Extraccion de Adn

 

EXTRACCION DE ADN ADN EN HIGADO HIGADO DE POLLO Objetivo En esta práctica realizaremos la extracción del AD ADN N de células animales, su estructura fibrilar y el extraordinario grado de arrollamiento, que permite el empaquetamiento en el núcleo celular de largusimas cadenas de esta molécula! Material necesario 

"e#ido animal $%gado de pollo&



"rozo de tela para filtrar 



'ipeta



 Alco%ol ()*



solución de detergente



+arilla de idrio



-olución de Na.l /0



Embudo



'robeta



+aso de precipitados



Detergente tipo laaa#illas laaa#illas

Funa!ento El ADN se encuentra en el interior del núcleo celular, disperso y muy replegado, unido a protenas para formar la cromatina! As, para extraerlo será necesario %omogeneizar  el te#ido y romper las células para separar el núcleo, romper también la enoltura nucle nuc lear ar para para li liber berar ar su conten contenid ido, o, luego luego separa separarr el ADN de las prote protena nas s que lo protegen y, por último, como precipitarlo para extraerlo la solución!que 1na realizado esto, el ADN aparecerá un agregado de fibrasde blanquecinas seez ad%ieren a la arilla de idrio! 'or último, se puede situar sobre un porta, te2irlo con un colorante básico y obserarlo al microscopio! 'rocedimiento

3! "riturar en fro la muestra de %gado en el mortero #unto con arena o mediante la batidora para %omogeneizar el te#ido! Este procedimiento también rompe muc%as células liberando su contenido! 'arecer ser más eficaz el empleo de una batidora, con la que se obtiene una mezcla más %omgénea y fácil de filtrar  después!

/!  A2adir unos 34 ml de agua destilada o, en su defecto,y remoer  suaemente pero mezclando a fondo!

 

5! 6iltrar arias eces el resultado a traés de un pedazo de tela! t ela! 1n pa2uelo ie#o de algodón a bien! Este filtrado es lento y difcil, pero retendrá en el pa2uelo restos de te#ido!

7!  A2adir al filtrado resultante un olumen igual de solución de Na.l /0! Esta disolución tan concentrada tiene arios efectos! En primer lugar prooca un c%oque osmótico que es capaz de romper algunas membranas membranas no afectadas por el tratam tratamien iento to an anter terior ior!! Ademá Además, s, las las carga cargas s positi positias as de los iones iones 8 Na  atr atrae aerán rán luego luego las carga cargas s negati negatias as del ADN manten mantenié iéndo ndolo lo en la disolución!

9!  A2adir a%ora 3 ml de detergente y remoer suaemente, mezclando bien pero eitando que se forme espuma! De#ando reposar un minuto cada ez! El detergente completa la rotura de las membranas al disoler y separar los lpidos de las mismas! "ambién interiene en la separación de las protenas que rodean al ADN! -i es posible oler a filtrar, se obtendrá una solución más limpia de restos! )! .on los pasos anteriores %emos conseguido tener el ADN libre en la disolución disolución acuosa acuo sa $la cual contendrá contendrá tambi también én diersos diersos restos tisulares tisulares y celulare celulares s en función de la bondad del filtrado&! A continuación %ay que separar el ADN %aciéndolo precipitar!

:!  A%ora se a2aden alco%ol! Es muy importante eitar que se mezclen ambas soluciones, pues será en la interfase donde precipitará el ADN!

 

3! El ADN irá apareciendo poco a poco en la interfase agua;alco%ol en forma de grumos blancos!