Extracción Del Adn de Cebolla

 

UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS Facultad de Ciencias de la Salud Tecnología en Regencia de Farmacia

UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS

FACULTAD CIENCIA DE LA SALUD TECNOLOGIA EN REGENCIA DE FARMACIA

BIOQUÍMICA GRUPO 2: IMPARES

PRACTICA: EXTRACCIÓN DEL ADN DE CEBOLLA ONION DNA EXTRACTION

ESTUDIANTES:

ASTRID JULIETH GONZALEZ KEVIN DAVID RIVAS BREIDDY JHERLAY TABARES

INFORME DE LABORATORIO BIOQUÍMICA

 

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INFORME DE LABORATORIO BIOQUÍMICA

RESUMEN Se extrajo el ADN de la cebolla, para esto se cortó la cebolla en pequeños pedazos y se mezcló con el reactivo de lisis procediendo a filtrarlo con la ayuda del embudo y una gasa procediendo así a terminar la prueba de identificación de ADN con la ayuda de los diferentes procedimientos que más adelante encontrarán; Al realizar los procedimientos adecuadamente, resulta que las fibrillas de ADN comenzaron a salir, de un color blanco precipitado por sobre el etanol frio (mezcla Heterogénea). En caso de que el ADN de la Muestra Vegetal no se pueda apreciar muy claramente. No debemos agitar el tubo para así apreciarlo mejor. Si se tiene problemas tiene problemas con el filtro, que no está bien hecho y que no filtra bien, por lo tanto hay que hacer otro. También puede haber complicaciones con la forma de poner el etanol frio de manera que cayera por las paredes del tubo de ensayo. Con esto podemos saber cómo es el procedimiento del extracto del ADN, así como si estructura de una forma fácil y sencilla. Palabras claves: ADN, extracción, identificación, reactivos.

ABSTRACT The DNA was extracted from the onion, for this the onion was cut into small pieces and mixed with the lysis reagent proceeding to filter it with the help of the funnel and a gauze thus proceeding to finish the DNA identification test with the help of the different procedures that you will find later; When performing the procedures properly, it turns out that the DNA fibrils began to come out, a white color precipitated over the cold ethanol (Heterogeneous mixture). mixtur e). In case the DNA of the Plant Sample cannot better. be seen very clearly. We should not shake the tube in order to appreciate it If you have problems with the filter, which is not well made and does not filter well, therefore you have to do another one. There may also be complications with putting the cold ethanol so that it runs off the walls of the test tube. With this we can know what the procedure of the DNA extract is like, as well as its structure in an easy and simple way. Keywords: DNA, extraction, identification, reagents.

 

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INFORME DE LABORATORIO BIOQUÍMICA

OBJETIVOS   Extraer y purificar el ADN de células vegetales.   Observar la estructura fibrilar del ADN.    Identificar la presencia de pentosas (ribosa desoxirribosa) mediante el reactivo de Bial.   Identificar la presencia de grupo fosfato mediante prueba específica para este grupo. 

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MARCO TEORICO

foundation, 2018 2018))   Imagen 1. (A MG E N founda

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PROCEDIMIENTO O METODOLOGÍA

Cortar en pequeños  pedazos Cebolla

50 g Pesar

50ml de solución de lisis  Añadir

Filtrar

En un embudo que contenga gasa

4ml del filtrado a un tubo de ensayo Transferir

8ml de etanol

Formación de  precipitado

Observar

 

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Del filtrado 10ml 20ml de etanol

Precipitado de color  blanco

Observar

Precipitado a un tubo de ensayo Transferir

El precipitado en 5ml de agua Disolver

Separar

La disolución en 2 tubos de ensayo

0.2ml de uno de los tubos y cronometrar el tiempo de salida Pipetear

Calentar

El otro tubo de ensayo en el baño de maría por 10 min Observar

La diferencia entre ambos tubos de ensayo

 

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RESULTADOS -

Se procedió a quitar la cascara de la cebolla y realizar cortes por la mitad de la cebolla (corazón) y pesar 50g. En una licuadora se agregó los 50g de cebolla y se le agregó 50ml de de solución de lisis. Después de licuar, se procedió a filtrar con la ayuda de gasa gasa en un vaso precipitado.

EXTRACTO DE CEBOLLA

Imagen 2. Filtrado de cebolla

-

Transferimos 4ml de filtrado (extracto), lo depositamos en un tubo de ensayo al cual le agregamos 8 ml de etanol al 95% frio, sin mezclar.

-

Se formó un precipitado blanco y con la ayuda de la pipeta Pasteur retiramos el líquido dejando así solo el precipitado en el tubo de ensayo, el líquido lo pasamos a otro tubo de ensayo limpio .

ADN

Imagen 3. Adición del etanol

Imagen 4. Observación del precipitado.

 

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Procedimos a realizar las siguientes pruebas: Procedimiento 5.6: identificación de DNA. Reactivo Agua Extracto Difelinamina

Tubo A

Tubo B

2 ml

1 ml 2 ml

1 ml

Cuadro 1. identificación de DNA

-

Procedimos a preparar 2 tubos de ensayo; tubo de ensayo A (agua), tubo de ensayo B (extracto) y agregamos el reactivo difenilamina.

-

Después de agregar el reactivo a ambos tubos de ensayo procedemos a llevarlos a baño de maría fuerte por 10 minutos.

-

El resultado de dicha prueba para la identificación de DNA se encuentra en la imagen 5.

Imagen 5. Identificación del DNA

Procedimiento 5.7: identificación de pentosas. Reactivo Agua Extracto Reactivo Bial Cuadro 2. Prueba de bial

Tubo A

Tubo B

1 ml 2 ml

1 ml 2 ml

 

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-

Procedimos a preparar 2 tubos de ensayo; tubo de ensayo A (agua), tubo de ensayo B (extracto) y agregamos el reactivo Bial.

-

Después de agregar el reactivo a ambos tubos de ensayo procedemos a llevarlos a baño de maría fuerte por 10 minutos para luego dejarlo enfriar hasta ver la aparición de la coloración verde.

-

En la imagen 6 se pudieron comprobar

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los resultados de la prueba.

Imagen 6. Prueba de Bial

Procedimiento 5.8: identificación de grupos fosfatos. Reactivo Agua Extracto cido Molibdico Espera 30 minutos Ácido ascórbico Cuadro 3. Prueba de fosfatos

Tubo A

Tubo B

0.1 ml 1 ml

0.1 ml 1 ml

1 ml

1 ml

 

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-

Procedimos a preparar 2 tubos de ensayo; tubo de ensayo A (agua), tubo de ensayo B (extracto), agregamos ácido molibdico a ambos tubos, mezclamos y esperamos 30 segundos después de lo cual agregamos ácido ascórbico.

-

Después de agregar los reactivos a ambos tubos de ensayo procedemos a mezclar todo junto, dejar quieto por 15 minutos para poder observar la aparición verdoso.

-

de

la

coloración

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azul-

En la siguiente imagen se pudieron comprobar los resultados de la prueba.

Presencia de grupos fosfatos.

Imagen 7. Prueba de fosfatos



  Punto 9

-Se le agregó 10 ml del filtrado (extracto de cebolla) a un Becker, añadimos 20 ml de etanol al 95% frio. Sin mezclar. -Se observó la formación de un precipitado blanco; con la ayuda de una varilla de vidrio se sacó el precipitado y lo agregamos en un tubo de ensayo. -Disolvemos el precipitado en 5 ml de agua, agitamos y dividimos en dos tubos para observar así su viscosidad.

imagen 8. Observación del preci precipitado pitado

 

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ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS   Procedimientos punto 6

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Para la extracción del ADN tiene que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula, debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN. El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interface entre el alcohol y el agua. (B ., 2 2016 016))   El ADN se precipita al añadir etanol al 95% frio, (como se observó en la imagen 4). El ADN es soluble en alcohol, pero se toma insoluble en presencia de sal (NaCl) porque el sodio neutraliza la carga negativa de los grupos fosfatos. El etanol formará una capa en la superficie por ser menos denso que la solución acuosa. (María,

 Meri no, G al alleg leg o, & O Occ hoa, Oc Octubre, tubre, 2019 2019))

Reacción de la Difelinamina TUBO A: El agua es levemente soluble en la difelinamina TUBO B: Se da una coloración azul con una absorción máxima máxim a a 595nm, la reacción la dan en general las 2 desoxipentosas y no es específica para el ADN. (Cecilia,

 2011)

Reacción química con el ADN:

Imagen 9. Reacción de Difenilamina  

 

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  Identificación de pentosas

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Reacción de Bial: -La pentosa del DNA y RNA puede evidenciarse por la reacción con orcinol -El ácido molíbdico y ácido ascórbico hidroliza las uniones fosfodiester y Nglicosídicas, liberando ribosa, bases púricas, pirimidínicas y ácido fosfórico.

(Cecilia, 2011)   -La pentosa en medio ácido se deshidrata originando furfural que reacciona con el orcinol dando un producto verde que demuestra la presencia de DNA y RNA.

(Martina, 2019)  

imagen 10. Reacción de Bial

  Identificación de grupos fosfatos

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-El fosfato reacciona con el ácido molibdico para dar fosfomolibdato, el cual es reducido por el ácido ascórbico a azul de molibdeno. - El arsenito; citrato se combina con el exceso de molibdato impidiendo su reacción posterior con el exceso de fosfato liberado de los esteres lábiles . (I.E.S.T.P.

HIP OLITO UNA NUE , 3 Ma Marzo rzo 20 2011) 11)

 

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CONCLUSIONES    Finalmente, la práctica de laboratorio de la extracción extracción del ADN de la cebolla se llevó a base de los objetivos en el cual se extrajo el ADN de células vegetales como la cebolla por medio de la solución lisis



  Se



observó

durante

la

practica

la

estructura

fibriliar

del

ADN

  Se identificó la presencia de pentosas mediante el reactivo de vial



  Se identifica la presencia de grupos fosfatos de la cebolla mediante la prueba específica para este grupo con la agregación de ácido molibdico y ascórbico. Presenciando coloración azul.



 

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BIBLIOGRAFÍA -

AMGEN foundation. (2018). Repaso de ARN y síntesis de proteínas (artículo). Khan Academy. https://es.khanacademy.org/science/high-schoolbiology/hs-molecular-genetics/hs-rna-and-protein-synthesis/a/hs-rna-andprotein-synthesis-review   protein-synthesis-review

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B., A. (2016). PRÁCTICA 4: EXTRACCIÓN DE ADN  (pp.  (pp. 1 –2). Recuperado de http://cienciasnaturales.iesvegadelturia.es/wpcontent/uploads/2016/03/4.-Extracci%C3%B3n-de-ADN.pdf    content/uploads/2016/03/4.-Extracci%C3%B3n-de-ADN.pdf 

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Extracción de ADN con material cotidiano: desarrollo de una estrategia interdisciplinar a partir de sus fundamentos científicos   (Educ. quím vol.30 no.1 Ciudad de México ene. 2019 Epub 14-Oct-2019). (2019, octubre). Scielo. http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0187893X2019000100058   893X2019000100058

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C. (2011, noviembre). Química Biológica I TP 8 DNA: extracción, identificación y reconocimiento  (N.o  3 –3). Facultad de Ciencias Naturales y Ciencias de la Salud de la UNPSJB. http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/quimicabiologica1/wpcontent/uploads/2010/08/2011-TP-8-Extracci%C3%B3n-ycaracterizaci%C3%B3n-de-DNA.pdf    caracterizaci%C3%B3n-de-DNA.pdf 

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Martina, P., Espinosa, T., Ferreyra, D., & Alvarenga, A. (2019, mayo).  ADN: extracción, identificación, reconocimiento y cuantificación  (N.o  4 –6). Aula http://www.aulavirtualVirtual EyN. exactas.dyndns.org/claroline/backends/download.php?url=L1RyYWJham9z X1ByYWN0aWNvcy9UUDZfUWNhX0Jpb2zzZ2ljYV9QVUJfMjAxOS5wZGY %3D&cidReset=true&cidReq=QUIMBIO   %3D&cidReset=true&cidReq=QUIMBIO

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I.E.S.T.P.

HIPOLITO

UNANUE.

(2011,

9

marzo). LibroManualLaboratBioquimica. Issuu. https://issuu.com/laboratorio_hu/docs/libromanuallaboratbioquimica/129