Informe 2 Microbiologia - Preparación de Medios y Siembra de

 

PRÁCTICA N°02 “Año del Bicentenario del Perú: 200 años de Independencia ” 

Universidad Nacional del Callao Escuela Profesional de Ingeniería Química

Informe de Laboratorio de N°02 PREPARACIÓN DE MEDIOS Y SIEMBRA DE BACTERIAS    Asignatura: Laboratorio de Mi Microbiología crobiología 

•

 

Grupo: 90 G 

 

Docente: Herrera Sánchez Sonia Elizabeth Integrantes: 

•

•

 

•

❖ Adco

Soto, Kiara Odaliz 

❖ D`Angelo ❖ Huamán

Natalin, Alexander

Trujillo, Carol Yacqueline 

❖ López López Murga, Félix Brolin 

Bellavista, setiembre del 2021

 

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PREPARACI ÓN DE MEDIOS Y SIEMBRAS DE BACTERIAS

ÍNDICE I.INTRODUCCION ................. ................................. ................................ ................................. ................................. ................................. ...................... .....  3 II. II.  OBJETIVOS ................................. .................................................. ................................. ................................. .................................. ........................... ..........  4 III. III.  MARCO TEÓRICO ............................... ............................................... ................................. ................................. ................................. ................... ..  5 3.1. 

Medio Medioss de cu cultltiv ivo o ............................... ............................................... ................................. .................................. ........................... ..........  5 

3.2. 

Tip Tipos os de Medio Medioss de cul tivo ti vo ................................ ................................................. .................................. ........................... ..........  

3.3. Utilización

de los Medios de Cultivo ...............................................................  

3.4. Preparación

de los Medios de cultivo ............................................................  

IV.  IV. EQUIPOS Y MATERIAES .............. .............................. ................................. ................................. ................................. ......................... ........ 9 V. Procedimiento Experimental .............................................................................. 10

RESULTADOS DOS .................................. ................................................. ................................. ................................. ................................. .................... ... 13 VI.  VI. RESULTA VII.  DISCUSION ............... VII. ............................... ................................. ................................. ................................. .................................. ......................... ........ 16 VIII. RECOMENDACIONES ................ VIII.  ................................. ................................. ................................. ................................. ...................... ...... 17 IX.  IX. REFE REFERENC RENCIAS IAS BIBLIOGRAFICAS BIBL IOGRAFICAS ............................... ............................................... ................................. ....................... ...... 18

 ANEXOS ................................. ................................................. ................................. ................................. ................................. ............................... .............. 19  X. ANEXOS

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I.

INTRODUCCIÓN

En el presente informe hablaremos acerca de los medios de cultivos y siembra de bacterias cuando nos referimos a los medios de cultivos debemos de saber que son una mezcla de nutrientes y algunos otros componentes que crearán las condiciones necesarias para que los microorganismos puedan desarrollarse. Estos medios son de gran importancia en el laboratorio de microbiología, además la diversidad de estos es tan grande que la variedad de medios de cultivo es enorme, ya que las bacterias con las cuales trabajamos son organismos adaptables a diferentes sustratos, por lo que debemos tener un control en su fabricación, preparación, conservación y uso para estos medios de cultivo que trabajaremos. No existe un medio de cultivo universal adecuada para todos ellos, por ese motivo se utilizan diferentes tipos de medios, por ejemplo, existen medios de cultivo de forma líquida o en forma sólida, en el laboratorio de microbiología se utilizará mas el medio de cultivo sólido, y para preparar este medio de cultivo, se partirá parti rá de un medio líquido al cual le añadiremos un agente solidificante como el agar, la gelatina o la silicagel. Existe diferentes tipos de constituyentes habituales de los medios de cultivo como por ejemplo el agar, que ya fue mencionado anteriormente que tenía como función la solidificación del cultivo, también está los extractos, los más utilizados en el laboratorio son, el extracto de carne, de levadura y de malta, también esta las peptonas, también los sistemas amortiguadores, para mantener el pH dentro del rango optimo del crecimiento bacteriano, Agentes reductores con el objetivo de crear en los medios de cultivo condiciones que permitan el desarrollo de los gérmenes, etc. Para su la preparación de estos medios de cultivos también debemos de tener en cuenta algunos aspectos importantes como por ejemplo, controlar el tiempo y la temperatura adecuada para su esterilización, esto detallaremos más adelante, los medios de cultivos también se pueden clasificar de acuerdo a su naturaleza ser sintéticos definidos, también podría como ser naturales o complejos, pueden de acuerdo al uso delomedio podrían ser usados medio de enriquecimiento, selectivo o diferenciales, la preparación de este medio de cultivo también es muy importante para que la bacteria se pueda reproducir. r eproducir.

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II.

OBJETIVOS

●  Conocer los d diferentes iferentes tip tipos os de medios de cultivo ex existentes istentes para el

crecimiento de microorganismos en el laboratorio. ●  Relacionar y c comprender omprender la composición de los dive diversos rsos medios de cultivo con sus características y aplicaciones. loss diferentes pasos a seguir en la preparación de un medio ●  Identificar lo de cultivo. identificar ar la mu muestra estra de queso a estudiar, para sabe saberr si es apta ●  Poder identific o no para el consumo humano.

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III.

MARCO TEÓRICO 

3.1 MEDIOS DE CULTIVO

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos. La diversidad metabólica de estos es tan grande que la variedad de medios de cultivo es enorme, no existiendo un medio de cultivo universal adecuado para todos ellos, ni siquiera refiriéndonos a las bacterias con exclusividad. CONSTITUYENTES HABITUALES HABITUALES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO A continuación, se da una idea general sobre algunos de los constituyentes habituales de los medios de cultivo: ●   AGAR

Se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo. En el agar bacteriológico el componente dominante es un polisacárido que se obtiene de ciertas algas marinas y que presenta la indudable ventaja de que, a excepción de algunos microorganismos marinos, no es utilizado como nutriente. nutriente. Un gel de agar al 11-2% -2% se licua alrededor de los 100ºC y se gelifica alrededor de los 40ºC, dependiendo de su grado de pureza. EXTRACTOS.

● 

Su preparación consiste en que ciertos órganos o tejidos animales o vegetales (p.e. carne, hígado, cerebro, semillas, etc.) son extraídos con agua y calor y posteriormente concentrados hasta la forma final de pasta o polvo. Estos preparados deshidratados son a menudo empleados en la elaboración de los medios de cultivo. Los más utilizados son el extracto de carne, de levadura y el de malta. ●  PEPTONAS

Son mezclas complejas de compuestos orgánicos, nitrogenados y sales minerales, que se obtienen por digestión enzimática o química de proteínas animales o vegetales 5 UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO  CALLAO 

 

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(soja, caseína, carne, etc.). Las peptonas son muy ricas en péptidos y aminoácidos, pero pueden ser deficientes en determinadas vitaminas y sales minerales. ●  FLUIDOS CORPORALES

Con frecuencia es necesario añadir a los medios de cultivo de algunos patógenos sustancias como sangre completa, sangre desfibrilada, plasma o suero sanguíneo, sobre todo para conseguir el primer aislamiento a partir del hospedador. La sangre no puede ser esterilizada, y por tanto debe de ser obtenida en condiciones asépticas directamente de un animal sano, y adicionada al medio de cultivo después de que este haya sido auto clavado. Los fluidos corporales no solo aportan factores de crecimiento, sino que también aportan sustancias que neutralizan a inhibidores del crecimiento de algunas bacterias. Un ejemplo podría ser la catalasa presente en las células sanguíneas destruye el peróxido de hidrógeno que algunas bacterias que no poseen esta enzima acumulan como producto del metabolismo del oxígeno. ●  SISTEMAS AMORTIGUADORES

Para mantener el pH dentro del rango óptimo del crecimiento bacteriano a veces, es necesario añadir algunos componentes componentes al medio de cultivo. Debido a que la mayoría de las bacterias son neutrófilos, se suelen emplear sales del tipo de los fosfatos disódicos o dipotásicos u otras sustancias como las peptonas para prevenir la desviación del pH. ●  INDICADORES DE PH

Con el objeto de poder detectar variaciones en el pH debido a fermentaciones u otros procesos, se hace necesario a veces añadir indicadores ácido-base que nos lo indiquen. ●   AGENTES REDUCTORES REDUCTORES

Con el objetivo de crear en los medios de cultivo condiciones que permitan el desarrollo de los gérmenes microaerófilos ò anaerobios se añaden estos agentes reductores siendo, los más empleados la cisteína y el tioglicolato entre otros.

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●   AGENTES SELECTIVOS SELECTIVOS

La adición de determinadas sustancias a un medio de cultivo puede convertirlo en selectivo. Así, por ejemplo, la adición de cristal violeta, sales biliares, azida sódica, telurito potásico, antibióticos, etc., a la concent concentración ración adecuada hará que actúen como agentes selectivos frente a determinados microorganismos. 3.2 TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO ●  MEDIOS GENERALES O NUTRITIVOS

Son aquellos que permiten el crecimiento de una gran variedad de microorganismos. Como por ejemplo el agua de peptona y el caldo de tripticasa-soja. ●  MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO

Son aquellos que favorecen el crecimiento de un determinado tipo de microorganismo sin llegar a inhibir totalmente el crecimiento de los demás. ●  MEDIOS SELECTIVOS

Son aquellos que permiten el crecimiento de un tipo de microorganismos determinado, inhibiendo el desarrollo de los demás. Por ejemplo, el agar MacConkey contiene cristal violeta, que inhibe el crecimiento de bacterias grampositivas y hongos, facilitando el desarrollo de las bacterias gramnegativas. ●  MEDIOS DIFERENCIALES

Son aquellos en los que se pone de manifiesto propiedades que un determinado tipo de microorganismos posee. 3.3 UTILIZACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

En muchos campos de la ciencia, se utilizan de manera directa o indirecta los medios de cultivo. Sus principales aplicaciones son: ❖ 

Diagnóstico clínico en medicina human humanaa y ve veterinaria terinaria -

Detección de microor microorganismos ganismos patógenos a partir de muest muestras ras de fluidos, tejidos y excretas y sus toxinas causantes de enfermedades. 7

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❖ 

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Industria farmacéutica -

Cultivo masivo de microorganismos productores de metabolitos (proteínas, factores de crecimiento, aminoácidos, etc.)

-

Control de calidad (c (control ontrol ddel el proces proceso, o, mat materias erias primas primas,, prod productos uctos terminados, agua, etc.)

❖ 

Industria alimenticia - Cultivo masivo de microorganismos productores de sustancias nutritivas y alimentos (proteínas y compuestos saborizantes)

❖ 

❖ 

Control del medio ambiente -

Control de las aguas y fuentes de abasto.

-

Control ambiental.

-

Control residual.

Otras indust industrias rias y ssectores ectores pú públicos blicos ( quí química, mica, agricultura) -

Control masivo de microorganismos. (control de polímeros, azúcares,

-

entre otros) Control de calidad ( control de proceso, materias primas, etc.)

3.4 PREPARACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

En la actualidad, la mayoría de los medios de cultivo se encuentran comercializado comercializadoss bajo la forma de liofilizados a lo que es preciso rehidratar. En estos casos la preparación del medio de cultivo se reduce sencillamente a pesar de la cantidad deseada del mismo y se disuelve en agua destilada siguiendo las instrucciones del fabricante. Las sustancias termolábiles, se esterilizan por la filtración y se añade al resto de los componentes después de que estos hayan sido previamente esterilizados en la autoclave y enfriados a temperatura ambiente 40 - 50ºC si se trata de medios con agar. Antes de su esterilización con los medios líquidos se reparten en distintos recipientes. Si es un medio sólido y se ha distribuido en tubos o matraces será necesario fundir el agar en Baño Maria u horno microondas, una vez fundido y homogenizado, se distribuye en caliente a los tubos o matraces se tapa y se esteriliza en la autoclave.

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IV.

EQUIPOS EQUIPO S Y MATERIALES 

A) PREPARACIÓN DEL MEDIO -

Balanza

-

Espátula

-

Vaso precipitado

ESTUFA 

Agitador magnético -

Probeta

-

Bote vacío

-

Agua destilada

B) SIEMBRA DE AGENTES MICROBIANOS -

Asa de siembra

-

Mechero de bunsen

-

Placas de medio sólido

-

Agente microbiano

-

Estufa

-

Autoclave

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V.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

MEDIO DE CULTIVO SOLIDO

PREPARACIÓN DE MEDIO DE CULTIVO LB EN LABORATORIO (200ml) Ingredientes: - Bactotriptona 10g - NaCl 5g - Extracto de Levadura 5g - Agua destilada hasta 1L - Agar 15g Realizaremos una forma universal de preparación del medio de cultivo tipo LB. ❖ 

Pesamos en una bal balanza anza cada comp componente onente (bactot (bactotriptona, riptona, NaCl, ex extracto tracto de levadura) del medio luego lo colocamos en un vaso de precipitado. Posteriormente añadimos un volumen de agua destilada inferior al volumen total.

❖ 

Colocamos a m mezcla ezcla en el agit agitador ador magnétic magnéticoo hasta co completar mpletar la disolu disolución ción de sus componentes, una vez disuelto pasamos el contenido del vaso de precipitado a una probeta y completamos el volumen restante.

❖ 

Pasamos el conteni contenido do a un bote de vidrio ccon on tapón de rosc roscaa y le colocamos una cinta adhesiva rotulada con el nombre del medio y su fecha de preparación

❖ 

Cuando es esta ta cint cintaa tome coloración oscura po podremos dremos decir que el material ha sido esterilizado.

❖ 

Introducimos los bbotes otes en el autoclave qu quee alcanzara una tempera temperatura tura de 120 °C

❖ 

Una vez esterilizado esperamos cierto tie tiempo mpo hasta que se eenfrie nfrie y sea posible manipularlo.

❖ 

Para la preparación del medio sólido, utilizaremos las placas Petri y pa para ra ello es necesario añadir agar al medio de cultivo, comúnment comúnmentee se utiliza 15g de agar por litro de solución, y como estamos preparando 200 ml de solución le corresponde 3g de agar.

❖ 

Finalmente vert vertemos emos el medio en placas P Petri etri con cuidad cuidadoo evitando llaa formación de burbujas y se espera a que las placas solidifiquen para su correcto uso.

El medio cultivo lb podemos adquirirlo ya preparado en medio líquido 10 UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO  CALLAO 

 

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MEDIO DE CULTIVO AGAR NUTRI NUTRITIVO TIVO PARA STAPHYLOCOCC STAPHYLOCOCCUS US AEREUS

El agar nutritivo es un medio un medio de cultivo usado normalmente como rutina para todo tipo todo  tipo de de bacteria.  bacteria. Es  Es muy útil porque permanece sólido incluso a relativamente altas temperaturas. Además, el crecimiento bacteriano en este agar este agar lo hace en la superficie, por lo que se distinguen mejor las colonias las  colonias pequeñas. Composición del agar nutritivo El agar nutritivo contiene normalmente (p/v) (p/v):: • 

0,5% de peptona; de peptona;  

• 

0,3% de extracto de carne/extracto de levadura;

• 

1,5% de agar; de agar;  

• 

0,5% de cloruro de cloruro de sodio;  sodio; 

• 

agua destilada;

• 

pH casi neutro (6,8) a 25 25°C. °C.  

Preparación: ▪  Para un litro de agar nut nutritivo ritivo se debe pes pesar ar 31 gr del medio desh deshidratado. idratado. Se colóca en una fiola y se disuelve en un litro de agua destilada. Después de 5 minutos de reposo, se calienta sobre una fuente de calor y se mezcla constantemente constanteme nte hasta que hierva por 1 o 2 minutos. ▪ 

Luego se coloca la fiola en un aut autoclave oclave y se est esteriliza eriliza a 121°C po porr 20 minutos.

▪ 

Culminado el tiempo se saca del autoc autoclave lave y se sirve en placas de Pet Petriri estériles, utilizando para ello una campana de flujo laminar o el mechero

bunsen. ▪  Si las placas de Pet Petriri son desechables (plásticas) el medio debe distribuirse cuando el agar tenga una temperatura aproximada de 50°C, para evitar que las mismas se deformen por el calor excesivo. ▪ 

Dejar solid solidificar ificar y guardar en un portaplacas de fforma orma invert invertida ida y refrigerar eenn nevera a 2-8°C hasta su uso.

▪ 

Las pl placas acas ddeben eben atemperarse antes de sser er sembrad sembradas. as. LLas as plac placas as de agar nutritivo no deben utilizarse si están contaminadas o deshidratadas.

▪ 

El pH del me medio dio prepar preparado ado ddebe ebe qquedar uedar ajus ajustado tado a 7,3 ± 0,2.

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MEDIO DE CULTIVO AGAR ENDO PARA COLIFORM COLIFORMES ES

MEDIO DE CULTIVO AGAR ENDO Composición del agar Endo ✓  ✓ 

digerido péptico de ttejido ejido anim animal al 10, 10,00 g Lactosa 10,0 g ● Fosfato dipotásico 3,5 g

✓ 

Sulfito sódico 2,5 g 12 ✓  Fucsina básica 0,5 g ✓ 

Agar-agar 15,0 g

✓ 

pH final: 7,5 ± 0,2

Preparación: Pesamos 41,5 g del medio deshidratado y disolver en 1 litro de agua destilada. Calentamos la mezcla con agitación frecuente hasta que el medio se disuelva por completo. Esterilizamos en autoclave a 121 ° C, durante 15 minutos. Cuando lo saquemos del autoclave, déjamos enfriar a una temperatura aproximada de 45- 50 ° C, agitamos la mezcla para homogeneizar antes de servir. Vertemos 20 ml en placas de Petri estériles. Dejamos que las placas se solidifiquen. Es muy importante proteger el medio preparado de la luz directa. El pH del medio debe estar entre 7,2 y 7,6 y el color del medio preparado es rosa pálido. SIEMBRA DE QUESO FRESCO Usamos los respectivos medios para nuestros microorganismos Coliformes y Staphylococcus Staphylococc us aureus Utilizamos 10 g de queso fresco, lo llevamos a 75 ml de solución peptonada y procedimos a realizar diluciones seriadas Posteriormente realizamos las siembras en superficie en el medio de cultivo Finalmente, las placas cultivadas fueron aisladas por 48 horas a 37 ºC, también estas bacterias crecen a temperatura ambiente

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RESULTADOS 

VI.

CALCULOS Y RESULTADOS Cuando tenemos una muestra solida es necesario hacer una dilución para luego recién proceder a hacer la siembra . siembra  . 75ml agua 10g de queso

FACTOR DE DILUCION  =

 

=

85

= 8.5 

10

El volumen inicial será de 0.5ml  =  ×    0.5 5 × 8.5 8.5 = 4.25 25   = 4.25 4.25  

Conteo de microorganismos AGENTE MICROBIANO COLIFORMES Dilución 1 (Considerando 3.106UFC/gr)  ×  =  ×    3 × 1 0

 × 0.5 =  × 4.25 4.25  

 = 35 352 2.94 .941 × 10

 

 

Dilución 2  ×  =  ×    35 352. 2.94 941 1 × 10  

 

× 0.5 =  × 4. 4.25 25 

 = 41 415 5.22 .224 × 10



 



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Dilución 3  ×  =  ×    41 415. 5.22 224 4 × 10

 

× 0.5 =  × 4. 4.25 25  

 = 488.49 × 10



 

Dilución 4  ×  =  ×    48 488. 8.4 49 × 10

 

× 0.5 =  × 4.25 4.25  

 = 57 574. 4.70 705 5

 

 

Dilución 5  ×  =  ×    574.705

 

× 0.5 =  × 4.25 4.25 

 = 67 67.6 .61 1

 

 

Para el agente microbiano coliformes El rango máximo es entre 500-1000 Por tanto, tomamos nuestra dilución numero 4

 = 57 574. 4.70 705 5

 

 

 =  ×    



= 57 574. 4.70 705 5 0.1  × 8. 8.5 5

 = 29.9 × 10

 

 

 

Resultado  El resultado de la siembra de coliformes es 29.9 × 10    de concentración

Por tanto, diremos que nuestra muestra no es apta para el consumo humano porque supera los LPM de la norma de lácteos.  AGENTE MICROBIANO MICROB IANO STA STAPHYLOCOCCUS PHYLOCOCCUS A AEREUS EREUS CONSIDERANDO CONSI DERANDO LA MISMA CONCEN CONCENTRACION TRACION INICIAL 14 UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO  CALLAO 

 

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Dilución 1 (Considerando 103 UFC/gr)  ×  =  ×    10

 

× 0.5 =  × 4.25 4.25 

 = 11 117. 7.64 64



 



Dilución 2  ×  =  ×    

117.64



× 0.5 =  × 4.25 4.25  

 = 13 13.8 .84 4

 

 

Dilución 3  

 × = × 

13.84

 







× 0.5 =  × 4. 4.25 25 

 = 1.62 1.6283 83

 

 

Para el agente microbiano STAPHYLOCOCCUS AEREUS  El rango máximo es entre 10-100 10 -100 Por tanto, tomamos nuestra dilución numero 2  = 13 13.8 .84 4

 

 

 =  ×    × 8.5   = 13.84 × 0.1   = 9.99 × 10

 

 

Resultado

El resultado de la siembra de STAPHYLOCOCCUS AEREUS es 9.99 × 10

 

  de

concentración Por tanto, diremos que nuestra muestra no es apta para el consumo humano porque supera los LPM de la norma de lácteos. 15 UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO  CALLAO 

 

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VII.

DISCUSIÓN

  De las 12 mu muestras estras de E. coli, observaremos que ha hayy 8 muestras que

•

equivalen a 66.66 % de muestras con valores muy altos de E. coli, observamos que las de 10 - 100 NMP/g son 3 muestras (%) y 5 muestras (41.66%) con valores de > 100 NMP/g de E. coli. En este caso debemos tener presente que como requisito microbiológico se permite de 3 - 10 NMP/g de E. coli.   En cambi cambio, o, pa para ra las muestras de Sta Staphylococcus phylococcus aureus, observamos que, de

•

las 12 muestras, 8 muestras que representan el 66.66% del total presentan valores altos de S. aureus, así tenemos que 5 muestras presentan valores de 102 UFC/g y 3 muestras que presentan valores de 103 UFC/g, siendo el recuento más alto hallado de 7,4 ≥ 10  (muestra 3 de Panadería). La NTP

202.195:2004, establece establece requisitos microbiológicos no mayores de 10 a 102 UFC/g para Staphylococcus aureus.   Los res resultados ultados obtenidos de los quesos comercializados en los lu lugares gares muestreados en el Cercado del Callao, han presentado condiciones

•

higiénicas muy deficientes y definitivamente no cumplen con las normas sanitarias vigentes (MINSA, 2001), (MINSA, 2008). Por otro lado, podemos decir que los valores elevados de contaminación de las muestras, 60 % de las muestras analizadas contaminadas con E. coli con valores promedios de 4,6 ~ 102 NMP/g y muestras contaminadas con S. aureus que se presentaron en un 69% del total de las muestras y que presentaron valores promedio de 2,6 ~ 103 UFC/g, nos indica que sus valores están fuera de los valores límite establecidos por la NTP 202.195:2004,, por lo que los productos no se presentaban aptos para el 202.195:2004 consumo humano.   Actualmente en el mercado ya ppodemos odemos encontrar medios específicos para

•

distintos microorganismos, y resulta más factible evaluar y preparar los reactivos que se usan para preparar dichos medios de cultivo. En el mercado se disponen de diversas marcas, cuya presentación es en paquetes, que viene con una lámina de plástico y una zona en donde se le adiciona la m muestra. uestra.

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VIII.

RECOMENDACIONES

  Los materiale materialess deben estar correct correctamente amente lilimpios mpios antes de empezar a trabajar y

●

colocarse de forma adecuada para que se facilite su utilización así se evitarán accidentes y se minimizará el riesgo de contaminación.   Identificar los materia materiales les y equipos para ttener ener una correcta pr práctica áctica en el

●

laboratorio.   Todo mat material erial debe ser est esterilizado, erilizado, as asíí como también eess neces necesario ario tener los

●

conceptos básicos de esterilización de cultivos.   Tener en ccuentas uentas las normas de bioseguridad, para prevenir cualquier inc incidente idente o

●

imprevisto a la hora de la práctica.

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IX.

REFER REFERENCI ENCIAS AS BIB BIBLIOGRÁFICAS LIOGRÁFICAS

  Cuervo, A. (2010). Manua Manuall de Prot Protocolos ocolos de Microbiología Ge General. neral. Universida Universidadd

●

de San Buenaventura seccional Cali.   Morales, M. et al (2012). Manual de Microbiología. Departamento de cienc ciencias ias

●

básicas académicas de Biología   Madigan, M. T., J.M. Mart Martinko inko y J. Parker. 2003. Brock Bio Biología logía de los

●

microorganismos. Madrid, España. 10a edición. Editorial Pearson-PrenticeHall.   Prescott, L.M. Ha Harley, rley, J.P. y Klein, D.A. 2004. Microbiología. Madrid, España.

•

5a edición.Mc Graw-Hill Interamericana.

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X.

ANEXOS

Cuestionario 1. ¿Q ¿Qué ué cuidados deben te tenerse nerse a all preparar un medio de cult ivo sól sólido ido en caja de Petri Petri? ? Los cuidados que deben tenerse al preparar un medio de cultivo son los

siguientes: -

Desinfectar con etanol o alguna sustancia volátil la superficie de trabajo.

-

No formar burbujas a la hora de colocar la mezcla en la placa de Petri, esto con

la intención que el microorganismo crezca de forma unificada en toda la placa. -

No agregar agar directamente a la mezcla del medio, primero debemos colocar

el agar y después recién la mezcla. -

Si nnos os ssobró obró medio líquido nosotros podríamos guárdalo, pero debemos agregar

algún antibiótico para evitar el crecimiento de otras bacterias. -

Tenemos que tomar en cuenta que en el aire hay bacteria bacteriass que pueden alojar alojarse se

en los materiales de trabajo para ello debemos usar un mechero bunsen o una campana de flujo laminar.  2. De los siguientes medios, mencionar en qué consiste su capacidad diferencial o sele diferencial selectiva ctiva y qué tipo s de microo rganismos crecen en e ellos? llos? Agar Rosa de Bengala y Agar Papa Dextrosa.

Agar Papa Dextrosa (PDA): Estos son medios de cultivo microbiológico, es el medio más utilizado para el crecimiento de hongos y levaduras que q ue atacan las plantas vivas. Agar Rosa de Bengala: Es un medio de cultivo selectivo ya que impide el desarrollo de microorganismos no deseados, utilizado en el recuento y aislamientos de hongos. Los microorganismos que crecen son específicamente para Fusarium y las levaduras.

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PRACTICA N°02

PREPARACI ÓN DE MEDIOS Y SIEMBRAS DE BACTERIAS

3. ¿C ¿Cuál uál e ess la función de los colorantes e indicadores e en n los medios de cultivo?

Colorantes e indicadores Estas sustancias se utilizan en los medios selectivos y diferenciales. Los colorantes actúan como agentes bacteriostáticos o como inhibidores del crecimiento. Se utilizan principalmente: Fucsina básica, Verde brillante, Verde de Malaquita, Cristal Violeta, Eosina, Azul de Metileno, Tionina, etc. Los indicadores son sustancias químicas que varían de color según el pH del medio. Se utilizan en los medios diferenciales y permiten visualizar, por cambios de color del medio de cultivo o de las colonias, la ocurrencia de distintas reacciones bioquímicas. Indicador Ácido Neutro Alcalino: Rojo Fenol Amarillo , Rojo Fucsia ,Rojo de Metilo , Azul Bromotimol Amarillo ,Fenolftaleína Incoloro .

4. De los medios usados in indica dica cuáles son específicos para mohos y cuále cuáless para bacterias y ¿por ¿por q ué?

Los medios de cultivos que son específicos para las bacterias son:   Agar Plate Count

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  Mcconkey

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  Agar Endo

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  Manitol salado

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  Agar nutritivo

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  Agar XLD   Agar Emb

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  Agar Muller Hinton

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  Salmonella y Shigella

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  Agar SPS, Agar Baird Parker

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Los medios de cultivos que son específicos para los mohos son:   Agar Sabouraud Glucosado

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  Green M.

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La mayoría de los medios de cultivo generales para hongos filamentosos y levaduras contienen peptona, algún hidrato de carbono y agar. 20 UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO  CALLAO 

 

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Dada la composición general de los medios de cultivo para hongos y la temperatura de incubación, las bacterias podrían multiplicarse en estos medios, pues estas bacterias se harían dominantes en el medio, ya que su velocidad de crecimiento es mucho mayor que la de los hongos. Por todo ello es necesario e importante la modificación de los medios para impedir el crecimiento bacteriano. Para impedir este crecimiento, estos medios de cultivo generales se acidifican y/o se añaden antibióticos. 5. Cuando se siembran hongos en medio líquido, describe cómo es el crecimiento con y sin agitación.

Se siembran hongos en medios líquidos cuando se requiere obtener un metabolito a gran escala, ya que los pellets aprovechan los nutrientes y oxigeno del medio de una manera más eficiente. Se pudo observar crecimiento en ambos, sin embargo, el medio que estuvo en constante agitación presento unas agrupaciones de mohos llamada pellets.  6. ¿En qué casos se siembra en medio semisólido y cuáles son las precauciones precaucio nes que se deben tomar?

Estos medios se emplean para estudiar la movilidad de los microorganismos y para favorecer la separación de microorganismos con diferentes requerimientos de oxígeno. Se utilizan para estudiar la motilidad de las bacterias. Tienen un menor porcentaje de agar, por lo que no se solidifican totalmente a temperatura ambient ambiente. e. Ejemplo: Agar MIO, Agar SIM

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7. Anot Anota a la morfol morfología ogía colo colonial nial de un moho y de una bacteria, bacteria, indicando de qué medio lo obtuviste. obtuvi ste.  Asper gillll us f um umig ig atu atuss  As pergi

La textura de las colonias es aterciopelada, afelpada, vellosa o algo plegada, con margen blanquecino o beige. El color inicialmente es blanco virando en aproximadamente siete días a un verde azulado por la producción de conidias. El reverso de la colonia es incoloro.

Escherichia richia coli Esche

Escherichia coli en agar Mac Conkey. Se logran ver colonias aisladas, son colonias medianas, circulares, convexas, bordes redondeados, lactosas positivas lo que les da coloración rosada.

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