Extraccion de Adn de Higado de Pollo

Para lobitooo http://www.buenastareas.com/ensayos/Informe-De-Laboratorio-Propiedades-De-Las/6462987.html EXTRACCION DE ADN DE HIGADO DE POLLO I. OBJETIVO Espesificos . Extraer el material genético (ADN) de células del hígado de pollo . Establecer la relación entre el proceso de extracción y propiedades quimico-fisicas del ADN . Extraer ADN de un tejido animal Introducción El ADN y ARN son biomoléculas que intervienen en el almacenamiento y la transferencia de la información genética. Son componentes fundamentales de la célula y constituyen en conjunto, entre el 5 y el 10% del peso seco. Normalmente no se encuentran solos sino que se hallan formando núcleo proteínas, ya que suelen unirse a determinados tipos de estas, como las histonas. El ARN se localiza tanto en el citoplasma celular como en el núcleo , mitocondrias y cloroplastos, mientras que el ADN se sitúa fundamentalmente en el núcleo de la célula y también cloroplastos y mitocondrias en pequeñas cantidades. Poseen una importancia manifiesta por el hecho de que ellos dirigen y llevan a cabo la síntesis de proteínas, y por tanto de las enzimas necesarias para el funcionamiento celular. Por otra parte el ADN es el vehículo de la herencia que se transmite de padres a hijos de generación en generación. Marco La extracción es un procedimiento de separación en el que el soluto de una disolución se distribuye entre dos líquidos inmiscibles, generalmente uno acuoso y otro orgánico. La extracción es una de las técnicas más empleadas para separar compuestos orgánicos de las disoluciones o suspensiones acuosas en las que se encuentran. Para ello, se agita la mezcla con un disolvente orgánico inmiscible con el agua y se dejan separar ambas capas. De este modo, el soluto presente se distribuye entre las fases orgánica y acuosa de acuerdo con sus solubilidades relativas, siendo la relación entre la concentración de la sustancia en ambos disolventes el llamado coeficiente de distribución o de reparto. El ADN lleva codificada la información genética. En las células eucariontes como son las del hígado de res, se encuentra asociado a proteínas histonas formando la cromatina. Esta se encuentra totalmente condensada con el fin de ocupar el mínimo volumen posible en el interior de la célula. En la práctica se obtienen buenos resultados realizando tres o cuatro extracciones consecutivas con un volumen de disolvente orgánico aproximadamente tres veces menor que el de la fase acuosa. La elección de disolvente depende de la naturaleza de la sustancia que se desea extraer y de su solubilidad en dicho disolvente.

CONCLUSIÓN EXTRACCIÓN E IDENTIFICACIÓN DE ADN En conclusión el ADN es muy importante en todos los seres vivos ya que estamos compuestos de este. Además que su función principal es codificar las instrucciones esenciales para fabricar a un ser vivo ya sea

idéntico en el caso de la reproducción asexual o parecido en el caso de la reproducción sexual Al hacer esta práctica me di cuenta de que estamos compuestos por millones de cadenas de ADN y que en una sola célula se encuentran muchas de ellas. El ADN en las células eucariotas se encuentra en el núcleo mientras que en las células procariotas que carecen de este, se encuentra disperso en el citoplasma. Para extraer el ADN de la célula tuvimos que hacer un proceso que consistía en primero romper la pared y/o membrana celular, después inhibir a las nucleasas, para después precipitar a las proteínas por lo que deduje que la célula protege de una manera al ADN de los virus es por eso que existen las nucleasas que son enzimas degradativas que protegen al ADN de que los virus no modifiquen su información genética. http://platea.pntic.mec.es/~cmarti3/bio/ADN/adn/ppal.htm

A) Rompimiento de membranas y pared celulares. Toma una muestra del tejido (5 gr Aprox) que hayas eligido y homogenízalo, es decir muelelo con el mortero, si el tejido es muy duro, si el tejido es muy duro licualo en seco. B) Digestion Coloca tu muestra molida (1 gr aprox), en un tubo de eppendorf de 1 ml y agrégale el Buffer de extracion (Tris- HCL 0.05 M, EDTA, 0,02 M, NaCl 0.35 M, Urea 7 M) a temperatura de cuarto (500 ul aprox). Cuando hayas agregado el Buffer de extracción a tu muestra, agítala e incúbala por 10 minutos con agitación esporádica. C) Separación de Proteínas, Carbohidratos y Lípidos A la mezcla que tienes en tu tubo de ensayo agrégale 500 ul. de Fenol/Cloroformo/Isopropanol frio usa guantes y no inhales los vapores. Agita vigorosamente en Vortex, cuidando que no se tire el contenido del tubo, deja reposar a temperatura ambiente por 5 min. Extrae la fase acuosa (500 ul.) con una micropipeta, si no se separan las fases centrifuga a 3000 rpm por 10 min, ten cuidado de equilibrar la centrifuga. Extrae la fase acuosa superior una vez centrifugada. D) Precipitación de Ácidos nucleicos DNA y RNA A la fase acuosa que extrae (500 ul), colocala en un tubo de eppendorf limpio y agrégale 400 ul de etanol (100 %) frio y 75 ul de NaCl 3 M. Mezcla por inversión, suave y observa como se precipita el DNA. D) Recuperacion de la pastilla. Centrifuga tu tubo por 5 min a 3000 rpm, recoge la pastilla del fondo del tubo. E) Resuspension. Resuspende tu pastilla de DNA en 5 ml de agua destilada estéril.

BIBLIOGRAFIA 

Gerald karp. Biología celular y molecular. ED McGrawHill 1998. Pág. 727-730.



Biología Molecular y Herencia. Robert A. Wallace, Jack L. King, Gerald P. Sanders., 1a edición. Editorial

http://siladin.cch-oriente.unam.mx/coord_area_cienc_exp/biologia/GuiaBioI/Extraccion_de_ADN.pdf

analisis La extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas. En primer lugar tienen que romperse la pared celular (sds) y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula, , vaciándose su contenido molecular en una disolución tampón en la que se disuelve el ADN , . En ese momento, el tampón contiene ADN y todo un surtido de restos moleculares: ARN, carbohidratos, proteínas y otras sustancias en menor proporción. Las proteínas asociadas al ADN, de gran longitud, se habrán fraccionado en cadenas más pequeñas y separado de él por acción del sds

A continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol, El alcohol es menos denso que el agua, por lo que flota en la parte superior. Debido a que se formaron dos capas separadas, toda la grasa y proteína que rompimos en los dos primeros pasos .En este caso, la proteína y la grasa irán al fondo, que es la capa acuosa, donde se sienten más confortables, mientras que el ADN prefiere la capa superior, el alcohol

Preguntas 1.

El SDS actúa rompiendo enlaces no covalentes en las proteínas, desnaturalizándolas, provocando que estas moléculas proteicas pierdan su conformación nativa. Esto ocurre porque el SDS se une a las zonas apolares del polipéptido. ¿Cuáles son las funciones del NaCl, etanol absoluto y el detergente? Con el NaCl conseguimos producir el estallido de los núcleos para que queden libres las fibras de cromatina. El etanol se utiliza para precipitar la solución del ADN. La acción de este detergente es formar un complejo con las proteínas y separarlas del ADN. Así nos quedará el ADN libre de las proteínas que tiene asociadas, e inhibe cualquier actividad nucleasa presente en la preparación. ¿Por qué se lava con etanol? Porque el etanol siempre forma una capa arriba de la solución acuosa ¿Que otras técnicas son empleadas en biología molecular para la extracción del ADN? - Separación del DNA mediante electroforesis en gel. - Técnica de extracción de DNA de leucocitos (técnica de miller) - Método wizard (promega, usa) - PCR - Ultra centrifugación - Espectrofotometría - Técnica de sedimentación de ácidos nucleicos.

Una hidrólisis moderada fragmenta el ácido nucleico en los nucleótidos que se forman por la unión covalente de un fosfato y una base heterocíclica a la pentosa. Las pentosas son de dos tipos: Ribosa en el ARN, y desoxirribosa en el ADN. La única diferencia entre estos dos azúcares es que la desoxirribosa tiene un átomo menos de oxígeno