Pop de um laboratório de analises clinicas Hematologia Università di Pisa 10 pag.
Document shared on www.docsity.com Downloaded by: adriana-aragao (
[email protected]) (
[email protected])
PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRÃO
POP LAB HEM - 003
TÍTULO: FAZER COLORAÇÃO DE LÂMINAS MANUAL I - CONTROLE HISTÓRICO REVISÃO
DATA
Nº PÁGINAS
HISTÓRICO ALTERAÇÃO
ELABORAÇÃO
00
13/03/2018
1 de 10 10
Emissão inicial
Clébia Caires
VERIFICAÇÃO Solange Pacheco
APROVAÇÃO Ana Marina Campas de Faria
1. Introdução
Romanowsky idealizou um método em que uma solução de corantes poderia corar diferentes estruturas. Misturas dos corantes eosina (corante ácido) e azul de metileno (corante básico) são preparadas segundo proposição de vários autores: Leishman, May-Grunwald, Giemsa, Wright e outros (que dão os respectivos nomes aos corantes). Estes corantes são dissolvidos em álcool (em geral metanol). Enquanto o corante básico confere cor azul violácea aos ácidos nucléicos, nucleoproteínas, grânulos basófilos e fracamente os grânulos dos neutrófilos, a eosina confere cor vermelha ou laranja à hemoglobina e aos grânulos eosinófilos. 2. Objetivo
Este procedimento procedimento Operacional Operacional Padrão foi elabora elaborado do pela Seção de Hematologia Hematologia e tem como produto final a coloração de lâminas.
3. Campos de aplicação
Setor de Hematologia.
4. Referências normativas
Resolução n° 302, de 13 de outubro de 2005: dispõe sobre regulamento técnico para
funcionamento de laboratórios clínicos. 5. Responsabilidade / competência
Técnico de patologia clínica: coloração de lâminas.
6. Definições
Não se aplica.
7. Conteúdo do padrão 7.1 Recursos necessários 1
ASSINATURA E CARIMBO
Document shared on www.docsity.com Downloaded by: adriana-aragao (
[email protected]) (
[email protected])
PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRÃO
POP LAB HEM - 003
TÍTULO: FAZER COLORAÇÃO DE LÂMINAS MANUAL I - CONTROLE HISTÓRICO REVISÃO
DATA
Nº PÁGINAS
HISTÓRICO ALTERAÇÃO
ELABORAÇÃO
00
13/03/2018
2 de 10 10
Emissão inicial
Clébia Caires
VERIFICAÇÃO Solange Pacheco
APROVAÇÃO Ana Marina Campas de Faria
Mão de obra especializ especializada ada
Reagentes de coloração
Amostra
7.2 Principais passos No setor de Hematologia são utilizadas duas metodologias para a coloração manual de lâminas, sendo estas a coloração May –Grünwald/Giemsa e e a coloração Panótico Rápid Rápido. o. A. Coloração May –Grünwald/Giemsa : 1. Indicação: As soluções de May –Grünwald/Giemsa destinam-se destinam-se a serem utilizadas na coloração de esfregaços do sangue ou da medula óssea. As soluções destinam-se à “utilização em diagnóstico in vitro ”, ”, evidenciando estruturas celulares.
2. Princípio: i. Os corantes são su substâncias bstâncias químicas que apre apresentam sentam ccor or defini definida da pe pela la presença de grupos atômicos ou radicais cromóforos na sua molécula. Tratada
ii.
iii.
pelos corantes, a célulaasanguínea estruturas e neutrófilas, conforme retenção evidencia do corante ácido,acidófilas, básico basófilas ou neutro respectivamente. O corante May –Grünwald é uma mistura de eosina e azul de metileno (não oxidados), que quimicamente se transforma em eosinato de azul de metileno. Já o Giemsa é é uma mistura de azur II e eosinato de azur. Esses dois corantes são utilizados através de um método de coloração em que após fixação e coloração pelo May-Grünwald (pouco específico para o núcleo), se processa uma segunda coloração com solução de Giemsa (que apresenta afinidade nuclear), obtendo-se um resultado final melhor e mais detalhado. 2
ASSINATURA E CARIMBO
Document shared on www.docsity.com Downloaded by: adriana-aragao (
[email protected]) (
[email protected])
PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRÃO
POP LAB HEM - 003
TÍTULO: FAZER COLORAÇÃO DE LÂMINAS MANUAL I - CONTROLE HISTÓRICO REVISÃO
DATA
Nº PÁGINAS
HISTÓRICO ALTERAÇÃO
ELABORAÇÃO
00
13/03/2018
3 de 10 10
Emissão inicial
Clébia Caires
VERIFICAÇÃO Solange Pacheco
APROVAÇÃO Ana Marina Campas de Faria
3. Equipamentos e Materiais: i. Suporte para coloração de lâminas; ii. Lâmina com esfregaço de sangue seco; iii. Corante de May-Grünwald ;; iv. Corante Giemsa (com (com diluição no momento da coloração); v. Suporte para secagem de lâmina; vi. Água destilada; 4. Procedimento: i. Identificar os esfregaços com o no nome me do paciente, o número da amostra e da data ta a lápis na borda fosca da lâmina; ii. Colocar a lâmina sobre o suporte como esfregaço voltado para cima; iii. Cobrir a lâmina com corante de May-Grünwald (20 (20 gotas) e aguardar 4 minutos; iv. Cobrir a lâmina com água destilada destilada se sem m des desprezar prezar o corante e deixar por 1 minuto. A quantidade de água a ser colocada sobre o May-Grünwald , a rigor, deve ser igual a quantidade de corante. O tempo nesta fase é crítico; v. O corante de Giemsa deve deve ser preparado para uso na proporção de uma gota do
vi. vii. viii. ix.
corante (50 µL) para cada 1 mL de água. A solução uso do corante de Giemsa não deve ser guardada por mais de 24 horas. Após o tempo de um minuto, desprezar solução May-Grünwald -água -água e cobrir a lâmina com o corante de Giemsa e e deixar por 12 minutos; Desprezar o corante e lavar; Limpar o fundo da lâmina com gaze seca; Colocar a lâmina para secar na posição vertical; Para o procedimento automatizado no corador SPS Evolution vide POP LAB HEM 018 – “PASSO A PASSO NO EQUIPAMENTO ABX PENTRA 120 DF E ABX PENTRA 120 DX/SPS” (Fase Analítica item 10). 3
ASSINATURA E CARIMBO
Document shared on www.docsity.com Downloaded by: adriana-aragao (
[email protected]) (
[email protected])
PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRÃO
POP LAB HEM - 003
TÍTULO: FAZER COLORAÇÃO DE LÂMINAS MANUAL I - CONTROLE HISTÓRICO REVISÃO
DATA
Nº PÁGINAS
HISTÓRICO ALTERAÇÃO
ELABORAÇÃO
00
13/03/2018
4 de 10 10
Emissão inicial
Clébia Caires
VERIFICAÇÃO Solange Pacheco
APROVAÇÃO Ana Marina Campas de Faria
5. Resultados esperados: i. Macroscopicamente, Macroscopicamente, o esfregaço de laminas bem corado (seja métodos manual ou automatizado) deve possuir uma coloração rósea na área menos espessa e uma coloração púrpura azulada na mais espessa. ii. As características microscópicas ideais da coloração hematológica deve seguir o seguinte padrão: Células/Componentes
Coloração
Hemácias
Rosa salmão
Núcleo dos neutrófilos
Purpura-azulado Purpura-azulado escuro
Grânulos específicos de neutrófilos
Violeta ou purpura claro
Grânulos de linfócitos e de plaquetas
Azul
Grânulos específicos de basófilos
Purpura escuro
Grânulos específicos de eosinófilos
Laranja
Cromatina (incluindo corpúsculos de Howell-Jolly )
Purpura
Corpusculos de Dohle
Cinza azulado
Grânulos de promielócitos e bastonetes de Auer
Purpura-avermelhado
Citoplasma de linfócitos
Azul
Citoplasma de monócitos
Cinza-azulado
Citoplasma de neutrófilos
Rosa claro
Citoplasma de plaquetas
Purpura azulado ou lilás
4
ASSINATURA E CARIMBO
Document shared on www.docsity.com Downloaded by: adriana-aragao (
[email protected]) (
[email protected])
PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRÃO
POP LAB HEM - 003
TÍTULO: FAZER COLORAÇÃO DE LÂMINAS MANUAL I - CONTROLE HISTÓRICO REVISÃO
DATA
Nº PÁGINAS
HISTÓRICO ALTERAÇÃO
ELABORAÇÃO
00
13/03/2018
5 de 10 10
Emissão inicial
Clébia Caires
VERIFICAÇÃO Solange Pacheco
APROVAÇÃO Ana Marina Campas de Faria
6. Controle de Qualidade: i. Não utilizar corantes com prazo de validade vencido; ii. Os corantes são estáveis em temperatura temperatura ambiente, e devem ser armazenados em locais frescos, secos, ao abrigo da luz solar direta e longe de fontes potencialmente geradoras de faíscas e calor, dada sua inflamabilidade. iii. Verificação da quali qualidade dade através da análise microscópica das lâminas diariamente, realizadas por (médicos, bioquímicos, biomédicos) e anotado em uma planilha ( vide anexo ). B. Coloração Panótico Rápido:
1. Indicação: Corantes destinados ao uso principal em hematologia, na coloração de células sanguíneas em esfregaços de sangue periférico, de medula ou de outra natureza. 2. Princípio: O Panótico Rápido baseia-se no princípio de coloração hematológica estabelecida por Romanowsky . É um corante utilizado em análises laboratoriais com a finalidade de se obter resultados de forma mais rápida. A extensão hematológica é submetida a ação de um fixador e duas soluções corantes, por meio de imersões rápidas, e ao final da última imersão encontra-se pronta para leitura. 3. Equipamentos e Materiais: Materiais: i. Lâmina com esfregaço de sangue seco; ii. Água destilada; iii. Reagentes do Kit Panótico Rápido Solução 1 – Solução de Ciclohexadienos a 0,1% Solução 2 – Solução de Azobenzenosulfônicos a 0,1% Solução 3 – Solução de Fenotiazinas a 0,1% 5
ASSINATURA E CARIMBO
Document shared on www.docsity.com
Downloaded by: adriana aragao (
[email protected]) (
[email protected])
PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRÃO
POP LAB HEM - 003
TÍTULO: FAZER COLORAÇÃO DE LÂMINAS MANUAL I - CONTROLE HISTÓRICO REVISÃO
DATA
Nº PÁGINAS
HISTÓRICO ALTERAÇÃO
ELABORAÇÃO
00
13/03/2018
6 de 10 10
Emissão inicial
Clébia Caires
iv.
VERIFICAÇÃO Solange Pacheco
APROVAÇÃO Ana Marina Campas de Faria
Cuba de Coplin (frascos (frascos de paredes com frisos onde coloca-se as lâminas para imersão – Fig. 1).
4. Procedimento: i. Identificar os esfregaços com o nome do paciente, o número da amostra e data a lápis na borda fosca da lâmina; ii. Colocar as soluções do kit de coloração nas cubas de Coplin (fig. 1), uma separadamente da outra, e identificar os frascos com os números 1, 2 e 3, obedecendo à ordem de imersão. i. Colocar as llâminas âminas cuba do primeiro corante e de deixar ixar por 10 segundos. Aos 10 segundos retirar do corante e deixar escorrer durante 5 segundos. seg undos. ii. Colocar as lâminas cuba do segundo corante e deixar por 10 segundos. Retirar do corante e deixar escorrer durante 5 segundos. iii. Colocar as lâminas cuba do terceiro corante e ddeixar eixar por 20 segundos. Retirar do corante e deixar escorrer durante 5 segundos e lavar as lâminas com água deionizada recente. Obs.: A técnica de coloração deve ser seguida rigorosamente observando o volume do
corante (a extensão deve estar totalmente submersa no corante) e o intervalo de 5 segundos entre as colorações subsequentes. Sempre certificar o correto fechamento das tampas das cubas, uma vez que os corantes são voláteis; o seu volume pode ser completado sempre que necessário.
6
ASSINATURA E CARIMBO
Document shared on www.docsity.com
Downloaded by: adriana-aragao (
[email protected]) (
[email protected])
PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRÃO
POP LAB HEM - 003
TÍTULO: FAZER COLORAÇÃO DE LÂMINAS MANUAL I - CONTROLE HISTÓRICO REVISÃO
DATA
Nº PÁGINAS
HISTÓRICO ALTERAÇÃO
ELABORAÇÃO
00
13/03/2018
7 de 10 10
Emissão inicial
Clébia Caires
VERIFICAÇÃO Solange Pacheco
APROVAÇÃO Ana Marina Campas de Faria
Figura 1: Cuba de Coplin com com tampa de rosca
5. Resultados esperados: esperados: Idem à coloração May –Grünwald/Giemsa. 6. Controle de Qualidade: Qualidade: Idem à coloração May –Grünwald/Giemsa. 7.3 Cuidados especiais
Os cuidados habituais de segurança devem ser aplicados nnaa manipulaçã manipulaçãoo da amostra e
dos reagentes conforme o Manual de Biossegurança do laboratório. Os reagentes utilizados em condições condições técnic técnicas as adequadas adequadas e armazenados nas condiç condições ões especificadas são estáveis estáveis até a data da validade expressa na etiqueta.
8. Siglas
SNA: solicitação de nova amostra
9. Indicadores
Desempenho no controle externo da qualidade (CEQ)
Recoleta (geral, po porr materi material al impróprio, impróprio, para confirmação, confirmação, por aci acidente dente e div diversas) ersas)
7
ASSINATURA E CARIMBO
Document shared on www.docsity.com
Downloaded by: adriana-aragao (
[email protected]) (
[email protected])
PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRÃO
POP LAB HEM - 003
TÍTULO: FAZER COLORAÇÃO DE LÂMINAS MANUAL I - CONTROLE HISTÓRICO REVISÃO
DATA
Nº PÁGINAS
HISTÓRICO ALTERAÇÃO
ELABORAÇÃO
00
13/03/2018
8 de 10 10
Emissão inicial
Clébia Caires
VERIFICAÇÃO
APROVAÇÃO Ana Marina Campas de Faria
Solange Pacheco
TAT (Turnaround Time) para tes testes tes ime imediatos diatos e de emergência - HEMATOLOGIA
10. Gerenciamento de riscos ri scos Categoria de risco Assistencial
Falhas potenciais geradoras de riscos Acidente com o tubo/frasco
Ações de prevenção
Evento Desatenção
Atenção ao manusear a amostra Atenção ao realizar a identificação da amostra
Ações frente ao evento SNA
Refazer exame
Assistencial
Identificação manual do paciente/analito incorreta
Troca de resultado do paciente/não realização do exame solicitado
Assistencial
Identificação errada de lâminas
Liberação de Atenção ao exame incorreto realizar a identificação da amostra
Assistencial
Reagente Liberação de Verificação do Refazer o exame inadequado:: Troca exame incorreto reagente antes de inadequado de iniciar a rotina reagente/reagente vencido
Refazer os exames quando o erro é detectado
11. Referências
NewProv, Bula Reagente May-Grünwald/Giemsa. 2010.
NewProv, Bula InstantProv. 2014.
8
ASSINATURA E CARIMBO
Document shared on www.docsity.com
Downloaded by: adriana-aragao (
[email protected]) (
[email protected])
PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRÃO
POP LAB HEM - 003
TÍTULO: FAZER COLORAÇÃO DE LÂMINAS MANUAL I - CONTROLE HISTÓRICO REVISÃO
DATA
Nº PÁGINAS
HISTÓRICO ALTERAÇÃO
ELABORAÇÃO
00
13/03/2018
9 de 10 10
Emissão inicial
Clébia Caires
VERIFICAÇÃO Solange Pacheco
APROVAÇÃO Ana Marina Campas de Faria
Dacie & Lewis. Practical Haematology. Churchill-Livingstone, 9th ed. 1995, Edinburgh.
ALQEP: Alberta Laboratory Quality/Enhancement Program, College of Physicians and Surgery, Blood Film Staining Effects, A educational Supplement – May 2004.
12. Anexos Planilha de coloração de lâminas.
HGIP - SERVIÇO DE PATOLOGIA CLÍNICA E MEDICINA LABORATORIA LABORATORIALL (SPCML) - SETOR HEMATOLOGIA Registro de Lote em Uso e Qualidade de Coloração Mês:
Ano:
Reagentes May Grunwald Giemsa
Metanol Tampão Dia
Marca
Kit do Equipamento 2 – SPS 105 SPSE 1027 Lote Validade Início de uso
Hemogram
1609453
09/2018
___/___/___
Hemogram Anidrol Anidrol
1710485 38.169-1 38.071-1
10/2019 10/2021 04/2018
___/___/___ ___/___/___ ___/___/___
Responsável pela coloração
Qualidade da coloração
Observação
Número da Amostra
Responsável
Conduta
Visto do responsável
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 9
ASSINATURA E CARIMBO
Document shared on www.docsity.com
Downloaded by: adriana-aragao (
[email protected]) (
[email protected])
PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRÃO
POP LAB HEM - 003
TÍTULO: FAZER COLORAÇÃO DE LÂMINAS MANUAL I - CONTROLE HISTÓRICO REVISÃO
DATA
Nº PÁGINAS
HISTÓRICO ALTERAÇÃO
ELABORAÇÃO
00
13/03/2018
10 de 10 10
Emissão inicial
Clébia Caires
VERIFICAÇÃO Solange Pacheco
APROVAÇÃO Ana Marina Campas de Faria
12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 LEGENDA: TR – – troca de reagente/ AG AG – – Aguardando Manutenção / NA – – não se aplica
ASSINATURA E CARIMBO
10
