green tea

Latar Belakang dan Tujuan: ekstrak teh hijau diberikannya berbagai biologis efek, termasuk kegiatan anti-inflamasi. Namun, belum ada laporan tentang pengaruh ekstrak teh hijau pada hilangnya attachment, yang merupakan penting karakteristik periodontitis. Di sini, kita meneliti efek penghambatan hijau ekstrak teh pada onset periodontitis dalam model tikus. Bahan dan Metode: Tikus diimunisasi intraperitoneal dengan Escherichia lipopolysaccharide coli (LPS). Kelompok LPS (n = 12) menerima aplikasi topikal LPS ke gingiva sulkus palatal setiap 24 jam. Ekstrak teh hijau kelompok (n = 12) menerima aplikasi topikal dari LPS dicampur dengan teh hijau ekstrak, sunphenon BG, setiap 24 jam. The phosphate-buffered saline (PBS) kelompok (N = 6) menerima aplikasi topikal dari PBS setiap 24 jam. Kadar anti-LPS imunoglobulin G (IgG) dalam serum ditentukan dengan menggunakan ELISA. Tikus kelompok perlakuan LPS dan kelompok ekstrak teh hijau tewas setelah aplikasi 10 dan ke-20. Tikus pada kelompok PBS tewas setelah aplikasi ke-20. Hilangnya lampiran, tingkat tulang alveolar dan infiltrasi sel inflamasi diselidiki histopatologi dan histometrically. sel dan RANKL-positif pembentukan kompleks imun dievaluasi immunohistologically. Hasil: Tidak ada perbedaan yang signifikan dalam tingkat serum anti-LPS IgG antara kelompok LPS dan kelompok ekstrak teh hijau. Sebaliknya, hilangnya lampiran, tingkat tulang alveolar, infiltrasi sel inflamasi dan RANKL ekspresi pada kelompok ekstrak teh hijau secara signifikan menurun dibandingkan dengan orang-orang dalam kelompok LPS. Kesimpulan: Temuan ini menunjukkan bahwa ekstrak teh hijau menekan timbulnya kehilangan perlekatan dan alveolar resorpsi tulang pada model tikus

periodontitis eksperimental.

Banyak penelitian telah menunjukkan diuntungkan, Efek resmi dari teh hijau dan ekstrak melawan kanker, diabetes mellitus dan obesitas in vivo dan in vitro (1-6). katekin, hadir dalam isi tinggi hijau teh, dianggap komponen utama bertanggung jawab untuk biologi fungsi teh hijau (7). Epigallocatechin-3-gallate (EGCG), bahan utama katekin teh hijau, telah dilaporkan menyebabkan berbagai biologis tanggapan, termasuk antioksidan, antibakteri dan anti-inflamasi Efek (11/08). Anti-inflamasi aktivitas katekin teh hijau juga dapat bermanfaat untuk periodontitis. Di Bahkan, Rogers et al. (12) melaporkan bahwa EGCG menghambat lipopolisakarida (LPS) produksi imbas dari inflamasi sitokin dan kemokin in vitro. Ia juga melaporkan bahwa ekstrak teh hijau menghambat LPSinduced resorpsi tulang pada tikus, dan bahwa suplementasi pasta gigi dengan teh hijau ekstrak ditekan periodontal

peradangan dan apikal migrasi epitel junctional pada tikus in vivo (13,14). Namun, pengaruh ekstrak teh hijau pada hilangnya lampiran - karakteristik penting periodontitis - tidak jelas. Kita baru-baru ini melaporkan eksperimen Model periodontitis di mana topikal penerapan LPS, sebagai antigen, menginduksi kerusakan periodontal pada tikus diimunisasi dengan LPS (15). Didalam Model, antibodi yang dihasilkan oleh preimmunization menginduksi antigen reaksi antibodi dan karena hilangnya lampiran terjadi, serta apikal migrasi epitel junctional dan resorpsi tulang. Tampaknya Model ini mirip dengan periodontitis manusia karena menginduksi hilangnya attachment melalui reaksi kekebalan dan respon inflamasi. Dalam penelitian kami sebelumnya keberadaan kompleks imun adalah conmenguat dengan pewarnaan immunohistological untuk komponen pelengkap 1, q subkomponen, B chain (C1qB). ini

diketahui bahwa C1qB adalah komponen dari melengkapi faktor C1 dan bahwa hal itu mengikat ke wilayah Fc dari imunoglobulin yang terlibat dalam pembentukan kompleks imun (16,17). Karena itu, kami juga disaring untuk C1qB di Penelitian ini untuk mengkonfirmasi keberadaan kompleks imun dan sebagai penanda LPS mengikat dengan spesifik antibodi dalam jaringan periodontal. Selain itu, sebagai RANKL, anggota tumor necrosis factor ligan keluarga, merupakan faktor penting dalam resorpsi tulang (18), ekspresi RANKL terdeteksi oleh immunostaining. Dalam penelitian ini, kami menggunakan LPS-induced tikus periodontitis eksperimental Model untuk memeriksa apakah ekstrak teh hijau, sunphenon BG, memiliki efek penghambatan pada timbulnya kehilangan perlekatan dan tulang alveolar resorpsi. Perusakan periodontal diselidiki histopatologi dan immunohistologically. Bahan dan metode Desain eksperimental

Tiga puluh, 9-minggu-tua tikus Lewis laki-laki yang dibagi menjadi tiga kelompok: LPS kelompok (n = 12); ekstrak teh hijau kelompok (n = 12); dan phosphatebuffered saline (PBS) kelompok (n = 6). Semua tikus menerima suntikan intraperitoneal 0,3 mL 150 lg Escherichia coli LPS (O111: B4; Sigma, St Louis, MO, USA) ditangguhkan di PBS dan emulsi secara lengkap Freund adjuvant (Difco, Detroit, MI, USA), diikuti, 28 d kemudian, dengan booster suntikan LPS emulsi di lengkap adjuvant Freund (Difco) (19). Pada awal, 1 d setelah booster injeksi, kelompok LPS ditantang setiap hari dengan aplikasi topikal E. coli LPS ke sulkus gingiva, dan kelompok ekstrak teh hijau ditantang dengan LPS dicampur dengan ekstrak teh hijau, sunphenon BG (Mengandung 91,3% polifenol, 76,6% dari yang katekin dan hadir dalam proporsi sebagai berikut: 45,9% EGCG, 9,6% epigallocatechin, 8,6% epicatechin gallate, 5,3% epicatechin

dan 7,2% lain-lain; Taiyo Kagaku, Mie, Jepang). Kelompok PBS diperlakukan dengan aplikasi topikal dari PBS saja. Dalam penelitian ini, topikal aplikasi dari LPS (50 lg / lL) saja, LPS (50 lg / lL) + 1% sunphenon BG, atau PBS hanya dilakukan sebagai dalam dijelaskan sebelumnya Model (15). Di penelitian ini, 1% sunphenon BG digunakan karena konsentrasi ini dari sunphenon BG ditemukan menekan resorpsi tulang in vivo dalam penelitian sebelumnya (13). Secara singkat, pertama semua, tikus dibius dengan isoflurane. Selanjutnya, tikus di LPS kelompok, kelompok ekstrak teh hijau dan kelompok PBS menerima aplikasi topikal E. coli LPS disuspensi di PBS, LPS + sunphenon BG disuspensi di PBS dan PBS saja, masing-masing, menggunakan mikropipet sebuah, ke gingiva sulkus palatal dari kiri maxillary molar pertama. Secara total, 21 lL (Tujuh aplikasi dari 3 lL dengan 5-menit interval antara setiap aplikasi) LPS, LPS + sunphenon BG atau

PBS diberikan dalam 30-min periode waktu, setiap hari, selama 20 d. setiap enam tikus tewas 24 jam setelah tanggal 10 dan aplikasi 20 di LPS dan teh hijau kelompok ekstrak. Enam tikus di PBS Kelompok tewas 24 jam setelah tanggal 20 aplikasi. Semua tikus yang dibeli dari Charles River Jepang (Tokyo) dan dipertahankan di bawah bebas patogen tertentu kondisi di Biomedical Research Center, Pusat Frontier Life Sciences (Nagasaki University, Nagasaki, Jepang). perawatan hewan dan prosedur eksperimental dilakukan sesuai dengan Pedoman untuk Hewan Percobaan dari Nagasaki Universitas dan dengan persetujuan dari Kelembagaan Perawatan Hewan dan Komite Gunakan. Tidak langsung ELISA untuk deteksi anti-LPS imunoglobulin G Sampel darah diambil dari pleksus vena retro-orbital tikus di LPS dan ekstrak teh hijau kelompok pada awal dan 24 jam setelah

5, 10 dan aplikasi 20. Itu kadar serum anti-LPS imunoglobulin G (IgG) ditentukan dalam individu sampel serum menggunakan ELISA. Setiap baik dari 96-baik mikrotiter piring dilapisi dengan 100 lL dari 2,5 lg solusi / mL E. coli LPS di 0,02 M penyangga karbonat dan kemudian diinkubasi semalam pada 4 ° C. Setelah dicuci dengan 0,05% Tween di PBS, sumur diblokir dengan PBS mengandung 0,1% bovine serum albumin. Setelah dicuci dengan 0,05% Tween di PBS, 100 lL dari sera tersebut (Diencerkan 1: 1000) yang akan diuji adalah ditambahkan dan piring diinkubasi selama 1 jam pada suhu kamar dan kemudian dicuci dengan 0,05% Tween di PBS. reaktivitas antibodi ditentukan dengan menambahkan kambing peroksidase-conjugated IgG anti-tikus (diencerkan 1: 5000 di PBS; Zymed Laboratories, San Francisco, CA, USA) untuk masing-masing dengan baik diikuti oleh inkubasi selama 1 jam pada suhu kamar. Kemudian, piring dicuci dengan 0,05% Tween di PBS dan 75 lL

dari 3,3 ', 5,5'-tetramethylbenzidine (R & D Sistem, Minneapolis, MN, USA) adalah ditambahkan dan inkubasi dilanjutkan selama 1 menit pada suhu kamar. Itu Reaksi enzim dihentikan oleh Selain itu dari 25 lL dari 1 M H2SO4 untuk masing-masing dengan baik. Lempeng yang dibaca di 450 nm. Persiapan jaringan rahang kiri masing-masing tikus itu segera dihapus setelah tikus tewas, kemudian tetap pada suhu 4 ° C selama 10 jam di PBS yang mengandung 4% paraformaldehyde, dekalsifikasi dengan 10% EDTA untuk 3 minggu dan kemudian tertanam dalam parafin menggunakan metode Amex (20). Secara singkat, spesimen yang dehidrasi dalam aseton, berturut-turut, dibersihkan di metil Benzoat selama 30 menit dan di xylene untuk 30 menit, dan kemudian merambah dengan parafin pada 60 ° C selama 2 jam. Buccolingually berorientasi bagian serial (4-lm tebal), pada tingkat akar utama dari kiri atas pertama molar, diperoleh. Histopatologi dan histometrical studi Lima kelompok bagian serial, masing-masing

mengandung 10 subbagian, yang diperoleh dari masing-masing spesimen. Itu subbagian pertama dari masing-masing kelompok bagian seri diwarnai dengan hematoxylin dan eosin untuk histopatologi pengamatan. Kami melakukan analisis histologis dari bagian jaringan diwarnai dengan hematoxylin dan Eosin menggunakan software image-analisis, IMAGE J (National Institutes US Kesehatan, Bethesda, MD, AMERIKA SERIKAT). Jarak antara cemento-enamel junction (CEJ) dan posisi koronal junctional yang epitel melekat pada permukaan akar diukur sebagai hilangnya attachment (X pada Gambar. 1). Jarak antara CEJ dan alveolar yang puncak tulang diukur sebagai tingkat tulang alveolar (Y pada Gambar. 1). Itu jumlah sel inflamasi dalam empat 50-lm 9 kotak 50-lm dari ikat jaringan yang berdekatan dengan epitel junctional dihitung pada perbesaran sebuah dari 9400 (Gambar. 1). Sel Jumlah per area jaringan ikat

(mm2 ) Dihitung. junctional yang daerah epitel diukur dengan menggunakan IMAGE software J, dan jumlah sel-sel inflamasi di junctional yang epitel dihitung di magnifi- sebuah kasi 9400. Perbedaan antara yang junctional epithelium dan lisan epitel diputuskan oleh perbedaan di ruang antar. Nomor sel per junctional epithelium daerah (mm2 ) Dihitung. pewarnaan Immunohistological dari RANKL dan melengkapi C1qB Untuk mendeteksi produksi RANKL, subbagian kedua digunakan untuk pewarnaan immunohistological dari sel RANKL-positif. Pertama-tama, bagian yang deparaffinized dan diperlakukan dengan 0,1% tripsin selama 15 menit pada 37 ° C. aktivitas peroksidase endogen diblokir dengan memperlakukan bagian dengan 0,3% H2O2 / metanol selama 30 menit, diikuti dengan inkubasi pada kelinci yang normal serum selama 30 menit pada suhu kamar.

Bagian-bagian ini kemudian direndam dalam kambing poliklonal antibodi terhadap RANKL (N-19; Santa Cruz Bioteknologi, Santa Cruz, CA, USA), semalam pada 4 ° C. Kemudian, bagian diinkubasi selama 30 menit dengan terbiotinilasi kelinci anti-kambing poliklonal immunoglobulin (Dako, Glostrup, Denmark). Akhirnya, ini bagian diinkubasi selama 30 menit dengan streptavidin peroksidase-conjugated (Dako), kemudian diinkubasi dengan diaminobenzidin solusi tetraoxide dan counterstained dengan hematoxylin. Itu jumlah sel RANKL-positif di dua wilayah Unit (125 lm 9 125 lm) sekitar permukaan tulang alveolar crest dihitung (Gambar. 1). Untuk mendeteksi kompleks imun, kami digunakan pewarnaan immunohistological untuk C1qB. Lain 12 tikus diperlakukan identik dengan orang-orang dalam kelompok LPS (N = 6) dan di ekstrak teh hijau kelompok (n = 6) setelah aplikasi 10. Mereka tewas 1 jam setelah aplikasi topikal dan maxillae mereka

yang immunohistologically bernoda untuk C1qB. Setelah deparaffinization dari bagian, endogen peroksidase aktivitas diblokir dengan 0,3% H2O2 / metanol selama 30 menit, diikuti oleh inkubasi pada kambing serum normal untuk 30 menit pada suhu kamar. Ini bagian kemudian direndam semalam kelinci poliklonal anti-C1qB (AVIVA Sistem Biologi, San Diego, CA, USA). Bagian kemudian berturut-turut diinkubasi dengan terbiotinilasi kambing anti-kelinci poliklonal immunoglobulin (Dako) selama 30 menit, dengan streptavidin peroksidase-conjugated (Dako) selama 30 menit dan kemudian ditempatkan di tetraoxide diaminobenzidin solusi dan counterstained dengan hematoxylin. Analisis statistik Data dianalisis secara statistik menggunakan software KaleidaGraph (Synergy Software, Reading, PA, USA). Perbedaan antara kelompok LPS dan ekstrak kelompok teh hijau yang dievaluasi dengan menggunakan Mann-Whitney U-test. Sebuah nilai p