Docsity Pop de Um Laboratorio de Analises Clinicas PDF

 

Pop de um laboratório de analises clinicas Hematologia Università di Pisa 10 pag.

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PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRÃO

POP LAB HEM - 003

TÍTULO: FAZER COLORAÇÃO DE LÂMINAS MANUAL I - CONTROLE HISTÓRICO REVISÃO

DATA

Nº PÁGINAS

HISTÓRICO ALTERAÇÃO

ELABORAÇÃO

00

13/03/2018

1 de 10  10 

Emissão inicial

Clébia Caires

VERIFICAÇÃO Solange Pacheco

APROVAÇÃO Ana Marina Campas de Faria

1. Introdução

Romanowsky idealizou um método em que uma solução de corantes poderia corar diferentes estruturas. Misturas dos corantes eosina (corante ácido) e azul de metileno (corante básico) são preparadas segundo proposição de vários autores: Leishman, May-Grunwald, Giemsa, Wright e outros (que dão os respectivos nomes aos corantes). Estes corantes são dissolvidos em álcool (em geral metanol). Enquanto o corante básico confere cor azul violácea aos ácidos nucléicos, nucleoproteínas, grânulos basófilos e fracamente os grânulos dos neutrófilos, a eosina confere cor vermelha ou laranja à hemoglobina e aos grânulos eosinófilos. 2. Objetivo

  Este procedimento procedimento Operacional Operacional Padrão foi elabora elaborado do pela Seção de Hematologia Hematologia e tem como produto final a coloração de lâminas.

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3. Campos de aplicação 

  Setor de Hematologia.

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4. Referências normativas

  Resolução n° 302, de 13 de outubro de 2005: dispõe sobre regulamento técnico para

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funcionamento de laboratórios clínicos. 5. Responsabilidade / competência

  Técnico de patologia clínica: coloração de lâminas.

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6. Definições

  Não se aplica.

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7. Conteúdo do padrão 7.1 Recursos necessários 1 

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PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRÃO

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TÍTULO: FAZER COLORAÇÃO DE LÂMINAS MANUAL I - CONTROLE HISTÓRICO REVISÃO

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  Mão de obra especializ especializada ada

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  Reagentes de coloração

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  Amostra

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7.2 Principais passos No setor de Hematologia são utilizadas duas metodologias para a coloração manual de lâminas, sendo estas a coloração May  –Grünwald/Giemsa  e  e a coloração Panótico Rápid Rápido. o. A. Coloração May  –Grünwald/Giemsa : 1. Indicação: As soluções de May  –Grünwald/Giemsa  destinam-se  destinam-se a serem utilizadas na coloração de esfregaços do sangue ou da medula óssea. As soluções destinam-se à “utilização em diagnóstico in vitro ”, ”, evidenciando estruturas celulares.  

2. Princípio: i. Os corantes são su substâncias bstâncias químicas que apre apresentam sentam ccor or defini definida da pe pela la presença de grupos atômicos ou radicais cromóforos na sua molécula. Tratada

ii.

iii.

pelos corantes, a célulaasanguínea estruturas e neutrófilas, conforme retenção evidencia do corante ácido,acidófilas, básico basófilas ou neutro respectivamente. O corante  May  –Grünwald   é uma mistura de eosina e azul de metileno (não oxidados), que quimicamente se transforma em eosinato de azul de metileno. Já o Giemsa  é  é uma mistura de azur II e eosinato de azur. Esses dois corantes são utilizados através de um método de coloração em que após fixação e coloração pelo May-Grünwald   (pouco específico para o núcleo), se processa uma segunda coloração com solução de Giemsa   (que apresenta afinidade nuclear), obtendo-se um resultado final melhor e mais detalhado. 2 

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3. Equipamentos e Materiais: i. Suporte para coloração de lâminas; ii. Lâmina com esfregaço de sangue seco; iii. Corante de May-Grünwald   ;; iv. Corante Giemsa  (com  (com diluição no momento da coloração); v. Suporte para secagem de lâmina; vi. Água destilada; 4. Procedimento: i. Identificar os esfregaços com o no nome me do paciente, o número da amostra e da data ta a lápis na borda fosca da lâmina; ii. Colocar a lâmina sobre o suporte como esfregaço voltado para cima; iii. Cobrir a lâmina com corante de May-Grünwald  (20  (20 gotas) e aguardar 4 minutos; iv. Cobrir a lâmina com água destilada destilada se sem m des desprezar prezar o corante e deixar por 1 minuto. A quantidade de água a ser colocada sobre o May-Grünwald , a rigor, deve ser igual a quantidade de corante. O tempo nesta fase é crítico; v. O corante de Giemsa  deve  deve ser preparado para uso na proporção de uma gota do

vi. vii. viii. ix.

corante (50 µL) para cada 1 mL de água. A solução uso do corante de Giemsa   não deve ser guardada por mais de 24 horas. Após o tempo de um minuto, desprezar solução May-Grünwald -água -água e cobrir a lâmina com o corante de Giemsa  e  e deixar por 12 minutos; Desprezar o corante e lavar; Limpar o fundo da lâmina com gaze seca; Colocar a lâmina para secar na posição vertical; Para o procedimento automatizado no corador SPS Evolution vide POP LAB HEM 018 – “PASSO A PASSO NO EQUIPAMENTO ABX PENTRA 120 DF E  ABX PENTRA 120 DX/SPS” (Fase Analítica item 10).  3 

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5. Resultados esperados: i. Macroscopicamente, Macroscopicamente, o esfregaço de laminas bem corado (seja métodos manual ou automatizado) deve possuir uma coloração rósea na área menos espessa e uma coloração púrpura azulada na mais espessa. ii. As características microscópicas ideais da coloração hematológica deve seguir o seguinte padrão: Células/Componentes

Coloração

Hemácias

Rosa salmão

Núcleo dos neutrófilos

Purpura-azulado Purpura-azulado escuro

Grânulos específicos de neutrófilos

Violeta ou purpura claro

Grânulos de linfócitos e de plaquetas

Azul

Grânulos específicos de basófilos

Purpura escuro

Grânulos específicos de eosinófilos

Laranja

Cromatina (incluindo corpúsculos de Howell-Jolly )

Purpura

Corpusculos de Dohle  

Cinza azulado

Grânulos de promielócitos e bastonetes de Auer  

Purpura-avermelhado

Citoplasma de linfócitos

Azul

Citoplasma de monócitos

Cinza-azulado

Citoplasma de neutrófilos

Rosa claro

Citoplasma de plaquetas

Purpura azulado ou lilás

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6. Controle de Qualidade: i. Não utilizar corantes com prazo de validade vencido; ii. Os corantes são estáveis em temperatura temperatura ambiente, e devem ser armazenados em locais frescos, secos, ao abrigo da luz solar direta e longe de fontes potencialmente geradoras de faíscas e calor, dada sua inflamabilidade. iii. Verificação da quali qualidade dade através da análise microscópica das lâminas diariamente, realizadas por (médicos, bioquímicos, biomédicos) e anotado em uma planilha ( vide anexo ). B. Coloração Panótico Rápido:

1. Indicação: Corantes destinados ao uso principal em hematologia, na coloração de células sanguíneas em esfregaços de sangue periférico, de medula ou de outra natureza. 2. Princípio: O Panótico Rápido baseia-se no princípio de coloração hematológica estabelecida por Romanowsky . É um corante utilizado em análises laboratoriais com a finalidade de se obter resultados de forma mais rápida. A extensão hematológica é submetida a ação de um fixador e duas soluções corantes, por meio de imersões rápidas, e ao final da última imersão encontra-se pronta para leitura. 3. Equipamentos e Materiais: Materiais: i. Lâmina com esfregaço de sangue seco; ii. Água destilada; iii. Reagentes do Kit Panótico Rápido Solução 1 – Solução de Ciclohexadienos a 0,1% Solução 2 – Solução de Azobenzenosulfônicos a 0,1% Solução 3 – Solução de Fenotiazinas a 0,1% 5 

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Cuba de Coplin  (frascos  (frascos de paredes com frisos onde coloca-se as lâminas para imersão – Fig. 1).

4. Procedimento: i. Identificar os esfregaços com o nome do paciente, o número da amostra e data a lápis na borda fosca da lâmina; ii. Colocar as soluções do kit de coloração nas cubas de Coplin   (fig. 1), uma separadamente da outra, e identificar os frascos com os números 1, 2 e 3, obedecendo à ordem de imersão. i. Colocar as llâminas âminas cuba do primeiro corante e de deixar ixar por 10 segundos. Aos 10 segundos retirar do corante e deixar escorrer durante 5 segundos. seg undos. ii. Colocar as lâminas cuba do segundo corante e deixar por 10 segundos. Retirar do corante e deixar escorrer durante 5 segundos. iii. Colocar as lâminas cuba do terceiro corante e ddeixar eixar por 20 segundos. Retirar do corante e deixar escorrer durante 5 segundos e lavar as lâminas com água deionizada recente. Obs.:  A técnica de coloração deve ser seguida rigorosamente observando o volume do

corante (a extensão deve estar totalmente submersa no corante) e o intervalo de 5 segundos entre as colorações subsequentes. Sempre certificar o correto fechamento das tampas das cubas, uma vez que os corantes são voláteis; o seu volume pode ser completado sempre que necessário.

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Figura 1: Cuba de Coplin  com  com tampa de rosca

5. Resultados esperados: esperados: Idem à coloração May  –Grünwald/Giemsa. 6. Controle de Qualidade: Qualidade: Idem à coloração May  –Grünwald/Giemsa.  7.3 Cuidados especiais

  Os cuidados habituais de segurança devem ser aplicados nnaa manipulaçã manipulaçãoo da amostra e

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dos reagentes conforme o Manual de Biossegurança do laboratório.   Os reagentes utilizados em condições condições técnic técnicas as adequadas adequadas e armazenados nas condiç condições ões especificadas são estáveis estáveis até a data da validade expressa na etiqueta.

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8. Siglas

  SNA: solicitação de nova amostra

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9. Indicadores

  Desempenho no controle externo da qualidade (CEQ)

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  Recoleta (geral, po porr materi material al impróprio, impróprio, para confirmação, confirmação, por aci acidente dente e div diversas) ersas)

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  TAT (Turnaround Time) para tes testes tes ime imediatos diatos e de emergência - HEMATOLOGIA

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10. Gerenciamento de riscos ri scos Categoria de risco Assistencial

Falhas potenciais geradoras de riscos Acidente com o tubo/frasco

Ações de prevenção

Evento Desatenção

Atenção ao manusear a amostra Atenção ao realizar a identificação da amostra

Ações frente ao evento SNA

Refazer exame

Assistencial

Identificação manual do paciente/analito incorreta

Troca de resultado do paciente/não realização do exame solicitado

Assistencial

Identificação errada de lâminas

Liberação de Atenção ao exame incorreto realizar a identificação da amostra

Assistencial

Reagente Liberação de Verificação do Refazer o exame inadequado:: Troca exame incorreto reagente antes de inadequado de iniciar a rotina reagente/reagente vencido

Refazer os exames quando o erro é detectado

11. Referências

  NewProv, Bula Reagente May-Grünwald/Giemsa. 2010.

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  NewProv, Bula InstantProv. 2014.

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  Dacie & Lewis. Practical Haematology. Churchill-Livingstone, 9th ed. 1995, Edinburgh.

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  ALQEP: Alberta Laboratory Quality/Enhancement Program, College of Physicians and Surgery, Blood Film Staining Effects, A educational Supplement – May 2004.

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12. Anexos Planilha de coloração de lâminas.

HGIP - SERVIÇO DE PATOLOGIA CLÍNICA E MEDICINA LABORATORIA LABORATORIALL (SPCML) - SETOR HEMATOLOGIA Registro de Lote em Uso e Qualidade de Coloração Mês:

Ano:

Reagentes May Grunwald Giemsa

Metanol Tampão Dia

Marca

Kit do Equipamento 2  – SPS 105 SPSE 1027 Lote Validade Início de uso

Hemogram

1609453

09/2018

___/___/___

Hemogram Anidrol Anidrol

1710485 38.169-1 38.071-1

10/2019 10/2021 04/2018

___/___/___ ___/___/___ ___/___/___

Responsável pela coloração

Qualidade da coloração

Observação

Número da Amostra

Responsável

Conduta

Visto do responsável

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 9 

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12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 LEGENDA: TR  –  – troca de reagente/ AG AG –  –  Aguardando Manutenção / NA  –  – não se aplica

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