Identificacion de Aminoacidos y Proteinas

Identifcación de Aminoácidos y Proteínas Nomb mbr e: Deni s eMor et a Fe c ha : 1 6/ ma y o / 2 01 1

1. Reacción de Ninhidrina Reac Reacci ción ón para para la dete detecc cciión de aminoácidos, actualmente acoplada a sistemas de valoración automát automática ica Tiene Tiene como como objeti objetivo vo detectar y cuantificar cantidades de aminoácidos libres. Los aminoácidos, en general reaccionan con con la ninh ninhid idri rina na cuan cuando do son son cale calent ntad ados os con con un exce exceso so de la misma. Todos los aminoácidos que  poseen un grupo amino libre reacc reaccio iona nan n y form forman an dióxi dióxido do de carbono, amonaco y un aldehdo que contiene un átomo de carbono menos que el compuesto original. !sta reacción da lugar a la form formac ació ión n de un produ product cto o colo color  r  a"ul o p#rpura $que posteriormente  puede ser utili"ado para cuantificar  el aminoácido%. !n el caso de la  prolina, que estructuralmente no  posee el grupo amino libre, sino un grupo imino, la coloración final es amarilla. !l amonaco, la mayora de los polip&ptidos y las protenas pueden desarrollar  colora coloració ción n en esta esta reacció reacción, n, pero pero a difere diferenci nciaa de los aminoácid aminoácidos, os, no libera liberan n '(). La coloración a"ulada o violeta será proporcional a la concentración del aminoácido. La ninh ninhid idri rina na $hid $hidra rato to de tric tricet etohi ohidr drin inden deno% o% es un oxid oxidan ante te ener energ& g&ti tico co que por una una desa desami mina naci ción ón oxid oxidat ativ ivaa de los los amin aminoá oáci cido doss cond conduc ucee a la form formac ació ión n del del alde aldeh hdo do correspondiente, con liberación de amoniaco y gas carbónico y formación de la ninhidrina reducida o hidrindrantina. La mol&cula de hidridantina, en presencia de otra de ninhidrina, condensa condensa a trav&s del amoniaco amoniaco produciendo produciendo una estructura estructura denominada denominada indanona o p#rpura p#rpura de Ruhemann, manifestando un color roji"o, excepto para la prolina, hidroxiprolina y en menor menor medi medida da para para la hist histid idin ina. a. *res *resen enta ta su máxi máximo mo de abso absorb rbanc ancia ia a los los +- nm, nm, exceptuando los tres aminoácidos reseados anteriormente.

). Reacción de Biuret !l nombre de la reacción procede del compuesto coloreado formado por la condensación de dos mol&culas de urea con eliminación de amonaco. !sta reacción está dada por aquellas sustancias cuyas mol&culas contienen dos grupos carbamino $/'(.01% unidos directamente o a trav&s de un solo átomo de carbono o nitrógeno. !l reactivo de 2iuret contiene 'u)3(4 en solución acuosa alcalina $gracias a la presencia de 0a(1 o 5(1%. La reacción se basa en la formación de un complejo de coordinación entre los iones 'u)6 y los  pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptdicos. !sta #ltima reacción provoca un cambio de coloración7 violeta p#rpura o violeta rosado. 8ebe sealarse que el color depende de la naturale"a de las protenas9 protenas y p&ptidos dan un color rosado9 la gelatina da un color a"ul.

3. Reacción de Millón La reacción del :illón se debe a la presencia del grupo hidroxifenilo en la mol&cula  proteica. 'ualquier compuesto fenólico que no est& sustituido en la posición ;,+ como la tirosina, el fenol y el timol producen resultados positivos en esta reacción. 8e estos compuestos, sólo la tirosina está presente en las protenas, de manera que sólo las protenas que tienen este aminoácido ofrecen resultados positivos. !n esta prueba los compuestos merc#ricos en medio fuertemente ácido $ácido ntrico del reactivo% se condensan con el grupo fenólico formando un compuesto de color rojo ladrillo o roji"o. La prueba no es satisfactoria para soluciones que contienen sales inorgánicas en gran cantidad, ya que el mercurio del reactivo del :illón es precipitado y se vuelve negativo, ra"ón por la cual este reactivo no se usa para medir alb#mina en orina. 8ebe tomarse en cuenta que en el caso de que la solución a examinar sea muy alcalina, debe ser   previamente neutrali"ada, ya que el álcali precipitara al ion mercurio en forma de óxidos amarillos. mplica la reacción del grupo indol del triptofano con el ácido glioxlico y las protenas que lo contienen, en presencia de ácido sulf#rico concentrado. La positividad se reconoce por la aparición de un anillo color violeta/roji"o.

$. Prueba de %a&' 3i acontece la aparición de una coloración roja, se tratará de una prueba positiva para la creatinina. *uede ser leda a +)- nm, detectándose hasta + ?g@mL.

(. Prueba de coagulación !s una prueba para identificar7 alb#minas, globulinas, glutelinas y prolaminas. La  positividad se manifiesta por la formación de un coágulo. 0o se conoce exactamente el mecanismo de reacción, se cree que ocurre cierta deshidratación de la mol&cula proteica.

). Prueba de Sul*ato de a+onio Las protenas, como otros coloides son precipitadas por soluciones concentradas de sales de amonio A0a'l. $014%)3(4 y 0a3(4 B. !8:>'3>'(FG>:>'