INFORME 3

PRACTICA N° 03 y 04 PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVOS, CONTEO DE BACTERIAS VIABLES Y TINCION GRAM

I.

OBJETIVOS I.1. Obje!"# $e%e&'( •

Preparac Preparación ión de medios medios de cultiv cultivo o a partir partir de Mac Conkey Agar y a  partir de leche de tigre “ceviche”.

I.). Obje!"#* e*+e-!#* •

Realiza Realizarr el conteo conteo de bacteri bacterias as viable viabless en una muestra muestra como como un

•

mtodo para evaluar el crecimiento microbiano. Cono Conocer cer el !und !undam amen ento to de colo colorac ració ión n de las las bacte bacteria riass para para ser  observadas a travs del microscopio.

II.

MARCO TEORICO II.1 II.1.. Me/! Me/!#* #* /e C( C(!" !"#* #* "no "no de los los sist sistem emas as m#s m#s impo import rtan ante tess para para la iden identi ti!i !ica caci ción ón de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias arti!iciales preparadas en el laboratorio. $l material alimenticio en el %ue crecen los microorganismo microorganismoss es el los los micr microo oorg rgan anis ismo moss es el

Me/!# /e C(!"# y el crecimiento crecimiento de

C(!"#. Para Para %ue %ue las las bacte bacteri rias as crezca crezcan n

adecuadamente en un medio de cultivo arti!icial& ste debe reunir una serie serie de condic condicion iones es tales tales como' como' temper temperatur atura& a& grado grado de humed humedad ad y  presión de o()geno adecuado& as) como un grado correcto de acidez o alcalinidad. "n medio de cultivo debe contener los nutrientes y !actores de crecimiento necesarios y debe estar e(ento de todo microorganismo contaminante. Me&2,

)00)

II.1.1. II.1.1. C('*!!' C('*!!'!% !% De Me/!#* Me/!#* De C(!" C(!"#5 #5 Página 1

*eg+n su estado !)sico'

L-6!/#*5 "sualmente se denominan caldos ya %ue contienen los nutrientes disueltos en agua. Permiten obtener suspensiones con un elevado n+mero de microorganismos. $,. Caldo nutritivo.



S(!/#*5 *e pueden preparar a partir de medios l)%uidos a los cuales se les a-aden agentes solidi!icantes como agar& gelatina o s)lica gel.

*e

utilizan

con

!recuencia

en

el

aislamiento

y

mantenimiento de los microorganismos en el laboratorio. $,. Agar nutritivo. C('"e((, L., 177).

II.).

C#%e# B'e&!'%# $l crecimiento de una población bacteriana puede ser entendido desde di!erentes perspectivas y de acuerdo a stas se puede llegar a determinar  la medida del crecimiento mediante diversas metodolog)as. $l conteo bacteriano se-ala la magnitud de la población total bacteriana. $n ese sentido se puede determinar por diversas tcnicas %ue se basan en algunos de los siguientes tipos de medida' cuenta celular directamente al microscopio o mediante un contador electrónico de part)culas o indirectamente con la cuenta de colonias/& masa celular en !orma directa  pesando el contenido celular del nitrógeno o indirectamente por  turbidimetr)a& proporcional al n+mero de clulas/ y actividad celular  indirectamente relacionando el grado de actividad bio%u)mica al tama-o de la población bacteriana/. O&e$', Y8 9e"e/# :, 1771.

II.).1. C#%e# E% P(''* Pe&!

Página 2

$s el mtodo m#s usado para el conteo de bacterias. 0as muestras del cultivo de bacterias son distribuidas en Placas Petri %ue son contenedoras de agar  alimento de las bacterias/. $s de suponerse %ue cada clula  se dividir# en sus m+ltiples alrededores para producir  colonias separadas en el agar. Cada clula es llamada unidad !ormadora de colonias "1C/. 2espus de la incubación& el n+mero de colonias se re!le,ar# en el n+mero de clulas "1C originalmente  presentes. $s importante considerar un n+mero limitado de colonias  pues de no ser as)& stas pueden sobre poblarse y di!icultar el conteo de las mismas. $l conteo se !acilita utilizando un contador de colonias. $ste mtodo es deseable por%ue arro,a el total de clulas viables sólo clulas vivas/3 en contraste con el conteo microscópico y el conteo de peso seco. "na desventa,a radica en el tiempo %ue re%uiere para producir las colonias& ya %ue se necesitan como m)nimo veinticuatro horas o m#s. Por otra parte& no es cien por ciento !iable  por%ue generalmente las colonias crecen unidas en cadenas o en grupos. D!# y BBL, )003.

II.3.

T!%!% /e G&'; *eg+n Pe/&# :. M'e#* )## 7C. Prats& :;;NC durante K horas.

= = Al !inal del periodo de incubación& cuenta las colonias en cada placa Petri& con el mtodo previamente e(plicado en clases.

= = = Anota los resultados de cada dilución y calcula el n+mero promedio de clulas por mililitro de muestra en la muestra original. $l n+mero de colonias obtenidas se multiplica por el rec)proco del !actor de dilución determinando as) el n+mero original de bacterias. Por  e,emplo si se contaron >: colonias en la dilución B; 8@ B'B;;;/ se multiplica >: O B;;;. B;;; es el rec)proco de B; 8@/.

= =

P&#e/!;!e%# +'&' (' /e !%!% $&'; $(traer de una colonia las bacterias y sumergir en una gota de agua sobre la porta ob,etos. *e de,a secar cerca al mechero para luego pintar. *e pinta con cristal violeta azul/ por B< min. *e lava con abundante agua. *e agrega lugol como un !i,ador *obre eso se lava con el alcohol 5