Determinación Azúcares Reductores.docx

DETERMINACIÓN DE AZÚCARES REDUCTORES POR EL METODO DEL ACIDO DINITROSALICILICO (DNS) Principio del método El método del ácido 3,5-dinitrosalicilico (DNS) se basa en la reducción del DNS (de color amarillo) por la glucosa al ácido 3- amino-5-dinitrosalicilico de color rojo previo calentamiento.

1.1 Materiales. Reactivo DNS.  Agua destilada. destilada. Solución de glucosa al 0.4g/L. Cubetas. Tobos de reacción. Micropipetas. Baño maría a 90ºC. Baño de hielo a 4ºC. Espectrofotómetro (540nm).

1.2 Procedimiento. a) Realizar curva curva de calibración de glucosa. 

Preparar solución de glucosa a 0.4g/L.



Realizar los estándares de glucosa a partir de la solución anterior y como lo determina el siguiente esquema:

Esquema de estándares de glucosa. Volumen Glucosa Volumen agua en ml (0.4mg/ml) (0 .4mg/ml) destilada 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0

1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0.0

Concentración del estándar (mg/ml) 0.00 0.04 0.08 0.12 0.16 0.20 0.24 0.28 0.32 0.36 0.40

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Agregar 1ml de DNS a cada una de los estándares anteriores incluyendo el blanco.

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Mezclar y someter a incubación a 90ºC durante 5min.

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Parar la reacción en baño de hielo a 4ºC durante 5min.

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Leer a 540nm.

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Calcular ecuación de la recta y parámetros estadísticos.

Nota: las muestras problemas deberán ser leídas sobre la curva anterior utilizando el mismo método de preparación empleando para los estándares.

PREPARACIÓN DEL REACTIVO DE DNS

Compuesto

Cantidad

 Acido 3,5-dinitro salicílico (DNS).

1g

Tartrato de tetrahidratado.

30g

sodio

y

potasio

Prepare 20ml de NaOH 2N (pesar 1.6g NaOH) y disuelva en ellos el tartrato, luego de disuelto lleve a un volumen final de 100ml, y en completa oscuridad disolver el DNS (reactivo fotosensible).