Microbiología Ref. Bis-Plus-D 4 x 4 paneles de identificación desmontables
Sistema de Identificación Bacteriana: Gram positivos/Anaerobios Para la identificación de cocos aerobios Gram positivos
Uso previsto El sistema de identificación de bacterias de Cypress Diagnostics: Gram positivo/anaerobios (Bis-Plus) es un panel de identificación estandarizado para bacterias grampositivas comunes (cocos grampositivos), corinebacterias (bacilos grampositivos) y anaerobios (tanto anaerobios grampositivos como gramnegativos, Consta de 24 pruebas bioquímicas miniaturizadas. Este prospecto está destinado al uso del kit Cypress Diagnostics Bis-Plus para la identificación de cocos grampositivos comunes, incluidos principalmente estafilococos, estreptococos, y enterococos. Para el diagnóstico in vitro. Solo para uso profesional.
las mucosas (posible riesgo de irritación, quemaduras o toxicidad). En caso de contacto, enjuagar la zona afectada con abundante agua. 5. La manipulación y eliminación de los dispositivos del kit y las muestras debe realizarse de acuerdo con las buenas prácticas de laboratorio (BPL) y las normas de seguridad.
Material proporcionado Cada kit contiene:
Significancia clínica Las infecciones bacterianas representan una gran proporción de personas ingresadas en hospitales cada año, Así como algunas adquiridas por pacientes que ya están bajo atención médica. Estos pueden ser causados por la ingestión de alimentos contaminados o por la exposición a ambientes no estériles a través de heridas donde están presentes bacterias patógenas oportunistas. Los síntomas y el tratamiento varían y, aunque se pueden obtener algunas pistas de los síntomas del paciente, es necesario determinar el agente causal para comprender completamente la naturaleza de la infección, su origen y el tratamiento adecuado. Por lo tanto, es de inmensa importancia caracterizar e identificar estas bacterias.
Principio de la prueba Un panel de identificación Bis-Plus de Cypress Diagnostics está compuesto por 24 pocillos de microtitulación, cada uno de ellos con diferentes reactivos deshidratados para una prueba bioquímica específica. Tras la adición de la suspensión bacteriana, los reactivos del pocillo se reconstituyen. Durante la incubación, la actividad metabólica de las bacterias inoculadas se acopla a una determinada reacción colorimétrica según la prueba específica. Una guía de código de colores complementada permite al usuario determinar si cada prueba es positiva o negativa. Esto, en última instancia, depende de si las bacterias del inóculo poseen o no una determinada actividad metabólica. Basándose en el perfil de resultados adquirido, la identificación de las especies bacterianas se puede obtener introduciendo el perfil de resultados en el software de identificación Cypress.
Precauciones El pleno cumplimiento de las siguientes buenas prácticas de laboratorio (BPL) determinará la fiabilidad de los resultados: 1. Los usuarios deben tener un conocimiento completo de este protocolo y seguir las instrucciones proporcionadas para el uso exitoso de este kit. 2. Debe evitarse la contaminación de muestras y componentes del kit. 3. Las tiras de los micropocillos no deben utilizarse si ellas o su envoltura están dañados, no pueden utilizarse más de una vez. 4. No utilizar después de la fecha de caducidad. 5. Las cepas bacterianas de control se pueden utilizar para el control del procedimiento. Se deben seguir las instrucciones de Salud y Seguridad que se enumeran a continuación: 1. No fume, coma ni beba en el laboratorio. No pipetee muestras o reactivos con la boca. 2. Use ropa de seguridad adecuada (guantes desechables, bata de laboratorio, gafas de seguridad) siempre que manipule reactivos o muestras de pacientes. 3. Se deben observar las pautas estándar para el manejo de agentes infecciosos y reactivos químicos en todos los procedimientos.
- Paneles de identificación 4 x 4 desmontables / 6 x 4 no desmontables. - 4/6 x bolsas de plástico resellables. - 24 hojas de resultados. - 1 guía de colores para la interpretación de los resultados. - 1 x inserto con tabla de identificación. Los usuarios registrados pueden descargar gratuitamente el software de identificación bacteriana Cypress Diagnostics desde nuestro sitio web (http:// www.diagnostics.be).
Material necesario pero NO proporcionado -
Aceite de parafina (ref. código Bis-01) Tiras OXI (ref. código Bis-02) Reactivo ALP (ref. código Bis-03) Reactivo HHYD (ref. código Bis-04) Reactivo NITR + polvo Zn (ref. código Bis-06) Tiras PYR (ref. código Bis-07S) Reactivo PYR (ref. código Bis-07R) Discos de novobiocina de 5μg (ref. código Bis-13) Peróxido de agua 3-6% (para prueba de catalasa, CAT) Plasma EDTA (para prueba de coagulasa, COA) Agar sangre Columbia (base con código de ref. GM006) para evaluar α- y β-hemólisis (pruebas aHEM y bHEM). Diapositivas de vidrio Medios culturales Asa(s) de inoculación estéril Solución salina estéril al 0,85 % Kit de tinción de Gram (ref. código HS001) Micropipetas Puntas de pipeta desechables Incubadora para 35 ± 2°C Contenedor de basura Tampones, quemadores, tubos y otros equipos y suministros estándar de laboratorio de microbiología
Material para pruebas adicionales NO proporcionado -
Tiras VP (ref. código Bis-05S) Reactivo VP (ref. código bis-05R)
Preparación Todos los componentes del kit están listos para usar.
Almacenamiento y estabilidad El kit debe almacenarse a temperaturas entre 2°C y 25°C y puede utilizarse hasta la fecha de caducidad impresa en la etiqueta. No se puede otorgar una garantía de calidad más allá de la fecha de vencimiento del kit. No exponga los reactivos de la prueba al calor, al sol o la luz intensa. Debe evitarse la contaminación microbiana. Los paneles de micropocillos están contenidos en una bolsa de aluminio con desecante (gel de sílice). Vuelva a colocar los paneles sin usar en la bolsa con desecante, cierre la bolsa con cuidado y guárdela a temperatura ambiente para un uso posterior de hasta 2 semanas.
4. Manipule los reactivos con cuidado. Evite el contacto con la piel y Diagnóstico de ciprés: Langdorpsesteenweg 160 • 3201 Langdorp • Bélgica www.diagnostics.be• Tel: ++ 32 15 67 67 68 • Correo electrónico:
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Muestras
Realización de pruebas bifuncionales
El panel de identificación Bis-Plus de Cypress Diagnostics para bacterias Gram positivas se ha desarrollado para la investigación de suspensiones bacterianas puras. Aislar el microorganismo a identificar de la muestra del paciente mediante técnicas estándar de microbiología para obtener un cultivo puro. Confirme la pureza del cultivo, realice la tinción de Gram y examine al microscopio. Antes de continuar, tenga en cuenta la morfología y el resultado de la tinción. Tome colonias aisladas de un cultivo puro de 18 a 24 horas utilizando un asa de inoculación estéril y colóquelas en 3,5 a 5 ml de solución salina al 0,85 % estéril sin tampón. La suspensión debe tener una turbidez de 3 McF y usarse inmediatamente después de la preparación.
- Pozo H3 (test NITR): obligatorio tanto para CAT+ como para CAT bacterias. Añadir 2 gotas de reactivo NITR e inmediatamente anotar el resultado en la hoja de resultados en caso de resultado positivo. En caso de resultado negativo después de agregar el reactivo NITR, agregue un poco de polvo de zinc (la punta de un asa de inoculación) y evalúe los resultados dentro de los 10 minutos.
Procedimiento de prueba
Realización de pruebas opcionales
A continuación encontrará el protocolo a seguir:
Equipo Pruebas obligatorias sin reactivo Pruebas obligatorias con reactivo
Pruebas opcionales
Prueba Bis-Plus
Código
aHEM bHEM COA YEP
GM006 GM006 BIS-13 BIS-02 BIS-07S y BIS07R BIS-01 BIS-03 BIS-04 BIS-06
CAT NOV OXI PYR Aceite de parafina ALP HHYD NITR VP
Bis-Plus
- Pozo A2 (test bifuncional bGLR/ALP): después de la evaluación de la reacción primaria (test bGLR), agregue 1-2 gotas de reactivo ALP e inmediatamente anote el resultado en la hoja de resultados. - Pozo A3 (test bifuncional bGLS/HHYD): obligatorio para CAT bacterias. Después de la evaluación de la reacción primaria (prueba bGLS), agregue 23 gotas de reactivo HHYD y anote el resultado en la hoja de resultados hasta 10 minutos.
Una prueba adicional que se puede realizar e introducir en el software de identificación para aumentar la puntuación de identificación es la prueba VP (Voges-Proskauer).
Evaluación de los resultados Introducir los resultados de las pruebas individuales previamente anotadas en la hoja de resultados en el software de identificación Cypress Diagnostics para obtener la especie bacteriana y la fiabilidad de la identificación. El ingreso de los resultados de la prueba CAT es obligatorio.El software permite la entrada de pruebas adicionales que aumentan la eficacia de la identificación (COA, NOV, aHEM, bHEM, OXI, VP, PYR, YEP). Cuando el resultado de alguna prueba no pueda evaluarse claramente como positivo o negativo, debe excluirse.Los microorganismos que se pueden identificar con este kit se enumeran en la tabla de identificación complementada con este inserto.
Control de calidad
BIS-05S y BIS-05R
Puede descargar el protocolo detallado de nuestro sitio WEB
Procedimientos preliminares Antes de utilizar los paneles de identificación, realice la prueba de catalasa (CAT) y anote sus resultados.Marque cada panel de identificación con el código del cultivo examinado a partir del cual se preparó la suspensión. Las pruebas obligatorias adicionales que se realizarán por separado y se anotarán en la hoja de resultados incluyen:
Se pueden utilizar cepas bacterianas de control con parámetros metabólicos conocidos para verificar el rendimiento del ensayo. Se recomiendan las cepas bacterianas de control enumeradas a continuación. + representa un resultado positivo, - un resultado negativo y v un resultado variable. Los perfiles se obtuvieron después de 24 h de incubación en agar sangre.
Enterococo faecalis ATCC29212
-Para bacterias catalasa negativas, pruebas bHEM (β-hemólisis) y PYR. -Para bacterias catalasa positivas, NOV (prueba de sensibilidad a novobiocina 5 μg, resultado positivo en caso de bacterias resistentes) y pruebas de COA (coagulasa). Proceder a la realización del test OXI (citocromo oxidasa, ver inserto correspondiente) y la valoración de YEP (producción de pigmento amarillo) y aHEM (α-hemólisis).
Staphylococcus aureus ATCC25923
Inoculación Pipetee 100 μL de la suspensión bacteriana bien homogeneizada (3 McF de turbidez) en cada pocillo del panel de identificación. Cubrir los pocillos H1 y H2 (ensayos URE y ARG) con 2-3 gotas de aceite de parafina.
Incubación Cubra la placa con su tapa y colóquela en una bolsa de plástico con cierre para evitar que la suspensión bacteriana se seque durante el tiempo de incubación. Incubar en atmósfera aeróbica regular a 35 ± 2°C durante 1824 horas. Para una incubación óptima, recomendamos colocar un recipiente con agua en la incubadora o utilizar una incubadora donde se pueda controlar y mantener la humedad.
Staphylococcus cohnii ssp. Urealyticus ATCC49331
Lectura Anote los resultados de cada prueba bioquímica miniaturizada en su campo correspondiente en la hoja de resultados. Utilice la guía de colores y/o la tabla de evaluación (más adelante en este inserto) para determinar, por pocillo, si el color mostrado corresponde a un resultado positivo o negativo. Puede usar una cepa de control en otra tira de identificación y evaluar los resultados por comparación.
Tenga en cuenta que el resultado de la prueba NITR (pocillo H3) no debe escribirse todavía, ya que se requiere la adición de reactivos después de la incubación (consulte el siguiente paso).
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Klebsiella pneumniae ATCC13882
Al igual que con todas las pruebas de diagnóstico, un diagnóstico clínico definitivo no debe basarse en los resultados de una sola prueba, sino que debe ser realizado por un médico después de la información del paciente, el origen de la muestra y otros hallazgos clínicos (morfología bacteriana, aspecto de la colonia, resultados de las pruebas de susceptibilidad a los antibióticos...) han sido evaluados.
Características de presentación El Cypress Diagnostics Bis-Plus fue probado para evaluar su rendimiento. Se probaron 150 cepas de cocos Gram + de control con el kit Bis-Plus y se obtuvieron los siguientes resultados:
Limitaciones de la prueba
- El 97% de las cepas se identificaron correctamente.
El kit Bis-Plus de Cypress Diagnostics solo es válido para la identificación de las especies de bacterias Gram positivas enumeradas en la tabla de identificación complementaria. Las causas más comunes de identificación incorrecta si se sigue estrictamente este inserto son la contaminación de los pocillos con otro microorganismo, el uso de un cultivo que no es puro o la presencia de una cepa atípica. Los medios que contienen glóbulos rojos contendrán catalasa y, por lo tanto, podrían dar un resultado falso positivo en la prueba CAT. Por lo tanto, la suspensión debe prepararse a partir de un cultivo puro, pero no debe prepararse en ningún tipo de agar sangre.
- El 3% de las cepas no se identificaron o se identificaron erróneamente.
Tabla de evaluación
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Bibliografía
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Identification table / Tableau d'identification / Tabela de identificação / Tabla de identificación / Таблица идентификации
1. ROW / FILE / FILA / FILA / Ряд 2. ROW / FILE / FILA / FILA / Ряд 3. ROW / FILE / FILA / FILA / Ряд H G F E D C B A A´ H G F E D C B A H G F E D C B A A´ URE MLT SOR LAC FRU ARA RAF bGA ARG MAN TRE CEL MNS R I B MLZ bGLR ALP NITR ESL MLB SUC GAL XYL NAG bGLS HHYD
GRAM+ CAT+
Aerococcus viridans Dermatococcus nishinomiyaensis Kocuria kristinae Kocuria rosea Kocuria varians Kytococcus sedentarius Macrococcus bovicus Macrococcus carouselicus Macrococcus caseolyticus Macrococcus equipersicus Micrococcus luteus Micrococcus lzlae Rothia mucilaginosa Staphylococcus arlettae Staphylococcus aureus ssp. anaerobicus Staphylococcus aureus ssp. aureus Staphylococcus auricularis Staphylococcus cap. ssp.ureolyticus Staphylococcus capitis ssp. capitis Staphylococcus caprae Staphylococcus carnosus ssp. carnosus Staphylococcus carnosus ssp. utilis Staphylococcus cohnii ssp. urealyticum Staphylococcus cohnii ssp. cohnii Staphylococcus condimenti Staphylococcus delphini Staphylococcus epidermidis Staphylococcus eqourum Staphylococcus felis Staphylococcus gallinarum Staphylococcus haemolyticus Staphylococcus hominis ssp. novobiosepticus Staphylococcus hominis ssp. hominis Staphylococcus hyicus Staphylococcus chromogenes Staphylococcus intermedius Staphylococcus klosii Staphylococcus lentus Staphylococcus lugdunensis Staphylococcus lutrae Staphylococcus muscae Staphylococcus pasteuri Staphylococcus petrasii ssp. croceilyticus Staphylococcus petrasii ssp. petrasii Staphylococcus petrasii ssp. pragensis Staphylococcus petrasii ssp. jettensis Staphylococcus piscifermentas Staphylococcus saprophyticus ssp. saprophyticus Staphylococcus saprophyticus ssp. bovis Staphylococcus sciuri ssp. rodentium Staphylococcus sciuri ssp. carnaticus Staphylococcus sciuri ssp. sciuri Staphylococcus schleiferi ssp. schleiferi Staphylococcus schleiferi ssp. coagulans Staphylococcus simulans Staphylococcus vitulinus Staphylococcus warneri Staphylococcus xylosus
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GRAM+ CAT-
Abiotrophia adiacens Abiotrophia defectiva Aerococcus viridans Alloiococcus otitis Dolosicoccus paucivorans Enterococcus avium Enterococcus casseliflavus Enterococcus cecorum Enterococcus columbae Enterococcus dispar Enterococcus durans Enterococcus faecalis Enterococcus faecium Enterococcus gallinarum Enterococcus hirae Enterococcus malodoratus Enterococcus mundtii Enterococcus pseudoavium Enterococcus raffinosus Enterococcus saccharolyticus Facklamia sourekii Gemella haemolysans Gemella morbilorum Globitacella sanguinis Helcococcus kunzii Lactococcus garviae Lactococcus lactis ssp. cremoris Lactococcus lactis ssp. lactis Leuconostoc. spp Streptococcus acidominimus Streptococcus agalactiae Streptococcus anginosus Streptococcus bovis biovar I Streptococcus bovis II biovar 1 Streptococcus bovis II biovar 2 Streptococcus canis Streptococcus constellatus Streptococcus dysgalactiae ssp. dysgalactiae Streptococcus dysgalactiae ssp. equisimilis Streptococcus equi ssp.zooepidemicus Streptococcus equi ssp. equi Streptococcus gordonii Streptococcus intermedius Streptococcus mitis biovar 1 Streptococcus mitis biovar 2 Streptococcus mutans Streptococcus oralis Streptococcus parasanguinis Streptococcus pneumoniae Streptococcus porcinus Streptococcus pyogenes Streptococcus salivarius ssp. salivarius Streptococcus salivarius ssp. thermophillus Streptococcus sanguinis biovar 2 Streptococcus sanguinis biovar 1 (cristatus) Streptococcus suis Streptococcus uberis Streptococcus vestibularis
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Legend / Légende / Legenda / Leyenda / Надпись: + = 90 – 99 %; (+) = 66 – 89 %; v = 34 – 65 %; (-) = 11 – 33 %; - = 1 – 10 %
Cypress Diagnostics: Langdorpsesteenweg 160 • 3201 Langdorp • Belgium www.diagnostics.be • Tel: ++ 32 15 67 67 68 • e-mail:
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