Demostracion de La Distribucion Intracelular de Las Enzimas de Oxido Reduccion Biologica

 

BIOQUÍMICA A FARMACIA Y BIOQUÍMIC

BIOQUÍMICA I

DEMOSTRACIÓN DE LA DISTRIBUCIÓN INTRACELULAR DE LAS ENZIMAS DE ÓXIDOREDUCCIÓN BIOLÓGICA I. INTRODUCCIÓN Existen sistemas enzimáticos capaces de realizar oxidaciones en el organismo, siendo sus sustratos carbohidratos, ácidos grasos, aminoácidos y algunas otras sustancias orgánicas. Los sistemas antes mencionados están constituidos por proteínas, fosfolípidos, grupos prostéticos además de iones metálicos. De acuerdo a su estructura y función las enzimas que intervienen es esos procesos se encuentran clasificadas en diversos grupos y tienen denominaciones especiales dentro de la literatura enzimológica. Las enzimas de óxido-reducción, tienen una distribución característica intracelular, encontrándose de modo fundamental en una subestructura celular en donde la energía derivada de las oxidaciones es captada en forma de trifosfato de adenosina (ATP). La finalidad de la presente experiencia es evidenciar la distribución intracelular de las enzimas de óxido-reducción usando los indicadores rédox 2,6-diclorofenolindofenol y p-fenilendiamina, además de los componentes celulares de un homogenizado de hígado de rata obtenidos por centrifugación diferencial.

II. OBJETIVOS  

Dispuestas varias fracciones celulares de un homogenizado de hígado de rata en un sistema buferado, los participantes serán capaces de determinar la distribución de las enzimas de óxido –reducción: -  Al identificar los cambios de coloración del indicador rédox 2,6-diclorofenolindofenol (2,6-DFIF). -  Al identificar los cambios de coloración del indicador redox p-fenilendiamina (p-FDA). Luego de lograr el objetivo anterior, los participantes graficarán en una cadena de óxido-

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reducción el lugar y acción de los indicadores rédox 2,6-DFIF y p-FDA.

III. MATERIALES Y REACIVOS -  -  -  -  -  - 

Hígado de rata Buffer fosfato de sodio 0,1M pH 7,4 2,6-diclorofenolindofenol 2,6-diclorofenolin dofenol 0,02% Succinato de sodio 0,1M p-fenilendiamina p-fenilendiami na 1% Homogenizado de hígado de rata en sucrosa al 0,25M

-

Fracción nuclear Fracción mitocondrial Fracción microsomal-soluble Tubos de ensayo 13x100 mm Gradilla porta tubos Pipeta de 1 mL Pipeta de 0,5 mL

IV. DIAGRAMA EXPERIMENTAL

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Utilizando 2,6-diclorofenolindofenol -  Armar el siguiente sistema:

COMPONENTES Buffer fosfato de sodio 0,1M pH 7,4 2,6-diclorofenolindofenol 2,6-diclorofenolindo fenol 0,02% Succinato de sodio 0,1M Fracción nuclear Fracción mitocondrial Fracción microsomal-soluble Homogenizado total -  -  -  -  - 

I

TUBOS (mL) II III IV

1 1

0,5 1

0,5 1

0,5 1

0,5 1

0,2 -

0,2 0,5 -

0,2 0,5 -

0,2 0,5 -

0,2 0,5

V

Mezclar Dejar en reposo a temperatura ambiente. ambiente. Observar constantemente constantemente los cambios de color del indicador rédox. Interpretar los resultados.

Utilizando la p-fenilendiamina -  Armar el siguiente sistema:

COMPONENTES Buffer fosfato de sodio 0,1M pH 7,4 p-fenilendiaminaa 1% p-fenilendiamin Succinato de sodio 0,1M Fracción nuclear Fracción mitocondrial Fracción microsomal-soluble Homogenizado total -  -  -  - 

I 1,5 0,5 0,2 -

TUBOS (mL) II III IV 1 0,5 0,2 0,5 -

1 0,5 0,2 0,5 -

1 0,5 0,2 0,5 -

V 1 0,5 0,2 0,5

Mezclar Dejar en reposo a temperatura ambiente. ambiente. Observar constantemente constantemente los cambios de color del indicador rédox. Interpretar los resultados.

V. RESULTADOS

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VI. DISCUSIÓN

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VII. CONCLUSIONES

VIII. BIBLIOGRAFÍA

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ESQUEMA DEL PROCEDIMIENTO DE LA PRÁCTICA

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