Dilucion Seriada PDF

 

DILUCION SERIADA

 

Que son: •

Solución: Mezcla homogénea de dos o mas sustancias

Componentes:: Componentes Soluto: Sustancia que se disuelve Solvente: Matriz en la que se disuelve el soluto •

Dilución: Es el acto de volver mas débil una solución, a partir de una solución concentrada para que quede a una menor concentración

 

•¿Como

se expresan?  expresan? 

Una parte de una solución original con respecto a las partes totales del volumen final 1:10 (una parte del soluto + 9 partes del solvente) 5% (v/v) [5 ml del soluto + 95 ml del solvente] so lvente] 5% (w/v) [5 gr del soluto + 95 ml del solvente]

 

Tipos de •

Seriadas

•

No seriadas

•

Independientes

diluciones

•

Químicas •

Diluciones seriadas: Sucesión de diluciones con incrementos progresivos y regulares, en los cuales el factor de dilución siempre es igual. 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128….  1:10 1:100 1:1000 1:10000……..  -1   -2   10-2 10-1

-3   10-3

10-4……… 

 

2.2.Métodos indirectos  indirectos 

•

Recuento de viables en placa  placa  

Método de extensión. La muestra se siembra sobre la superficie del medio sólido 

Método de vertido El medio sólido en sobrefusión se añade a la muestra  

Diluir y anotar la dilución  Muestra: 

Sembrar sobre la placa (0.1ml) 

Incubar  1 célula = 1 colonia ~ 106 células 

Placa Petri medio sólido 

 

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Útil para la técnica de vertido en placa o extensión en placa.

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Se

siembran

volúmenes

conocidos de cada dilución 

Luego se incuba a 35 – 37 0C durante 24 – 48 horas. horas. 

 

Muestra ( E. coli) 

Para el recuento hay que tener en cuenta la dilución y le volumen de muestra sembrado  sembrado 

 

Recuento de viables en placa  placa 

Cuentacolonias tradicional  tradicional 

Cuentacolonias automático  automático 

 

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Finalizado el tiempo de incubación, se realiza el recuento.  recuento. 

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Se toman en cuenta únicamente aquellas cajas Petri que tengan entre 30 y 300 colonias.  colonias. 

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Este número de colonias es estadísticament estadísticamentee representativ representativo. o.  

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Aquellas placas que tengan más de 300 colonias se reportan como  como   “INCONTABLES”. 

 

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Para el recuento bacteriano se puede usar cuentacolonias.  cuentacolonias. 

 

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Puede ser contada toda la placa o por cuadrantes.

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Cuando la carga bacteriana es alta, se toma en cuenta un cuadrante con carga alta, un cuadrante con carga media y un cuadrante con carga baja.

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Se realiza la sumatoria de los tres cuadrantes y se saca el promedio.

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Finalmente el promedio se multiplica por 65

No. Colonias = (CA + CM + CB /3) * 65 

 

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CA = 32

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CM = 19 CB = 10

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Sumatoria Σ = 61

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Promedio 61/3 = 20.33

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Factor = 20.33*65 = 1322

 

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Terminado el conteo por cualquier método, se debe aplicar la siguiente fórmula para obtener el No. de UFC/ ml o UFC/g.

UFC/ml ó UFC/g = No. de colonias por placa X el factor de dilución *  ml de la muestra sembrada  *Factor *Fa ctor de dilución: inversa de la dilución.

 

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EJEMPLO 1 

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EJEMPLO 2 

No. de colonias: 280

No. de colonias: 56

Dilución: 10 -3

Dilución: 10 -4

Volumen de siembra: 1 ml

Volumen de siembra: 0.2 ml

UFC/ ml = 280 X 1000 /1

UFC/ ml = 56 X 10000 /0.2

UFC/ ml= 280.000

UFC/ ml= 2 800.000

 

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Cuando se realiza más de una dilución para cada uno de los parámetros se garantiza los resultados obtenidos.

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Este método disminuye el margen de error y abaliza la calidad de las pruebas.

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Para obtener los resultados por duplicado se aplica la siguiente fórmula:

UFC / ml parámetro = UFC / ml dilución A + UFC / ml dilución B  2