VII. Conclusión Esta práctica damos por concluido cumpliendo con los objetivos propuestos, en la página de resultados hemos resaltado las clasificaciones de bacterias según las coloraciones con el cristal de violeta, así mismo las diferencias de Gram negativas y positivas por el contenido de peptidoglicanos. Las bacterias negativas y positivas se mencionan en dicha página, así mismo se ha investigado las sustancias químicas que se utiliza y por último la manera de realizar el conteo de las colonias en un cultivo, todas informaciones y los resultados resul tados

son obtenidos de llos os informes informes ex experimentales perimentales e investiga investigacio ciones nes

realizadas como se cita en el marco teórico, de esta manera la practica queda por concluida. VIII. Bibliografía

  ANONI ANONIMO. MO. (201 (2019). 9). IDENTIFICACION DE BACTERIAS TINCION DE GRAM.  GRAM.   practica,, UN practica UNIIVERSIDAD CA CATO TOLI LICA CA DE D E CUENCA, cu cuenca. enca.



  carbajal, T. a. (2015). Identificacion de microorganismos con base en tecnicas Bacteorologicas tincion de gram.  gram.  INFORME EXPERIMENTAL, DGETI, mexico .



  Mora, x. (1 de 5 de 2018). vetacunicultura-patologia. vetacunicultura-patologia. Recuperado  Recuperado el 11 de 02 de 2021, de https://seleccionesavicolas.com/pdf-files/2012/2/6536diferenciando-bacterias-gram-y-gram.pdf



  Reategui, L. c. (2018). OBSERVACION DE BACTERIAS GRAM POSITIVO Y GRAM NEGATIVO EN EL LABOARTORIO DE MICROBIOLOGIA.  MICROBIOLOGIA.   practica,, u practica univ niversid ersidad ad naci nacional onal intercultu intercultural ral de la amz amzonia, onia, ucay ucayali, ali, pucall pucallpa. pa.

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