curcumina

PRODUCTOS NATURALES Identificación De Curcumina Por Cromatografía

IDENTIFICACION DE LA CURCUMINA POR CROMATOGRAFIA EN CAPA DELGADA

INTRODUCCIÓN La cúrcuma es una especia derivada de los rizomas de Cúrcuma longa, que es un miembro de la familia del jengibre (Zingiberaceae). Los rizomas son tallos subterráneos horizontales que envían los brotes, así como las raíces. El color amarillo brillante de cúrcuma proviene principalmente de pigmentos liposolubles polifenólicos, conocidos como curcuminoide. La curcumina, el director de curcuminoide encuentra en la cúrcuma, se considera generalmente el componente más activo. Curcuminoides Otros se encuentran en la cúrcuma son demetoxicurcumina y bisdemetoxicurcumina.

La curcuma se extrajo por primera vez en 1815 (E. Vogel y Pelletier S.) Tiene valiosas propiedades terapéuticas y demostradas por estudios clínicos. Es un potente antioxidante (más potente que la vitamina E), antiséptico, antibacteriano, anti-inflamatorio. Se reduce el colesterol y reduce la pérdida ósea. Y al parecer, tiene propiedades contra el cáncer a dosis de 1 a 8 g por día. Muchos estudios están en marcha. Sin embargo, es rápidamente metabolizado por el cuerpo que reduce su eficacia. Se remediarse mediante el uso de ella con una adición de 1,5% piperina (uno de los compuestos presentes en la pimienta).

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MARCO TEÓRICO 1. Estructura La curcumina incorpora varios grupos funcionales. Los sistemas de anillos aromáticos, que son fenoles , están conectados por dos alfa, β-insaturados carbonilo grupos. Las dicetonas formar estables enoles y son fácilmente desprotonado para formar enolatos; la α, β-insaturado grupo carbonilo es un buen aceptor de Michael y sufre adición nucleófila . La estructura fue identificada por primera vez en 1910 por J. Miłobędzka, Kostanecki Stanisław y Lampe Wiktor . [3] La curcumina puede existir en varias tautómeras formas, incluyendo un 1,3-di ceto forma y dos equivalentes enol formas. La forma enol es más enérgicamente estable en la fase sólida y en solución.

La curcumina incorpora varios grupos funcionales. Los sistemas de anillos aromáticos, que son fenoles , están conectados por dos alfa, β-insaturados carbonilo grupos. Las dicetonas formar estables enoles y son fácilmente desprotonado para formar enolatos; la α, β-insaturado grupo carbonilo es un buen aceptor de Michael y sufre adición nucleófila . La estructura fue identificada por primera vez en 1910 por J. Miłobędzka, Kostanecki Stanisław y Lampe Wiktor . [3]

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2. Biosíntesis Aproximadamente en el año 1973 y Whiting propuso dos mecanismos para la biosíntesis de la curcumina. El primer mecanismo implicado una reacción de extensión de cadena por el ácido cinámico y 5 malonil-CoA moléculas que eventualmente arylized en un curcuminoide. El segundo mecanismo involucró a dos unidades de cinamato ser acoplados entre sí por el malonil-CoA. Ambos mecanismos utilizar ácido cinámico como punto de partida, que se deriva a partir del aminoácido fenilalanina . Esto es notable porque la biosíntesis de las plantas que emplean ácido cinámico como punto de partida es rara en comparación con el uso más común de ácido p-cumárico. Sólo unos pocos compuestos identificados, tales como anigorufone y pinosilvina, el uso de ácido cinámico como su molécula de principio. Una ruta experimental apoyado no se presentó hasta el año 2008.

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3. Extracción El término extracción significa sacar o retirar de la forma más efectiva y lo más completa posible las sustancias activas contenidas en una droga vegetal. En éste proceso existen diversos factores que influyen entre ellas tenemos    

Solvente Estado de agregación de la droga vegetal Agitation Temperatura

Extracción solidó – líquido. Este tipo de extracción consiste en poner en contacto la droga con el disolvente., obteniéndose el líquido extractor. La extracción parcial.- Es cuando no existe una extracción completa de los principios activos y puede ser por: Maceración, Digestión, infusión, Cocimiento, etc. La extracción Exhaustiva.- Es cuando existe una extracción completa de los principios activos y puedes ser por: Percolación, y por soxhlet  Descripción detallada La cúrcuma se extrae de la raíz seca del rizoma de Curcuma Longa. El proceso de extracción requiere la materia prima para ser molido en polvo, y se lava con un disolvente adecuado que selectivamente extractos colorantes. Este proceso después de la destilación de los rendimientos de oleorresina un disolvente con colorantes importa el contenido en la región de 25-35 por ciento junto con los aceites volátiles y otros extractivos resinosos. La Oleorresina así obtenido se somete a lavados adicionales utilizando disolventes selectivos que pueden extraer la curcumina pigmento de la oleorresina. Este proceso produce un color en polvo, alimentos purificados, conocidos como curcumina en polvo, con más del 90 por ciento de contenido de materia colorante y el aceite volátil muy poco y la otra materia seca de origen natural. La selección de los disolventes que se hace con cuidado para satisfacer extractabilidad y criterios de regulación.

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4. cromatografía La cromatografía es una técnica de separación extraordinariamente versátil que presenta distintas variantes. En toda separación cromatografía hay dos fases (sólida, líquida o gas) una móvil y otra estacionaria, que se mueven una con respecto de la otra manteniendo un contacto íntimo. La muestra se introduce en la fase móvil y los componentes de la muestra se distribuyen entre la fase estacionaria y la móvil. Los componentes de la mezcla a separar invierten un tiempo diferente en recorrer cada una de las fases, con lo que se produce la separación. Si un componente está la mayor parte del tiempo en la fase móvil el producto se mueve rápidamente, mientras que si se encuentra la mayor parte en la fase estacionaria, el producto queda retenido y su salida es mucho más lenta.

Los rizomas de Cúrcuma, producen por lo menos tres curcuminoides coloreados estimados mediante cromatografía en capa fina. El modelo de estructura de la curcumina y los curcuminoides similar a los carotinoides hace suponer que las instauraciones pueden absorber oxígeno y radicales libres, además de implicar un mecanismo antinflamatorio. Anís Está constituido por los frutos desecados (dobles aquenios)de la Umbelífera, Pimpinella anisum. El anetol es un fenilpropano que se encuentra distribuido en varias plantas aromáticas. Esta amplia distribución, junto con la facilidad en su detección a nivel de laboratorio mediante la cromatografía en capa fina (CCF) y la espectroscopia Ultravioleta (UV), la hacen un indicador adecuado para el reconocimiento y el con trol de calidad de productos fitofarmacéuticos terminados o sus materias primas vegetales

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 FUNDAMENTO TEORICO

Cromatografía es un conjunto de técnicas de análisis que se emplean para separar los componentes de una mezcla según su distribución entre una fase fija y otra móvil. La fase móvil o eluyente consiste en un fluido, gas o líquido, que arrastra a la muestra cuyos componentes queremos separar a través de una fase fija. La fase fija o estacionaria es una sustancia sólida o líquida que retiene en distinta proporción cada componente de la muestra. En cromatografía los componentes de una mezcla son arrastrados por la fase móvil a través de la fase fija que, al interaccionar con cada componente, va reteniendo a unos más que a otros y logrando así separarlos. La capacidad de la cromatografía para separar los componentes de una mezcla se denomina poder de resolución. Posteriormente, será posible identificar las sustancias separadas a través de diversos métodos: espectrofotometría, aplicación de luz ultravioleta sobre las manchas.

Clasificación de la cromatografía según la disposición de la Fase Estacionaria

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5. CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA En la cromatografía en capa fina la fase estacionaria está compuesta por una sustancia adherida a un soporte en forma de capa muy fina. El soporte empleado puede ser de vidrio, plástico o metal y es posible encontrarlo en el mercado en varios tamaños. Por su parte, la sustancia sólida adherida al soporte puede ser almidón, silica-gel, óxido de aluminio o celulosa y la parte móvil suele ser una mezcla de disolventes, según las sustancias a separar, que asciende por capilaridad por la placa arrastrando los componentes de la mezcla que aparecen como manchas. Los líquidos más usados para la fase móvil son el acetato de etilo, el etanol, el metanol, el ácido acético y algunos disolventes orgánicos como el cloroformo, tolueno. Las sustancias separadas se presentan en forma de manchas que pueden ser coloreadas o incoloras.  Factores que influyen en el desarrollo de la cromatografía en capa fina En la realización de una cromatografía en capa fina hay numerosos factores que pueden influir produciendo alteraciones en el resultado:  Temperatura: cuanto menor es la temperatura, más difícil es el proceso de separación. Por ello, se debe de trabajar siempre a 20-25ºC.  Corrientes de aire: se deben de evitar para no alterar el desplazamiento de las sustancias que forman la mezcla.  Estado de las placas: las placas y las cubetas deben de estar perfectamente limpias y sin restos de grasa y adhesivos, ya que alterarían la migración de los componentes de la mezcla.  Pureza de los disolventes: es imprescindible utilizar reactivos de alta pureza para evitar contaminaciones en el proceso. Parte experimental

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PARTE EXPERIMENTAL OBJETIVOS  Preparar y desarrollar una Cromatografía en Capa Delgada, CCD.  Preparar y desarrollar una Cromatografía en Capa Delgada Preparativa

TÉCNICA DE REALIZACIÓN:  En la cubeta se coloca previamente la fase móvil de forma que alcance, aproximadamente, 2 cm de altura.  La muestra debe disolverse en un disolvente adecuado antes de aplicarla a la placa.  La muestra disuelta se coloca en la placa con ayuda de una micro pipeta, que permite depositar cantidades de muestra muy pequeñas.  Se deja secar para evaporar el disolvente y que quede únicamente la muestra.  La placa con la fase móvil se coloca en una cubeta de vidrio para que las condiciones externas (humedad, tª, aire) no afecten el proceso.  Finalmente, se deja que la fase móvil ascienda por capilaridad por la

placa hasta que llegue a 10 cm de la aplicación o durante 30 minutos.1

MATERIALES Y REACTIVOS

       

Materiales Balanza analítica. Vasos precipitados y embudo Cocina Espátula Cámara cromatografía Papel filtro Pipeta y probeta Pinzas y soporte metálico

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     

Reactivos Extracto etanolico Etanol destilado acetona cloroformo FeCl3 H2SO4 NaOH cromatofolio

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PROCEDIMIENTO 1.

Se peso 40 mg del extracto metanolico seco de la Cúrcuma Longa

2.

Una vez pesado se disolver la muestra con etanol.

3.

Sembrar en banda los 40 mg de extracto, en un cromatofolio de 10x10 cm.

4.

Prepara la fase móvil de mezcla cloroformo: etanol (25:1) y echarlo a la cámara cromatografía.

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5.

Se desarrollo la cámara Interiormente.

6.

Se disolvió la banda superior curcumina con acetona, para lo cual se raspó con una espátula la banda superior del cromatofolio.

7.

Al raspado le adicionamos acetona para poder disolver la curcumina

8.

Preparamos un sistema de filtrado y separamos el solvente que contiene la curcumina

La extracción con solvente la realizamos 3 veces con suficiente acetona para disolver

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Solvente total obtenido, luego se lleva a evaporación total del solvente para obtener solo la curcumina

9.

Recristalizar con EtOH: calentar el sistema con etanol caliente (debe hervir) y calentar la muestra

10.

Luego de calentar el sistema pasamos a filtrar.

11.

Del filtrado separamos 1 ml a 3 tubos de ensayo y realizamos la prueba de identificación

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PRUEBAS PARA RECONOCER LA CURCUMINA 1.

A cada tubo le adicionamos gotas de NaOH al 1%, FeCl3 al 10%, y H2SO4 cc, respectivamente

1 ensayo NaOH salió (-) 2 ensayo FeCl3 salio (-) 3 ensayo H2SO4 salio (+)

2.

La solución restante lo llevamos a un baño en hielo,

En este paso se forma una muy pequeña cantidad de cristales, ya durante el sembrado no se llego a usar los 40 mg de extracto etanolico

3.

La solución enfriada se lleva a temperatura ambiente para su posterior lectura en el espectrofotómetro con solvente etanol destilado. Luego la solución con etanol se coloca en la celda y se lleva al UV-VIS, el espectro aparece en pantalla

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DISCUSIÓN DE RESULTADOS RESULTADOS  Al agregar ácido sulfúrico concentrado se torno una coloración rojo oscuro  Al agregar Hidróxido de sodio al 1% se torno una coloración roja  Al agregar Cloruro fèrrico al 10 % se torno una coloración marrón rojiza

DISCUSIÒN La cúrcuma imparte color y sabor a los alimentos, el pigmento es muy usado en preparados de mostaza, curry en polvo, sopas, arroz, vegetales, condimentos y salsas. Los componentes que caracterizan la cúrcuma son los pigmentos amarillos y los aceites volátiles. El principal pigmento amarillo es curcumina [1,7-bis-(4'hidroxi-3'metoxi-fenil) hepta-1,6-dieno-3,5-diona]; otros curcuminoides son; desmetoxicurcumina y bisdesmetoxicurcumina (Govindarajan, 1980; Karaszet al., 1973; Raghuveeret al., 1979; Senet al., 1974).

Por su parte, Janben (1984) determinó por el método de cromatografía de capa fina (CCF) los tres componentes colorantes de la curcumina, y señaló que el polvo de los rizomas de cúrcuma contiene además 5,5% de aceites volátiles. El autor señaló que los tres diferuloil metano pueden ser reconocidos luego de la separación, pero el color desaparece rápidamente. Sólo el reactivo ácido acéticobórico produjo color dependiendo de la concentración una mancha roja, la cual fluorece rojo sangre y el color se retuvo por más de una hora. La rubrocurcumina producida tiene un rojo más intenso que la rosocianina, sin embargo, señaló el autor que la desmetoxicurcumina es más naranja.

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CONCLUSIONES Se han caracterizado los pigmentos de la cúrcuma, Curcuma longa en un estudio realizado a Curcuma longa , Este estudio revelo que el contenido total de pigmentos expresados como curcumina fue 3,6%, constituidos por tres componentes amarillos con valores de R f de 0,92; 0,82 y 0,81 en cromatografía en capa fina, e identificados como curcumina, desmetoxicurcumina y bisdesmetoxicurcumina, respectivamente. La separación de los pigmentos contenidos en la cúrcuma se realizó por CCF según el método señalado por Janben (1984). En la Figura 1 se observa el cromatograma obtenido. En este cromatograma se aprecian los tres componentes pigmentantes. Donde la curcumina (I) presenta un valor de Rf de 0,92; la desmetoxicurcumina (II), de Rf de 0,82 y la bisdesmetoxicurcumina (III) de 0,81; lo cual coincide con los resultados obtenidos por Janben (1984) para la cúrcuma. Los tres curcuminoides son separados y a diferencia de lo señalado por Janben (1984) el color amarillo claro inicial pasan a un amarillo oscuro y permanecen así por largo tiempo. Al agregar la solución de ácido bórico al cromatograma los curcuminoides muestran una coloración rojo - naranja característica de la rosocianina y rubrocurcumina producida por estos compuestos. La rubrocurcumina es producida por la curcumina debido al color rojo intenso presentado y la rosocianina es producida por la desmetoxicurcumina y bisdesmetoxicurcumina debido al color naranja producido. Esta coloración también permanece por largo tiempo.

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REALIZACIÓN DE LA CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA: En este proceso solo se uso una placa cromatografía 10 x 5 cm, la cuales solo se podrán coger por los bordes y nunca tocar la parte de celulosa (la blanca), porque ello nos daría errores en la medición.

Una vez obtenida las placas, marcamos con un lápiz una línea a 1 cm de la base. Sobre esa línea marcamos un punto, donde se depositara con el capilar pequeñas cantidades de las muestras.

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El extracto diclorometano obtenido y pesado, se redisuelve en 1ml de cloroformo en una placa petri. Listo para sembrar con capilar

Preparación del capilar para el sembrado en la placa de silica gel.

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Finalmente se procede a sembrar en una placa de sílica gel GF -254 (10 x 5 cm).

DISCUSIÓN DE RESULTADOS

 El presente laboratorio se llevó a cabo para aislar el principal compuestos bioactivos a partir de aceite del anisum. Anetol fue aislado de la planta anís.  Para aplicar las soluciones a las cromatoplacas se utilizan capilares, que previamente son estirados en la flama del mechero con el fin de que tengan el diámetro adecuado.  En el factor de retención, las distancias han sido medidas con una regla a simple vista, por lo que los valores de polaridad no son exactos sino una simple aproximación.  Precaución, nunca se mira directamente la luz ultravioleta, ésta puede causar daños severos al ojo. Una vez revelada la placa, se marca

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ligeramente con un lápiz el contorno de las manchas para mejor ubicación de las mismas.

CONCLUSIONES  La técnica de cromatografía en capa fina (CCF) tiene numerosas ventajas, aparte de ser rápida, sencilla, barata... tiene también la ventaja de utilizar poca cantidad de muestra.  La polaridad de la mezcla de disolventes “eluyente” utilizado es clave para obtener una buena separación. Eluyentes más polares arrastran más fácilmente a los compuestos, es decir los compuestos "corren más" en eluyentes más polares.  La muestra obtenida del extracto de cloroformo tiene como uno de sus componentes al anetol, esto se logró al comparar el Rf experimental (0.89).con el Rf teórico (0.9), los cuales son muy cercanos.

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ANEXOS anisum como trans-anetol (Fig. 1). Picos significativos se encuentran en: (1463.951,609.08) cm-1 correspondiente al anillo de fenilo; (3007) cm-1 atribuida a aromáticos (C-H) de bonos, (2,853 a 2.924) cm-1 atribuida a (-CH3) del grupo; (1653) cm-1 correspondiente a (C = C) y bonos (1245) cm-1 correspondiente de éter

aromático

(C-O-C).

Por

otra

parte,

se

analizó

anetol

utilizando el sistema HPLC (Fig. 2) e identificado mediante la comparación de su retención tiempo (TR) y espectro UV con la del compuesto estándar. El tiempo de retención 7-9 min y el espectro ultravioleta del compuesto aislado.

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BIBLIOGRAFÍA

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A.

Gabriel

J.

QUIJANO

T.

Jairo:

“Marcha

Fitoquímica

Semicuantitativa”,Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Antioquia, Medellín.

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 http://es.scribd.com/doc/14172689/5-Cromatografia-en-Capa-Fina

OBJETIVOS 

Preparar y desarrollar una Cromatografía en Capa Delgada, CCD.



Preparar y desarrollar una Cromatografía en Capa Delgada Preparativa, CCDP.

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