Electroforesis de ADN

 

Universidad de Guadalajara Centro universitario de ciencias exactas e ingenierías

Laboratorio de Biología Molecular y Genética

Sección D04

2018 B

Practica 2

“ELECTROFORESIS DE ADN”

Profesora: Mtra. Ariana Arreola Rodriguez Equipo 6 ● De Leo Leon nR Rodr odrigu iguez ez Erik Erika a Viri Viridia diana na ● Jime Jimene nez z Qu Quez ezad ada a An Ana a Isab Isabel el ● Mun Mungui guia a Huiz Huizar ar Franci Francisco sco Jav Javier ier ● Va Varg rgas as He Hern rnán ánde dez zA Azu zuce cena na

Fecha de realización: 05-Noviembre-2018 entrega: 12-Noviembre-2018  12-Noviembre-2018 Fecha de entrega:

 

Objetivo ● Familiarizarse con  métodos de separación de ácidos nucleicos mediante electroforesis en geles de agarosa. ● Ai Aisl sla amie ien nto y  puri purifi fic cac ació ión n de plá lásm smiidos dos bac acte terria ian nos a partir rtir de est stir irpe pes s port porta ador oras as mediante la utilización de un “Kit” comercial. ● Determinación de  los tamaños moleculares mediante electroforesis en gel de agarosa, haciendo  una recta patrón con fragmentos de DNA de peso molecular  conocido. Fundamento El té térm rmin ino o  el elec ectr trof ofor ores esis is se usa usa para para desc descri ribi birr la migr migrac ació ión n de una una part partíc ícul ula a ca carg rgad ada a bajo bajo la influencia de un campo eléctrico. La ele lect ctrrof ofo oresi resis s  en gel es una una técn técnic ica a muy muy uti utili liza zada da para se sep parar rar molé olécu cula las s o frag fragm mento entos s de mo molé lécu cula las s  de ácid ácidos os nucl nuclei eico cos. s. Los Los ma mate teri rial ales es más más co comu mune nes s para para se sepa para rarr molé molécu cula las s de ácid ácidos os nucl nuclei eico cos s  so son n polí políme mero ros s co como mo la poli poliac acri rila lami mida da o la agar agaros osa. a. Esto Estos s gele geles s se co colo loca can n en la  cubeta de electroforesis, sumergidos en un tampón de pH alrededor de 8. De esta forma, las  moléculas de DNA o RNA sometidas a electroforesis se desplazarán al polo positivo ya  que a pH superiores a 5 poseen carga negativa. Los geles se comportan como un tamiz  molecular y permiten separar moléculas cargadas en función de su tamaño y forma. Así,  moléculas de DNA de diferente tamaño, van a emigrar de fo forrma disti tin nta en un gel de  electroforesis. La distancia recorrida por cada fragmento de DNA va a ser   in inve vers rsam amen ente te pr prop opor orci cion onal al  al loga logari ritm tmo o de su peso peso mole molecu cula lar. r. Es im impo port rtan ante te la ut util iliz izac ació ión n de marc ma rcad ador ores es de  ta tama maño ño co cono noci cido do porq porque ue nos nos perm permit itir irán án ca calc lcul ular ar los los peso pesos s mole molecu cula lare res s de las muestras de DNA problema. Material ● ● ● ● ●

Muestr Muestra a de de DNA DNA extraí extraído do previa previame mente nte Micropipetas Punt Puntas as pa para ra mi micr crop opip ipet eta a Tubo Tubos s tip tipo o epp eppen endo dorf rf Cama Camara ra de elec electr trof ofor ores esis is

Procedimiento 

 

Conclusión Se realizó  la práctica de electroforesis en gel de agarosa para identificar   genéticamente una  cepa bacteriana , se corrió la electroforesis a 90 V por 30 minu inutos y  se procedió a realizar el revelado , sin embargo no se obtuvo un resultado satisfactorio ya  que no aparecieron bandas en la muestra, solo en el control, además, al  mismo ti tie empo se corrió la PCR a las mismas condicio ion nes, y tampoco se obtuvo resultado  alguno para la PCR, esto puede deberse a que hizo falta más ti tiem empo po pa para ra  co corr rre er la ele elect ctro rofo fore resi sis s o que la pu pure rez za de DNA obt bten enid ida a ant nter erio iorm rme ent nte e que fue  de 1.16, fue insuficiente para obtener algún result lta ado en la electr tro ofo forresis. is. Otr tro o fac factor  que también pudo haber infl flu uido ido fue la cantidad de muestr tra a que se tomó para realizar  la electroforesis ya que fue de sólo 1 mg . sin embargo a pesar de que no se  obtuvo un resultado favora rab ble en la realiz iza ación de la prá rác ctica, aprendimos el fundamento y  la técnica para llevar a cabo una electroforesis y una PCR lo cual es de gran importancia para nuestra formación académica. Anexos

 

Bibliografía ● Carmen Alici icia  Padill illa Peña et. al. Electrof roforesis de ácidos nucleic ico os en geles de ag agar aros osa. a.  Aisl Aislam amie ient nto o y ca cara ract cter eriz izac ació ión n el elec ectr trof ofor orét étic ica a de DN DNA A pl plas asmí mídi dico co.. Depa De part rtam amen ento to de  Bioq Bioquí uími mica ca y Biol Biolog ogía ía Mo Mole lecu cula lar, r, Ca Camp mpus us Un Univ iver ersi sita tari rio o de Rabanales, Edificio  Severo Ochoa, 14071-Córdoba. Recuperado de : https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/17%20ELECTROFORESI S%20ACS%20NUCLEICOS%20GELES%20AGAROSA.pdff S%20ACS%20NUCLEICOS%20GELES%20AGAROSA.pd