Determinación de la Concentración Letal Media de Sulfato de Cobre en Daphnia Magna mediante un Ensayo de Toxicidad Aguda

PRÁCTICA DE LABORATORIO N°06

I. II.

OBJETIVOS Someter a una concentración letal media a una población de daphnias Magna y evaluar los efectos del toxico. INTRODUCCION La determinación de concentraciones de contaminantes y tóxicos no indica los efectos de su presencia en el ambiente. Por este motivo los efectos se evalúan a través de pruebas de toxicidad. Estas pueden ser de tipo agudo (letal), en las que se observa la mortalidad, utilizándose como parámetro comparativo la concentración letal media (CL50), que es aquella en la que muere la mitad de los organismos sometidos a la prueba. Otras son de tipo crónico (subletal), y en ellas se evalúan respuestas fisiológicas e incluso moleculares, a través de biomarcadores. Las pruebas se realizan con tóxicos aislados o con muestras ambientales, utilizando especies de cultivos controlados o nativas del sitio. Son comunes los estudios en invertebrados (Daphnia magna, Moina macrocopa, Artemia salina), vertebrados (peces, ratas), especies vegetales (Lemna gibba), e incluso bacterias (Salmonella tiphymuriun y Phytobacterium phosphoreum). Algunos bioensayos están normados y se usan para la determinación de condiciones especiales de descarga, tal es el caso de la Norma Mexicana NMXAA-087-SCFI-2010, siguiendo un protocolo semejante al que se aplicará en esta práctica

Fig. 1. Vista microscópica “Daphnia magna”

MARIEL ALEJANDRA QUISPE COLLAO

1

PRÁCTICA DE LABORATORIO N°06

Fig. 2. Vista microscópica “Artemia salina”

III.

MATERIALES Y METODOS  Solución estándar de sulfato de cobre (1g/L)  1 vaso de precipitado de 1000 mL  1 vaso de precipitado de 500 mL  1 probeta de 100 mL  12 vasos de precipitado de 50 o 100 mL  3 pipetas Pasteur con bulbo  3 cajas de Petri de 5cm  2 pipetas de 5 mL  2 matraces aforados de 100 mL  Organismos de prueba. Neonatos de Daphnia magna de 48 horas de edad

-

Se trabajo con 1000ppm de sulfato de cobre diluido en 250ml de agua destilada. Se calculo el volumen de la solución preparada a utilizarse para cada prueba diferente con concentraciones de 10ppm,40ppm,60ppm y 100ppm. Siendo estas de 0.93ml,3.72ml,5.58ml,9.3ml. respectivamente. MARIEL ALEJANDRA QUISPE COLLAO

2

PRÁCTICA DE LABORATORIO N°06

-

Una vez calculados los volúmenes se le agregaron poblaciones de 10 daphnias a cada vaso precipitado. Se evaluó la tasa de mortandad de las poblaciones a las 24hrs. Y 48 hrs.

CONCENTRACION DEL TOXICO 10PPM 40PPM 60PPM 100PPM

TIEMPO DE EXPOSICION 24HRS 48HRS 10 10 10 10 -

Tabla 1. Registro de la mortalidad del bioensayo

IV.

RESULTADOS Se registró la muerte total de las poblaciones en las 4 pruebas realizadas dentro de las 24 hrs.

MORTALIDAD A LAS 24HRS. 12

N° Especies

10

8 6 4 2 0 10PPM

40PPM

60PPM

100PPM

Concentración de sulfato de cobre

V.

CONCLUSIONES - Se valoró la Concentración Letal Media (CL50) en Pulgas de agua (Daphnia Magna) expuestos en soluciones de Sulfato de Cobre y se determinó la media de las dosis suministradas, fluctuó en 100 mg/l de CuSO4. MARIEL ALEJANDRA QUISPE COLLAO

3

PRÁCTICA DE LABORATORIO N°06

-

-

. La prueba de toxicidad las pulgas de agua que se expusieron a las soluciones de sulfato de cobre, mostraron coloración blanquecina en la piel también disminuyeron sus movimientos comparados a los del principio. Una de las razones por la cual D. magna es tan utilizada como bioindicador ambiental radica en su tipo de reproducción, que presenta dos fases, sexual y asexual. Si encuentra condiciones favorables mantiene la fase asexual conocida como partenogénesis, lo que nos permitiría trabajar con poblaciones genéticamente uniformes. De los 26 individuos recolectados sólo sobrevivieron y se desarrollaron aquellos que podían mantener una reproducción partenogénica bajo las condiciones dadas.

VI. CUESTIONARIO

1. ¿QUÉ CRITERIOS SE APLICAN PARA SELECCIONAR UNA ESPECIE PARA BIOENSAYOS? Que existan antecedentes realizados con el mismo fin que se requiere. El uso de los bioensayos como indicadores del grado de afectación de una sustancia química en organismos vivos, ha sido manejado bajo condiciones controladas de laboratorio desde hace mucho tiempo; se ha trabajado con éxito en varios países latinoamericanos (Colombia, Chile, Argentina, Cuba y otros), especialmente utilizando cebolla de bulbo (Allium cepa), lechuga (Lactuca sativa), pulga de agua (Daphnia magna), algas (Hidra attenuata), arroz (Oriza sativa), repollito de agua (Pistia stratiotes), larva y adultos de Aedes aegypty, entre las principales. 2. ¿CUÁL ES LA IMPORTANCIA DE LOS GRUPOS CONTROL EN LOS BIOENSAYOS? Estos grupos muestran las condiciones originales o iniciales del medio a evaluarse y como estos organismo se desenvuelven frente a tal realidad, se usan para ser comparadas y evaluar las variaciones que surgen. 3. ¿QUÉ ES LA CONCENTRACIÓN EFECTIVA MEDIA Ó CE50? : Concentración del agente tóxico que causa efecto agudo (por ejemplo inmovilidad) al 50% de los organismos de prueba en un determinado período de exposición. 4 . ¿LOS RESULTADOS DE LOS BIOENSAYOS PERMITEN INTERPRETAR DIRECTAMENTE EL EFECTO DE LOS TÓXICOS EVALUADOS EN EL AMBIENTE? Si existen pruebas previas de caracterización fisicoquímica y biológica del medio a evaluarse se puede establecer una relación entre la existencia del organismo y la composición del medio natural. 5. SI EL TÓXICO DE PRUEBA ES K2CR2O7, ¿CÓMO PREPARARÍA UNA SOLUCIÓN ESTÁNDAR DE 0.25 PPM DE CR?

MARIEL ALEJANDRA QUISPE COLLAO

4

PRÁCTICA DE LABORATORIO N°06 VII. BIBLIOGRAFIA

-

-

Diario Oficial de la Federación. 1996. Norma Oficial Mexicana NOM001-SEMARNAT-1996, Que establece los Límites Máximos Permisibles de contaminantes en las Descargas de aguas residuales en aguas y bienes nacionales. DOF, México. Diario Oficial de la Federación. 2002. Norma Oficial Mexicana NOM087-ECOL-SSA1-2002. Protección ambiental - Salud ambiental Residuos peligrosos biológico-infecciosos - Clasificación y especificaciones de manejo. DOF, México. Diario Oficial de la Federación. 2010. Norma Mexicana NMX-AA-087SCFI-2010. Análisis de agua - Evaluación de toxicidad aguda con Daphnia magna, Straus (Crustacea - Cladocera) - Método de prueba. DOF, México. Moreno, D.F. 2003. Toxicología Ambiental. Mc Graw Hill, México. Ramírez, R.P. & C.A. Mendoza. 2008. Ensayos toxicológicos para la evaluación de sustancias químicas en agua y suelo. La experiencia en México. Secretaría de Medio Ambiente y Recursos Naturales. Instituto Nacional de Ecología, México. Montaje y Puesta en marcha de un Laboratorio de Bioensayos para evaluarla toxicidad de las aguas a nivel local. Municipalidad de Pudahuel -Santiago -Chile. [Sitio de Internet]. 2001. [Citado el 26 de octubre de 2001 ].[6p].Disponible en http: [email protected]

MARIEL ALEJANDRA QUISPE COLLAO

5

PRÁCTICA DE LABORATORIO N°06

ANEXOS

Anexo 1. Concentraciones evaluadas

MARIEL ALEJANDRA QUISPE COLLAO

6

PRÁCTICA DE LABORATORIO N°06

Anexo 2. Resultados a las 24hrs.

MARIEL ALEJANDRA QUISPE COLLAO

7

PRÁCTICA DE LABORATORIO N°06

MARIEL ALEJANDRA QUISPE COLLAO

8