Drogas con heterósidos flavonoides

DROGAS CON HETERÓSIDOS FLAVONOIDES

Universidad Nacional Mayor de san Marcos (2015) Catedra de Farmacognosia y Medicina Tradicional

Drogas con heterósidos flavonoides  Angelo P. Motta, I  Gabriela S. Donayre, I  Roxana Y. Ancasi, I  Yuly Y. Cotrina, I Dra. Arilmi Gorriti,  II  Dra. Augusta Córdoba R,  II  Q.F Katherine Acosta A.  II I Alumnos de la Facultad de Farmacia Farmacia y Bioquímica- Escuela de Farmacia y Bioquímica. UNMSM. Lima-Perú II Profesoras de Laboratorio de la Asignatura de Farmacognosia I.

RESUMEN El presente trabajo tuvo como objetivo reconocer reconocer la importancia de los compuestos fenólicos fenólicos en farmacognosia e identificar flavonoides flavonoides cualitativamente en “naranja” naranja” Citrus sinensi s, s, “r uda” uda” Ruta graveolens y “cebolla” Allium “cebolla”  Allium cepa L.. cepa L.. Se realizó la extracción de flavonoides utilizando diferentes métodos, así mismo se realizaron pruebas de identificación de flavonoides y se usó el estándar de hesperidina para el análisis cromatográfico del albedo de la naranja. Al presentar respuestas positivas en todas las reacciones de identificación, los resultados indican que el extracto seco de naranja contiene hesperidina. El extracto acuoso y etanólico de ruda contiene rutina. El extracto alcohólico de cebolla contiene quercetina.

Palabras clave: Flavonoides, hesperidina, rutina, quercetina, naranja, ruda, cebolla

ABSTRACT The present study aimed to recognize the importance of phenolic compounds in pharmacognosy and identify qualitatively qual itatively flavonoids in “orange” Citrus sinensis, sinensis, “rude rude”” Ruta graveolens and graveolens  and “onion onion”” Allium cepa L.. L.. Extraction of flavonoids was conducted using different methods, also flavonoids identification tests were performed and t he Standard hesperidin was used for chromatographic analysis of the orange. At present positive responses in all reactions of identification, the results indicate that dry orange extract contains hesperidin. hesperidin. The aqueous and ethanol extract contains rough routine. The alcohol alcoholic ic onion extract containing quercetin. quercetin.

Flavonoids, s, hesperidin, rutin, quercetin, orange, rue, onion Key words: Flavonoid

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I.

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INTRODUCCIÓN

Los flavonoides son pigmentos naturales presentes en los vegetales y que protegen al organismo del daño producido por agentes oxidantes, como los rayos ultravioletas, la polución ambiental, sustancias químicas presentes en los alimentos, etc. El organismo humano no puede producir estas sustancias químicas protectoras, por lo que deben obtenerse mediante la alimentación o en forma de suplementos. Están ampliamente distribuidos en plantas, frutas, verduras y en diversas bebidas y representan componentes sustanciales de la parte no energética de la dieta humana 1 Los flavonoides contienen en su estructura química un número variable de grupos hidroxilo fenólicos y excelentes propiedades de quelación del hierro y otros metales de transición, lo que les confiere una gran capacidad antioxidante. Tres características estructurales son importantes para su función: a) La presencia en el anillo B de la estructura catecol u O-dihidroxi; b) La presencia de un doble enlace en posición 2,3; c) La presencia de grupos hidroxilo en posición 3 y 514. La quercetina presenta las tres características mientras que la catequina solo presenta la segunda y la diosmetina la primera.2

II. OBJETIVOS -

-

Reconocer cualitativa y cuantitativamente flavonoides en Citrus sinensis. Identificar cualitativamente flavonoides “cebolla”, Allium cepa L Evaluar la presencia de flavonoides en “ruda”, Ruta graveolens

Figura 1. Flavonoides. Estructura básica y tipos

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III.

DESARROLLO

3.1.

ANÁLISIS CUALITATIVO

graveolens,  se separó 5 g para un extracto acuoso y 5 g para un extracto etanólico.

3.1.1. Hesperidósido:

A. Extracto etanólico

“Naranja” Citrus sinensis

A. Extracción Se pesó 20g de albedo de naranja en un frasco ámbar, se agrega 20 mL de etanol y 2 mL de NaOH y se dejó reposar por 7 días. Pasado el tiempo de maceración, se decantó el líquido de maceración, se acidificó a pH5 y se dejó reposar por 30minutos para la formación de cristales. Luego se filtró, para obtener los cristales de hesperidina en la torta, se llevó a secar para la ebullición de los solventes hasta obtener el extracto seco de hesperidina.

B. Reacciones específicas identificación Reacción con H2SO4 cc.

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de

Se colocó 1mg de extracto seco de hesperidina en un tubo de ensayo, se agregó gotas de H 2SO4cc. Se observó la coloración naranja

Reacción con HCl cc. Se colocó 1mg de extracto seco de hesperidina en un tubo de ensayo, agregue gotas de HClcc. Se observó el precipitado blanco.

Reacción con HNO3 Se colocó 1mg de extracto seco de hesperidina en un tubo de ensayo, se agregó gotas de HNO 3. Se observó la coloración parda rojiza.

Reacción con NaOH 30% Se colocó 1mg de extracto seco de hesperidina en un tubo de ensayo, agregó gotas de NaOH 30%. Se observó la coloración amarillo naranja

3.1.2. Rutinósido “Ruda” Ruta graveolens Para realizar el ensayo de los rutinósidos se pesó 10 g de Ruta

En un beaker de 250 mL se colocó 5 g del material vegetal y se agregó alcohol de 96° c.s.p. recubrir. Se pasó a un baño maría durante 20 minutos, luego se decantó con ayuda de una pipeta Pasteur a los tubos donde se le agregó respectivamente, los reactivos siguientes: wilson, shinoda, FeCl3 (ac)

B. Extracto acuoso En un beacker de 250 mL se colocó 5 g del material vegetal y se agregó agua destilada c.s.p. recubrir. Se pasó a un baño maría durante 20 minutos, luego se decantó con ayuda de una pipeta Pasteur a los tubos donde se le agregó respectivamente, los reactivos siguientes: wilson, shinoda,FeCl 3 (ac)

3.1.3. Quercetina : Cebolla “ Allium cepa L.”  Para realizar el ensayo de quercetina, se pesó 2 g de cáscara de cebolla y  se agregó 25 mL de alcohol. Luego se llevó a baño maría por 15 minutos.

A. Reacciones específicas de identificación Reacción con Pb(CH3COO)2 Se colocó 0.5 mL de extracto etanólico de cebolla en un tubo de ensayo , se agregó gotas de FeCl3 . Se observó la coloración verde en frio ,rojo oscuro en caliente

Reacción con FeCl3 Se colocó 0.5 mL de extracto etanólico de cebolla en un tubo de ensayo, se agregó gotas de FeCl3. Se observó el precipitado de color amarillo

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3.2.

ANÁLISIS CROMATOGRÁFICO

En la Tabla N° 1 se muestra los resultados obtenidos para la caracterización de hesperidósido en la Naranja.

Sistema de solventes: Acetato de etilo: metanol: agua (100: 13.5:10) Revelador: Solución etanólica de cloruro férrico Soporte: Sílica gel Estándar: Solución de hesperidina Muestra: Extracto seco de albedo de naranja

IV. 4.1. 4.1.1.

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RESULTADOS

Tabla 1. Reacciones específicas de identificación del hesperidósido

Reacción

pH 5

pH inicial

Resultad o

H2SO4 cc

Coloración naranja

+++

HCl cc

Precipitad o blanco

+++

ANÁLISIS CUALITATIVO Hesperidósido:

En la figura 2, se detalla la preparación de los extracto seco de naranja.

Observación

HNO3

NAOH 30%

Coloración pardo rojizo

Coloración amarillo naranja

+

+++

Nota: positivo trazas (+), abundante (+++)

4.1.2. Rutinósido En la figura 3, se detalla la preparación de los extractos de ruda.

Figura 3.Obtención de rutinósidos. A. Hojas de Ruda; B. Extracto Acuoso; C. Extracto Etanólico.

Figura 2. Preparación del extracto seco de Citrus sinensis . A. Maceración alcohólica del albedo de naranja en un frasco ámbar por 7 días (izquierda) y decantación del líquido de maceración (derecha) B. Acidificación del macerado a pH 5 para la formación de cristales C. Filtración D. Secado de la torta en una estufa por 1 día E. Obtención del extracto seco de hesperidina.

En la Tabla N° 2 y 3 se muestran los resultados obtenidos para la caracterización de Rutina de la Ruta graveolens. En la figura 3 y 4 se visualiza respuestas similares para las extracciones acuosa y alcohólica.

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Tabla 2. Caracterización de rutina de la Ruta graveolens, extracción acuosa

DROGA

RUDA Ruta graveolens 

Extracto acuoso

Tabla 3. Caracterización de rutina de la Ruta graveolens, extracción alcohólica RESULT ADOS

REACCIÓN

OBSERVACIÓN

Wilson (Ac. Bórico + Citrato de sodio)

Coloración rosada. Observación en el Uv: Fluorescencia verde

++

Coloración rosada Coloración verde

+ ++

Shinoda FeCl3

Nota: positivo trazas (+), abundante (++)

DROGA

REACCIÓN

OBSERVACIÓN

RESUL TADOS

RUDA

Wilson (Ac. Bórico + Citrato de sodio)

Coloración amarilla  – rosada Observación en el Uv: Fluorescencia verde

++

Shinoda

Coloración rosada

++

FeCl3

Coloración verde

++

Ruta graveolens 

Extracto alcohólico

Nota: positivo trazas (+), abundante (++)

Figura 4. Caracterización del extracto acuoso de Ruta graveolens. A. Blanco (extracto acuoso); B. Extracto con el reactivo de Wilson; C. Extracto con reactivo Shinoda; D. Extracto con solución de FeCl3; E. Extracto acuoso con el reactivo de Wilson observado en lámpara UV

Figura 5. Caracterización del extracto alcohólico de Ruta graveolens. A. Blanco (extracto alcohólico); B. Extracto con el reactivo de Wilson; C. Extracto con reactivo Shinoda; D. Extracto con solución de FeCl3; E. Extracto acuoso con el reactivo de Wilson observado en lámpara UV

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4.1.3. Quercetinósido

4.2. ANÁLISIS CROMATOGRÁFICO

En la figura 6, se detalla la preparación del extracto etanólico de cebolla.

Debido a la probable contaminación del sistema de solventes no se determinó R.F ni de la muestra, ni del estándar de hesperidina

Bf .

Figura 6. Extracto etanólico de cebolla. A. 2 g de cascara de cebolla en 25 mL de acochol. B. Extracción por decocción, en baño maría por 15 minutos. C. Obtención del extracto etanólico

En la Tabla N° 4 se muestra los resultados obtenidos para la caracterización de quercetinósido en la cebolla Tabla 4. Reacciones específicas de identificación del quercetinósido

Reacción

Pb(CH3COO)2

Observación

Resultado

Precipitado de color amarillo

+++

Coloración verde en frio

+

Coloración rojo oscuro en caliente

+

FeCl3

Nota: positivo trazas (+), abundante (+++)

Figura 7. Análisis Cromatográfico A. Cromatoplaca observada en lampara UV. Bf. Bandas fluorescentes. B. Revelado con solución de FeCl 3 bajo campana de extracción C. Cromatoplaca, revelada con FeCl 3, vista a luz visible. D. Cromatoplaca, revelada con FeCl 3, vista a luz UV, no

En la Tabla N° 5 se muestra que no se obtuvo el R.F de la cromatografía, del extracto seco de naranja Citrus sinensis para la identificación la hesperidina Tabla 5. Resultado de la cromatografía del hesperidósido

Heterósidos flavonoides Estándar de Hesperidina Muestra del extracto seco de albedo de naranja

Relación de Flujo (R.F) No se determino No se determino

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V. DISCUSIÓN Las múltiples investigaciones que se han realizado sobre la quercetina, evidencian que este flavonol contiene un alto poder antioxidante y está presente en extractos vegetales como la cebolla tipo bulbo. 3 Generalmente, los solventes polares son empleados en la extracción de glicosidos o agliconas.4 Por lo cual, en la práctica se utilizó etanol como solvente de la decocción. Así se obtuvo el extracto alcohólico que se emplea en las reacciones de identificación cualitativa. En la tabla 4 se observó que la muestra presento coloración amarilla al reaccionar con Pb(CH3COO)2. Al reaccionar con FeCl3 en frio, se observó una coloración verde, mientras que luego de someterla a calor, presento coloración roja. 5 La reacción del FeCl 3 con grupos fenólicos puede dar lugar a la formación de compuestos coloreados, dado que los grupos hidroxilo actúan como activadores del anillo bencénico al donarle densidad, esto ocasiona que la aromaticidad del anillo se debilite, adquiriendo más las características de un polieno conjugado. 2 La aparición de un color verde sugiere la presencia de un derivado de catecol. 4 La reacción con el acetato de plomo se fundamenta en formación de un complejo coloreado entre el plomo y los di y polihidroxifenoles como las flavonas, flavonoles, flavanonas dihidroxiladas, flavanoles y antocianidinas di y 2 trihidroxiladas. Es así que se apreció un ligero precipitado amarillo. Para el experimento de la caracterización de Rutina de la Ruta graveolen se realizaron dos extractos: acuosos y etanólico resultando reacciones positivas

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para ambos, que demuestra que los rutinósidos son compuestos solubles en agua y etanol debido a su carácter fenólico,6 destacando prioritariamente en el extracto alcohólico, por su solubilidad relativamente alta 7 por ser el rutinósido un flavonoide. Entre las reacciones de análisis cualitativo que se llevaron a cabo podemos mencionar a la reacción de Shinoda, donde el magnesio metálico es oxidado por el HCl concentrado, dando como productos al H2, que es eliminado en forma de gas y el MgCl2, que es el que forma complejos con los flavonoides dando coloraciones características 6, esto fue evidenciable en la práctica ya que el rutinósido por ser un flavonol (quercetin 3rutinoside)8  dio una coloración amarillenta, la cual fue mucho más notoria en la reacción con el extracto etanólico debido a que el magnesio divalente intensificó la coloración por estar doblemente coordinado en presencia de una alta concentración del rutinosido. Además, se logró observar una fluorescencia verde en una cámara UV que demuestra su intensa absorción en la región ultravioleta (340nm)8, esto debido a los sistemas aromáticos conjugados 6  presente en la estructura de rutinósido. En la tabla 1, los resultados en la coloración con los reactivos usados para el análisis de Hesperidina en la Naranja (Citrus sinensis) dieron positivo sin excepción, por parte del ácido nítrico la coloración resultó parda rojiza pero con una intensidad baja, esto pudo deberse a que el ácido a pesar de ser fuerte no se encontraba en la concentración óptima.  9 En el caso de la reacción de Shinoda, el extracto de ruda en contacto con ácido clorhídrico con virutas de magnesio metálico se genera hidrógeno, este último reduce al flavonoide (rutina), lo cual se

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reconoce por la coloración rosada. En la reacción de coloración con FeCl 3, la muestra de extracto de ruda cambio a una coloración verde. Esto se debe a que la naturaleza polifenólica de los flavonoides, específicamente compuestos con ortodifenoles, lleva a la formación de coloraciones variadas en presencia de FeCl3, que en este caso por presentar rutina, produce una coloración verde . 9

VI. CONCLUSIONES -

Se reconoció cualitativamente hesperidina en albedo de “naranja”, Citrus sinensis, mediante las reacciones con ácido sulfúrico concentrado, ácido clohídrico concentrado, ácido nítrico e hidróxido al 30% mientras que por el método cromatográfico no se corroboró la presencia de este tipo de heterósido flavonoide. Se identificó cualitativamente los flavonoides, de tipo quercetina en la cascara de cebolla por medio de la reacción de acetato de plomo y cloruro férrico. Se evaluó la presencia de heterósidos flavonoides de tipo quercetín3-rutinóside (flavonol) en Ruta graveolens mediante análisis cualitativo.

-

-

VII.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

1. Martínez F., González G, Culebras J. Tuñón J. Los flavonoides: propiedades y acciones antioxidantes Nutr. Hosp. (2002) XVII (6) 271-278 2. Rengifo P. Cuantificación de flavonoides en el extracto etanólico de propóleos. Revista Pharmaciencia. Perú - 2013 1(2)]

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3. Golda M. Gil D. Cano3, Benavides Y. Evaluación de la capacidad antioxidante de la quercetina a partir del extracto natural de cebolla roja ocañera (allilium cepa l) y manzana roja (pyrus malus l var. Red delicius) en aceite de palma refinado tipo industrial en condiciones de calentamiento continuo. Revista Publicaciones e Investigación. 2010 1(4) 4. Lock O. Colorantes Naturales. Fondo Editorial de la Pontificia Universidad Católica del Perú: 1997 5. Navarro C., Vera L. Estudio de la concentración de quercetina en las variedades de manzana (malus domestica) fuji, red delicius y delicia. Universidad de Guanajuato - 2010, 1. 6. Martínez M, Querevalú L, De Los Rios E, Ruiz S. Características farmacognósticas de las hojas de Capparis avicennifolia. Rev. Med. Vallejiana. 2007 Oct 18;4(2)9:121-31. 7. Howard A, inventor; Howard Foundation (Holdings) Limited “Grandview”, assignee. Mejoras en o relacionadas con la solubilización de flavonoles. Spanish patent ES 2 230 267 T3. 2005 May 1. Spanish. 8. Cazes J. Encyclopedia of da cromatography. 2 ed. New York: Taylor & Francis Group; 2005 p.632. 9. Cuevas Montilla E., Antezana A. y Winterhalter P., análisis y caracterización de antocianinas en diferentes variedades de maíz (Zea mays) boliviano. Universidad Mayor San Simón Cochabamba, Sucre a Parque la Torre, Cochabamba, Bolivia, 2008. pág. 83 -84

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