Curva de Calibración para La Determinación Cuantitativa de Proteínas

 

Curva de calibración para la determinación cuantitativa de proteínas La curva de calibración nos permite tener un patrón de forma numérica para obtener la concentración de la muestra de proteína. De forma experimental se obtiene o btiene una relación de absorbancia por concentración al analizar las muestras patrón en un espectrofotómetro que en este caso es de UV-vis; de acuerdo a esto se espera obtener una relación con tendencia lineal como función, acorde a esto se obtendrá una ecuación por el método de mínimos cuadrados para obtener una ecuación de la forma : Y=mx + b Donde y es la absorbancia, x la concentración y b es le intercepto en y que se o obtiene btiene mediante cálculos estadístico acordes a la metodología de mínimos cuadrados. Se debe tener en cuenta también la fiabilidad de los parámetros de los mínimos cuadrados, para ello se debe estimar las incertidumbres expresadas como deviaciones estándar de la pendiente y de la ordenada en el origen o rigen ( todo se realiza mediante una hoja de cálculo en Excel por facilidad). De esta forma se obtiene o btiene una gráfica como se muestra a continuación como ejemplo

CURVA DE VALORACIÓN 250

y = 10,1277x + 1,866 R² = 0,9948

200      a        i      c      n      a      v      r      o      s        b      a

150 100 50 0 0

5

10

15

20

CONCENTRACIÓN ESTANDAR

RESULTADOS DE ESTIMACION LINEAL (MATRIZ) PENDIENTE ORDENADA Sm R^2

10,1277582 0,32715606 0,99480969

1,86619939 3,50617809 5,56852177

Sb Sy

25

 

CONCENTRACIONES ESTÁNDARES (ppm) (X) 1 2 5

AREA UA (Y) 9,98929 26,1658 61,7659

X^2

MEDIA (Y)

9,66878 10,18894 26,4874 23,1853 50,3554

1 4 25

9,949003333 25,2795 56,06065

70,5518 93,0873 72,3888 107 74,5978 93,7802 15 161,386 157,779 20 206,7304 205,48727 199,5144

49 100 225 400

72,5128 93,43375 159,5825 203,9106867

804

620,72889

SUMA DE COLUMNAS 60 634,4154 694,41541 199,5144

D= D= 2028 2028

(Todo es calculado mediante las formulaciones estadísticas de Excel)

Asi con la formula Y=101277x+1.866 de donde se despeja x que es la concentración: X=( y-1.866)/ 101277 nos proporciona la concentración de la muestra de proteína con respecto al dato obtenido de la absorbancia de dicha muestra