HPLC Vs Uhplc

 

Migración de HPLC a UHPLC 

1

© 2009 PerkinElmer 

 

Sistema Conventional LC vs. UHPLC Analytical LC Tiempo de análisis

Tiempo de análisis

3 - 60 min

1 - 8 min

•

Flujo: 0.5 - 5 ml/min

•

Presión: 500 - 6,000psi

•

Baja o Alta presión en la mezcla con gradiente

•

Presión Max: 6,000

•

Columnas : 3 a10μm

•

Column ID:4.6mm

•

Rango de temperatura: 4 - 90

• 2

UHPLC

°

Bomba

Automuestreador 

Columnas

Horno para Columnas

•

Flujo: 0.5 - 3 ml/min

•

Presión: 1000 - 15,000psi

•

Alta presión con gradiente Binario

•

Presión Max: 15,000 psi

•

Columnas : sub 3μm

•

Column ID:2.1mm

•

Rango de temperatura:

C

Frecuencia de muestreo: 1 50 pts/ seg

4 - 90

Detectors

•

°

C

Frecuencia de muestreo: 1 100 pts/ seg

 

FLEXAR Más posibilidades posibilidades en los análisis análisis de HPLC

18,000 PSI

3

…. Y en las presiones de la Bomba

…. Y en las presiones de la Bomba   

Beneficios de UHPLC UHPLC

Green Productivity   

Mayor Rendimiento Mucho Menos Solventes Mejor Detección

Las isoflavonas en productos nutracéuticos se pueden analizar con UHPLC al menos seis veces más rápido, con una sensibilidad más alta y reduciendo al menos en un 90% el uso de los solventes de la fase móvil al compararlo con HPLC convencional.

.

Convencional HPLC

0 4

5

10

15

20

min.

…ahorra tiempo y dinero

 

Los temores comunes de migración a UHPLC

Tecnolog ecnología ía Nueva Nue va Costo del nuevo hardware Robustez de las columnas sub-2mm  Alta Presión Entrenamiento Software Conversión de Métodos

5



 Migración a UHPLC es más fácil de lo que la mayoria de la gente piensa



El nuevo hardware se paga solo, con el incremento en la productividad y reducción de los costo de operación. No tenga miedo de un UHPLC!!!

 

Herramientas disponibles para simplificar la migración de un Método…  Muchas referencias están disponibles con una descripción detallada para la transferencia un método, incluyendo libro de PerkinElmer “Guidelines for the Use of de UHPLC Instruments” by D.un Guillarme & J. Veuthey.titulado White paper is available at: http://las.perkinelmer.com/content/applicationnotes/wtp_guidelinesforuhplcinstruments.pdf  

Hay 5 parámetros importantes de un método que hay que tomar encuenta para transferir  un método de HPLC a UHPLC.

6



Volumen Inyección (V i n j )



Velocidad de Flujo (F )



Tiempo de programa Isocratico (t i s o )



Tiempo de programa Gradiente (t gr ad )



Pendiente Gradiente

…Calculadora para la transferencia de métodos está disponible en PerkinElmer    

Transferencia de un Método con Gradiente HPLC

90

UHPLC

90

85

85

    N80     C     A     %75

    N80     C     A     %75

70

70

65

65 0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

0

Time(min)

1

2

3

4

5

6

7

8

Time(min)

Comparison of HPLC and the transferred (calculated) UHPLC gradient programs  programs 

7

Step   Step

HPLC Time   Time

UHPLC Time   Time

%ACN   %ACN

1 2

0 5

0 0.6

70 70

3

25

3.2

85

4

29

3.7

85

5

30

3.8

70

6

45

5.7

70

8X

Disminución del Tiempo de análisis

9

45 min Run  5.7 min Run  

Aplicaciones de UHPLC Nutraceútico : Isoflavonas en Soya

.

110.00

.

3 .

100.00

Peak List 1. Daidzin 2. Glycitin 3. Genistin 4. Daidzein 5. Gylcitein 6. Genistein

4

3

.

.

.

90.00

4

.

80.00

6

1.

2

1.

5

.

70.00

1

.

.

60.00

0 5.

1 0.

1 5.

2.0

2.5

3 0.

3 5.

4.0

4.5

5 0.

5 5.

6 0.

6.5

PE Brownlee C18  50 mm x 2.1 mm, 1.9 mm

50.00

6

2 .5

2. 0

2 .5

3 .0

5 1

40.00

30.00

20.00

10.00

PE Brownlee C18 150 mm x 4.6 mm, 5 mm 0

8

2

4

6

8

10

12

14

16

18

20

22

24

26

28

30

32

34

36

38

40

42

Mejora en el rendimiento de 6X   

Aplicaciones de UHPLC Furanic Compounds Typically Typically Found in Electrical Insulating Liquids Method ASTM D 5837

9  

Aplicaciones de UHPLC Mezcla de Pesticidas

4X THROUGHPUT PE Brownlee C18 50mm x 2.1mm, 1.9 mm

IMPROVEMENT!

PE Brownlee Aqueous C18 250mm x 4.6mm, 5mm

10  

Aplicaciones de UHPLC EPA Phenols in water. PE Brownlee C18  50mm x 2.1mm, 1.9mm

2.5X THROUGHPUT IMPROVEMENT!

Brownlee Aqueous C18 150mm x 4.6mm, 5mm

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Resumen

La Migración de un sistema de HPLC a UHPLC, se requiere de un sistema optimizado, no basta con el cambio de la columna. La Conversión de un método de HPLC a UHPLC es simple, utilizando la calculadora de UHPLC disponible. Incremento en la productividad productividad de hasta 9 veces, al disminuir el tiempo tiempo de análisis Menor consumo de fase móvil hasta 93% “Tecnología Verde” Desarrollo de métodos / optimización es mucho más rápido debido a que los tiempo de las corridas son más corto en UHPLC Los instrumentos se pagan solos, por el incremento en la productividad y reducción de los costos de operación.

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No tenga miedo de un UHPLC